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Ciclometria de Fluxo

Olá pessoal, este é o Dr. Vishal Trivedi do departamento de biociência e bioengenharia IIT Guwahati e dentro da biologia celular então, longe o que discutimos somos discutidos sobre a técnica de cultura celular, discutimos sobre a diferenciação dos diferentes tipos de células. E então dentro da célula também discutimos sobre como você pode ser capaz de isolar as diferentes organelas, utilizando a centrifugação diferencial ou a centrifugação instigante.
Fora isso, também discutimos em profundidade diferentes técnicas de microscopia, seja ela a microscopia de contraste de fase, ou a microscopia fluorescente ou a microscopia eletrônica. E em detalhes temos discutido sobre os diferentes tipos de protocolo assim como o procedimento o que você tem que seguir para resolver processar uma amostra para a microscopia fluorescente.
Microscopia de contraste de fase, microscopia eletrônica se é a microscopia eletrônica de varredura ou a microscopia eletrônica de transmissão; e, além disso, discutimos também alguns dos experimentos cruciais. Por isso, agora, hoje vamos discutir sobre tópico diferente e o tópico é a citometria de fluxo. Então, o que é o uso da citometria de fluxo, você pode imaginar uma situação em que você está realmente tentando lidar com um tecido complicado.
Por exemplo, se você está manuseando com o tecido e deseja analisar todas as células, então você está na verdade procurando um sistema onde o que pode ser capaz de analisá-las separadamente, e você não quer que elas sejam separadas simplesmente pela centrifugação denstigada ou pela centrifugação diferencial. Então, vamos discutir isso e vamos começar com a composição dos diferentes tecidos.
(Consulte O Slide Time: 02:46) Então, como você pode ver, eu tomei um exemplo dos alguns dos tecidos o que está realmente em um corpo humano, seja o sangue, o fígado, o cérebro ou o coração. E o que se pode ver é que o por exemplo, o sangue como o sangue é feito em off de RBC, WBC. Dentro do WBC você tem os linfócitos, neutrófilos, basófilos, eosinófago e plaquetas. Fora isso, você também tem o componente de soro.
Portanto, esse é o componente A granular ou o componente A celular. Então, é assim que vamos mantê-lo separado. E como por exemplo, no fígado, você tem os hepatócitos, você tem as células kuffer e depois o fígado também está tendo o suprimento extensivo do sangue. Então você também pode ir para ter as células sanguíneos. De forma semelhante no cérebro, você pode ter os neurônios astrócitos, assim como as células da glia.
Fora isso, você também pode ter o algum dos fibroblastos e todos os outros tipos de micróbios, macrófagos e todos os outros tipos de células. E então falando sobre o coração, você pode ter os cardiomiócitos você pode ter as células do fabricante de ritmo cardíaco, você vai ter os fibroblastos, você pode ter as células musculares lisas, e pode ter células endoteliais, que na verdade são responsáveis por fazer as artérias assim como as vontades.
Por isso, como você pode ver, todos esses tecidos são muito complexos compostos pelos diferentes tipos de células. E você pode imaginar uma situação em que você está interessado em estudar o self, mas não quer perturbá-los, ou não quer ferir essas células com por passar com as extensas certificações celulares ou algumas das técnicas de purificação. Então, como você pode ser capaz de conseguir isso você está procurando por um sistema que realmente possa separar as células sob o fluxo e então você pode ser capaz de estudar individualmente essas células.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 04:48) Então, quando você estiver querendo estudar células individuais, ou quando você quer distinguir uma determinada célula da outra célula, você tem os 3 4 critérios diferentes o que você pode usar. Então, no que diz respeito à célula, o que você pode ter, você pode ter a forma, assim, células diferentes terão os diferentes tipos de forma, então você também pode ter a densidade daquela célula em particular, assim, que o número de diferentes tipos de organelas, o que está presente em uma célula vai realmente compor e será responsável pela densidade daquela célula específica.
E então você também pode ter os diferentes tipos de receptor sobre a superfície celular e isso também pode ser um critério para distinguir uma célula da outra célula. E então no final os diferentes tipos de células podem também ter o comportamento metabólico diferencial ou reações metabólicas. Por exemplo, em algumas células, você pode ter algumas reações, que é responsável pela produção dos radicais livres.
