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Geração De Anticorpos

Olá pessoal, este é o Dr. Vishal Trivedi do departamento de biociências e bioengenharia, IIT, Guwahati. E hoje vamos começar o novo tópico e esse tema é a imunologia. Por isso, a imunologia é o campo da ciência, que basicamente estuda o sistema imunológico. Por isso, antes de entrar nos detalhes das ferramentas imunológicas, o que está disponível conosco e como explorá-los?
Temos que entender como funciona o sistema imunológico e assim, que você será capaz de entender em qual contexto vamos ser capazes de utilizar essas ferramentas e como explorá-las para a compreensão dos diferentes tipos de problemas biológicos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 01:43) Assim, o sistema imunológico é o sistema é o que protege o organismo contra os patógenos invasores e estas são uma reações específicas, que induzem em um hospedeiro por um estímulo antigênico é conhecida como resposta imune. Assim, uma vez que um antigénio estrangeiro como a bactéria, o vírus ou o fungo entram no hospedeiro, ele realmente reconhece este organismo em particular como o non self e em resposta ao non self, o sistema imunitário é que não está exercendo as reações, que na verdade vão destruir este organismo estrangeiro.
Assim, coletivamente todas as respostas o que estão sendo desenvolvidas contra um antigénio estrangeiro é conhecido como resposta imune e estas respostas imunes poderiam ser de 2 tipos diferentes, poderia ser uma imunidade mediada humoral ou a imunidade mediada pelo celular. Na imunidade humoral uma imunidade mediada principalmente o complemento de anticorpo e outros componentes humorais estão mediando este tipo específico de imunidade que significa, toda resposta humoral significa, toda resposta o que está sendo mediado pelo componente líquido.
Por exemplo, se a célula está secretando alguma célula de enzimas citotíticas estão secretando a célula dos anticorpos estão secretando os elogios e todos estes estão realmente circulando dentro do sangue e eles estão realmente monitorando continuamente os organismos estrangeiros. Então, assim que o organismo estrangeiro entra no corpo, essa resposta humoral está realmente reconhecendo essas células e então ou elas estão matando essas células ou elas estão realmente tomando a ajuda da resposta imunológica mediada por celular.
É por isso que a resposta humoral fornece a diferença contra o patógeno bacteriano, assim como o patógeno viral. Por isso, a resposta humoral é a resposta feia, que está sendo desenvolvida contra os patógenos muito mortíferos como a resposta bacteriana ou a resposta viral, por exemplo, quando obtemos as infecções frias ou de gripe, nós a primeira resposta, que vem é a resposta humoral fácil que é, o vírus é reconhecido pelos anticorpos.
Assim como os demais componentes da resposta humoral e eles tentam provocar a resposta imunológica. Da mesma forma, se haverá uma infecção bacteriana, o complemento assim como o sistema relacionado na verdade é ativado, e é assim que eles destroem a resposta humoral das células bacterianas sempre tiram a ajuda da resposta mediada pelo celular para criar uma resposta mais robusta e longa duradoura.
Então, a outra resposta é a imunidade mediada pela célula, em que você envolve as células como as células T e B, ela protege o organismo contra o vírus fungi e patógenos bacterianos intracelulares, além de fornecer também fornece a imunidade contra os cânceres. Então, a resposta imunológica mediada por celular é mais robusta, ela longa duração e ela realmente cria uma memória dentro dos organismos.
Assim, sempre que haverá uma segunda volta de entrada dos patógenos semelhantes, ele realmente reconhece instantaneamente esse patógeno e cria a resposta imune robusta e a resposta imune mediada por células é contra os fungos, vírus e especialmente os patógenos intracelulares. Por exemplo, a mycobacterium tuberculosis e além disso, quando a célula está ficando irregular ou a célula está realmente se transformando em células cancerosas, a resposta imunológica mediada pelo celular também está agindo contra as células cancerosas para eliminá-las do corpo.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 05:51) Então, o dentro da resposta humoral, o anticorpo é a molécula central, que está ocorrindo ou que está realmente governando os diferentes tipos de respostas imunes envolvendo os diferentes tipos de células. E é por isso que antes de entrar no detalhe das respostas mais imunes, é importante entender a estrutura do anticorpo imunológico, para que você seja capaz de entender a interação do anticorpo com o antigénio assim como as outras aplicações do anticorpo. Por isso, anticorpo é uma estrutura em forma de Y ou molécula em forma de Y.
