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Estratégias De Otimização

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. Então, as desvantagens da extração de plantas naturais, inclui a baixa concentração do produto na planta. Pode haver por causa do thedemand, diferença de oferta lá pode haver oferta limitada, pode ser uma planta em extinção becauseof extensivo uprooting by the industry. Depois, pode ser uma planta endêmica não capaz de crescer em outro lugar apenas em uma determinada região, por isso pode haver oferta limitada por essas razões. Agora, espécies ameaçadas de extinção que eu disse podem ser um limitadamento que pode levar a, finalmente, a extensão da planta. Então planta natural becauseit é sazonal o composto é temporal e a variação espacial está lá, Então, porque ifit é sazonal então há muito tempo necessário talvez só venha a tona quando o plantão maturado surge, portanto, qualidade e quantidade não uniforme e inconsistente .Então, quais são os métodos alternativos de produção para tais fitoquímicos de alto valor que eu disse que tínhamos visto como são complexas as estruturas e os percursos biossintéticos. Então, estes com altíssimo valor e baixo volume mede estruturas muito complexas estruturas demasiado maníquirais, por isso se tem observado que a síntese química é muito difícil. E mesmo que seja as pessoas são capazes de o fazer, torna-se um processo de várias etapas. Então, métodos biotecnologistas o que podem ser métodos de base de biotecnologia? Um é o processo de bio baseado em células vegetais, o whatelse? .O que não é mencionado aqui. Engenharia de Proteína. Engenharia de Proteína. .Onde quer dizer expressão heteróloga de que você está falando, assim em algum outro sistema host sistemeucariótico hospedeiro. Mas, alguns dos metabólitos secundários que estão tentando o sistema mais frequentesado é o fermento onde as pessoas que estão sendo um organismo eucariótico as pessoas estão tentando expressar. Mas o desafio é que alguns desses metabólitos de alto valor ou patologias biossintéticos não elucidados. Então, agora como obter essas etapas intermediárias, a engenharia de proteínas que é necessária você precisa saber quais proteínas estão envolvidas. Em seguida, a outra é ela é um espectro tão largo e grande como por exemplo, 40 ou 50 stepsare envolvidos e se é um sistema heteróloga onde os percursos não apresentam. Então, todos os thosesteps têm que ser incluídos, por isso é muito desafiador o que pode causar os rendimentos são muito menos o que pode tornar o processo não econômico e desafiador .Então, o processo mais viável que se propõe é o qual gostaríamos de propor é o processo de bio bio baseado em plantcell onde o maquinário está presente. Mas é preciso trabalhar em torno de diferentes gargalos que são os que podem ser os baixos rendimentos e a escala até o processo. Assim, a vantagem de produzir esses metabólitos de alto valor que são de baixo volume na natureza utilizando a tecnologia de células vegetais pode ser. Pode haver controle de oferta por quê? Porque o produto é independente da disponibilidadeda planta em si e eles estão afastados das restrições climáticas, geográficas e governamentais, restrições. Depois, o alto crescimento e a produtividade, tão alto crescimento e produtividade como comparada à planta natural como, alto crescimento e produtividade como plantas tonaturais comparadas. Produtividade porque podemos cultura deles inmenos quantidade de tempo. Right.It pode otimizar a produção de acordo com nossas agulhas s.Então, taxa de crescimento porque estas são amenizadas para otimizações. Então, você pode acabar com o tempo é o grande fator que você pode executar lote para lote alguns são meses ou anos em que você terá que esperar aqui você pode executar um reator e colheita. Portanto, redução no tempo e no espaço-lógico; exigência para a produção do seu desejado compounds.Agora, a melhora da estirpe é também a própria linha celular é amenizada a otimização. Assim, você pode manipular os rendimentos celulares para melhorar o y p por x que é produto yieldper unidade biomassa. Então, há facilidade de extração e purificação por quê?Porque não estamos conseguindo uma mistura de produtos que estamos recebendo. Porque você está fazendo uma otimização de processos, então, você estará otimizando as condições soas para aumentar a produtividade dos seus compostos desejados. Então, o que acontece que a relativeabundância do seu composto desejado se torna mais do que a outra molécula pequena ou outras de outras impurezas, portanto, lá pelo processamento de downstream pode tornar-se mais fácil .Então, o que precisamos para o cultivo de células vegetais nós agora estudamos tudo isso, é necessário um suporte de apropriação, um meio de crescimento adequado; o que faz o crescimento médio composto desligado. Você terá grandes sais, sais menores, fontes