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Module 1: Sistemas de Liberação e Hidrogels

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Vinculação cruzada

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Olá, todos. Bem-vindo a outra palestra de Engenharia de Entrega de Drogas e Princípios. Atualmente estamos falando de Hydrogels e vamos continuar que nesta aula como as últimas duas turmas.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 00:42)

Tomemos uma rápida recapitulação sobre o que aprendemos na última aula. Então, já falamos de hidrogels, falamos sobre as hidrogelas físicas, que essencialmente falamos de iônica neste caso, depois conversamos sobre hidrogelas químicas, conversamos sobre como essas são formadas. Portanto, essencialmente qual é a grande diferença entre o químico e o físico. Os físicos são envolvimentos de cadeia essencialmente molecular enquanto que, o produto químico pode ter um vínculo real que está presente entre essas cadeias de polímeros.
E aí já falamos sobre processo de síntese. Assim, o processo de síntese tipicamente para hidrogels físicos envolve aquecimento ou mudança em pH ou qualquer outro gatilho que faça com que essas correntes comecem a interagir entre si e formem essas gelas. Enquanto que, as hidrogelas químicas, tudo o que você tem a fazer é apenas adicionar o linker cruzado ou de alguma forma ativar

os grupos; poderia ser através de luz ou poderia ser talvez adicionando glutaraldeído ou algum outro tipo de linker cruzado que faça com que esse gatilho aconteça.
Em seguida, falamos sobre alguns cálculos de tamanho do poro. Então, muito brevemente discutimos isso. Vamos discutir isso mais em aulas futuras e depois conversamos sobre a cinética de difusão de drogas. Então, como podemos modelar, como a droga vai se difusar. Então, descobrimos que podemos apenas usar a lei da Fick e tudo o que temos para realmente mudar é o coeficiente de difusão D, que depois será afetado por se o gel for micro poroso ou macro poroso.
Então, esse micro poroso D não tem realmente muito papel para jogar aqui. Embora haja alguns fatores que se juntam; enquanto que, se for micro poroso então junto com esses fatores adicionamos outro coeficiente de partição Kr porque essas cadeias essas moléculas de drogas agora vão começar a interagir com isso também.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 02:24)

