Conheça o mundo das técnicas analíticas na purificação de biomoléculas neste curso gratuito. Você explorará o fato de que a cromatografia é uma técnica que permite aos cientistas separar moléculas de interesse de uma mistura bruta e descobrir qual efeito essa separação explora. Descubra qual tipo de cromatografia faz com que a matriz tenha um grupo funcional carregado negativamente com uma afinidade com moléculas carregadas positivamente. Você será apresentado ao conceito de “cromatografia de interação hidrofóbica”, que explora a capacidade de fortes interações entre o grupo hidrofóbico ligado à matriz e as manchas hidrofóbicas presentes em um analito, como uma proteína. Descubra o que acontece com as moléculas de água que protegem as cadeias laterais das proteínas na presença de uma grande quantidade de sal e descubra em que resulta a adição de uma baixa quantidade de sal à solução proteica. Demonstrações, problemas, exemplos e perguntas de avaliação neste curso baseado em vídeo ministrado por instrutor foram elaborados para fornecer a você uma base abrangente

O curso começa com a definição de cromatografia de filtração em gel (também conhecida como cromatografia de exclusão de tamanho ou cromatografia de peneira molecular) e os diferentes tipos de problemas que se pode ter após embalar a coluna. A escolha da coluna será discutida, dependendo da faixa de peso molecular e do limite de pressão do equipamento operacional. Você explorará o fato de que o peso molecular e o tamanho de uma proteína estão relacionados à forma da molécula e à relação entre seu peso molecular e o raio de rotação. Você descobrirá o fato de que a determinação do peso molecular nativo por filtração em gel em conjugação com o SDS-PAGE pode ser usada para determinar o status oligomérico da proteína. Continue estudando a preparação de amostras de filtração em gel na fase móvel e como a ligação do DNA à proteína induz certas mudanças conformacionais

seguir, você aprenderá que a cromatografia de afinidade funciona com base no princípio das forças de reconhecimento mútuo entre um ligante e um receptor. Você obterá uma visão do fato de que, no método de cromatografia de bioafinidade, as biomoléculas são usadas como um receptor presente na matriz e explora o fenômeno biológico, como o antígeno-anticorpo. Você descobrirá então que a glutationa S-transferase (GST) utiliza a glutationa como substrato para catalisar reações de conjugação para fins de desintoxicação xenobiótica. Essa proteína de fusão GST é produzida pela recombinação da proteína de interesse com a sequência GST presente no vetor de expressão. Você aprenderá que a biotinilação de anticorpos permite a imobilização de anticorpos na orientação correta nas esferas de vidro revestidas com estreptomicina. Você descobrirá que uma coluna de afinidade também pode ser usada como uma ferramenta para estudar ou isolar um parceiro de interação de uma proteína específica. Finalmente, você estudará cromatografia de filtração em gel, interações de receptor e ligante, cromatografia de bioafinidade e cromatografia de afinidade de metal. Este curso será de interesse para estudantes de biotecnologia ou profissionais em biotecnologia experimental