de energia, reguladores de crescimento nele que preenchem o crescimento da célula vegetal e este pode ser qual a forma? Líquido, ou semi-sólidos .Assim, são necessárias condições assépticas, de modo a evitar a contaminação especialmente de micróbios. Agora, condições de cultura ideais, então haverá condições de cultura externa significando condições ambientais e outros parâmetros físicos e químicos .Então, este é um esquemático como começar? Sabemos que começamos a partir das partes das plantas então a moldamos sob a forma de uma forma diferenciada que é caldo. A partir desse callus youcan selecionar as linhas de celular, trazê-la em suspensão faça as otimizações onde as estratégias de melhoria de rendimento são implementadas. Então, quanto a melhorar o y p por x que tipo de estratégias vêm nessa? Sua melhora, sua otimização midiática, alimentação precursora, elicitação e engenharia genética que pode ser engenharia metabólica. Em seguida, venha ao palco do bioreator uma vez que uma suspensão foi otimizada em estágio bioreator o que pode ser cantado. Você novamente otimiza os parâmetros de operatingos do bioreator que também chamamos de parâmetros de fermentação. Então você pode otimizar o modo operacionista, modo de cultivo o que significa que podem estar alimentando estratégias a fim de remover o que, por que temos que ter estratégias de alimentação, qual é o objetivo, por que estamos falando de modos de cultivo aqui sempre nos reatores, por que ou os reatores não podem ser runas batch? .Para remover a limitação de nutrientes e a inovação de nutrientes se ela está lá, então porque para melhorar a produtividade o seu rendimento rende você gostaria de aumentar o biomassor o produto. E por que em um lote ele está ficando limitado? Por causa da imitação de nutrientes, por isso, a alimentação de nutrientes é feita para se passar por cima dessa limitação de nutrientes. E agora com a lógica de que se a limitação de nutrientes você pode despejar em todo o substrato, então o thatit nunca é limitado, então então uma inovação pode desempenhar um papel. Então, lá vem o roleof como você se alimenta, quando você se alimenta. Então, então depois de ter crescido a biomassa ele compara o processamento a jusante, o processamento a jusante significa separação, purificação do produto. Então, quais são as abordagens que estamos goingando discutir, o que pode levar à melhoria do rendimento e da produtividade da segunda armetabólita, otimização da composição midiática, otimização de fatores ambientais, aditamento de precursoras, permeabilização celular, adição de elicitores, imobilização de células vegetais e cultivo de alta densidade em reatores. E em algumas delas é a fim de reduzir o acerto e o julgamento e minimizar o número de experimentos que você gostaria de realizar para a optima veremos como a modelagem matemática é usada com estudos de caso .Agora, ontem se você lembra que eu estava falando sobre isso a fim de desenvolver o início do bioprocessante você gostaria de começar com o .Highest. A mais alta rende linha de celular, então logicamente você gostaria de pegar primeiro a variedade vegetal que é mais alta rendendo, como é que a seleção e a seleção é igual ou é diferente. Seja microbiano, seja animal, seja ele fomentador plantcell, essas técnicas continuam sendo as mesmas de otimização, quando dizemos screeningand seleção. Screening.Ela estava próxima, o rastreamento é uma técnica passiva, a seleção é uma técnica ativa. Screeningis o que ela disse para seleção na qual você tela a linha de celular com base em como youscreen supuseria, qualquer exemplo. .Hm. Como melhorar por tela culture.Ok, assim você vai engendrar primeiro as células. Para branco azul. Para branco azul .. Mam, há certeza de que há certa bacteriana que canutilizam o órgão sanguíneos alguns que não podem. Por isso, neste processo de triagem whenwe submetido a esta mesma mídia, podemos entender quais são as células que utilizam a mediae que são aquelas que não podem, assim, que é o processo de triagem .Não, portanto extrapolado para os metabólitos secundários a partir de células vegetais .. Precisamos selecionar o callusline mais alto rendendo. Por isso, uma vez ou a linha de celular callus é uma mistura de várias células não é ela. É por isso que dizemos que callus levaria a diferença em com subculturas subsequentes você pode achar que o "yield keepson" variando. Direito co cultura e ver a bactéria está ficando. Bactéria onde a bactéria está chegando?Como dizer se a planta está produzindo um metaphyte particular eles vão se defasar contra a bactéria que será espécie de organismo de teste para descobrir a produção está realmente acontecendo ornot você pode entrar em bactérias para encontrar. No papel isso pode ser feito, pense em termsof você é dado e você precisa desenvolver um bioprocesso. Então, pense simples o que pode te costurar