Então, vamos falar sobre in situ cross linkel hidrogels. Este pode ser qualquer um desses dois hidrogels anteriores se falarmos de, tanto físico ou químico, mas o que essencialmente in situ significa é este que estes gels podem cruzar link no local. Por isso, estes são muito desejáveis quando se fala em qualquer tipo de entrega porque o que você pode fazer é ter componentes individuais. Você pode misturar esses dois componentes e uma vez que você mistura esses dois componentes juntos o gatilho é basicamente dado para a polimerização começar e essas coisas se polimerizam dentro de um determinado período de tempo. Isso pode ser ao longo de um período de segundos ou um período de minutos.
Então, por que é desejável? Digamos que se eu sou um clínico, sou médico e estou tentando injetar algo através basicamente de uma seringa e querer ter um sistema de hidrogel para ter essa liberação de drogas ao longo do tempo. Então, tudo o que eu posso fazer é misturar os dois componentes juntos na seringa e injetar diretamente no paciente e o que vai acontecer é nesse tempo ou naquele gatilho essa coisa vai polimerizar e onde quer que ele tenha sido injetado vai ficar lá e meio que formar um depósito. Então, estes chamam in situ porque formam hidrogel dentro do corpo.
E o gatilho de polimerização pode ser vários tipos. Então, um gatilho é o tempo. Então, você tudo que você tem que fazer é apenas misturar dois componentes e pode ser como como eu disse poucos segundos 10 seconds, 20 seconds ou pode ser minutos, 2 minutes, 3 minutes e dentro que a polimerização vai começar. Pode ser temperatura certa, quero dizer que posso até não ter que fazer nada nesta seringa. Então, em seringa é completamente estável eu nem tenho que me apressar, mas eu quero dizer temperatura deixe-nos dizer 25 grau Celsius, mas quando eu injetei no corpo nossa temperatura corporal é de 37 grau Celsius. Então, porque agora existe essa mudança na temperatura algo foi ativado que faz com que a polimerização, o gelling aconteça e que 25 a 37 grau Celsius gatilho é o suficiente que ele fez polimeriza deixe-nos dizer dentro de alguns segundos. Ou pode ser pH. Digamos e isso poderia ser novamente vários tipos. Digamos, nos meus dois tubos que estou misturando, o pH combinado do polímero aqui digamos é pH de 5 em que não se polimeriza.
O outro tubo basicamente apenas contém hidróxido de sódio deixe-nos dizer com um pH de 8, mas quando misti-los em conjunto que leva a um pH de 7 e no pH de 7 esta coisa começa a polimerizar. Então, isso pode acontecer pode ser que eu nem me preocupe em mixar com o NaOH. Eu apenas injeto no corpo e um pH de corpo é cerca de 7 de qualquer maneira e assim, quando este difuso em, pode fazer com que a polimerização aconteça. Então, qualquer uma dessas coisas pode ser explorada em se você estiver falando de gelação in situ.
Há algumas desvantagens para isso. Obviamente, há muitas e muitas vantagens, mas há algumas desvantagens. Uma é essa vontade difusa em todo o corpo direito. Quer dizer, se eu deixar a gente dizer injetar em uma área que é altamente fluídica nos deixe dizer se ela está no meu estômago ou na minha cavidade peritoneal ou em qualquer lugar que tenha muita difusão e convecção rolando então antes que possa polimerizar pode apenas difusor por todo o corpo. Eu realmente não tenho um controle de forma.
Então, isso é um grande problema porque como você sabe que a maioria desses cinéticos de difusão vai depender do que é a área através da qual ela está saindo do sistema. Então, se a área é compacta e a droga só está saindo dessa área muito superficial, você terá uma taxa de liberação diferente onde, em caso de cross situ cross ligando o que vai acontecer é uma vez injetado no corpo, ele pode tomar qualquer forma estranha que ele flui antes de se polimerizar e agora você tem área de superfície muito maior e área de superfície muito irregular através da qual a droga pode começar a se difundir para fora. Neste caso, é muito difícil para mim modelar o quanto a droga vai sair em um determinado período de tempo.
Então, esses são alguns dos desafios. Outra vantagem aqui é obviamente, se eu estou procurando preencher um defeito; vamos dizer; vamos dizer uma lesão e alguma parte do meu músculo se foi e eu quero enchê-lo com um gel contendo algumas células, tudo o que eu tenho que fazer é apenas colocar algum líquido sobre ele. O líquido vai tomando automaticamente a forma, digamos se este foi o meu músculo e houve algum acidente através do qual esta é a forma que precisa ser preenchida. Agora, eu nem preciso me preocupar em projetar a forma. O que eu posso fazer é eu posso preencher isso com o polímero e uma vez que ele gela ele essencialmente só ocupa a estrutura que eu quero.
Então, há algumas vantagens para ela, mas, obviamente, tem que ser olhada em que tipo de aplicações estamos olhando para antes de avançar com isso. Por isso, novamente isso é muito utilizado em pesquisas e há muita esperança para que isso seja traduzido para a clínica. Falaremos sobre um grande trabalho de pesquisa sobre isso para meio que entender isso.
O jornal vai olhar para coisas diferentes também. Então, deixe-nos entrar nele.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 07:34)

Então, neste caso este é um papel que está usando um link cross in situ, mas então isso é aqui o que eu estou tentando fazer é basicamente dar algumas ideias para como essas hidrogelas estão sendo usadas no sistema.
Por isso, neste papel específico o que eles estão fazendo é eles estão usando uma ligação cruzada baseada em maleimida de um hidrogel PEG para melhorar a cinética de reação na ligação cruzada para acontecer tanto para encapsulamento celular como no direito de entrega in situ. Então, neste caso a droga é na verdade células e eles querem fazer um sistema que eles podem simplesmente injetar no corpo e não ter que se preocupar com cirurgias e tudo mais.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 08:13)

Assim, neste caso o objetivo do estudo é utilizar um maleimide como uma cruz alternativa que liga a moiety ao polietilenoglicol e quando digo alternativa há de experimentar diferentes tipos de métodos de ligação cruzada e ver qual é muito utilizada.
Então, antes que este papel viesse as pessoas tipicamente usavam acrilato ou nos deixavam dizer alguns EDC NHS ou algum outro uso alguma outra forma de acoplamento, mas agora este papel se propõe usando uma ligação cruzada de maleimide cross. Então, o que eles fizeram foi ter comparado a cruz ligando os motivos que é novamente como eu acrílico, diacrilatos e sulfone de vinil que é outro grupo funcional.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 08:57)