O que realmente contém as 2 correntes uma é a luz, onde o dinheiro é a cadeia pesada e o outro é chamado como a cadeia de luz esta, assim, você tem a cadeia pesada de 2 e as 2 cadeias de luz, que estão sendo ligadas entre si pelas pontes sulfídras entre o pesado assim como a cadeia de luz e além disso, assim, esta molécula em forma de Y tem 2 região. Uma é a região de cadeia pesada que se chama ou a região do terminal C que é chamada como região constante.
E a região superior que é formada pela cadeia de luz assim como a cadeia pesada é chamada como o local de ligação de antígenos. Então, você pode imaginar que sempre que haverá um antígeno, que está chegando nas proximidades dos anticorpos, ele está realmente interagindo com esta porção específica e esta porção em particular está reconhecendo esse antígeno e se a interação é estável o suficiente, ele realmente vai e liga de ligação de ligação de antigénio.
Fora que esse anticorpo é muito, muito suscetível para algumas das proteases. Assim, se você, por exemplo, se trata desse particular, o anticorpo com a protease, o mais algumas das proteases estão limpando esse anticorpo em 2 parte, mas eles estão mantendo a região constante longe da região suportável ou da região de ligação do antigénio. Então, é assim que você pode ser capaz de afinar a produção do anticorpo do antigénio de tal forma que ele realmente vai ativar a maquinaria celular mas ser ele não vai ligar-se ao antigénio.
Então, porque essa região é uma região constante ela realmente tem um receptor para sobre a superfície celular. Então o que aconteceu é quando o antigénio se liga a este anticorpo em particular, esta região constante é vinculativa para um receptor? E é assim que ele realmente está governando a nossa jusante sinalizando para dentro da célula. E é assim que ele realmente está eliciando as respostas imunes daquelas células particulares.
E é assim que os anticorpos que estão realmente a circular no sangue é vinculativo para o antigénio e é assim que está realmente a trazer os anticorpos ligados ao antigénio para o receptor, e é assim que está a activar de facto aquelas células por causarem a resposta imune mais robusta. Fora isso, porque o antigénio é vinculativo para este sítio de ligação de antigénio específico, não está a ligar o antigénio para circular.
Por exemplo, se você tem bactérias, o que na verdade pode ser perigoso para o hospedeiro, as bactérias não podem replicar até que ele esteja se movendo livremente. Então, o que aconteceu é que a bactéria vai se ligar a essa região específica da molécula e como resultado a bactéria vai ser sequestesada em uma área muito pequena. Por isso, os anticorpos estão principalmente fazendo 2 função principal uma é realmente sequesterizar o antígeno para uma área muito, muito localizada.
Assim, que as outras células como os macrófagos e as células dendritas, e todos os outros tipos de células T e B realmente chegam a essa vizinhança particular e poderiam ser capazes de destruir este antigénio estrangeiro específico, além de que este anticorpo ligado antigénio vai realmente ligar-se aos receptores presentes nas células imunes. E é assim que vai, na verdade, activar a sinalização a jusante e que a jusante sinaliza.
Poderia realmente ser capaz de ativar a resposta imune mais robusta dessas células, ou seria na forma de produção de mais quantidade de anticorpos ou poderia ser de fato, na forma de produção das enzimas citotíticas, radicais livres todos os outros tipos de respostas imunes, portanto, que o este determinado antígeno estrangeiro ou organismos patogênicos estrangeiros poderiam ser destruídos por isso. Então, essa é a principal função dos anticorpos no, que está participando da resposta imunológica, vamos ver como os anticorpos estão sendo produzidos em um hospedeiro como os humanos.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 11:12) Assim, a geração de anticorpos é um processo de 4 etapas em um organismo sob as condições naturais, ele tem uma fase de atraso. Assim, na fase de lag, o que está acontecendo é que, na verdade, é a nesta fase em particular haverá uma entrada de patógeno e então esse patógeno vai ser contatado pelas células imunes. Então, esta é, na verdade, uma fase de lag que também pode ser chamada como fase preparatória.
