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Hoje, avançamos da cromatina para a próxima fase na expressão gênica.
Isso é processamento de RNA nuclear. Então, este é o eucarionte específico. Uma vez que estamos falando de ementa de organismo multicelular, o processamento de RNA nuclear ou outro processamento são essenciais.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 00:51)

Então, no slide acima, se você olhar para A, existem dois tipos de células diferentes, e em ambos os tipos de células, você tem cinco diferentes RNAs mensageiros (mRNA) sendo transcrito de cinco genes diferentes. Na célula tipo 1, mRNA C, D, E entra no citoplasma, mas, na célula tipo 2, A, B, C saem para o citoplasma. Portanto, trata-se de uma seleção nuclear que decide qual mRNA deve ser exportado e não exportado. Então, mesmo nesse nível, você poderia ter diferenças. Existem contextos desenvolvimentistas específicos onde os regulamentos a esses passos tornam-se importantes, no contexto geral do desenvolvimento embrionário. Não podemos sempre fazê-lo ao nível de histona ou metilação do DNA e controlando a transcrição. Porque pode não haver tempo suficiente para isso, e essas transcrições podem ser usadas mais tarde em alguma outra etapa. Por isso, eles são feitos com antecedência, então é por isso que esses regulamentos na etapa de transcrição do post são importantes dependendo do contexto temporal e espacial, e um deles é a seleção nuclear. O outro regulamento a nível nuclear sobre o RNA é a emenda.

Então, se você olhar para B, o diagrama central de barras informa a estrutura do gene real como você vê no RNA nascente apenas transcrito, não emendado. Então, você tem 1,2,3,4,5 exons diferentes aqui, e essas linhas verticais em forma de V indicam qual vai ser unido. Por exemplo, as linhas em cima do diagrama de barra central indicam que o exon 1 e exon 3 serão unidas, e exon 2 não será unido, portanto, o exon 2 será tratado como intron nesse caso.

Então, este doador splice, onde estou apontando, está conectado a este splice aceitador aqui. Então, pulando dois outros potenciais no meio, então essa é uma maneira de emendar para que você esteja reunindo exons 1, 3, 5 e em outro você encontra 1, 2, 4, 5, portanto, isso é emenda alternativa. Por isso, a emenda alternativa não é um componente menor na regulação de expressão gênica, assim como você verá em slides subsequentes agora. Sendo assim, é aí que vamos gastar a maior parte do tempo de hoje.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 03:46)

Então, este é o verdadeiro exemplo da seleção nuclear, então este é o embrião do Sea urchin em um estágio inicial. Por isso, em (A) Você está olhando para uma imagem de contraste de fase mostrando todas as células. Por isso, em (B), trata-se de uma hibridização in situ revelando a localização de um certo mensageiro RNA, que aqui é CyIIIa. Assim, expressa-se apenas em algumas células ectoérmicas não em todo o embrião e, isso é mais ilustrado neste blot norte (C). Aqui o RNA isolado do ectoderme na pista 1 e RNA isolado de endodermo e mesoderme na pista 2 são separados eletroforeticamente e transferidos para uma membrana e sondados com a sonda radiolabada para CyIIIa, sonda específica que revela o RNA maior. Se você olhar para a imagem, a diferença não é muito, eles têm um nível de presença mais ou menos semelhante, indicando que em todas as três camadas ele está sendo transcrito. Está lá em ectoderma e assim como no endodermo e mesoderme. Mas se você olhar para a mesma transcrição usando uma sonda específica exon, que vai hibridize em uma fração grande do RNA, haverá mRNA amadurecida presente no citoplasma. Porque o processamento acontece rapidamente, e eles vêm para o citoplasma. Portanto, ela é em grande parte hibridizante para o RNA citoplasmático maduro. E o seu nível é muito elevado em ectodermo em comparação com os outros dois indicando que há uma seleção do RNA no citoplasma como o que está a ser exportado.
Por isso, no ectoderme, ele fica preferencialmente exportado mas não nas outras duas camadas germinais.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 06:02)

Então, vamos continuar com emendas alternativas. Existem quatro maneiras diferentes de emenda alternativa. O primeiro tipo é o exon cassete. Por exemplo, em (A), o tipo II procolágeno mRNA está presente tem um cassete com exon 1,2,3 em chondrócitos precursores e como outro cassete com 1 e 2 em chondrocytes maduros.