Por isso, maleimida como já discutimos no passado é uma estrutura como esta em presença de tióis que este reage com o grupo sulfato de sulfato. Por isso, os tióis todos terão um sulidrato. Então, algo como cisteína ou qualquer outro grupo de thiol pode estar presente devido a alguma outra molécula e esta vai reagir diretamente com isso. Então, isso é novamente muito extensamente usado em reações de bioconjugação de peptídeos, mas então aqui eles agora estão propondo-o a usá-lo com hidrogels.
A cinética de reação é muito rápida como você verá no restante dos dados neste papel. Isso tem uma especificidade muito alta para os tióis. Por isso, em pH fisiológico este é novamente para a maioria das aplicações biológicas que estamos olhando o pH fisiológico. Então, esse grupo maleimida tem uma afinidade e especificidade muito alta para os tióis. Então, não teria muitas reações acontecendo por aí.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 09:50)

Então, vamos ver o que eles fizeram neste jornal. Então, eles usaram hidrogels. Estes são novamente como eu disse que estas são redes de polímero de cruz hidratada. Eles são meio que um analógico sintético às matrizes extracelulares em que as células geralmente residem. Então, essa é uma estrutura muito parecida como eu disse nas últimas duas turmas e há facilidade de modificação e você pode modificá-las. Eles resultarão em algumas propriedades bioativas que são independentes do que você está encapsulando nelas.
E neste caso eles têm uso de hidrogel PEG. Novamente como eu disse que o PEG é muito amplamente utilizado.
Por isso, e em algum lugar motivos já sabemos que é muito baixa adsorção de proteínas. Ele é realmente usado em diferentes áreas para evitar que a adsorção proteica aconteça. Isso minimamente causa qualquer inflamação. Apesar de termos conversado sobre alguns anticorpos PEG de forma fraca, mas em geral se não há anticorpos PEG ele causa uma inflamação muito baixa.
Segurança de uso em-vivo; novamente ela tem sido usada muito amplamente para as últimas décadas e lá muitos produtos disponíveis comercialmente que utilizaram diferentes funcionalidades para incorporar neles. Então, todos esses são um plus para isso.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 11:08)

Então, aqui estão alguns dos métodos que eles usaram. Como eu disse esses maleimidos vão realmente reagir com tióis para formar esse vínculo thioether e o que eles fizeram foi ter comprado o PEG comercialmente disponível que tem os quatro grupos de acrilato, ele é um PEG de 4 braços. Então, aqui está a ligação cruzada entre os quatro braços do PEG. Então, este é o braço 1, braço 2, braço 3, braço 4 e cada um desses braços contém um grupo maleimide no final. Então, e então em vez de maleimida eles também fizeram modificações semelhantes e eu tenho um sulfone de acrilato e vinil que são dois dos grupos que foram usados bastante no momento em que este papel foi publicado.
E então novamente essa reação acontece a um pH de 7,4. A TEA é meio que um catalisador para isso e assim por acrilatação a polimerização acontece com base em uma ligação cruzada de UV e o sulfone de vinil também reage com tióis para formar títulos.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 12:09)