Onde o antígeno estrangeiro entrará no corpo do hospedeiro e então esse antígeno estrangeiro vai ser reconhecido pelas células imunes e então eles realmente vão começar a preparação para como enfrentar o antigénio estrangeiro na segunda fase, você tem a fase de log. Então, então a fase de log que você realmente vai ver, haverá um aumento na produção de anticorpos. O que significa que, as células anti-imunes passaram a adquirir ou a entender as estratégias como enfrentar este antigénio estrangeiro específico.
E depois passaram por múltiplos processos e em que processos e após o término desses processos, começaram a produzir os anticorpos e eles como eu disse no próprio slide anterior, que esses anticorpos agora vão começar a sequesterizar esse antígeno. Então, que não deve ser capaz de se espalhar por todo o corpo. Em seguida, no terceiro está a fase de planalto o planalto será o equilíbrio entre a síntese do anticorpo, assim como o catabolismo.
Por isso, nesta fase, na verdade, o antígeno estrangeiro está prestes a ser eliminado do corpo ou porque nesta fase a produção de anticorpos bem como o anticorpo que está vinculado ao antigénio ou que já foi consumido vai ser o mesmo. É por isso que se você ver a produção de anticorpos vai ser constante em toda esta região e então você vai ter a fase de declínio. Então, haverá um declínio do titer de anticorpos que significa, a produção de anticorpos vai ser para baixo.
Por isso, nesta fase, a infecção vai ser sustentada para uma determinada área localizada. Mas ainda assim a infecção de intensidade ativa está aí. Assim, a produção de anticorpos assim como a destruição vai ficando constante e então você entra em uma fase de declínio onde os anticorpos estão indo para onde o antígeno vai ser eliminado do corpo, o que significa que com o organismo afasta a infecção do corpo e é assim que não haverá necessidade de produzir os anticorpos e é assim que a produção de anticorpos vai ser diminuida.
Nesta fase apenas o organismo vai começar a produzir as células da memória ou vai mesmo treinar a célula para que ela realmente guarde uma memória do referido antígeno estrangeiro específico. Assim, sempre que isso acontecer na segunda resposta ou na segunda vez, o tempo que o organismo tomou para a fase de lag, bem como a fase de log para fazer o passo pré-operatório vai ser encurtado.
E como resultado, se o mesmo organismo entrar na segunda etapa, é a resposta imunológica vai ser o mais rápido e é isso que a razão é que quando se está vacinando as crianças é ou mesmo os adultos, na verdade não está fazendo nada, mas a redução do preparativo fica para que, assim que os organismos chegam, o corpo comece a produzir os anticorpos e então esses anticorpos vão começar a sequesterizar o antígeno para uma área localizada e então começar a atuá-los, para que o sistema imunológico vá sendo eliminá-los.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 15:02) Agora, vamos ver como quais são os diferentes eventos necessários para a obtenção dos anticorpos produzidos nos organismos. Então, o primeiro evento é que o antígeno vai entrar no corpo do hospedeiro e depois o logo que o antígeno entrará no corpo do hospedeiro, as primeiras células que vão ser ativadas ou a primeira célula que vai encontrar esses antígenos são chamadas como antígenos apresentando células, estas células são os macrófagos ou as células dendritas.
Por isso, em todas as partes do corpo, onde há uma chance de você ter a entrada dos antígenos estrangeiros, você tem os macrófagos assim como a célula dendrita por exemplo, você tem as células kupffer, que estão presentes no fígado, você tem os macrófagos alveolares, que estão presentes nos pulmões, e então você tem os macrófagos em cada órgão, para que seja qualquer infecção que esteja indo para aquele órgão específico.