O segundo tipo é exons mutuamente exclusivos onde a partir de um pré-mRNA após emendar um exon será incluído em um tipo de tecido e excluído em outros tipos de tecido. Portanto, aqui em (B) se o vermelho está presente roxo é excluído e se o roxo está presente vermelho é exclusivo, ambos são mutuamente exclusivos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 07:03)

E o terceiro tipo em splicing alternativo é 5 ' splice site variação. Em (C), a partir de pré-mRNA, exon 2 é totalmente incluído em Bcl-xL mas na outra presença de uma doadora splice no início do exon 2 resulta em excluir a maioria dos exon 2 e forma Bcl-xs. Assim, duas linhas em forma de vã mostram o início de uma intrina em ambos os tipos. Então, neste caso isso tem consequências graves.
Bcl-xL inibe a morte celular programada e Bcl-xs induz a morte celular. Ela tem consequências opostas e, na maioria do câncer, as linhas celulares, a versão xL é comum; como resultado, a apoptose é inibida e a célula continua a proliferar. O quarto tipo é semelhante ao tipo anterior mas com o splicing de 3. Por isso, em (D) por causa da presença de 3 ' doador de emendas duas variantes diferentes são produzidas. Então, esses são os quatro mecanismos pelos quais a emenda alternativa pode acontecer.

Estes tipos de emendas acontecem a quase todos os genes, mais de 90% dos genes de codificação proteína humana estão sujeitos a emendas alternativas. Para te dar uma ideia o número de genes em C. elegans e humanos não são muito diferentes, mas se você olhar a complexidade do organismo ou anatomia ou funcional, o Homo sapiens pode aprender tudo isso e vir ensinar uma aula mas C. elegans não podem fazer isso. C. elegans tem uma anatomia muito simples com um par de tubos mas depois ter todos os processos biológicos básicos; tem um sistema nervoso; pode sentir dor e assim por diante. Por isso, a maior parte da complexidade entre C. elegans e Homo sapiens vem de emendas alternativas. Por isso, portanto, isso é uma coisa importante então não se leve como uma aberração na expressão gênica. Veremos mais alguns exemplos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 10:23)

Então, o próximo exemplo é α-tropomyosina no rato. Em diferentes músculo diferentes exons estão incluídos. Então, esses coloridos verdes são exons presentes em todas as diferentes variantes e outra coisa importante é às vezes a emenda alternativa pode afetar a sequência de 3 ' UTR.
Os mRNAs musculares listrados têm uma UTR diferente de 3 dos outros mRNAs musculares. Assim, a importância de 3 ' UTR vai ficar mais clara quando vamos para a regulação da tradução nos slides futuros. Por isso, aqui alguns exons incluídos são suaves musculares específicos e alguns exons são específicos para o músculo reto e apenas eles estão incluídos no mRNA amadurecida do músculo estriado.

Assim, por essas várias combinações de permutação de exclusão e incluindo exons variedade de proteínas podem ser geradas. Por isso, portanto, a definição de um gene-uma enzima que se tornou um gene-um polipeptídeo agora torna-se realmente um gene e uma família de proteínas. São família de proteína porque eles têm alguma semelhança, alguma sequência de exon está lá em todos eles.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 11:59)

