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Interação Anticorpo-Antigénio
Olá todo mundo este é Dr.Vishal Trivedi do departamento de biociências e bioengenharia do IIT Guwahati. E hoje vamos discutir sobre a interação dos anticorpos com o antígeno nas palestras anteriores que discutimos como gerar os anticorpos que discutimos sobre a geração dos anticorpos policletonais e assim como o anticorpo monoclonal. Assim, uma vez que você gerou o anticorpo você gerou a primeira ferramenta imunológica para usá-lo para diversos fins.Então um dos propósitos de gerar um anticorpo é estudar a interação do anticorpo com o antígeno. Por isso, vejamos como o anticorpo e o antigénio realmente interagem uns com os outros e como isso pode ser explorado para projetar diferentes tipos de experimentos ou diferentes tipos de ferramentas para estudar os vários processos biológicos.(Consulte o Tempo do slide: 02:02)Assim como você pode ver que você tem um anticorpo e então você tem um antígeno este antígeno poderia ser composto por uma ou mais regiões epitopicas por exemplo neste caso temos as 6 regiões epitopicas como 1 2 3 4 5 e 6. E o que se pode ver é toda essa região epitópica na verdade sãoproduzindo os anticorpos ou todas essas regiões epitópicas são antigênicas na natureza então eles estão realmente produzindo os anticorpos e todos esses anticorpos são exclusivos dessa região epitópica.O que significa que o anticorpo e antígenos estão realmente formando um par de cognato onde um anticorpo é exclusivo para um antigénio específico especificamente o anticorpo é específico para aquela região epitopica específica. O que significa que se você tem o anticorpo para a região epitópica 6 ele realmente vai reconhecer esse epítopo em particular e como um global ele também vai permitir que você reconheça o antigénio também. Então, por que os antígenos e anticorpos estão formando o par de cognatos.Porque eles estão realmente trabalhando nos princípios de reconhecimento exclusivo onde você tem os determinantes exclusivos que estão permitindo que o antígeno e os anticorpos interajam entre si e que a interação seja muito específica e exclusiva.(Consulte o Tempo do slide: 03:42)Agora vamos ver que você tem um anticorpo e então você tem um antígeno e como e por que ele está realmente tendo as interações exclusivas ou espasticidade exclusiva. Porque o antigénio é constituído por uma estrutura dimensional de 3. Sendo assim, você tem uma estrutura dimensional de 3 que é composta pelo anticorpo. E o que se pode ver é que ele pode realmente permitir que os antígenos interajam e os antígenos que estão realmente mapeando com o tipo similar de estruturas dimensionais de 3 sejam realmente autorizados a interagir com os anticorpos.Além disso, os anticorpos também estão fornecendo os diversos espaços onde eles realmente vão fornecer ou o local para a interação eletrostática ou as interações hidrofóbicas. Por exemplo neste caso este site está realmente tendo um resíduo carregado positivamente para que aconteça é que realmente vai permitir que o antigénio tenha um reidue carregado negativamente. Assim, até mesmo a estrutura dimensional de 3 de um anticorpo assim como o antígeno está combinando. Mas os resíduos positivos que estão presentes neste lado não estão a obter um resíduo negativo presente no antigénio.Não está realmente a permitir que este e particular antigénio se vincule o que significa que pode haver múltiplos antígenos que na verdade podem estar a formar aquele tipo semelhante de estruturas dimensionais de 3. Mas até que, a não ser que essa interação não vá ficar satisfeita o anticorpo não vai reconhecer o antigénio para formar o complexo estável. Da mesma forma você tem um site para a ligação de hidrogênio para que o anticorpo possa ser um doador de hidrogênio é por isso que na verdade ele está procurando um aceitador de hidrogênio no antigénio para que ele seja capaz de formar uma ligação de hidrogênio estável.Da mesma forma você tem os grupos que na verdade estiveram participando das interações da parede maravilha e por outro lado também tem os grupos que na verdade estão envolvidos na interação de empilhamento do pipeline. Assim, toda essa interação assim como as estruturas dimensionais de 3 realmente proporcionam a especificidade nos anticorpos para reconhecer o antigénio ou a região epitópica presente no antigénio.