Por exemplo, nas células imunes, você sempre tem esses tipos de coisas, então em alguns casos, você pode ter o fluxo de cálcio e em alguns casos você pode ter as produções da ATP e tudo mais. Assim, o percurso básico pode não talvez permanecer o mesmo em diferentes tipos de células, mas todos os outros tipos de célula que é responsável por dar a eles os resultados funcionais podem ser diferentes em diferentes tipos de células. Então, todos esses 4 critérios podem ser explorados em uma redação baseada em fluxo, onde você pode realmente ser capaz de utilizar esses parâmetros para distinguir uma célula de outra célula.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 06:22) Se você quiser fazer isso, por exemplo, em células de mamíferos, você tem os diferentes tipos de tamanhos como por exemplo, as células espermáticas estão tendo um tamanho de 3,86 micrômetro, as células vermelhas do sangue são 5,76 linfócitos são ligeiramente maiores 6,29 e o que você pode ver são os macrófagos estão na faixa de 21 micrometros cardiomiócitos são ainda maiores do que isso para você, eles serão de 30, micrometro e megakaryocytes são muito grandes.
Então, eles estão em torno de 40 micrômetro. Então, o que se pode ver é o tamanho no em termos de tamanhos, diferentes células de mamíferos são diferentes umas das outras. Da mesma forma, as células são diferentes em termos de densidade, assim como as reações metabólicas bem como o receptor de superfície celular, o que está presente nessas células. Então, estes são os 4 critérios que um deles pode facilmente utilizar para explorar e um pode facilmente usar para distinguir os diferentes tipos de células. Por isso, para analisar as células, você está procurando um sistema que realmente possa executar esses experimentos esses critérios para célula individual.
(Consulte Slide Time: 07:30) Então, para esse tipo de coisa, o que você está procurando é você está procurando um instrumento ou você pode estar procurando um analisador de células, o que poderia ser capaz de primeiro você pode imaginar que você tem uma populações semelhantes, onde você tem as células das diferentes cores. Então, o que eu estou mostrando é uma cor diferente significa que vai para a célula ter diferentes tipos de reações metabólicas ou tipos diferentes de células ou receptores ou pode ser de tamanhos diferentes como esta é uma célula grande ou esta é uma célula pequena.
Portanto, independentemente disso, primeiro você está à procura de um sistema. Então, que ele realmente possa distinguir e analisar essa massa celular e dar a eles uma única célula. E uma vez que a célula única está saindo dessa tubulação é poderia ser eliminada com a ajuda de um laser e quando você iluminar esta célula, você pode ser capaz de ter os detectores, estes detectores poderiam detectar o tamanho dessa célula específica ou você pode ter o detector que pode detectar a densidade desta célula específica ou você pode ter o detector que realmente pode detectar a fluorescência.
Então, de onde você vai conseguir a fluorescência. Por exemplo, se essa célula tem os diferentes tipos de receptores, então o que você pode fazer é simplesmente adicionar os anticorpos, que na verdade vão se ligar a esta célula em particular e ele realmente vai dar a você a fluorescência e isso pode ser detectado com esses tipos de detectores de fluorescência e então no final você também requer um coletor de células.
Então, caso suponha que você queira coletar essa célula em particular e deseja analisar e realizar ainda mais alguns experimentos, então você pode realmente ter um tipo de funil de coisa e que realmente pode ser usado para detectar ou para coletar essas células. Então, esse é um instrumento básico ou infraestrutura básica o que você exige dele para se você gostaria de analisar vir uma mistura complicada de células utilizando os analisadores de células. Vejamos como a instrumentação se parece.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 09:23) Então, em um citômetro de fluxo a instrumentação é muito simples para que o que você tem é você ter uma amostra, que na verdade vai ter uma mistura de células. Então, uma vez que essa mistura de células vai entrar em um tubo, ela vai ser primeiramente focada e então você vai ter a única célula saindo dessa tubulação e então essa célula única vai ser eliminada por uma fonte laser.
