Os Fundamentos da Chromatografia

Quando você estuda os fundamentos da cromatografia, você vai aprender como essa técnica permite que os cientistas separem moléculas de interesse de uma mistura bruta. O objetivo da cromatografia consiste em separar uma mistura complexa em componentes individuais explorando o efeito de partição que distribui as moléculas em diferentes fases. Você descobrirá que em cromatografia de troca de cátion, o matrico tem um grupo funcional carregado negativamente com afinidade em relação a moléculas carregadas positivamente. Você será introduzido ao conceito de cromatografia de interação hidrofóbica (HIC), que explora a capacidade de interações fortes entre o grupo hidrofóbico acoplado à matriz e patches hidrofóbicos presentes em uma substância analítica como uma proteína. Você aprenderá que na presença de uma elevada quantidade de sal, a molécula de água blindando as cadeias laterais de proteína são deslocadas completamente com uma exposição de patches hidrofóbicos sobre a superfície de proteínas para induzir a precipitação de proteínas ou uma redução da solubilidade proteica. Você descobrirá que a adição de uma quantidade baixa de sal à solução proteica resulta no deslocamento de moléculas de água desossadas com um aumento da solubilidade proteica. Demonstrações, problemas, exemplos e questões de avaliação neste curso baseado em vídeos guiados pelo instrutor, são projetados para lhe proporcionar uma base abrangente em cromatografia.

O material apresenta os mecanismos de separação em cromatografia e as diferentes propriedades físicas que podem ser utilizadas para separar moléculas. Em seguida, serão discutidas as proteínas, que possuem solubilidade mínima em soluções com um pH que corresponde ao seu Pi e muitas vezes precipitam-se fora de solução. Você irá explorar o fato de que o peso molecular e o tamanho de uma proteína estão relacionados com a forma da molécula e a relação entre o seu peso molecular e o raio de giro. Você descobrirá o fato de que o tempo de retenção se refere ao tempo que leva para que um analito saia da coluna. Será esclarecido que as duas principais formas de cromatografia são a cromatografia de partição e a cromatografia de adsorção. Você descobrirá que em cromatografia de coluna, uma fase estacionária é preenchida em um tubo cilíndrico composto de vidro ou aço. Você também aprenderá que a trama do volume de eluição, juntamente com a absorvância, é conhecida como cromatograma. Você descobrirá que o termo resolução, refere-se à capacidade de uma coluna de cromatografia separar dois picos analíticos de um outro.

Em seguida, você aprenderá que para o instrumento de cromatografia líquida de proteína rápida (FPLC) as colunas de plástico são as mais indicadas para usar, enquanto para o instrumento de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) as colunas inoxidável ainda são as mais indicadas para usar. Você ganhará insight sobre o fato do tamanho do laço depender de quanta proteína você deseja injetar e a capacidade da coluna. Você descobrirá então que as quatro propriedades de uma molécula de proteína são a carga, área de superfície, afinidade e sua hidrofobicidade. Você será ensinado que as diferentes técnicas de cromatografia que você pode utilizar para explorar as propriedades de uma molécula de proteína são cromatografia de troca iônica (IEX), HIC, cromatografia de filtração de gel e cromatografia de afinidade. Você descobrirá que ao preparar esferas de matriz para cromatografia, o primeiro passo é escancarar o meio, seguido da remoção de partículas muito pequenas e o último passo é a equilibração com os íons contrários. Por fim, você estudará técnicas de cromatografia, conexões de coluna, buffers de cromatografia de troca de cátion e métodos de análise de elucubrações. Este curso será de interesse para os estudantes de várias disciplinas de ciências, incluindo química analítica e biologia.