menos, o que pode facilmente ser implementado e então você precisa pegar as lines.Então, uma vez que você começar a crescer bactérias junto com células vegetais de plantas não sobreviverá. Mam, tomando nosso ponto podemos apenas apresentar quantidade de condições de estresse em que você oferece um metabólito secundário é produzido. E o submetido a todas essas linhas de callus e vemos qual delas produz o mostof quantidade de metabólitos secundários. Isso é correto, mas a única checada aqui é que você agora está conseguindo ter optado por um material que é conhecido por produzir aquele composto você tem várias linhas de celular. Então, uma é você verificar o rendimento do producte você seleciona a linha celular mais alta rendendo e a outra se suponha que ela é alguma estampa se for metabólito secundário baseado em pigmento. Então, então você pode pegar aquela peça de callusque demonstra essa cor se for um pigmento de pigmento colorido ou qualquer pigmento de colouredother. Então você sabe a partir dessa mistura de células que células estarão produzindo que callus ou como você disse que se agora está chegando a seleção que é você wouldlike para apenas pegar as linhas de células desejadas as outras que você não care.Então, deixe-as morrer apenas aquelas que você deseja selecionar devem sobreviver, será usefulado você está selecionando uma linha de células vegetais para o que para me dar alguns exemplos para que finalidade. Se estou tentando encontrar uma linha celular altamente resistente, suponhamos que eu esteja procurando o estresse salinidade como você está dizendo, então somente aqueles que resistiam vão sobreviver aos outros não sobreviveriam. Assim, que subseqüente subculturação e aclimatização também você vai acabar tendo linha celular resistente ao estresse e, portanto, você pode pegar a linha de células de taxa desejada na linha de celular. Então, agora culturesvegetais vegetais sabemos que eles são geneticamente heterogêneos significa o que, que eles mudam em cromossomal.Então, foi isso que quando eu digo mudança em número de cromossomo, arranjo, que tipo de variationam eu falo. .Soma variação clonal, portanto, instabilidade epigenética, instabilidade epigenética significa mudança na expressão de thegenê ou fenótipo celular causado por mecanismo diferente de alterações em sua DNAseqüência. Assim, o que causa instabilidade genética levando a acúmulo de produto apenas em alguma população de células que é o problema que o caldo heterogêneo teria. Ora, a produtividade em tal população mista de células é passível de ser instável, por isso geralmente quem induz a partir de um explico um calo não é chamado de linha de células vegetais. Pois a partir da ferida que se cria e do início da célula em torno dessa ferida a adega começa a se dividir rapidamente e a formar uma massa diferenciada. Agora, todos esses celulares uma maquiagem diferente e como você a cultivaria em um meio solidificado eles se multiplicariam.Assim, algumas das células que estão próximas do meio terão mais abordagem sobre os nutrientesareia são mais os nutrientes estão mais disponíveis para aquelas células do que as células que atem o topo. Por isso, existem gradientes bioquímicos que podem formar que podem levar a ultimateliontes no seu potencial biossintético. Então, geralmente é observado que quando você começa com linhas de calo, ou você primeiro traz para a suspensão e através do celular se lembra que eu falei sobre a técnica de costura celular. Com o objetivo de obter uma cultura síncrona baseada no tamanho com uma suposição de que as células da mesma forma de sizee podem ser assumidas no mesmo estado metabólico .Então, lá por levar a uma cultura síncrona ou você fica sub cultuando-as tais que são as condições que são preferíveis para o metabolito secundário de interesse tal que, durante a seleção natural subcultura acontece. Assim, você só irá preferir as celulas que forem capazes de produzir sob essas condições os metabólitos secundários se continuariam a crescer e mais tarde eles seriam a maioria .Então, é sempre o tipo de células no calo e o número dessas células em thatcallus que são capazes de produzir o seu metabólito secundário. Então, como aumentar esse número e é geralmente observado que quando você começa com os calos de indução dos calos para o ano inicial ou tão oh você verá uma grande variação. Só depois de 3 4 anseios da sub cultura você descobrirá que ela se resume a um rendimento consistente do produto .Então, a produtividade em tal população mista de células é passível de ser instável desde a mudança em qualquer fator. Essa é a própria razão pela qual nós, em laboratório, sempre insistimos em manter o condicionamento que você não pode ou tirar levianamente a sub culturação do callus o material-pai que vai formar o seu banco de células master. Portanto, sob as condições que você subcultura, o tempo em