Introdúcete en el mundo de las técnicas analíticas en la purificación de biomoléculas en este curso gratuito. Explorarás el hecho de que la cromatografía es una técnica que permite a los científicos separar las moléculas de interés de una mezcla cruda y descubrir qué efecto aprovecha esta separación. Descubra qué tipo de cromatografía hace que la matriz tenga un grupo funcional cargado negativamente con una afinidad hacia las moléculas cargadas positivamente. Conocerás el concepto de «cromatografía de interacción hidrófoba», que aprovecha la capacidad de generar interacciones fuertes entre el grupo hidrófobo adherido a la matriz y los parches hidrofóbicos presentes en un analito, como una proteína. Descubra qué ocurre con las moléculas de agua que protegen las cadenas laterales de las proteínas en presencia de una gran cantidad de sal y descubra las consecuencias de añadir una cantidad baja de sal a la solución proteica. Las demostraciones, los problemas, los ejemplos y las preguntas de evaluación de este curso en vídeo dirigido por un instructor están diseñados para proporcionarle una base integral

El curso comienza con la definición de la cromatografía de filtración en gel (también conocida como cromatografía de exclusión por tamaño o cromatografía con tamiz molecular) y los diferentes tipos de problemas que es probable que surjan después de empaquetar la columna. Se analizará la elección de la columna, según el rango de peso molecular y el límite de presión del equipo operativo. Explorarás el hecho de que el peso molecular y el tamaño de una proteína están relacionados con la forma de la molécula y la relación entre su peso molecular y el radio de giro. Descubrirá que la determinación del peso molecular nativo mediante filtración en gel conjugada con el SDS-PAGE se puede utilizar para determinar el estado oligomérico de la proteína. Continúe estudiando la preparación de muestras filtradas en gel en la fase móvil y cómo la unión del ADN a las proteínas

A continuación, aprenderá que la cromatografía de afinidad funciona según el principio de las fuerzas de reconocimiento mutuo entre un ligando y un receptor. Comprenderá que en el método de cromatografía de bioafinidad, las biomoléculas se utilizan como un receptor presente en la matriz y aprovecha los fenómenos biológicos, como el anticuerpo-antígeno. A continuación, descubrirá que la glutatión S-transferasa (GST) utiliza el glutatión como sustrato para catalizar las reacciones de conjugación con fines de desintoxicación xenobiótica. Esta proteína de fusión del GST se produce mediante la recombinación de la proteína de interés con la secuencia del GST presente en el vector de expresión. Se le enseñará que la biotinilación de los anticuerpos permite la inmovilización de los anticuerpos en la orientación correcta sobre las perlas de vidrio recubiertas de estreptomicina. Descubrirás que una columna de afinidad también se puede utilizar como herramienta para estudiar o aislar a una pareja que interactúa con una proteína en particular. Finalmente, estudiará la cromatografía de filtración en gel, las interacciones entre el receptor y el ligando, la cromatografía de bioafinidad y la cromatografía de afinidad por metales. Este curso será de interés para los estudiantes de biotecnología o para los profesionales