(Consulte o Tempo de deslizamento: 06:12)Agora a interação antigénio do antigénio poderia ser de múltiplos tipos porque como se pode ver que o antigénio poderia ser de múltiplos tipos. Por exemplo, o antigénio poderia ser um antigénio insolúvel ou poderia ser um antigénio solúvel então o que é médio pelo antigénio insolúvel é que. Por exemplo as células como por exemplo você tem o RBE so o RBE é um antigénio que na verdade não é solúvel na solução que na verdade vai formar um material particulado. Por exemplo se você manter o RBC no qualquer tampão ele realmente vai se estabelecer.Então, é por isso que está caindo sob a categoria dos antigénios insolúveis as outras moléculas que também são insolúveis são como vírus ou algumas das bactérias também estão a cair sob os antigénios insolúveis. Os antigénios solúveis são, em sua maioria, as substâncias proteináceas como as proteínas ou o DNA ou o RNA. E em algum momento também os lipídios para que as moléculas que são solúveis em meios aquosos estejam caindo sob os antígenos solúveis. Portanto, se o antígeno for insolúvel ele realmente vai interagir com anticorpos e vai participar das reações de aglutinação.Reações de aglutinação são as reações em que o anticorpo vai interagir com o antígeno e na verdade vai formar uma rede ou a mesh. Por causa disso, na verdade vai desgargalhar que vai bater em todo o antígeno contendo um antígeno particulado. Considerando que se o antígeno for solúvel na natureza ele vai interagir com os anticorpos. E em um processo seus anticorpos vão precipitar o antígeno a partir das proximidades.O exemplo clássico nas reações de precipitação são o assado de difusão de imuno radial, assim como as imunoprecipitações. E, além da interação antigénio antigénio que estão a participar na reação de aglutinação ou nas reações de precipitação o antigénio interacção antigénio é também responsável pelo desenvolvimento de diferentes tipos de imunoensaio como o ELISA RIA ou o western blotting. Então na palestra de hoje ’ vamos realmente discutir a maioria dessas técnicas e então vamos gostar também de ver como essa técnica pode ser utilizada para resolver os alguns dos problemas científicos.Como realizar a hemaglutinação assina o material o que você exigia para fazer o dosagem de hemaglutinação é o que você exige dos RBCs que você exige dos leitores de placas de microtitre ou placa de microtitre você requer o PBS. Então você requer a micropipeta e as dicas que você exige dos tubos cônicos então você exige a centrífuga com um rotor de balde oscilante e você requer uma solução de balada para que você seja capaz de desinfectar o vírus contendo artigos para que não haja contaminação cruzada dos vírus para os outros objetos.(Consulte o Tempo do slide: 23:57)Na etapa 1 você tem que preparar as RBCs então o que você faz é coletar 1 2 ml do sangue com EDTA para que ele contenha o anticoagulante então as RBCs frescas devem ser preparadas para este assay porque as RBCs frescas vão ter a quantidade muito alta de antigénio assim como as RBCs frescas não vão mostrar qualquer degradação do antigénio que está a ser expresso em sua superfície celular então você gira a esta por 1500 rpm por 10 minutes cuidadosamente.Remova a camada de buffy branco o que significa que você retire a parte de cima da paleta de RBC e depois remova a parte do soro então você dilui a pelada resultante na PBS e misture-a com o giro invertido a 1500 rpm por 10 minutes descarte o sobrenadante repita a lavagem 3 4 vezes e então você prepara uma solução 1% RBC usando o salina de 1 x fosfato como um diluente. Uma vez que suas RBCs estão prontas então você pode realmente fazer as diluições virais.