E, assim, foi o que eles fizeram que fizeram reações. A reação que eles fizeram é que eles têm um macromer PEG, eles colocam uma lige adesiva. Por que isso é necessário? O que você quer dizer com ligas adesivas? Esta é uma lige que reage ou que realmente interage com as células e faz com que a célula adere a ela. Como dissemos que o PEG não permite qualquer aderência. Então, eles colocaram alguns ligandos adesivos por aqui que resultarão no PEG para ser compatível com celular. As células agora podem se ligar a ele.
E assim, uma vez que eles fazem isso, eles conseguem uma estrutura assim, onde digamos que em qualquer proporção que eles estão fazendo deixe-nos dizer que estão colocando isso em uma proporção de 1 é para 1, então cada um desses macromer PEG resultará em uma média terá um desses ligas adesivas e então eles têm outro linker de cruz peptídeo. Então, esta é uma espécie de um linker cruzado que contém tióis. Então, este também contém tiol, mas é apenas um único tiol. Então, ele pode reagir uma vez, mas não formaria um gel, mas neste caso agora eles estão falando de um peptídeo que contém thiol em ambas as extremadas.
Então, agora ele pode essencialmente cruzar o link em uma rede inteira como esta. E eles usaram diferentes condições que usaram o peptídeo adesivo a 4 milli molar ou 400 millimolar, eles já usaram para diferentes épocas de até uma hora e então a ligação cruzada é feita por um peptídeo que também é cleavável que é uma protease limpa, então, isso significa que as células podem secretar proteases. Por isso, digamos que a célula quer se moviar e ela está entrinada nessa malha gigante, então, se uma célula está aqui e ela quer sair daqui pode simplesmente secretar alguma protease, degradar isso e isso vai se abrir e então a célula pode se mover para fora.
E, por isso, tudo isso resultou nessa estrutura de hidrogel como você pode ver aqui é eles a formaram em forma de disco. Então, ele apenas tomou a forma do disco em que eles se formaram e resultou em hidrogel.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 14:10)

Falemos de alguns da cruz que ligam a química que eles usaram. Então, como eu disse que o acrilato é polimerização radical. Então, se você tem alguns métodos baseados em UV, algum iniciador de fotos é usado, isso resultará em polimerização para acontecer. Lembre-se de que a desvantagem aqui é claro, o próprio UV é tóxico para as células e o iniciador de fotos também é tóxico para a célula. Então, você pode realmente ter a viabilidade celular reduzida lá. Então, esse é um problema que foi identificado com acrilato então, bem um pouco de tempo.
E não é realmente muito propício fazer uma entrega in situ e falaremos sobre que isso não acontece realmente muito rápido. A reação é muito lenta e na reação é lenta e se você injetar, vamos dizer que é se demorar 30 minutes minutos e então 30 minutes todos os seus componentes de hidrogel vão ficar apenas difunditados em seu corpo e ele realmente não formaria um depósito no local em que você está injetando.

E então a outra reação é a adição do tipo Michael e assim, esta é basicamente uma reação de Michael onde uma adição nucleofílica acontece em outro nucleófilo. Então, isso é o que eles têm usado para reagir a maleimida aos tióis.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 15:27)

Então, novamente, como dissemos que eles incorporaram a lige adesiva celular então, um dos ligands foram incorporados é esta molécula de RGD. Esta é uma molécula que é muito amplamente encontrada em fibronectina ou vitronectina e outras moléculas de ECM através das quais essas células possuem ligandos e quando encontram RGD em uma cadeia de polímero podem simplesmente ligar-se a ele e meio que se tentem a partir daí. Então, isso é o que eles usaram.
Eles também modificaram isso para também conter um tiol para que haja um grupo suldrilo presente através do qual ele pode reagir e então o grupo RGD ainda está disponível para as células se ligarem. Então, foi isso que eles fizeram. Então, eles usaram 20 kDa 4-arm PEG com tiol contendo peptídeo adesivo. E então em um passo dois, o que eles fizeram foi o peptídeo degradável é esse. Neste caso trata-se de todo o peptídeo e este site VPM é onde as células vão cleave-lo.
Então, quando a protease está na solução eles vão cleave esse peptídeo VPM, uma vez que você vê e então novamente eles a modificaram com dois cisteínicos cada um contendo um tiol e assim, novamente o que isso faz é que permite que você meio que tenha um controle no sistema em que agora você pode ter polimerização acontecendo a partir disso assim como seu degradável. Então, eu espero que isso seja claro.