A primeira célula que vai encontrar esse antígeno estrangeiro específico são esses macrófagos. Então, o que é o trabalho desses macrófagos é que eles vão de fato processar o antígeno o que é médio por processo o antígeno é que eles realmente vão digerir esse antígeno e eles vão gerar os peptídeos antigênicos, o que significa que o organismo vai ser destruído e então você está realmente selecionando os antígenos.
Você está selecionando os peptídeos que são antigênicos e então esses antígenos apresentando células apresentarão esses antígenos ou os peptídeos antigênicos com a ajuda da classe MHC 2, uma vez que eles apresentarem esses peptídeos antigênicos com a classe MHC 2, estes vão ativar as células T-helper e as células T-helper em resposta ao antigénio que se apresenta na classe MHC 2 vai realmente activar as células B a jusante e uma vez activadas as células B.
Começam a ir produzir o anticorpo que realmente vai voltar a estimular ainda mais essas ações. Por isso, para o antigénio está entrando no corpo e antígeno apresentando células estão realmente reconhecendo os antígenos sem a ajuda de qualquer ferramenta. Por exemplo, haverá uma bactéria, o antigénio apresentando células estão a reconhecer a bactéria apenas pelas proteínas que estão presentes na parede celular bacteriana.
Mas, assim que haverá ativação de células B, os anticorpos vão ser produzidos e, em seguida, eles vão de fato a palmando as bactérias com este anticorpo em particular. E isso de fato vai permitir que o antígeno apresente células para reconhecer essas bactérias de forma mais eficiente com a ajuda do receptor de superfície celular, pois agora eles não são dependentes do antígeno que está sendo expresso na bactéria.
Pois a quantidade de antígeno que está sendo expressa na bactéria é muito pequena ou muito pouco comparada com os anticorpos, que vão ser uma ligação a esta bactéria em particular e o receptor para aquele receptor específico para o anticorpo vai ser com vai ser mais eficientemente ligar o antigénio que apresenta célula e é assim que toda esta cascata vai ser amplificada.
Enquanto isso, as células B vão se diferenciando nas células de plasma, e então as células de plasma vão começar a produzir os anticorpos, esses anticorpos são contra ir participar das respostas imunes. Então, é isso que vai ser mostrado na figura onde o antígeno vai ser processado pelo antígeno apresentando células como macrófagos, e então ele vai ser expresso junto com a classe MHC 2 e então que na verdade vai ativar as células T-helper.
E as células T-helper novamente vão ativar as células B e esse estágio a célula B vai ser diferenciado em 2 células, uma é chamada como as células de plasma O outro é chamado como células de memória e então as células de plasma começarão a produzir os anticorpos e esses anticorpos vão realmente contribuir mais para a resposta imune mais robusta porque esses anticorpos são solúveis na natureza.
Então, eles vão realmente ativar as mais células e resposta imune mais robusta porque o objetivo do anticorpo é sequester o antigénio assim como para amplificar o sinal inicial assim, que você vai mesmo ativar as respostas imunes completas.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 20:13) Agora, vamos entender o que se entende por parte da polclonal assim como o anticorpo monoclonal. Assim, anticorpos o que está sendo produzido por um organismo poderia estar em 2 categorias, um é chamado de policlonal o outro é chamado como os anticorpos monoclonais. Então, agora, o que você pode imaginar, o que você pode ver é que você tem um antígeno, você pode imaginar que esta é uma proteína muito grande, que realmente contém os múltiplos tipos de sites antigênicos.
E todos esses sítios antigênicos são chamados como epítopos o que significa que nosso antigénio poderia ter os múltiplos epítopos como 1, 2, 3, 4, 5 e 6 e todos estes epítopos quando vão ser processados pelo antigénio apresentando células vão ser expressos juntamente com a classe MHC dois e posteriormente. Eles na verdade vão ativar as células B e então as células B vão ativar as células de plasma.
Então, nesse processo, o que vai acontecer é que, na verdade, eles vão ativar as múltiplas células de plasma. Então, você vai ter por exemplo, se você está processando o epitope 1 ele realmente vai ativar um tipo de células de plasma e que na verdade vai começar a produzir os anticorpos. Da mesma forma, você tem os epitopes 2, 3, 4 e 5 todos esses epítopos estão realmente produzindo os diferentes tipos de anticorpos.