A emenda alternativa mais complexa que conhecemos atualmente é Dscam, Drosophila neuronal mRNA que é expressa em neurônios. Veremos a importância funcional disso no próximo slide, mas isso ilustra, a partir de um único gene você recebe 38.016 mRNAs diferentes que são quase o dobro do de todos os genes de codificação proteína em Drosophila. A Drosophila tem apenas cerca de 14.000 genes por isso é quase o dobro de C. elegans genome em si. Por isso, aqui 24 exons diferentes estão presentes nesta proteína. A partir do nascente mRNA nos segmentos listrados, qualquer pessoa pode ser selecionada como Exon 4; 12 alternativas diferentes são possíveis de servir como exon 4, 12 sequências adjacentes diferentes.
Da mesma forma, para exon 6, são possíveis 48 alternativas, e depois exon 9, 33, exon 17, 2. Agora se você trabalha fora todas as combinações ela funciona para ser 38.016 e os dados experimentais sustentam que a grande maioria deles são todos produzidos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 13:23)

Por isso, agora, vamos analisar por que isso é importante e como isso ajuda. Então, isso é mais parecido com a recombinação de VDJ em células b humanas, fazendo um propósito similar aqui mas para o autoreconhecimento. Então, aqui no neurônio, você tem dendritos ramificados e esses dendritos precisam saber que eles pertencem ao mesmo corpo celular. Então, essencialmente, eles são irmãs e não precisam se conectar. Quando eles recebem um sinal, eles precisam se conectar aos neurônios adjacentes ou outro neurônio nessa corrente então só ele será útil para condução de impulso nervoso. Então, essa auto-repulsão é proporcionada por aquela versão exclusiva suplente de Dscam alternativa produzida naquele neurônio e outro neurônio tem emendas alternativas diferentes. Por isso, ele tem seu Pincode em termos de composição de Dscam exon e que ajuda em conexões. Em (B) forma verde e roxa uma conexão e forma verde e vermelha outra. Suponha que digamos que esse Dscam seja mutado e não seja produzido então o que você esperaria? Estes não saberão se arrepender e todos eles serão aderidos e eles farão uma massa de estrutura neuronal conectada.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 15:03)

Então é isso que acontece. Sendo assim, o tipo (C) selvagem é altamente ramificada e (D) o neurônio carente do Dscam. Então, isso é ementa alternativa.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 16:00)

Outro exemplo interessante é a emenda muscular específica. Esse trabalho aconteceu exatamente em torno do tempo em que entrei para o departamento como um pós-doc, e este papel tinha saído de outro laboratório no mesmo prédio. Foi na imprensa, e foi falado, então eu estava animado para ler, e isso está lá no livro didonês, então vamos ler sobre isso, então aqui você tem uma questão de emendas musculares específicas. Agora vamos olhar para as condições da doença, portanto dentro da Drosophila, vimos que podemos sofrer mutações e encontrar a função. Então, em pacientes humanos, há uma consequência quando essas emendas não acontecem como deveriam estar acontecendo? Então, vamos ver um exemplo.

Em (A), entre o exon 1 e 2 a o codon de parada está presente. Durante a emenda, essa intron é excluída, portanto, uma proteína funcional é feita. Mas no mutante, você tem uma mutação no intron onde um G se torna um A e devido a isso promove splicing. Portanto, portanto, uma parte dessa intron está incluída,

e devido a isso, a tradução é finalizada e você não faz uma proteína funcional. Assim, em tipo silvestre, esse codon de parada nunca seria encontrado porque aquela coisa toda é excluída, e como um

resultado, você direto vai para exon 2, e o quadro de leitura continua a fazer a proteína do tipo selvagem.
Então, o nome dessa proteína é miostatina. Essa proteína previne a proliferação de células musculares em um ponto de tempo específico, e eles se diferenciam em músculos imediatamente, o que ajuda a fazer a quantidade necessária de músculo. Então, em uma família onde eles encontraram essa mutação, quatro caras já eram atletas, e uma criança pequena conseguiu segurar um bolinho de 3 kg com as duas mãos totalmente estendidas. Isso foi possível porque seus músculos eram tão fortes, e isso pode ser feito em organismos modelo também.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 19:06)

Por isso, neste slide, o do lado direito é o poderoso mouse, o esquerdo é um rato normal.
Isso atraiu imprensa, o papel veio na natureza, e então este corpo docente estava na imprensa para se encontrar com TV, rádio e jornais. Então, você vê a diferença muscular entre os dois porque a proliferação celular não foi parada na hora certa, então eles fizeram muito mais células, e quando diferenciaram, eles fizeram muitos músculos.