(Consulte o Tempo do slide: 25:02)Então diluições virais você vai fazer como uma diluição serial para cada poço você adiciona o microlitro de 50 do PBS e então você vai fazer uma diluição serial dos vírus então o que você faz é pegar os vírus primeiro você adiciona o vírus na primeira amostra e então você vai realmente fazer uma diluição em série simplesmente transferindo os vírus de um poço para outro bem e é assim que você vai realmente vai preparar uma diluição serial das amostras do vírus.O que significa que você vai preparar uma dobra diluições descartar o microlitro de 50 do último poço para as soluções de água sanitária então você prepara o controle positivo e negativo adequado o controle positivo deve ser de uma amostra em que o vírus já é conhecido por estar presente enquanto o controle negativo seria apenas ter o RBC e o PBS então você adicionar o 50 microlitro da RBC a todos os poços a quantitativa de trabalho seria os 0,5% RBCs.Então você os mistura suavemente e fecha a tampa e então guarde ou incubá-los para a temperatura ambiente por 15 30 minutes minutos para desenvolver ou para realizar as reações para que se vá mostrar o hemaglutination assay.(Consulte o tempo de deslizamento: 26:26)Em última análise o que você vai ver é isso então o que você vai ver é só colocar os vírus nas diferentes diluições como 1 1 é para 4 1 é para 8 é cada vez que ele está diluindo em metade e finalmente você vai ter as múltiplas diluições como até 1 é para 128 então no controle positivo o que você vê é que o até 32 você está realmente obtendo um padrão de RBC com um padrão nebuloso então o que se vê é na verdade um padrão nublado que na verdade é um representante com a indicação do assado de hemaglutinação.Considerando que você vê esse RBC este é um botão de RBC suave que na verdade é indicação de que o assado de hemaglutinação não está funcionando nesta determinada concentração uma vez que a concentração do vírus irá descer para um determinado nível então não será suficiente aglutinar as RBCs e é assim que você vai ver um botão de RBC suave agora você tem uma amostra 1 e amostra 2 so na amostra 1 o que você vê é que na verdade ele está livre de vírus porque não está mostrando um dosador de hemaglutinação.Os botões de RBC estão presentes desde o primeiro bem em si enquanto que na amostra número 2 você tem a aglutinação reação o padrão nebuloso aqui o padrão nebuloso aqui e o padrão nebuloso aqui mas no dos anos 1 é até 8 você realmente começou a obter o botão RBC que indica que os vírus tem o titer de 1 é a 8 na amostra 2 enquanto que o controle de hemaglutinação do controle positivo é que o título de hemaglutinação do controle positivo é o 32 ou o 2 para a potência 5.Considerando que o vírus sem vírus foi observado na amostra 1 portanto tem a unidade 0 HA e o titer HA da amostra 2 ou a 2 para a potência 2 na verdade estão em 50 microlitros so que isso vai te dizer que o que amostra é ter a quantidade mais quantidade de vírus e qual amostra tem a menor quantidade de vírus e você pode ser capaz de quantificar o número de vírus presentes em cada amostra e este é um ensaio muito útil para detectar o vírus em uma determinada amostra e assim como você pode ser capaz de quantificar o nível de vírus presentes naquela solução específica.Agora vamos voltar às interações antigénio anticorpo até agora discutimos sobre as reações de aglutinação em que também temos discutido sobre a hemaglutinação e dentro da aglutinação que temos discutiu-se sobre o direto assim como as reações de aglutinação indireta agora nos deixam discutir sobre os antígenos solúveis por isso uma vez que o antígeno é solúvel vai-se formando o precipitado interagindo com os anticorpos.E dentro das reações de precipitação você tem os 2 ensaios como o ensaio de difusão imunológica radial tanto quanto as imunoprecipitações para estudar a interação entre o antigénio assim como os anticorpos.