Os fundamentos da cromatografia

Ao estudar os fundamentos da cromatografia, você aprenderá como essa técnica permite aos cientistas separar moléculas de interesse de uma mistura bruta. O objetivo da cromatografia é separar uma mistura complexa em componentes individuais, explorando o efeito de partição que distribui as moléculas em diferentes fases. Você descobrirá que na cromatografia de troca catiônica, a matriz tem um grupo funcional carregado negativamente com afinidade por moléculas carregadas positivamente. Você será apresentado ao conceito de cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), que explora a capacidade de fortes interações entre o grupo hidrofóbico ligado à matriz e as manchas hidrofóbicas presentes em um analito, como uma proteína. Você aprenderá que, na presença de uma grande quantidade de sal, a molécula de água que protege as cadeias laterais da proteína é completamente deslocada com a exposição de manchas hidrofóbicas na superfície da proteína para induzir a precipitação da proteína ou uma redução na solubilidade da proteína. Você descobrirá que a adição de uma baixa quantidade de sal à solução proteica resulta no deslocamento das moléculas de água ligadas com um aumento na solubilidade da proteína. Demonstrações, problemas, exemplos e perguntas de avaliação neste curso baseado em vídeo ministrado por instrutor foram elaborados para fornecer a você uma base

O material apresenta os mecanismos de separação na cromatografia e as diferentes propriedades físicas que podem ser usadas para separar moléculas. Em seguida, serão discutidas as proteínas, que têm solubilidade mínima em soluções com um pH que corresponde ao seu Pi e muitas vezes precipitam da solução. Você explorará o fato de que o peso molecular e o tamanho de uma proteína estão relacionados à forma da molécula e à relação entre seu peso molecular e o raio de rotação. Você descobrirá o fato de que o tempo de retenção se refere ao tempo que um analito leva para sair da coluna. Será esclarecido que as duas principais formas de cromatografia são a cromatografia de partição e a cromatografia de adsorção. Você descobrirá que na cromatografia em coluna, uma fase estacionária é preenchida em um tubo cilíndrico feito de vidro ou aço. Você também aprenderá que o gráfico do volume de eluição, junto com a absorbância, é conhecido como cromatograma. Você descobrirá que o termo resolução se refere à capacidade de uma coluna de cromatografia separar dois picos de analitos um do

seguir, você aprenderá que, para o instrumento de cromatografia líquida protéica rápida (FPLC), as colunas de plástico são as mais apropriadas para uso, enquanto que para o instrumento de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), as colunas estáticas de aço inoxidável são as mais apropriadas para uso. Você obterá uma visão do fato de que o tamanho do circuito depende da quantidade de proteína que você deseja injetar e da capacidade da coluna. Você descobrirá então que as quatro propriedades de uma molécula de proteína são a carga, a área de superfície, a afinidade e sua hidrofobicidade. Você aprenderá que as diferentes técnicas de cromatografia que você pode usar para explorar as propriedades de uma molécula de proteína são cromatografia de troca iônica (IEX), HIC, cromatografia de filtração em gel e cromatografia de afinidade. Você descobrirá que, ao preparar esferas de matriz para cromatografia, a primeira etapa é inchar o meio, seguida pela remoção de partículas muito pequenas e a última etapa é o equilíbrio com contra-íons. Finalmente, você estudará técnicas de cromatografia, conexões de coluna, tampões de cromatografia de troca catiônica e métodos de análise de eluentes. Este curso será de interesse para estudantes de várias disciplinas científicas, incluindo química analítica e biologia