Então, será que um biólogo desenvolvimentista se afasta recomendando a um médico que você mudo e faça mais músculos? Não será porque os biólogos desenvolvimentistas pensarão sobre as outras consequências. Por exemplo, você se preocupará com padrões de metilação quando pensar em apenas a sequência de codificação. Assim, similarmente, você vai esperar que haja outras complexidades como, por exemplo, uma razão filogenética e ontogenética para o porquê daquela divisão celular parada naquele momento. Por isso, você não vai bagunçar imediatamente, mas isso dá uma ideia do que acontece quando você tem um defeito splicante.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 20:29)

Acho que isso transmitiu a mensagem sobre a importância da emenda. Por isso, a seguir, vamos seguir para a regulação da tradução. Por isso, a regulação da tradução é muito vital em certos contextos; há dois exemplos destacados exemplos para ilustrar este ponto; um é embriogênese precoce, e outro é o sistema nervoso adulto. Você pega um neurônio; por exemplo, ele tem um corpo celular e tem um axônio longo, e no final do axônio, você tem sinapses. Na sinapse, os neurotransmissores são produzidos e secretados. Em seguida, o neurônio pós-sináptico deve ter o receptor para aceitar o sinal.
Se essas coisas têm que ser feitas e degradadas muito rapidamente para sincronia com a condução do impulso nervoso, não se pode ir e descontrar o DNA modificando a cromatina e depois transcrever, emendar e, em seguida, obter permissão do núcleo para sair.

Os neurônios não terão tempo suficiente para isso e depois disso, a proteína tem que ser transportada até o fim do axônio para chegar ao local das sinapses. Assim, esse problema geralmente é resolvido fazendo o RNA e mantê-lo armazenado onde você quer e quando o sinal correto vem, você traduz.
Esse é um contexto; o outro contexto é a clivagem no embrião. É rápida, e durante a embriogênese, nova transcrição é ausente. Assim, para realizar o desenvolvimento embrionário, coordenando particularmente o ciclo celular e produzindo muita membrana celular, os fatores necessários já devem ser feitos e armazenados no oócito. Também, durante a divisão celular, muitos núcleos são feitos, por isso precisamos desse muito de um cromossomo. Em seguida, o ciclo de divisão celular precisa ser regulado. Uma vez que você decote é completado em alguns organismos, nesse momento, a especificação do destino celular acontece; por exemplo, em C. elegans na primeira divisão em si, o destino das duas células filhas é diferente.

Então, tudo isso não pode ser controlado no nível transcripcional. Por isso, novamente, a regulação de tradução de mRNA produzida pela mãe e depositada no oocyte desempenha um papel crítico. Tanto que, em alguns organismos, você pode se livrar dos componentes nucleares, mas ainda assim, o ciclo celular pode acontecer sem o material nuclear; o citoplasma tem as coisas necessárias para simular isso, e estes são contextos onde a tradução se torna importante. Por isso, agora, vamos ver como acontece a regulação da tradução.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 23:58)

Então, um mecanismo pelo qual a regulação da tradução pode acontecer é aumentar ou diminuir a estabilidade do RNA mensageiro, significando uma vez transcrito, quanto tempo vai que o RNA mensageiro sobreviva antes de ficar degradado. Então, você pode ter uma meia-vida para isso, a duração tomada para metade do RNA mensageiro ser degradado. Por isso, em uma mãe lactante, o mRNA prolactina geralmente produzido na glândinha mamária fica rapidamente degradado. Eu deveria explicar o método primeiro. Então, isso é células glândulas mamárias do mouse cultuadas, e incubadas com nucleotídeos radioativos como neste caso, provavelmente UTP. Então, todo o RNA sintetizado fica radioativamente-rotulado. Em seguida, células desse meio contendo nucleotídeo radioativo são lavadas e colocadas em um meio fresco sem nucleotídeo radioativo mas você desrotulou um, de modo que é chamado de período de perseguição.