(Consulte o tempo de deslizamento: 30:00)Portanto, reações de precipitação a reação de um antigénio solúvel com os anticorpos IgG ou os anticorpos IgM para formar um grande intertravamento agregados são chamados como as reações de precipitação. As reações de precipitação são formadas pelos anticorpos são conhecidos como os precipitantes so o precipitado o que ésendo formado pelos anticorpos são conhecidos como os precipitantes ele ocorre em 2 estágios portanto a interação antigénio ocorre em 2 estágio para formar o precipitado no estágio 1 ele realmente é uma reação rápida.Onde assim que você adicionar os anticorpos para o antigénio haverá uma rápida interação dentro de um segundo entre o antigénio e anticorpo para formar o complexo antigénio antigénio uma vez que esta rápida interação ocorre e o antigénio e o anticorpo estão a formar um complexo estável então eles procedam ao estágio 2 onde haverá uma lenta taxa de reação completando-se mesmo dentro de alguns minutos ou horas e formando um latício dos complexos anticorpos que significa agora no estágio 2 que é na verdade uma reação lenta.Todos esses complexos anticorpos antigénios vão formando um clump ou o lattice e fazendo-se assim os estes complexos vão sendo tão pesados que na verdade não vão ser solúveis nos meios de comunicação aquosos e é assim que vão realmente ser removidos ou vão formar-se uma matéria particulada que na verdade pode ser visível a olho nu. Incompatibilidade dos anticorpos e da relação antigénio anticorpo so o que é muito importante para os anticorpos antigénios ou anticorpos antigénios para formar o precipitado.É que se deve fornecer a quantidade adequada de antigénio assim como os anticorpos porque se haverá uma incompatibilidade entre o antigénio ou o anticorpo demasiado baixo antigénio ou antigénio demasiado elevado os anticorpos não vão formar o precipitado ideal e é tudo importante que você deve adicioná-los em uma determinada proporção para observar as precipitações ideais sem precipitações visíveis é formado se você tiver a proporção inadequada de antígeno e anticorpo.(Consulte o Slide Time: 32:34)Agora o primeiro experimento o que vamos discutir são os ensaios de imunodifusão ou imunodifusão testa os testes de imunodifusão são realizados em um meio de ágar de gágnio um do ensaio de imunodifusão é chamado como o teste de Ouchterlony nos poços de agarose e neste bloco de agarose o que você vai fazer é você vai cortar o poço e esses poços vão conter o antigénio ou os anticorpos e depois vai-se adicionar os anticorpos ou o antigénio para estes bem.E o que vai acontecer é que o antígeno vai mesmo se difundir a partir desses poços em todas as direções similarmente você pode imaginar que o antigénio 2 também é o inter é difunto para este e o anticorpo também é difunto no ágar e o que vai acontecer é bem quando eles estão se difunde eles realmente vão se encontrar uns com os outros e é assim que eles no seu ponto de encontro estes 2 estão realmente indo formar o precipitado portanto o que você vê é que neste caso específico o antigénio 2 está realmente formando um precipitado contínuo.O que significa o antigénio 1 e assim como o antigénio 2 são realmente são idênticos uns aos outros e são semelhantes uns aos outros e são semelhantes uns aos outros é por isso que estão realmente mostrando o precipitado visível e eles estão realmente formando um precipitado contínuo quando próximo dos anticorpos so formados uma linha de precipitado visível é formada entre o poço onde após difusão ótima proporção de anticorpo antígeno é formada então antígeno e anticorpo passa a ter uma concentração altíssima a sua concentração é diluir similarmente quando o antigénio se difunde é também a concentração é altíssima ao lado do poço mas quando é difusa e isso é tudo o que você é realmente ir alcançar concentrações ideais antigénios de antigénio para ver o precipitado visível.(Consulte o Tempo do slide: 34:54)Agora o próximo é o assay de imunodifusão radial. Ensaio de imunodifusão radial é uma técnica de ensaio de imunodifusão quantitativa utilizada para detectar a concentração de antigénio através da medição do diâmetro do anel precipitante formado pela interação do antigénio e do anticorpo em uma consideração ideal neste método o anticorpo é incorporado ao gel de agarose enquanto o antigénio se difunde em um padrão radial assim o anticorpo é uniformemente distribuído por todo o gel.Então, comparado com os ensaios de imunodifusão neste um que você está fazendo é simplesmente você está a tomar um bloco de agarose e na verdade está adicionando os