que você subcultura não pode pensar que se for 30 dias, deixe-me fazê-lo por quarenta dias não importa. Tudo importa o tempo em que você está sub cultuando, as condições hoje em que você tinha colocado ponto oito amanhã você tinha colocado 0,6 vai variar. Então, um tem que ser realmente cuidadoso enquanto subculta o seu banco de células master. Desde mudanças em qualquer ambiente de fábrica, ou nutricionalo que favorece o crescimento de uma determinada sub-população de células ali alternada alterando a superposição da cultura a variação da cultura .Agora, porque é algo que pode tfragar o potencial sintético bio da sua massa celular, assim também se torna uma ferramenta para a variação. Assim, a variação da cultura oferece a oportunidadede isolar-se da população mista de células variadas, aquelas com alta produtivaapacidade. E, assim, desenvolvendo a partir delas linhas celulares de alta produtividade .Assim, a taxa de acumulação dentro das células produtivas e a proporção de tais células na cultura é o que rege o rendimento ou a seleção da linha de células de alta rendas. A baixa produção na cultura celular pode ser devido a uma é a concorrência entre os percursos primários e secundários, os mesmos intermediados como vimos os percursos que então bifurcatepara o metabolismo secundário. Por isso, sempre haverá uma competição de fluxo de carbono. Expressão mais baixa de enzimas chave na taxa que limita os passos na expressão patinada ou gene do metabolismo secundário pode ser uma limitação. Então a triagem é técnica apassiva pela qual uma série de células são analisadas para a taxa desejada .Então, geralmente como você estava dizendo que procuraríamos a linha celular mais alta rendendo, weirão fazer alguma parte do calo que iremos tirar vamos fazer extração e faremos análise de yieldin. Ou se for um pigmento colorido você pode vê-lo diretamente do seu é visibleto olhos, se é se for se ele fluorose sob UV então para você pode fazê-lo por UV light.Então, se o calo que você obteve está produzindo o seu composto ou não você cancheck. Agora, seleção é o quê? A seleção é um processo ativo pelo qual delibera-favorece apenas a sobrevivência da variante desejada e o outro tipo selvagem de células que eles willdie. Por isso, sistemas callus eles são usados para a seleção de screeningand. As linhas celulares que acumulam altos níveis de compostos coloridos podem ser selecionadas através da observação visual. O calo pode ser conferido visualmente para pigmentaçãoalterada a olho nu para manchas coloridas sob lâmpada UV. Screening de pigmentos por exemplo, se supor que você sabe da literatura que mais verde é thecallus está em algum lugar ligado ao metabolismo secundário biossintetizado.Então, você gostaria de selecionar a linha de callus secundários do metabolito secundário, portanto, rastreamento na base de pigmentos como clorofila, anthocyanins, napthoquinones, carotenoides, estes são todos pigments.Então, se você está procurando por tais tipos de pigmentos ele fica muito fácil de fazer a triagem. Agora a seleção também pode ser realizada usando suas técnicas de rastreamento, triagem de meansmeios de rastreamento utilizando diferentes tamanhos de malha e tentando reduzir o tamanho da malha por exemplo, de 100 mícrons a menos de 100. Então, alguns suponhamos 500 maiores que 500 mícrons para menos de cem mícrons. Então, a mesma coisa que você pode acabar com a cultura síncrona, a seleção pode ser realizada com a finalização da multa que cresce rapidamente, consistindo em agregados de 50 células ou assim. Agora, a suspensão de células finas é adequada em seleçãopara resistência por que você pensa toda vez que os estresses em suspensão de células finas para processo seletivo, como ele vai ajudar do que a cultura do nódulo. Assim todo o uniforme de sensor em uma atividade metabólica. Estamos a falar em termos de seleção, seleccionamentos. Assim, a variação de tamanho não afetará o processo eleitoral, como todas as células terão o mesmo. Isso foi vender costura, agora em geral pode haver mais do que além de metodologias de costura de células como por exemplo, se você está procurando resistência. Assim, o restante vai ficar quilomado apenas aqueles que são resistentes sobreviverão ou este resistente pode ser resolvido resistência, ou pode ser contra o metabolito tóxico ou resistência.Então, se supor que o outro é morto e você precisa agora o único sobrevive por que o teyit é recomendado para usar suspensões de células diluídas. Como você estava dando um exemplos para a bactéria você a cultivar em um meio solidificado tal que só a bactéria que pode desgradear esse metabólito em particular. Ou o que é resistente sairia e então o que você faz para picar o que você pega o. Colônia.Colônia, então também lá o que é recomendado para use.Solução. Soluções diluídas você pode chegar ao purposesquê? Selecionar a linha de