Que são anticorpos, que são direcionados contra um o anticorpo que são direcionados contra 2 e assim, em. Então, o que vai acontecer é que, se você recolher todos esses anticorpos, que estão vindo das diferentes células, por exemplo, este é o número 1, este é 2, este é 3, este é 4 e este é 5. Por isso, se você está coletando os anticorpos, que estão vindo dos 5 ou mais tipos diferentes de células, como diferentes tipos de células de plasma, que na verdade são os clones.
Em seguida, o anticorpo é chamado como anticorpo políclonal, o que significa o polo significa, muitos meios clonais, os clones que significa, se os anticorpos estão vindo dos múltiplos clones dos múltiplos antigénios ou dos antígenos, mas um múltiplos epítopos de um único antígeno, então o anticorpo resultante é chamado como anticorpo políclonal. Enquanto que, se você ver os epítopos número 6, ele realmente vai ser processado pela célula única de plasma e que na verdade vai dar-lhe os anticorpos.
E esses anticorpos vão chamar-se como anticorpos monoclonais. Mono significa clonal único significa o clone. Então, se um único epítopo está sendo processado pelo clone único e você está coletando os anticorpos a partir de um único clone. Em seguida, é chamado como os anticorpos monoclonais que significa, o anticorpo monoclonal, políclonal, significa que os anticorpos dos muitos clones e anticorpos políclonais vão sendo produzidos dentro dos animais nas condições naturais.
Assim, sob as condições naturais quando uma bactéria vai ser processada em um organismo, ela não produz o anticorpo monoclonal, ela produz os anticorpos contra os múltiplos epítopos de um único antígeno. O que significa que poderiam ser múltiplas proteínas e uma combinação de múltiplas proteínas ou pode ser um múltiplo epítopos ou múltiplas regiões antigénicas presentes no antigénio único independentemente destas condições.
O objetivo de produzir um anticorpo policletonal é que você quer aumentar os múltiplos anticorpos possíveis para um único antígeno. Assim, que você será capaz de reconhecer esses antígenos e você será capaz de criar nossa resposta imune robusta em comparação com a de que o anticorpo monoclonal significa os anticorpos de um único clone. Porque, você não pode fazer isso naturalmente porque, você não pode ter como pedir ao corpo para apenas selecionar um único clone e começar a produzir os anticorpos.
Ele é realmente feito pela nossa técnica in vitro que é chamada como as tecnologias de hibridoma. Então, essas são as 2 maneiras pelas quais você pode ser capaz de produzir os anticorpos um o anticorpo policlonal, onde você pode usar diretamente os animais ou os anticorpos monoclonais, onde você tem que usar uma tecnologia de hibridoma para selecionar o clone e, em seguida, pedir ao clone para produzir anticorpos. Então, é isso que nós vamos discutir nesta palestra em particular.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 25:20) Então, geração de anticorpos policonais em uma geração de um anticorpo policletonal, discutimos quando estamos discutindo sobre a cromatografia de afinidade. Por isso, não vamos discutir isso em detalhes, mas, exceto que apenas para o seu refrescante sua memória, o que nós discutimos é que você pode ter os 2 tipos diferentes de antígeno ou o hapten for hapten também vai estar presente ou ir ser convertido no antígeno com a ajuda de proteína transportadora como a borda kale ou alguma outra proteína transportadora.
Então, que as haptens vão ser convertidas no antígeno haptens são os antígenos, que são não imunogênicos. Então, você pode ter os antígenos, que são imunogênicos o que significa, eles podem ser capazes de criar uma resposta imune robusta ou você pode ter os antígenos, que são não imunogênicos. Então, essas haptens são os antígenos não imunogênicos, então, você tem que convertê-los em um antígeno imunogênico, e que você tem que fazer simplesmente adicionando uma proteína transportadora.