Assim, uma vez que esta célula única vai ser eliminada pela fonte laser, vai-se dar o sinal e estes sinais podem ser detectados pelos diferentes tipos de detectores, quer seja o detector para o escaneamento diantado ou é o detector para o escaneamento lateral ou se é um detector para os diferentes tipos de canal de fluorescência quer seja o FL-1 FL-2 ou o FL-3 são estes então vão ser processados pela unidade de processamento e depois vai ser convertido em sinal legível.
E isso na verdade vai ser analisado pelo computador e no final você vai ver as releituras dessas células individuais desse particular. Então, se você vir essa instrumentação particular o que é para o citômetro de célula o que você tem é você tem os 3 componentes um é este componente em particular que é chamado como os componentes fluídicos ou os fluídicos. Então, esse são os componentes fluídicos onde você tem os fluidos onde você tem a água e então este é o componente que é chamado como é uma parte do sistema óptico.
Então, que este é um sistema que está realmente analisando a sua amostra ou o sinal o que está saindo da sua amostra e então este é o sistema de sinal o que você exigia este chamado como sistema eletrônico. Então, esse sistema eletrônico vai converter esse sinal óptico em um sinal de leitura. Então, na verdade ele vai converter esse fóton o que está por vir. O que está sendo percebido pelo sistema óptico e depois vai-se convertendo-o em um sinal legível e que vai ser mostrado pelo computador.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 11:36) Então, em um citômetro de fluxo típico você tem os 3 componentes que tem o sistema de fluxo que é chamado como fluídicos e o trabalho dos fluídicos é que ele vai focalizar a amostra. Então, que você pode ser capaz de ter a célula única em um único momento e então esta única célula pode ser eliminada com o laser. Então, isso é uma parte do sistema óptico. Sendo assim, sistema óptico é composto pelos lasers de um lado e os detectores do outro lado e, em seguida, o terceiro sistema é o sistema eletrônico ou o sistema de processamento de sinais.
Então, o sistema eletrônico é simples de que ele vai converter esse sinal de sistema o que está vindo do sistema óptico e então ele vai converte-lo em um sinal legível primeiro discuta sobre todo esse sistema tão individualmente.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 12:24) Então, no sistema de fluxo, você vai ter a célula de fluxo e a célula de fluxo o objetivo do sistema de fluxo é que ele realmente vai focalizar a amostra. Então, que na verdade você vai ter essa única cela de cada vez. Então, esse foco da amostra está sendo feito com a ajuda do fluido da bainha. Então, o que você tem é quando a amostra é injetada nessa célula de fluxo, a célula de fluxo vai, na verdade, ter o fluido da bainha.
Então, você tem o fluido de bainha exterior e aquele fluido de bainha externa real realmente contém a salina de 0,9% ou o PBS e então ele está realmente enfechando o núcleo central. Assim, no núcleo central, você vai ter a amostra enquanto que, na verdade, vai ser cercada pelo fluido da bainha e depois vai usar o processo hidrodinâmico para concentrar a amostra. Então, você pode imaginar que você tem o fluido de bainha correndo para isso.
Então, esse é um design típico de uma célula de fluxo. Então, uma vez que a amostra está entrando nessa célula de fluxo, então, o que vai acontecer é que realmente vai se concentrar esta amostra e então ela realmente vai dar a você as células individuais. Então, você pode imaginar que você tem as múltiplas células na base dessa amostra específica, mas então finalmente ela vai te dar a célula única e isso acontece, porque o fluido de bainha está rodando em cima assim como a parte inferior dessa amostra e este fluido de bainha.
A velocidade do fluido de bainha está sendo controlada de tal forma que ele realmente vai focalizar a amostra e como resultado a célula única vai sair deste sistema fluídico e então esta célula única vai ser eliminada pelo laser. Então, esta é, na verdade, uma maneira típica em que a amostra vai ser focada pelo sistema de focalização hidrodinâmico e esses fluidos estão fluindo em um único canal.
