Los fundamentos de la cromatografía

Cuando estudie los fundamentos de la cromatografía, aprenderá cómo esta técnica permite a los científicos separar las moléculas de interés de una mezcla cruda. El propósito de la cromatografía es separar una mezcla compleja en componentes individuales aprovechando el efecto de partición que distribuye las moléculas en diferentes fases. Descubrirá que en la cromatografía de intercambio catiónico, la matriz tiene un grupo funcional cargado negativamente con una afinidad hacia las moléculas cargadas positivamente. Conocerás el concepto de cromatografía de interacción hidrófoba (HIC), que aprovecha la capacidad de generar interacciones fuertes entre el grupo hidrófobo adherido a la matriz y los parches hidrofóbicos presentes en un analito, como una proteína. Aprenderá que, en presencia de una gran cantidad de sal, la molécula de agua que protege las cadenas laterales de las proteínas se desplaza por completo con la exposición de parches hidrófobos en la superficie de la proteína para inducir la precipitación de las proteínas o una reducción de la solubilidad de las proteínas. Descubrirá que la adición de una cantidad baja de sal a la solución proteica provoca el desplazamiento de las moléculas de agua unidas y un aumento de la solubilidad de las proteínas. Las demostraciones, los problemas, los ejemplos y las preguntas de evaluación de este curso en vídeo dirigido por un instructor están diseñados para proporcionarle una base

El material presenta los mecanismos de separación en la cromatografía y las diferentes propiedades físicas que se pueden utilizar para separar las moléculas. Luego, se analizarán las proteínas, que tienen una solubilidad mínima en soluciones con un pH que corresponde a su Pi y, a menudo, precipitan fuera de la solución. Explorarás el hecho de que el peso molecular y el tamaño de una proteína están relacionados con la forma de la molécula y la relación entre su peso molecular y el radio de giro. Descubrirás que el tiempo de retención se refiere al tiempo que tarda un analito en salir de la columna. Se aclarará que las dos formas principales de cromatografía son la cromatografía de partición y la cromatografía de adsorción. Descubrirá que en la cromatografía en columna, una fase estacionaria se llena en un tubo cilíndrico hecho de vidrio o acero. También aprenderá que la gráfica del volumen de elución, junto con la absorbancia, se conoce como cromatograma. Descubrirá que el término resolución se refiere a la capacidad de una columna de cromatografía para separar dos picos de analitos entre

A continuación, aprenderá que para el instrumento de cromatografía líquida rápida de proteínas (FPLC) las columnas de plástico son las más adecuadas, mientras que para el instrumento de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) son las más adecuadas. Comprenderá el hecho de que el tamaño del bucle depende de la cantidad de proteína que desee inyectar y de la capacidad de la columna. Descubrirás entonces que las cuatro propiedades de una molécula de proteína son la carga, el área de superficie, la afinidad y su hidrofobicidad. Se le enseñará que las diferentes técnicas de cromatografía que puede utilizar para explotar las propiedades de una molécula de proteína son la cromatografía de intercambio iónico (IEX), la HIC, la cromatografía de filtración en gel y la cromatografía de afinidad. Descubrirás que al preparar las perlas matriciales para la cromatografía, el primer paso es hinchar el medio, luego eliminar las partículas muy pequeñas y el último paso es equilibrar con contraiones. Finalmente, estudiará las técnicas de cromatografía, las conexiones de columnas, los tampones de cromatografía de intercambio catiónico y los métodos para analizar los eluyentes. Este curso será de interés para estudiantes de varias disciplinas científicas, incluidas la química analítica y la biología