Então, isso; o tamanho deles realmente vai subir porque os haptens são não imunogênicos porque eles são de tamanho pequeno. Então, você tem que adicioná-los a uma proteína transportadora como a borda kale ou a BSA ou qualquer outra proteína portadora imunogênica então, que eles vão causar uma resposta imune então, estes são os antígenos profissionais, que são imunogênicos também, então você tem que processá-los por fazer uma preparação o que significa que o antígeno vai se misturar com o você tem que fazer o antígeno pronto para a imunização.
Então você tem que imunizar os animais por esse preparo de antigénio, então uma vez que você imunize os animais, você tem que testar o animal para geração dos anticorpos, uma vez que você confirma que os anticorpos estão sendo produzidos, então você pode ser capaz de sangrar os animais e então finalmente você pode coletar o soro e a partir deste soro você pode ser capaz de fazer a purificação dos anticorpos, e que na verdade vai dar-lhe os anticorpos policonais, e como eu expliquei no próprio slide anterior.
Por que é polclonal porque o antígeno vai ser composto de múltiplos epítopos. E é assim que os múltiplos epítopos vão ser activados as múltiplas células B e, finalmente, as múltiplas células B vão ser convertidas nas múltiplas células do plasma e é assim que se vai obter os anticorpos dos clones múltiplos e que é tudo o que vai ser anticorpos políclonais.
(Consulte O Slide Time: 28:05) Para um anticorpos monoclonais, o processo é pouco mais complicado porque nisso você primeiro você vai imunizar os animais e então você vai produzir os clones múltiplos e então esses clones múltiplos têm que ser você sabe grifado e então você tem que selecionar o clone único. Em um anticorpos monoclonais, o que você tem que fazer primeiro é pegar os antígenos, então significa que você tem que produzir o antígeno em grandes quantidades.
Então você tem que fazer uma emulsificação desse antígeno, então, que você será capaz de torná-lo pronto para a imunização, então você tem que fazer a imunização desses animais, então você tem que testar os anticorpos, se os anticorpos estão sendo produzidos ou não, e então você vai fazer o sangramento, então você coleta o soro e então você testa os anticorpos. Por isso, uma vez que você teste que, há quantidade suficiente de anticorpos estão sendo presentes neste animal em particular.
Depois você leva esses animais e o preparo as células B do baço, e então você também cultura as células do mieloma, e então você fuso o mieloma e as células B para formar o hibridomas então você tela as células de fuso e então acaba indo colher os anticorpos monoclonais do clone único.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 29:30) Vamos ver como fazer os tais procedimentos. Por isso, em uma produção típica de anticorpos monoclonais, como discutimos primeiro você pega o antígeno, você imuniza os animais, você coleta esses baús, então, de um lado você coleta você cultura as linhas de células do mieloma, você pega as células do mieloma, misture-as com as reações de fuso que conterá o polietileno glicol que realmente vai dar a você as hibridomas.
Essas hibridomas podem ser cultivadas em cultura de massa, para que você possa ser capaz de produzir os anticorpos ou se você pode congelar esses hibridomas Assim, que sempre que for necessário, você pode simplesmente tirar esses hibridoma injetados no animal, para que ele realmente vá para você saber se recuperar do do congelamento e então você pode ser capaz de produzir anticorpos. Então, estes são os múltiplos passos o que você exige para desafiar os animais.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 30:28) Assim, a purificação dos antígenos, o antígeno usado para imunizar para ser tão puro quanto possível uso de antigénio puro reduz a geração de anticorpos reativos cruzados, já discutimos sobre como preparar o antigénio você pode preparar o antigénio sob a condição nativa simplesmente fazendo técnicas de cromatografia ou pode preparar o antigénio sob condição de natural com a ajuda das ilusões eletrónicas. Uma vez que seu antígeno está pronto, então você tem que preparar o imunogênio.