Mas eles não se misturam porque a velocidade desses fluidos são muito diferentes e a densidade do líquido o que você usa para o fluido de bainha versus a densidade do líquido o que você usa para preparar a amostra é diferente. Sendo assim, é assim que eles são realmente fluidos em torno da amostra sem ter limites. Então, se você imaginar que há um limite, não há limite, a amostra também está se escorrendo no líquido, este fluido de bainha também está rodando como um líquido, mas porque o fluido de bainha está rodando muito rápido e ele está de forma focada.
Então, por causa disso a amostra está ficando focada e então a célula única sai desse sistema fluídico específico. Por isso, uma vez que a célula única sai, então essas células solteiras estão entrando na região óptica, onde você tem os diferentes tipos de luz de origem, assim como as luzes do detector.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 15:18) Assim, uma vez que entrem no sistema óptico, o sistema óptico possui 2 sistema um é a fonte através da qual você vai usar para eliminar a amostra. Assim, você pode ter o laser como um laser do sistema como uma fonte ou para a lâmpada de arco. Em alguns casos as pessoas também estão usando o laser de argônio. De modo que o laser de argônio está realmente dando a flexibilidade para excitar a amostra a laser de 488 nanômetro é sempre usado.
Porque o laser está lhe dando a intensidade muito, muito alta e a intensidade muito alta e que é onde o laser é preferido sobre o algum tipo de tungstênio ou bulbos de arco porque a intensidade da lâmpada sempre foi variando se é você sabe o início ou o fim assim, essa flutuação poderia realmente ser problemática para os instrumentos de ou para as amostras para você saber, para ficar excitada e alguns casos a excitação baseada em cordeiro também vai danificar a florescência.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 16:21) Então, esta é a fonte de luz e no que diz respeito ao detector você tem o detector múltiplo, o detector que na verdade vai detectar o escaneamento para a frente ou o espalhamento para a frente ou você pode ter o lado espalhando. Então, o que é significar pelo espalhamento e dispersão lateral é que você pode imaginar que você tem um objeto e então se está eliminando-o com raio laser.
Então, o que vai acontecer é uma vez que o feixe de laser vai atingir esta amostra, ele vai ser espalhado em 2 direções um ele vai ser espalhado em uma estrutura em forma de cone como nas direções para a frente ou na verdade vai ser espalhado em um ângulo de 90 graus. Então, isso é chamado como o espalhamento lateral que é chamado como SSE enquanto que, isso é chamado como o escaneamento para a frente ou o espalhamento para a frente, o encaminhamento para a frente como você pode ver que o espalhamento para frente está dependendo do tamanho dessa coisa em particular.
Por isso, FSC vai realmente dar uma ideia sobre o tamanho da partícula enquanto, na verdade o SSC vai dar a ideia sobre a densidade da molécula porque como a molécula vai enquanto esses feixes de laser vão atingir o material o que está presente dentro da célula ela vai ser espalhada por um ângulo direito. Portanto, se a condição de ângulo direito, se o material é menos denso do que o espalhamento.
O que você vê no grau 90 vai ser menos enquanto, o espalhamento seria na direção do atacante vai ser mais mas se o material o que está presente dentro da cela for muito, muito denso, então a quantidade de proporção desse raio laser vai ser vai para o lado espalhando-se e é assim que o espalhamento lateral vai dar a ideia sobre a densidade da amostra enquanto que o espalhamento para frente vai dar a ideia sobre o tamanho da batida.
Então, esses 2 canais estão sendo usados para detectar e para diferenciar os diferentes tipos de células com base no tamanho, bem como a densidade da molécula. Então, o espalhamento para a frente é para o tamanho e espalhamento lateral é para a densidade o que significa se uma molécula é mais densa, ela vai dar a você mais lado se espalhando se a molécula for de tamanho maior, então ela realmente vai dar a você mais de espalhamento e como essas 2 propriedades podem ser usadas.
Então, essas 2 propriedades podem ser usadas até para distinguir os diferentes tipos de células por exemplo, quando você está processando uma amostra, você pode realmente processar o você sabe um complicado por exemplo, se você processar o sangue como assim, como vemos como o sangue está tendo um tamanho igual a RBCs então você tem os macrófagos e então você tem os monócitos e todos esses tipos de células.