Agora você observa quanto tempo o RNA rotulado fica. Então, sem essa lactação estimulando o hormônio prolactina o mRNA fica rapidamente degradado, a meia-vida é provavelmente cerca de duas horas ou uma hora e meia mas com o hormônio ele fica por mais de dois dias. Por isso, ao aumentar a estabilidade o mRNA está disponível para várias rodadas de tradução, assim você aumenta o produto proteico.

Por isso, o objetivo final da expressão gênica diferencial é variar o tipo e quantidade de proteínas de um tipo de célula para outro tipo de célula. Sendo assim, esse é o ponto final máximo da expressão gênica quando se fala em genes de codificação de proteínas. Então, esse é um exemplo para a estabilidade diferencial, então aqui a estabilidade está sob duas condições diferentes.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 26:19)

O próximo que vemos é o que acontece tipicamente em oócitos. Isto foi descrito pela primeira vez em bons detalhes em Oócitos Xenopus; portanto, vamos olhar para esse exemplo, e este é o tipo de regulação que é crítica em quase todo o desenvolvimento oocyte que as pessoas estudam. Então, de fato, em nosso laboratório, estudamos exclusivamente a regulação translacional da germline. Então, olhemos para isso; antes disso, eu deveria apresentá-lo a essa ideia de olhar para o mRNA.

Assim geralmente o mRNA é escrito como uma linha longa com 5 'cap a 3' poly-A tail, mas em células, eles não existem assim; em vez disso, eles são encontrados na forma de anel. Assim, o fim de 5 'end e 3' são reunidos por proteínas que se ligam ao cap de 5, por exemplo, fatores de iniciação de tradução que se ligam ao cap de 5 ou a 5 ' UTR etc. Eles interagem com proteínas que se unem à cauda de 3 ' UTR ou poly-A, e aquelas interações de proteína fazem o mRNA em uma estrutura circular.

Portanto, é o que se vê em (A) um micrográfico de elétrons. Por isso, aqui está um exemplo (B), então geralmente os fatores de iniciação que se ligam ao limite de 5 minutos interagem com uma proteína que se liga à cauda poly-A, chamada de proteína de ligação poly-A (PABP), que resulta em circularização. E isso é necessário para vinculação de outro fator de iniciação-como 4G, que recruta a pequena subunidade ribossomal e inicia a tradução. Sendo assim, é o que ocorre tipicamente mas em Xenopus oocyte, o mais mRNA que não é traduzido em um dado momento são encontrados em forma circular mas não pela interação de 4E e 4G com o PABP; em vez disso, uma proteína chamada Maskin se liga a 4E e que Maskin interage com uma proteína chamada citoplasmática de poliadenilação proteína, CPEB que se liga à sequência de sinal de poliadenilação. Agora o CPEB interage com o Maskin, e esse tipo de forma circular exclui totalmente os outros fatores de iniciação e, portanto, ele é translacionalmente adormecido. Ele não fica traduzido até que a sinalização adequada venha. Por exemplo, o hormônio progesterona, que estimula a maturação oocyte e completa a divisão mitótica sobre a fecundação, leva à ativação de um kinase que fosforiliza o CPEB. E quando o CPEB é fosforilado, ele recruta uma proteína chamada decote e fator específico de poliadenilação, e que recruta uma polimerase (A) polimerase. Então, esta polia (A) polimerase estende a cauda poltica-A no citoplasma.
Lembre-se, quando aprendemos sobre a estrutura de genes eucarióticos, eu disse que alguma poliadenilação acontece no núcleo. Em alguns dos desenvolvimentos.A poliadenilação adicional de um deles acontece no citoplasma, portanto, este é um exemplo disso. Então, você tem mais uma extensão da cauda poly-A, e esta cauda poly-A agora liga o PABP, e que pode interagir diretamente com o 4G, e esta fosforilação também lança o Maskin fora de interação com o 4E, e agora começa a tradução. Apesar de isso não ter sido totalmente trabalhado como como isso é coreografado, isso dá a você um mecanismo de como a ativação acontece.

