Scopri il mondo delle tecniche analitiche nella purificazione delle biomolecole in questo corso gratuito. Esplorerai il fatto che la cromatografia è una tecnica che consente agli scienziati di separare le molecole di interesse da una miscela grezza e scoprirai quale effetto sfrutta questa separazione. Scoprite quale tipo di cromatografia fa sì che la matrice abbia un gruppo funzionale caricato negativamente con un'affinità verso le molecole caricate positivamente. Verrà introdotto il concetto di «cromatografia a interazione idrofobica» che sfrutta la capacità di forti interazioni tra il gruppo idrofobo attaccato alla matrice e le macchie idrofobe presenti su un analita come una proteina. Scopri cosa succede alle molecole d'acqua che proteggono le catene laterali delle proteine in presenza di un'elevata quantità di sale e scopri cosa comporta l'aggiunta di una bassa quantità di sale alla soluzione proteica. Le dimostrazioni, i problemi, gli esempi e le domande di valutazione in questo corso basato su video con istruttore sono progettati per fornirti una base completa

su questo aspetto della biologia.

Il corso inizia con la definizione di cromatografia per filtrazione su gel (nota anche come cromatografia ad esclusione dimensionale o cromatografia a setaccio molecolare) e i diversi tipi di problemi che si possono avere dopo aver imballato la colonna. Verrà discussa la scelta della colonna, in base all'intervallo di peso molecolare e al limite di pressione dell'apparecchiatura operativa. Esplorerai il fatto che il peso molecolare e la dimensione di una proteina sono correlati alla forma della molecola e alla relazione tra il suo peso molecolare e il raggio di rotazione. Scoprirai che la determinazione nativa del peso molecolare mediante filtrazione su gel in coniugazione con l'SDS-PAGE può essere utilizzata per determinare lo stato oligomerico della proteina. Continuate a studiare la preparazione di campioni di filtrazione su gel in fase mobile e come il legame del DNA alle proteine induce determinati cambiamenti

conformazionali.

Successivamente, imparerai che la cromatografia di affinità funziona secondo il principio delle forze di mutuo riconoscimento tra un ligando e un recettore. Comprenderai il fatto che nel metodo della cromatografia a bioaffinità, le biomolecole vengono utilizzate come recettori presenti sulla matrice e sfruttano fenomeni biologici come l'antigene anticorpale. Scoprirai quindi che la glutatione S-transferasi (GST) utilizza il glutatione come substrato per catalizzare le reazioni di coniugazione a fini di disintossicazione xenobiotica. Questa proteina di fusione GST è prodotta dalla ricombinazione della proteina di interesse con la sequenza GST presente nel vettore di espressione. Ti verrà insegnato che la biotinilazione degli anticorpi consente l'immobilizzazione degli anticorpi con il corretto orientamento sulle perle di vetro rivestite di streptomicina. Scoprirai che una colonna di affinità può essere utilizzata anche come strumento per studiare o isolare un partner interagente di una particolare proteina. Infine, studierai la cromatografia per filtrazione su gel, le interazioni tra recettori e ligandi, la cromatografia a bioaffinità e la cromatografia ad affinità metallica. Questo corso sarà

di interesse per gli studenti di biotecnologia o per i professionisti della biotecnologia sperimentale.