anticorpos em que isso significa que o bloco de agarose vai ter a concentração homogênea dos anticorpos então você tem um bloco de agarose que realmente contém os anticorpos em uma consideração homogênea em relação aos imunoensaios radiais nesta que você está realmente tendo em comparação com os ensaios de imunodifusão.Neste você está realmente tendo a concentração constante dos anticorpos em todo o bloco de agarose e então o que você faz é realmente vai cortar um poço e então você vai realmente adicionar o antígeno nisso uma vez adicionado o antigénio; o antigénio vai paradifuso e na verdade vai se concretizar em uma determinada concentração ela realmente vai se manter interagindo com o anticorpo que está presente neste bloco de agarose e então é começar a fazer o precipitado dependendo de quanto antígeno você está tendo neste particular bem.Ele na verdade vai dar um anel de precipitação proporcional à concentração do antígeno o que você adicionou no poço o diâmetro do anel precipitado é proporcional à concentração do antígeno com concentração crescente do antígeno o anel de precipitado com o com será um maior diâmetro são formados o tamanho do anel de precipitado vai depender dos seguintes 4 fatores número 1 ele realmente vai estar presente na concentração de antígeno o que você está levando na amostra bem.Número 2 ele também depende da concentração de anticorpo de agarose o que você está levando para este específico bloco de agarose porque se o anticorpo vai ser o antigénio não vai ser suficiente se o anticorpo estiver limitando então o antigénio mesmo no antigénio é mais o anel de precipitado será proporcional ao fim a concentração do anticorpo então tu o também dependerá do tamanho da amostra bem assim porque a quantidade do bem o que você vai levar a difusão vai começar a partir daí.Então o tamanho do anel de precipitado também será proporcional a isso e então o volume da amostra também será muito importante para ver o diâmetro do anel precipitado.(Consulte o Tempo do slide: 38:08)Como realizar esta redação a curva padrão pode ser obtida a partir da qual pode-se determinar a quantidade de antígeno em uma concentração desconhecida por exemplo você pode realmente fazer a amostra desconhecida de diferentes concentrações para que você possa fazer um antigénio de quantidade diferente e que na verdade lhe vai dar o anel de precipitação de diferente diâmetro. Então o que você pode fazer é simplesmente traçar os diâmetros desses anéis no eixo y.E você pode realmente traçar a concentração do antígeno sobre o eixo x e então o que você pode fazer é simplesmente usar a concentração desconhecida e você pode simplesmente ser capaz de determinar a concentração desse antígeno específico se os mais de um anel aparecem no teste por exemplo se você tem os 2 anéis como este então isso realmente implica que você tem mais de um antigénio presente em sua mistura de reação.O que significa que estes antígenos estão realmente tendo as reações diferenciais com os anticorpos que este poderia seja a mistura de antígeno ou o anticorpo para que isso possa ser porque você qualquer que seja o anticorpo que você está adicionando não é puro então ele está realmente tendo os 2 anticorpos diferentes e que fazem estes 2 anticorpos diferentes têm os diferentes tipos de interação com o antigénio e por causa disso você está realmente obtendo os 2 anéis um anel que é para o anticorpo 1 o outro anel que é para o anticorpo 2 ou em outro caso você tem o anticorpo único.Mas você tem 2 antígenos que também estão tendo a interação com o anticorpo so o anel menor que você está recebendo para o antigénio 1 de acordo com a sua concentração e o anel maior que você está obtendo para o antigénio 2 que também é de acordo com a sua concentração particular este ensaio é comumente utilizado nos laboratórios clínicos para a determinação do rótulo de imunoglobulina nos pacientes Assim com estes ensaios imunológicos radiais você pode realmente ser capaz de determinar os anticorpos você pode ser capaz de determinar os anticorpos.Porque ele realmente vai te dar o anel de precipitante para que você realmente possa ser capaz de detectar ou você pode ser capaz de diagnosticar a presença do anticorpo na amostra ou a presença do antígeno.