Mas, então, há uma onda de ativação sequencial. Alguns mRNA são expressos em um determinado estágio, e alguns mRNA são expressos mais tarde e assim por diante. Então, isso ainda está sendo intensamente estudado, então todo esse mecanismo foi trabalhado no início de 2000, você sabe como os papéis estavam saindo em 2001, 2002 por volta dessa época. Por isso, agora, esse mecanismo foi encontrado em muitos outros organismos onde você pode fazer muita genética.

Então, lá eles fizeram um muito mais trabalho em muitos exemplos desse tipo. Assim, olhemos para um desses exemplos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 31:18)

Então, este é o Oocyte Drosophila, onde você tem uma proteína chamada de Bicóide. Então, este Bicoid é uma proteína interessante; é um regulador de transcrição, bem como um regulador de tradução. Aqui a vemos como um regulador translacional. Então, ele se liga a uma sequência chamada de elemento de reconhecimento de Bicóide em um mRNA que codifica uma proteína chamada Caudal. Então, essa Caudal é necessária para evitar o desenvolvimento posterior na região anterior. Por isso, Caudal precisa ser suprimido, e isso é feito por um Bicóide, que geralmente promove o desenvolvimento anterior. Quando Bicóide se liga a este mRNA, ele recruta outra proteína nova que se liga ao tampão de metilo, e isso exclui todos os fatores de iniciação. Então, é assim que o Bicoid impede a tradução de Caudal mRNA. Por isso, agora você percebe que o tema geral aqui são proteínas que interagem com a sequência de RNA podem interferir na ativação translacional. Alguns deles aumentam ou diminuem a cauda poly-A em alguns contextos, não no contexto oócito Xenopus; onde mesmo com a cauda poly-A mais curta, o mRNA é estável, é apenas que não podem ligar o PABP e, portanto, não são traduzidos, mas não são degradados. Em algumas instâncias, se você remover a cauda poly-A, o RNA é marcado para degradação.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 32:58)

Então, aqui, existem alguns exemplos das moléculas de mRNA que são reguladas, onde funcionam, e em que organismos eles vêm. O ciclismo estar na lista não é surpreendente por estar envolvido na regulação do ciclo celular.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 33:17)

Então, ela continua, então a partir de múltiplos organismos, portanto, este é um mecanismo evolutivamente bem conservado.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 33:27)

Em seguida, uma é óbvia, mas depois demorou para que as pessoas encontrem um exemplo disso. Se as proteínas podem ligar sequência especificamente a 3 'UTR e 5' UTR, por que não outro ácido nucléico?
A complementaridade da sequência deve dar-lhe mais especificidade à sequência dada, e isso foi encontrado em uma tela emocionante em C. elegans embriogênese. Por isso, em C. elegans embriogênese, um padrão específico de divisão pode acabar reiterando se mudanças específicas de expressão gênica não acontecem.

Digamos, no quarto nível de divisão celular, um padrão específico de assimetria é gerado durante a divisão celular, e você não quer que isso seja reiterado porque você acabará produzindo um tipo similar de destinos de células em outra geração também e isso é evitado com o bloqueio de alguma expressão de genes. Então, as mutações neles são chamadas de heterocrônicas porque, na ordem temporal, elas estão na hora errada. Assim, o que deveria ter sido na terceira fase vai acabar se repetindo na quarta fase ou na quinta etapa ou mesmo mais tarde, e, portanto, são chamadas de mutações heterocrônicas. O laboratório que identificou a mutação que tinha o fenótipo heterocronico finalmente mapeou a mutação para um locus, mas eles não encontraram ali nenhuma sequência de codificação proteínica adequada. Eles estavam confiantes sobre o fenótipo e o locus que mapeavam, e sabiam que o locus importa mesmo que não fosse codificar proteínas. Quando olharam cuidadosamente, descobriram que codifica um RNA curto, uma pequena sequência de RNA que é complementar aos 3 ' UTR de outro RNA que está envolvido nesta especificação de linhagem. Assim, lin strands for lineage in C. elegans, a maioria dos genes tem três alfabetos e hífen e um número.