Então, o que você faz é combinar os 100 microlitros de antigénio com igual quantidade de fluidos completam adjuvante a um volume final de 200 microlitros então se mistura minuciosamente para obter a emulsão usando uma seringa ou uma pipeta. É preciso verificar a emulsão se é uma boa emulsão ou não simplesmente por deixar cair uma pequena gota de emulsão em água e o que é o bem é uma boa emulsão não se espalhará sobre a superfície da água o que significa que a emulsão vai permanecer intacta quando mesmo se você a deixar cair sobre a água.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 31:34) Então antes de você imunizar você tira o sangue e para que ele realmente vá dizer se o que é o titer dos anticorpos presentes no animal antes de fazer a imunização incubou a amostra em 4 grau e então você coleta o soro e você pode manter este soro e rotulá-lo como um soro pré-imune o que significa que você pode coletar o soro e armazená-lo em menos 20 grau e que é considerado vai ser um soro pré-imune que na verdade vai ser um soro de controle.
De modo que lhe dirá qual é a quantidade de anticorpos presentes em seu animal pagar por fazer as imunizações, então você vai fazer as imunizações, você tira os animais ou os camundongos neste caso com a ajuda e que uma estirpe o que você vai usar é a estirpe BALB/c, você primeiro esteriliza-los com a ajuda do álcool 70%, então você vai injetar na mistura antígeno o que preparamos e durante esta etapa ou usar como ajudante.
Para que realizemos camundões ou você pode usar um dispositivo de estirpe para segurar o camundão brevemente limpar o local de injeção com o etanol 70% e injetar antigénio através de múltiplas rotas. Assim você tem várias rotas através das quais você pode ser capaz de injetar os antígenos, ou você pode injetar como uma mistura intravenosa tão intenção pode ser diretamente injetada na veia da cauda deste camundoncelo. Então isso vai realmente criar uma resposta imune muito pequena porque se você injetar diretamente nas injeções intravenosas, ela realmente vai causar os choques ópticos da NFL.
Em primeiro lugar, e a segunda é que em algum momento pode realmente limpar a infecção limpar o antigénio muito rápido para que não vá criar uma resposta imune muito robusta. Então, você só pode injetar antígeno em um modo intravenoso se você souber que o antígeno é muito, muito imunogênico. Em seguida, você pode injetar em uma injeção intraperitoneal enquanto faz injeções de IP evite injetar o antígeno no estômago porque você quer fazer uma injeção intraperitoneal.
Mas não o injete no estômago porque, de outra forma, ele vai realmente criar muitos problemas para os camundongos, então você também pode fazer uma injeção sub-cutânea ou intramuscular e que você pode fazer nos músculos da coxa e esse tipo de injeção na verdade cria uma resposta imune robusta porque a entrega do antígeno permanece muito por um tempo muito, muito tempo porque quando você a injeta nos músculos ou na subcutaneidade aquela área está em acessível para o sistema imunológico para e não é injecionável para o suprimento de sangue também.
Por isso, é por isso que o antígeno permanecerá com o corpo por um tempo muito, muito longo e que na verdade vai criar uma resposta imune robusta.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 34:44) Após a injeção manter o camundão de volta para dentro da gaiola então você vai fazer outra injeção depois de algum tempo. A única diferença é que você vai usar o adjuvante incompleto do freund assim nas injeções primárias você vai usar o adjuvante completo do freund nas injeções secundárias você vai usar os adjuvantes incompletos de freund para um volume final de 200 microlitros mix minuciosamente para obter uma emulsão e isso tudo vai ser continuar igual. Assim, quando você faz as injeções secundárias com o adjuvante incompleto do freund, ele na verdade vai criar as células B da memória.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 35:21) Em seguida, você vai fazer um titre de anticorpos. Por isso, antes de prosseguir mais por nota tirando nosso baço e gerando os hibridomas você tem que garantir que o anticorpo está sendo produzido. Então, o que você vai fazer é tirar o sangue dos camundões e sabe, preparar o soro dos camundões e depois vai gerar determinar o nível do anticorpo com a ajuda do ELISA. E você vai usar o ELISA indireto que é o qual vamos discutir em palestras subsequentes.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 35:57) Então, até isso, nós imunizamos os animais e conseguimos o anticorpo produzindo os animais. Assim, em subseqüente a isso agora, já que temos os animais imunizados, podemos continuar a gerar os hibridomas e a ecratar os hibridomas e, em seguida, a circular o monoclonal an