(Consulte o Tempo do slide: 40:33)Agora deixe nós vemos como realizar este ensaio e qualquer que seja o material que você é necessário o material o que você exigiu são os glasswares como frasco de medição de frasco e reagentes de copo você requer agarose para que você possa preparar o bloco de agarose então você será capaz de preparar o amortecedor padrão então você requer os antigénios padrão de então você requer é a incubadora de 37 grau Celsius incubadora um micro-ondas ou o queimador.Para que você seja capaz de preparar o bloco de agarose então você será capaz de um vortex mixer mixer spatula micropipette e todos estes tipos de itens menores.(Consulte o Tempo do slide: 41:18)Para os procedimentos primeiro você tem que preparar um gel de 1 ml de agarose para que você realmente só pesa a quantidade de agarose o que você exige e então você coloca para fora os 6 ml dessa solução de teste em um tubo de ensaio permite que a solução esfrie até 55 60 grau Celsius esta é uma etapa muito importante que você deve permitir que esta solução esfrie para que quando você adicionar os anticorpos aos anticorpos da solução não deve ser desnaturado e adicionar o microlitro de 80 de antisoro a 6 ml de soluções de agarose.Mix bem para distribuição uniforme dos anticorpos então você despeja as soluções de agarose contendo as entaas em uma placa de vidro livre de gordura não gordurada colocada na superfície horizontal permite que o gel se fixe por 30 minutes o que significa que você vai pegar um bloco de vidro e este bloco de vidro não deve ter um revestimento brilhante para que você tenha um revestimento brilhante assim se você tiver um revestimento brilhante este um bloco grosseiro não vai se ater a isso.Então o que você precisa é um copo que não tem o revestimento brilhante e ele deve ser áspero na verdade para que ele seja capaz de segurar o bloco grosseiro então você realmente vai despejar o agarose sobre isso e aí você deixa que a agarose se solidifique uma vez que o agarose é solidificado então você realmente vai socar os poços com a ajuda de um puncher de gel que na verdade você vai poder carregar os antígenos para que você consiga carregar os antígenos para esta use gelatins uma vez que você no orifício você pode remover este bloco de agarose.Para que haja um poço para carregar as amostras então você pode adicionar o microlitro de 10 do antigénio padrão e o antigénio de ensaio no poço e depois você incubar esta placa de vidro em uma câmara úmida porque se você permitir que a água evapore a partir disso a agarose não vai ficar como uma folha fina então você tem que parar a evaporação da água então o que você pode fazer é simplesmente adicionar algum tecido que é tecido molhado na água para que ele venha manter o teor de umidade intacto dentro desta câmara.(Consulte o tempo de deslizamento: 43:39)Agora é só incutá-lo para o durante a noite e então você vai ver os resultados então você observa o anel de precipitação em torno do antígeno bem marque as bordas do anel precipitado e meça o diâmetro então o que você vai ver é ver por exemplo este é o poço e o que você vai ver é um anel de precipitação em torno deste similarmente este é o outro antígeno que ele vai ver o anel de precipitado então o que você vai fazer é apenas esboçar esse anel e então você vai determinar o diâmetro desse anel de precipitação em particular.E o que você vai observar é que o contra a concentração você tem que anotar o diâmetro e então você também pode anotar o diâmetro para as amostras de teste então o que você vai fazer é enredo estes em uma curva.