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Diplôme en techniques analytiques de purification de biomolécules

Dans ce cours gratuit en ligne, découvrez les méthodes impliquées dans les techniques d'analyse pour la purification des biomolécules.

Publisher: NPTEL
Les différentes techniques et analyses impliquées dans la purification complexe des biomolécules sont couvertes dans ce cours gratuit en ligne. On discute aussi de la définition de la chromatographie de filtration sur gel et de la chromatographie d'affinité, qui fonctionne sur le principe des forces de reconnaissance mutuelle entre un ligand et un récepteur.
Diplôme en techniques analytiques de purification de biomolécules
  • Durée

    6-10 Heures
  • Students

    201
  • Accreditation

    CPD

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Résultats

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Description

Etre introduit dans le monde des techniques analytiques dans la purification des biomolécules dans ce cours gratuit. Vous découvrirez le fait que la chromatographie est une technique qui permet aux scientifiques de séparer les molécules d'intérêt d'un mélange brut et de découvrir les effets de cette séparation. Déterminez quel type de chromatographie mène à un groupe fonctionnel chargé négativement avec une affinité pour les molécules chargées positivement. On vous présentera le concept de la chromatographie d'interaction hydrophobe de ‘ qui exploite la capacité d'interactions fortes entre le groupe hydrophobe attaché à la matrice et les taches hydrophobes présentes sur un analyte tel qu'une protéine. Découvrez ce qui se passe dans les molécules d'eau qui blindage les chaînes latérales de protéines en présence d'une grande quantité de sel, et découvrez ce que l'addition d'une faible quantité de sel à la solution protéique donne des résultats. Des démonstrations, des problèmes, des exemples et des questions d'évaluation dans ce cours basé sur une vidéo dirigée par un instructeur sont conçus pour vous fournir une base complète dans cet aspect de la biologie.

Le cours s'appuie sur la définition de la chromatographie de filtration sur gel (également connue sous le nom de chromatographie   d'exclusion de taille   ou de chromatographie par tamis moléculaire  ) et les différents types de problèmes que l'on est susceptible d'avoir après l'empaquetage de la colonne. Le choix de la colonne sera discuté, en fonction de l'étendue du poids moléculaire et de la limite de pression du matériel d'exploitation. Vous allez explorer le fait que le poids moléculaire et la taille d'une protéine sont liés à la forme de la molécule et à la relation entre son poids moléculaire et le rayon de giration. Vous découvrirez le fait que la détermination du poids moléculaire natif par filtration sur gel en conjugaison avec la SDS-PAGE peut être utilisée pour déterminer l'état oligomérique de la protéine. Continuez à étudier la préparation des échantillons de filtration sur gel dans la phase mobile et comment la liaison de l'ADN à la protéine induit certains changements conformationnels.

Ensuite, vous apprendrez que la chromatographie d'affinité fonctionne sur le principe des forces de reconnaissance mutuelle entre un ligand et un récepteur. Vous y trouverez un aperçu du fait que, dans la méthode de chromatographie sur bio-affinité, les biomolécules sont utilisées comme un récepteur présent sur la matrice et qu'elle exploite le phénomène biologique tel que l'antigène-anticorps. Vous découvrirez alors que la Glutathione S-transférase (GST) utilise le glutathion comme substrat pour catalyser les réactions de conjugaison aux fins de la détoxification des xénobiotiques. Cette protéine de fusion de la TPS est produite par la recombinaison de la protéine d'intérêt avec la séquence GST présente dans le vecteur d'expression. On vous enseignera que la biotinylation des anticorps permet l'immobilisation des anticorps dans l'orientation correcte sur les billes de verre enrobées de streptomycine. Vous découvrirez qu'une colonne d'affinité peut également être utilisée comme outil pour étudier ou isoler un partenaire en interaction d'une protéine particulière. Enfin, vous étudierez la chromatographie de filtration sur gel, les interactions entre les récepteurs et les ligands, la chromatographie de bioaffinité et la chromatographie d'affinité avec les métaux. Ce cours intéressera les étudiants en biotechnologie ou les professionnels de la biotechnologie expérimentale.

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