O número geralmente é a ordem em que aquele gene específico pertencente a essa classe foi identificado. Por isso lin significa linhagem defeituosa, na medida em que é o décimo quarto gene que eles identificaram.
Então, se você olhar a sequência de lin-14 mRNA no 3 ' UTR, há seções coloridas de 1 7, e essas são as sequências às quais este lin-4 se liga. O lin-4 é uma das mutações heterocrônicas que não estava codificando uma proteína e encontrada para ser um pequeno RNA.

Os loops indicam onde não há complementar, onde se vê uma coisa linear; há correspondência de base. Então, esta foi a primeira descoberta, e isso é algo nematode específico? NÃO, nos últimos vinte anos, as pessoas descobriram que este pequeno RNA é naturalmente codificado no genoma tal como o genoma C. elegans, e eles regulam a tradução da grande maioria dos mRNAs.

A estimativa atual é de cerca de 30 a 40% de todos os mRNA humanos estão sujeitos à regulação por esses pequenos mRNAs chamados miRNAs, micro moléculas de RNA interferentes, ou micro RNA em breve.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 37:10)

E é assim que eles são feitos; eles geralmente existem em múltiplas cópias de repetição de tandem. Uma vez transcrita, uma nuclease chamada Drosha as limpa. Então, a informação neste cartão vem de estudos em vários organismos. O primeiro exemplo é de C. elegans que é onde foi descoberto pela primeira vez, mas depois as pessoas trabalharam fora o mecanismo estudando múltiplos organismos.

Por exemplo, Drosha foi descoberta em Drosophila, onde fizeram extratos de células e fizeram essas reações in vitro. Sendo assim, essas múltiplas repetições são digeridas em unidades individuais no núcleo por Drosha, e isso é transportado para o citoplasma. Estes vêm como penteados se repetem, e esse penteado é removido por uma nuclease citoplasmática chamada Dicer.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 38:07)

E agora você fica com as duas vertentes, e elas são desferidas e carregadas em um complexo chamado RISC.
Este complexo de RISC leva uma das duas vertentes do miRNA duplex e usa que para identificar a sequencia de destino, vai lá, e se liga à sequencia de alvo. Ligação para o alvo pode ter múltiplas consequências; um deles é o RNA fica cleado, a estabilidade é reduzida drasticamente, esta é uma, mas você pode ter várias consequências.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 38:44)

Isso aí dentro, deslize então nós vamos voltar a esse exemplo. Assim, este complexo de ribonucleoproteína miRNP que transporta a sequência miRNA pode executar qualquer um destes três; pode inibir o complexo de iniciação, uma ligação proteica à tampa de 5 ou pode atrapalhar a capacidade de ribossomos de alongamento, ou pode remover a cauda poly-A e reduzir a estabilidade do RNA, ou pode recrutar proteases para digerir o peptídeo nascente que está saindo.

Todos os três mecanismos foram vistos com exemplos específicos. Assim, veremos até que ponto isso importa no contexto mamífero.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 39:35)

Assim, durante o desenvolvimento de diferentes tipos de linfócitos, a célula precursora linfóide tem uma baixa abundância de miR181. Então, você recebe ambas as células B e células T. As células B expressam miR181 em abundância maior do que a precursora. Mas se você introduzir artificialmente uma grande quantidade de miR181, nesta célula precursora, acabará produzindo a grande maioria do tipo B-célula e não as células T.
Então, você faz mais células B às custas das células T, então estas têm claras consequências desenvolvimentimentais em múltiplos organismos. Assim, cada tipo de célula passa a ter um conjunto específico dos produtos do gene, não informações genéticas e, como resultado, seu destino vai ser diferente.