Então, agora, você está falando sobre deixar-nos dizer que esta é a nossa cadeia de 4 braços um está contendo RGD que é capaz de ligação a uma célula e os outros braços são então atravessar ligados através deste VPM. Então, se eu usar outra cor. Por isso, agora, você tem uma cadeia contendo VPM do restante deles que então será bondeu para outro PEG de 4 braços. Então, é assim que toda a estrutura é formada. Então, isso está zoado para um destes e é assim. Então, agora, as células podem realmente degradar esse moiete do VPM para se moviar tão bem quanto ligar para esta estrutura de RGD.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 18:01)

Então, aqui vai você, é só a mesma coisa que eu só desenho. Então, você primeiro a reage a uma proporção de 1 é para 1. Então, você essencialmente fica bem funcionalizado com o RGD e aí você mistura isso com a proporção deixe-nos dizer 1 é para 3. Então, agora, você tem três sites em que todos os VPM ficam bonzados também começa a cruzar a ligação em toda a rede.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 18:29)

Então, agora vamos olhar para quais são os dados que eles conseguem a partir disso. Por isso, antes de mais nada, o PEG-4MAL mostra maior incorporação de RGD e VPM. Então, essa reação é mais eficiente que é o que eles estão tentando propor. Então, vamos olhar para isso. Por isso, em casos de PEG-4MAL o que eles veem é mesmo que eles tenham baixa quantidade do TEA que é um catalisador aqui, mesmo em 10 minutes você quase consegue todas as reações. Por isso, no eixo y você tem o tiol inreagido. Então, eles medem o quanto do thiol inreagido está presente. Então, se eles eram estequiométricos misturados, então supondo que todo o tiol deveria ter terminado, é o que eles veem que quase eles conseguem 100 de conversão de thiol e a mesma coisa acontece aos 60 minutes. Considerando que, se você olhar olhar para o PEG vinil sulhone ou PEG acrilato pelo menos para as concentrações de TEA para 10 e 60 minutes você só vê muito pouca incorporação. Então, eu quero dizer que você está falando de apenas 40 ou neste caso de caso muito pouco.
Se agora você aumentar a concentração do TEA que é novamente um catalisador aqui, você chegar a 100 vezes. Então, quer dizer que isso é essencialmente estamos falando de 100 vezes aumentando a concentração de catalisadores mesmo então você está vendo não uma incorporação muito boa apenas depois de um pouco de tempo você começa a ver quase 100 de reação e a mesma coisa se aplica com um PEG-4-acrylate. Por isso, mostra claramente que essa química de reação é com muito mais eficiente para continuar com esse sistema em particular.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 20:07)

Em seguida, quais são as diferentes concentrações de polímero que podemos utilizar para formar este hidrogel. Então, qual é o menor peso possível? Então, e se você continuar a reduzir as cadeias de polímeros você pode não obter um hidrogel em um determinado ponto do tempo. Então, eles descobriram que com o PEG-4MAL até um gel de 3 pode ser formado enquanto que, com acrilato você só pode obter um gel a um mínimo de 7,5 porcentual deste polímero e com PEG-vinil-sulfato você chega a 4 e então o PEG-DA também está se formando pelo menos em 7,5.
E os tempos de gelação também são muito diferentes. Então, o PEG-4MAL se forma dentro de 1 5 minutes enquanto, o outro leva até 30 minutes minutos e durações mais longas. Por isso, como eu disse, eles não são muito propícios para a gelação in situ porque se for tomada 60 minutes para formar um gel, então pelo tempo em que é injetado em 60 minutes todo o polímero de PEG estará todo disperso por todo o corpo. Então, e não só isso se você está encapsulando células e se você nos deixar dizer fazendo isso em um prato de cultura de células o que vai acontecer você tomou gravidade as células estão se estabelecendo agora.
E, por isso, se nos deixar dizer se esta é a sua estrutura de gel 3D. Digamos que esta é a sua estrutura gel 3D. Todas as suas células serão meio povoadas na base e o restante do gel terá uma população muito esparsa por causa da gravidade que essas células estão acertados.e mais " Então, é por isso que você não terá uma distribuição muito boa das células também se o tempo de gelação não for rápido.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 21:51)

Em seguida, eles foram em frente e olharam para a proporção de inchaço do hidrogel. Então, o que eles descobriram é que o PEG-4MAL teve um inchaço muito alto em porcentagem menor. Então, esse foi o percentual de 3 que é o mínimo que eles podem obter e à medida que você aumenta a concentração de polímero o inchaço diminui. Considerando que, em outros casos, não se tem realmente muito inchaço acontecendo porque está a exigir percentagens bastante elevadas.
(Consulte O Tempo De Deslizamento: 22:24)