(Consulte o Tempo do slide: 44:31)E você pode ser capaz de usar essa curva para calcular a concentração do antigénio em amostras desconhecidas enquanto você está realizando este assay você pode ter que você pode enfrentar os diferentes tipos de problemas e é assim que você realmente pode fazer a resolução de problemas também. Qual é o problema você pode não ver uma forma de anel de precipitação nesse caso você pode não ter feito o qualquer sensação inadequada inadequada dos poços ou você pode ser capaz de incubar o gel de agarose ficou secado enquanto você estava fazendo a incubação.Então enquanto ele vai ficar seco ele vai mesmo afetar a difusão do antígeno e é assim que na verdade não vai dar os anéis de precipitação quando você está realmente adicionando o antisera no agarose a temperatura de agarose não foi de 55 60. Mas foi um pouco mais alto e foi assim que os anticorpos ficaram inativados se você quer resolver esse problema o que você tem que fazer é ter que preencher a quantidade adequada das soluções no poço você tem que garantir que haja hidratante suficiente na câmara.E então você também tem que garantir que o agarose ficou resfriado chegar o suficiente para que o antisera não vai ser inativado em algum momento o que você vai observar também é o anel de precipitação de blur que significa que o anel de precipitado não vai ser muito claro cortado. Na verdade vai ser nebuloso nesse caso você pode o primeiro motivo é que pode ser por causa da inativação do soro ou pode ser por causa do entorse irregular do gel o que significa que sua espessura de gel é irregular.O que significa que ele não vai formar a superfície muito lisa e por causa disso está realmente mostrando um anel de precipitação embasado você pode simplesmente resolver este problema seja garantindo que o antisera não tenha sido inativado e a agarose esfrie completamente antes de despejar na placa de vidro. E então você também pode colocar a placa de vidro sobre uma superfície plana enquanto jorram o gel para que não haja pingamento irregular da agarose sobre as placas de vidro para que esta seja toda sobre os ensaios de imunodifusão radial onde discutimos cada detalhe dos protocolos deixe-nos seguir para o próximo slide.(Consulte o Tempo do slide: 46:54)O próximo é a eletroforese imune o princípio da eletroforese imunológica é baseado na movimentação dos antígenos e anticorpos para o pólo oposto após aplicar a corrente elétrica se a reação ocorrer você verá uma linha de precipitação até agora o que estávamos fazendo é simplesmente estávamos confiando na difusão do antígeno ou dos anticorpos e nesse caso você vai observar um anel de precipitação ou linha de precipitação mas em algum momento o antígeno ou o anticorpo o que você está manuseando são muito grandes e eles estão lá a taxa de difusão é muito lenta.Por causa disso não é possível que esses antígenos sejam testados em um imuno assado ou o imunodiffusion assisto então nesse caso é o que você simplesmente faz um gel de agarose e nesse caso você só sabe despejar a agarose pours o antígeno em um poço e os anticorpos em outro poço e depois você aplicar a corrente elétrica através deles para que aconteça o que vai acontecer é o antigénio e os anticorpos vão correr em sentido inverso e então enquanto eles estiverem correndo eles vão interagir uns com os outros e é assim que vão se formar o precipitado.Então o que você vai fazer é simplesmente adicionar o antígeno em um dos bem anticorpos em outro poço e então você vai aplicar o campo elétrico então uma vez que você aplicar os campos elétricos o antigénio vai correr para esta direção o anticorpo vai correr para esta direção e quando eles se encontrarão no ponto central que você vai ver uma linha de precipitação para que a linha de precipitação seja lhe dizer que este antígeno e este anticorpo estão interagindo uns com os outros.E este é este tipo de ensaio é útil para o diagnóstico da meningite bacteriana e das outras doenças portanto tudo se trata do estudo da interação do antígeno e anticorpo até o momento discutimos sobre as reações de aglutinação e nas reações de precipitação acabamos de discutir sobre os ensaios imunológicos radiais então com isso eu gostaria de concluir minha palestra aqui nas palestras subseqüentes que somos na verdade ir discutir sobre as reações de imunoprecipitação.E então vamos pegar os imunoensaios para discutir como realizar os imunoensaios e como você pode ser capaz de usá-los para responder as algumas perguntas biológicas assim com isso eu gostaria de concluir minha palestra aqui obrigada.