Então, o que vai acontecer é se você processar o lado o sangue e suponhamos que está processando o lado espalhando-se deste lado e o encaminhamento para a frente espalhando-se deste lado, então o que vai acontecer é você vai ver o cone shape shape plot como este e onde todas essas tramas de pontos vão realmente dizer que qual célula realmente está correspondendo a qual, então, isto significa que estas células que na verdade vão ter a menor quantidade de espalhamento lateral e menos quantidade do espalhamento para frente é realmente correspondente à RBC.
Porque as RBCs são de tamanho muito pequeno e a RBC não tem o núcleo e organelas. Então, é a densidade dele também é muito baixa. Então, é por isso que no canto esquerdo, você vai ver as RBCs enquanto que, no canto superior direito, você vai ver as células que estão de fora muito, tamanho muito grande e lá, elas também têm a altíssima densidade e assim, o que são essas células, estes são os monócitos ou os linfócitos, que estão sendo presentes no canto vermelho disso.
Então, é assim que você pode ser capaz de e separar os diferentes tipos de células sem nem mesmo passar com os detectores adicionais. Assim, além destes você também pode ter os detectores adicionais para os canais de fluorescência por exemplo, você pode ter o FL-1 você pode ter o FL-2 você pode ter o FL-3 e todos estes FL-3 significa o fluxo desde o canal 1 flow diz canal 2 e o canal 3 e todos estes FL-1 FL-2 FL-3 são, na verdade, canal dedicado para a fluorescência específica.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 20:44) Em seguida, você tem o sistema eletrônico. Assim, no sistema eletrônico realmente se converte os fótons o que você vai obter ou o que você vai medir pelo sistema óptico em nosso fotoelétron o que significa que ele realmente vai converter isso na corrente eletrônica e essa corrente vai ser convertido ainda mais em uma contagem legível. Então, pode realmente permitir medir a amplitude, a área e a largura do pulso fotoelétron.
O que significa, onde quer que o que seja a altura deste sinal em particular, qual é a área deste sinal particular e quantos sinais você está recebendo, que na verdade vai ser o propósito de ter um sistema fotoelétron, ele amplifica o pulso linearmente ou logariticamente e depois digitaliza o pulso de amplitude. Então, sistema eletrônico é só tirar o sinal do sistema óptico e então ele realmente vai converter isso em uma contagem legível e isso vai ser visualizado pela pessoa que está fazendo os experimentos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 21:50) Você tem os diferentes tipos de trama o que você pode usar no citômetro de fluxo. Assim, você pode ter o histograma de cor única. Então, o que quer dizer com o histograma é que você pode ter a propriedade única por exemplo, você pode ter o FL-1, então, o que vai acontecer é você pode ter o histograma como este ou assim, por exemplo, esta são as amostras não rotuladas. Então, esta é a amostra não rotulada e então esta é a amostra rotulada.
Assim, você pode ter o histograma de cor única, você pode ter a trama de ponto de 2 cor para o ponto de trama significa, você pode ter o padrão do sinal por exemplo, neste tamanho você provavelmente pode ter o FL-3 deste lado você pode ter o FL-1 ou algum momento você ponto enredo você pode ter o SSC versus FSC. Por isso, o que vai mostrar a você vai mostrar a distribuição dos diferentes tipos de sinal neste determinado avião.
Então, você pode ter uma distribuição assim, o que é distribuição nós vamos dizer que as estas células que estão presentes desse lado na verdade é alta em FL-3 enquanto que, a baixa em FL-1 enquanto que, o self que está presente aqui é realmente alto em FL-1 e baixo em FL-3. Então, esse é o propósito de ter um enredo de 2 cores de cor. Da mesma forma, você pode ter o enredo de contorno para enredo de contorno é na verdade uma extensão da trama de ponto.
Então, um enredo de ponto vai realmente dar os pontos enquanto, o contorno realmente vai dar contorno como encobrir esse sinal particular e aí vai mesmo dizer que se o sinal está subindo ou descem. Então, o contorno de fato vai te mostrar o circularizado você sabe padrão e enquanto que no centro ele realmente vai te mostrar o sinal mais alto para que seja como ele realmente vai dar o sinal de contorno e então você pode ter as 2 parcelas de densidade de cores.