E assim, então eles foram em frente e encapsularam algumas células por 3 dias e aqui estão os dados para isso. Então, o que estamos olhando agora é nessa direção de linha, você está vendo cada um

condição. E assim, se você pode ver, então, o bottommost é um PEG-4MAL e nesta coluna você está vendo essencialmente qual o gel percentual foi usado. Então, isso vai de 10 4 e o que você vê aqui é que o PEG-DA não forma gel na versão 5 e o percentual de 4 como foi mostrado antes como o mesmo caso com o PEG-4A.
E o sulfone de vinil PEG faz gels, mas se você olhar para todas essas células, todas elas parecem bastante arredondadas. A única vez que você está vendo um pouco de um alongamento é sobre este, mas todo o resto deles eles parecem bastante arredontados; isso significa, quando as células estão fora, elas significam que não podem realmente se provocar em algo. Então, quando as células estão se aliando elas começam a se esticar, elas começam a alongar e se espalhar sobre a superfície ou sobre um gel, mas neste caso você não vê isso.
Considerando que, se você olhar para o PEG-4MAL em concentrações mais altas, sim, as células são uma espécie de arredondado, mas como você está diminuindo a concentração do polímero em 4 e 5 você as vê muito bem alongadas. É assim que uma matriz típica da ECM vai se parecer. Trata-se de um gel de colágeno que é a matriz natural de ECM que encontramos em nosso corpo e assim, é assim que as células tipicamente olam. E aí as únicas duas condições que são capazes de mimetizar que são essas duas. Então, o resto deles não é sequer capaz de fazer qualquer tipo de mimetismo como colágeno.
Então, as manchas aqui usadas são essencialmente Calcein AM, que é um corante que é permeável através da membrana celular e ela entra. E uma vez que lá é reduzido dentro do sistema para um subproduto que depois tem uma fluorescência. Assim, apenas as células vivas fluoresce.
E aí você tem uma mancha não viável que é um iodeto de propídio, que é um corante que é incapaz de se difundir nas células estão vivas, mas a membrana fica comprometida. Ele se difunde em e se liga ao DNA e depois dá o vermelho fluorescente. Então, você pode ver qual deles são vivos e mortos. Então, todos estes são a maioria deles mostrando-se verde assim, o que significa que são células vivas.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 24:42)

Em seguida, eles foram mais adiante e fizeram alguma atividade metabólica. Então, eles descobriram que a atividade metabólica é alta em maleimides. Então, aqui você tem maleimidos no vermelho e todos eles você vê que comparado a um controle 2D, então, nestes são todos comparados a um controle 2D em que não há gel, você descobre que eles são razoavelmente bem metabolicamente ativos enquanto que, a atividade metabólica diminui em outras condições e esta é novamente apenas um controle de colágeno. Colágeno claro, é uma atividade metabólica mais elevada para essas células.
São C2C12 que são essencialmente algumas células de micoblast musculares e você vê que apesar de a atividade não ser tão boa quanto o colágeno, mas comparada com as outras chemissoras de polímero sintético, elas têm uma atividade metabólica muito melhor.

(Consulte O Tempo De Deslizamento: 25:31)

E então, vamos ver o que acontece quando você aplica isso in-vivo. Então, o que esses autores fizeram foi então colocá-lo em um coração de rato; assim, em um animal vivo. Então, isso é o que acontece. Por isso, quando você apenas dispense o pouco de líquido sobre esse coração de rato o coração batendo. O que se vê é então o líquido foi então se espalhou por um pouco, mas depois começou a polimerizar. Então, você consegue um gel polimerizado tomando a forma da superfície externa da parede cardíaca.
E não só que o que os autores fizeram eles encapsularam algum FITC aqui dentro assim, que a fluorescência verde. Então, isso tudo é gel, este é todo tecido, o tecido cardíaco neste caso e o que se vê é que há uma espécie de interface. Então, o gel é realmente capaz de se difundir e polimerizar e então as células também foram capazes de se deslocar para cá. Então, o que você meio que vê é uma região sobreposta. Então, você tem essa região sobreposta na qual essas células estão interagindo com o tecido e esta é uma superfície muito compatível.
Então, isso é basicamente tudo sobre os hidrogels in situ para esta classe. Continuaremos ainda mais com uma discussão de hidrogel e mais algum cálculo do tamanho de poro da rede e tudo na classe futura.
Obrigado.