celular mais alta rendendo um caldo é o quê? Uma massa heterogênea de células. Por isso, portanto, o que é preferido você a traz em suspensão, faça um seleto diluído para uma linha celular resistente e permita que isso crese e multiplique para dar um calo fresco usando o que técnicas de cultura de células únicas que aprendemos antes. Por isso, no programa de seleção para resistência na cultura celular um pode detectar crescimento da população resistente. Mas porque você endurece em células únicas ela se tornará ela levará tempo para que o calo reapareça e forrará a cultura para voltar a um estado em rápido crescimento. Por isso, portanto, diz-se que o thatit levará cerca de 1 ou 2 meses para voltar a alcançar para um caldo uniforme uma única linha de callus baseada em celeste. Agora, para evitar problemas inerentes à useof callus ou cultura de células para seleção e rastreamento, pode-se preferir o plantio de células ou protoplaston suportes sólidos ou colchões. Agora, ao emplacar as células, o primeiro esteis a preparar células únicas ou pequenos agregados de tamanho para plantio. As células têm de ser arcadas em densidades inferiores permitindo o crescimento de colônias individuais, claramente separatedócolas que podem ser isoladas e depois subcultas. Ao contrário das células microbianas, as células da culturedplanta requerem densidade mínima de inoculum esta também estudamos que as células vegetais vão necessitando de densidade mínima de inoculum para o crescimento a começar. As células de plantas generais são células vegetais de hm são .. Estão crescendo. Comunicar-se uns aos outros. Eles se comunicam uns com os outros através de. Transferido como partes. Então, há célula a contato celular que é necessária, há comunicação acontecendo, por isso, para facilitar e trazê-la para aquela condicionante é necessária a densidade mínima de inoculum. Agora, preparação de células únicas ou protoplastestamos já estudamos para filtrar células sucroveleave de cultura de suspensão fina através, por isso utilizamos técnicas de costura celular. Então, onde em torno de 500 75 mícrons você keeppassando a suspensão celular isso vai acabar na cultura síncrona. O suspensionamento obtido consiste em células únicas ou agregados pequenos, o que muito provavelmente teve origem de singlecells por que como você pode supor isso. Quando estamos usando essas técnicas de costura de células weare começando do tamanho grande e estamos terminando em um tamanho muito pequeno 75 micron tamanho areless size. Então, geralmente as células nós dissemos que 50's ou 100cells juntos estariam lá em agregados celulares e o tamanho está em torno do tamanho da célula vegetal que também está em média morta. Se você sabe que a média você vai chegar à lógica por que essa sewingtécnica de 500 75 vai acabar em células únicas ou vai acabar em muito pequenos agregados que iriam; obviamente, estar vindo das células solteiras. Por terem multiplicado e formado um pouco maior do que a única célula .Então, grandes agregados de suspensão adicionando pectinase ajuda como isso também nós fizemos que é a própria razão pela qual estávamos fazendo tudo isso. Geralmente você descobrirá que mesmo quando você irá induzir callus de diferentes tipos de explantes eles irão todos variar não apenas em sua maquilhagem bioquímica eles também vão, às vezes, variar em sua morfogenética ou morfologia.Alguns serão muito duros e compactos, alguns serão muito friáveis que você só vai tocar com uma espátula e eles vão se dispersar no meio. Então, isso por causa da friabilidade é becauseof o teor de água no calo. Por isso, grandes suspensões agregadas estamos usando pectinasenow porque é preferido que o calo deva ser friável na natureza. Se você quer gerar uma suspensão, porque ela pode facilmente se dispersar no meio líquido. A escolha e a seleção devem ser feitas a partir de uma suspensão de celular recém-preparada da planta graças a uma suspensão muito antiga por quê? .Por que você deve preferir jovem? Porque eles serão mais células em crescimento ativo. O tecido mostideal para isolamento de célula única são células de folhas e mesophyll que podem ser mecanicalétias e enzimaticamente isoladas. A fim de selecionar uma única célula para plantio de suspensionamentos de células devem ser diluídas em densidades onde as células vegetais não crescem sem suplementação especial .Então, quais são os métodos de triagem e seleção, os metabólitos secundários pode showan de cor intensa, por isso a detecção visual você pode pegar aquele pedaço do calo e startpropagando que callus. Assim, você vai acabar em uma linha de callus que vai dando o produto de interesse. Áreas pigmentadas alteradas do caldo podem ser facilmente detectadas ou direitálise do extrato da célula é feito para saber a qualidade do clone. Os clones subinvestigados têm que ser divididos para subcultura e análise química.