Essa trama de densidade também é como a trama de ponto de cor de 2 e também vai te mostrar a densidade como ela é muito simples para similar ao enredo de contorno mas na verdade vai mostrar a densidade daquela amostra particular naquela região em particular. Então, é assim que você tem de fato a flexibilidade de diferentes tipos de tramas se você tem a trama de histograma, se tem a trama de ponto.
Se você tem o enredo de contorno ou se tem a densidade plot todos estes a finalidade de todas essas tramas são procurar as propriedades individuais por exemplo, você vai usar a trama de histograma quando estiver olhando para a propriedade única variando nos diferentes tipos de células, mas você pode ter a trama de ponto quando está procurando as 2 propriedades diferentes e como as 2 propriedades diferentes estão variando em uma única população de células ou em uma várias populações de células.
Mas em uma célula individual, você pode ser capaz de perguntar se esta célula tem as 2 propriedades ou propriedades únicas ou ambas propriedades. Então é assim que você realmente se tem a trama de ponto de cor 2, ela realmente lhe dá mais flexibilidade na análise das amostras em comparação com a qual você tem a trama de histograma. Por isso, a trama de histograma sempre lhe dá a informação quantitativa ou é realmente lhe dizer que qual é o nível deste sinal específico que significa deste lado, se você está colocando o FL-1 você pode ter a fluorescência realmente.
Então, na verdade vai dizer qual é o nível dessa fluorescência em comparação com isso. Então, na verdade vai dar-lhe a informação quantitativa ou semi-quantitativa também vai dizer-lhe a distribuição das amostras dentro desta trama de histograma em particular, mas é também não vai dar-lhe as informações sobre se aquela célula em particular está a ter o segundo andar para ou não, porque só vai ficar com o histograma de cor única enquanto que no caso de ponto enredo, só lhe é dito a distribuição das 2 propriedades em uma amostra.
Então, isso é na verdade Então, 2 color dot plot é sempre foi usado para ver qualitativamente como as 2 propriedades estão distribuindo dentro de uma população de células e então com base nisso, você pode ser capaz de escolher uma determinada população e então você pergunta qual é o nível do sinal de um ou outro sinal. Então, nós vamos dar um exemplo disso e então você vai entender mais em detalhes.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 26:27) Em seguida, você tem a aquisição de dados. Então, a aquisição de dados é muito simples, você tem que processar a sua amostra e depois, idealmente, o que as pessoas fazem é que estão sempre coletando as 10.000 contagens. Por isso, em um citômetro de fluxo, você não liga para o número de células que você sempre chama de contagem, pois cada célula individual é considerada como uma partícula e que a partícula está sendo contada. Então, o que as pessoas normalmente fazem é sempre coletar a amostra muitas vezes 10.000 conta.
Por isso, quando você for colocar a amostra na célula de fluxo ou quando for colocar colete as amostras para a máquina, na verdade é primeiro que vai permitir que você colete a amostra. Então, o que você faz é primeiro você coletar as amostras sem nem mesmo passar com o processo de aquisição. Então, ele dá a opção de sugar a amostra sem gravá-la. Então, o que vai acontecer é inicialmente o que você vai fazer é primeiro você ver se a amostra é boa o suficiente ou não.
Então, isso de fato vai dizer que você tem que fazê-lo com a ajuda do SSC versus FSC para primeira coisa o que você tem que fazer é primeiro você tem que coletar ou verificar a qualidade da amostra. Então, se você fizer o SSC versus FSC, ponto enredo ou a trama de ponto de cor 2 para então ela realmente vai dar o padrão da amostra. Então, suponhamos que este seja o padrão estabelecido, você pode ter que 2 condições onde em uma condição, eu estou recebendo esse tipo de padrão ou as outras condições você está recebendo uma condição como esta.
Então, não há distribuição ou suponha que isso seja assim. Então, esta é, na verdade, uma amostra que está bem preparada, pois você está obtendo uma distribuição de todas as células do FSC versus SSC porque agora você pode ser capaz de ver todas as populações de células ou a população de células presentes na amostra, enquanto que neste caso, suas todas as células estão presentes sobre os cantos da esquerda, o que significa quer a maneira como você processou a amostra, ela está realmente destruindo todas as outras amostras ou está realmente causando os agregados dessas células.
