Questo corso dettagliato ti introduce nel mondo delle pratiche professionali di laboratorio e dell'elettroforesi. Scoprirai il fatto che la buona pratica di laboratorio (GLP) incarna una serie di principi che forniscono un quadro all'interno del quale gli studi di laboratorio sono pianificati, eseguiti, monitorati, registrati, riportati e archiviati. Verranno discussi i tre livelli di categorizzazione dell'approccio Rosch. Verrà introdotto il concetto di capacità tampone, una misura quantitativa della resistenza alla variazione del pH di una soluzione contenente un agente tampone rispetto a una variazione della concentrazione di acido o alcali. Imparerai anche che l'elettroforesi nel sistema di elettroforesi verticale funziona in modo discontinuo con un tampone nella vasca superiore e inferiore, mentre l'elettroforesi nel sistema gel orizzontale funziona continuamente. Scoprirai come viene utilizzata la curva di calibrazione dei gel nativi e di denaturazione per determinare il peso molecolare della proteina. Le dimostrazioni, i problemi, gli esempi e le domande di valutazione di questo corso basato su video con istruttore sono progettati per fornirti una base completa, che ti consentirà

Il corso inizia introducendo la definizione di GLP e i diversi livelli di categorizzazione al suo interno. Quindi, verrà discussa la scheda di sicurezza dei materiali (MSDS), che mostra come contiene informazioni sui potenziali pericoli di un materiale. Esplorerai la soluzione tampone, che viene utilizzata durante gli esperimenti come mezzo per mantenere il pH a un valore quasi costante in un'ampia varietà di applicazioni chimiche. Scoprirete il fatto che a forza centrifuga e viscosità del liquido fisse, la velocità di sedimentazione di una particella è proporzionale alla sua dimensione e alla differenza tra la densità della particella e la densità della soluzione. Scoprirai anche che l'elettroforesi si riferisce a un processo elettrocinetico che separa le particelle cariche in un fluido utilizzando un campo di carica elettrica e i motivi per cui la tecnica dell'elettroforesi non è adatta alla separazione e all'analisi di campioni biologici complessi.

Successivamente, imparerai che i campioni biologici complessi vengono risolti in modo efficiente nell'elettroforesi su gel 2D. Ciò comporta la combinazione di carica e peso molecolare per fornire una separazione molto maggiore rispetto all'uso della singola proprietà. Comprenderete che quando si esegue l'esperimento di elettroforesi su gel di agarosio sulla pagina nativa, il campione preparato con il colorante di carico non contiene detergenti o agenti denaturanti e, di conseguenza, il campione viene eseguito in base alla carica. Vedrai quindi che nell'elettroforesi orizzontale su gel di poliacrilammide, il campione biologico complesso viene risolto in base alla sua carica e quindi spostato sull'elettrodo di controcarica. Studia le curve di calibrazione dei gel nativi e di denaturazione prima di passare ai sistemi di trattamento dei liquidi, alle strutture secondarie nell'RNA, all'elettroforesi su gel di poliacrilammide e alla polimerizzazione su gel di impilamento. Questo corso sarà di interesse per gli studenti di biotecnologia o per i professionisti della biotecnologia sperimentale.