Então, estes porque estão fazendo com que os agregados as células estejam sempre presentes no canto inferior esquerdo da amostra e então esta amostra não é boa o suficiente, pois então não é possível fazer a análise de histograma e pedir qualquer pergunta porque não processou a amostra adequadamente. Agora, uma vez que você tem isso, então você tem uma escolha que deseja coletar o enredo de ponto ou se quer coletar a trama de histograma, então depois de uma vez você ver que então você pode pedir que você queira coletar a trama de histograma.
Então, então você pode fazer FL-1 ou FL-3 ou o que quer que seja e então ele realmente vai dar a amostra para o FL-3. Então, FL-3 ou FL-1 você está sempre coletando em termos de escala de log. Então, você pode ver que na verdade vai dar 10 para a potência 0, 10 para a potência 1, 10 para a potência 2, 10 para a potência 3. Agora, aqui também você tem que sempre considerar que quando você está olhando para a trama de histograma e você está procurando a trama de histograma de amostras não rotuladas.
Você pode ter o múltiplo direito livre porque a amostra não rotulada vai ter um nível muito baixo de fluorescência, sempre vai ser assim, mas você tem a flexibilidade em um citômetro de fluxo que você pode ser capaz de aumentar a corrente assim como o ganho dos instrumentos. Então, o que é significa pela corrente e o ganho é que é uma forma virtual de dar mais intensidade à amostra.
Assim, quando você der mais intensidade para amostra ela acaba por lhe dar mais a fluorescência. Assim, isso pode ser modulado com a ajuda do laser. Por isso, se você fornecer mais corrente ao laser, a intensidade do laser vai subir e como resultado, vai dar mais sinal. Como você pode alterar a corrente assim como o ganho, você pode ser capaz de deslocar esses picos em ambas as direções. Então, por exemplo, se eu estou usando uma corrente de 400 que ainda posso usar, eu posso simplesmente converti-la para 700.
Então, o que eu fiz por ter acabado de aumentar a corrente para 1,5 volts. Então, nesse caso o pico vai ser deslocado para este lado, se eu fizer o inverso a corrente é então o pico vai ser deslocado nessa direção. Porque, toda a coisa que você vê no citômetro de fluxo é muito relativa é sempre relativa ao que você fez para as células de controle. Assim em condições ideais quando você está fazendo as aquisições de dados.
E quando você tenta fazer um enredo de histograma, o que você prefere é que você vê que começou com 10 para o power 0, 10 para o power 1, 10 para o power 2, 10 para o power 3. Então, o que você prefere deste lado, você vai ter número de células. Então, o que você prefere é para amostras não rotuladas, deve ficar em torno de 10 até o poder 1 e deve dar um pico. Então, isso; você pode ser capaz de ver a mudança na fluorescência dessa amostra específica rotulada em ambos os rumos.
Por exemplo, se eu estou olhando para o não tratado versus a amostra tratada, e não sei se a fluorescência vai subir ou descer, então nesse caso, se eu mantenho o pico a 10 power 1. E suponha que os picos foram deslocados para este lado quando eu estou tratando a amostra com algum tipo de droga ou algo e a fluorescência não vai aumentar então neste caso, ele realmente vai te dar o pico deste lado e supor que haverá um aumento no pico então ele realmente vai dar um pico neste lado.
Considerando que, nas demais condições em que você está realmente mantendo o pico de amostra não tratada muito próximo de 10 para ligar 0 ou menos de 10 para a potência 0 então nesse caso, você não conseguirá ver qualquer movimento do pico em direção ao lado esquerdo porque aquele tempo que você sabe lado esquerdo não é existente porque 10 para o poder 0 é a escala mínima possível neste tipo específico de analisadores.
Então, é por isso que é importante que você mantenha o pico de tal forma para que você possa ser capaz de ver o movimento do pico em ambos os lados. É isso que a aquisição de dados tem que ser feita em várias ocasiões como uma vez que você vê as amostras de controle e uma vez que você vê a amostra não tratada atual você tem que modular a amostra não tratada com a ajuda da corrente também