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Embriogênese Somática e Cultura Protoplast

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Agora, em embriogênese somática, existem duas etapas. Se você precisa produzir embriões a partir de células somáticas que são chamadas de embriogênese somática são duas etapas. Estágio uma onde há indução de embriogênese que significa que as células que são significantes formam embriões ou ou que são propensas a se tornar embriogênicas na natureza você induz a elas a subjugar-se ou as células que não estão determinadas a fazer embriões são determinadas então o rendimento a fazer embrios.Assim, estágio um é indução da embriogênese e estágio dois é então uma vez que o zigoto é formedor estágios diferentes ele subirá para produzir seu plantlet.Assim, requisitos para estas duas etapas são diferentes em termos de mídia. Não é necessário geralmente qualquer que seja a composição da mídia esteja funcionando bem com callus indução a induzir embriões pode funcionar bem, mas uma vez para o desenvolvimento após a indução de embriões pode precisar de revisão da mídia, composição de mídia específica .Então, as diferentes etapas no desenvolvimento de embriões diferem morfologicamente.Então, nós estaremos olhando para lá é uma foto. Existem quatro estágios diferentes antes da região do hipocotilo aparecer s.Assim, células embriogênicas geralmente, o que são elas?Eles aqueles que têm competência e embriogênicos na natureza geralmente são encontrados como pequenos ricos em citoplasma e são o tamanho do vacuole é menor. E aquelas células que são não embriogênicas serão grandes vacuoladas e menos densecytoplasm.Assim, as células embriogênicas terão citoplasma mais denso em comparação com os não embriogênicos. E, geralmente, observa-se que elas são uma vez transferidas para baixo auxinas de confinamento então ele induz o embrios.Agora, uma vez que os embriões somáticos eles são transferidos de meio de indução para médio-desenvolvimentoquando ele está ocorrente a partir de um célula única, a indução, a célula única irá se dividir em um número de células 4 5, então formando-se de estrutura globular. Uma vez que a estrutura globular é formada ela sofre diferenciação para se tornar uma forma de torpedo, e então após torpedo ele subirá mais vascularbundle formation.Generalmente, você pode ver nas regiões de hipocotílicos onde os elementos xilem começam a se tornar visibleicos.Então, e então os cotiledons o promidium shoot e o promidium raiz aparecem .Assim, desenvolvimento e maturação, ele é semelhante ao embrio.Além do zigótico, é semelhante ao embrio.Também, é semelhante ao embrio.Também, há quatro estágios conhecidos globulares, então coração em forma de coração, depois torpedo e cotyledonarystage.Agora, todos estes são morfologicamente distintos. Pode-se ver claramente uma vez que o embrião começa a desenvolver os embriões somáticos foi. E além disso, bioquimicamente também eles são diferentes porque a diferenciação está ocorrindo formação de feixe vascular está ocorrentando e, com isso, levando-se à região do meristema haverá uma meristema de raiz, atira a região meristem aparência. Então, o que acontece?Na fase de diferenciação de células de torpedo ocorre estabelecer a raiz e atirar meristem.Agora, o que é o estágio de torpedos?Este terceiro-um que se parece com um torpedo.Agora, pequenas células citoplasmicamente ricas que são embriogênicas são observadas nestes meristemareia o resto das células, são células vacuoladas e maturadas que formarão o bulk.Agora, quais são os fatores que podem afetar a embriogênese?É meio nutriente especialmente sacarose e reduzir o nitrogênio. Depois, gases leves, gases que significa oxigênio dissolvido aqui, então hormônios exógenos yourgrowth regulators.Então, quais podem ser as diferentes aplicações de embriões somáticos?Você pode usá-los para micro propagação. Eles também são usados como culturas de órgãos para produção de metabolito secundário .Então, quando eu digo produção de metabolito secundário como você acha que embriões somáticos podem ser usedados para produção de metabólitos secundários de grande escala?Micro propagação última aula em si sabemos, grande quantidade de luz de planta pequena pode arise.Então, então como vem a produção de metabólito secundário?Terceiro aplicativo é dado como eles podem ser usados como sistema modelo para estudar crescimento dos teplants.Então, isso também é bastante óbvio. Como um embrião desenvolve sites?Assim, eles podem atuar como sistemas modelo a embriões o embrios.real zigótico, mas como eles podem ser usados para os metabólitos secundários?Como e por que você pensa?Embriões somáticos são mais organizados do que a célula cultures.Senhora, é porque todos eles estão sendo formados a partir das células somáticas eles são moreconsistentes na produção do metabólito secundário, e nenhuma grande quantidade de variaçãoe na qualidade do metabolito secundário não pode ser seen.Assim, essa é a razão. Uma das razões pode ser que. Sendo uma estrutura organizada ela é menos propensa a variação.Assim, é e além disso o metabolismo secundário também está ligado em células vegetais com diferenciação organogenes.É a função de ordem mais alta. O metabolismo secundário veio depois, primário metabolismo é para crescimento e desenvolvimento .Assim, o metabolismo secundário é uma parte de funções superiores que significa muito mais organizaçãopara sobrevival.Então, isso precisa de célula a contatos de células, organogênese para acontecer, e diferenciação em organformação não é nada, mas se metem naquelas funções organizadas. Diferentes células se unem para executar uma função específica, por isso é mais definida now.Assim, esse tipo de células quando se unem se tornam estruturas organizadas, ali se encontra o metabolismo mais visível em termos de capacidade biossintética.Assim, os rendimentos de metabólitos secundários são encontrados mais elevados em estruturasestruturas.Agora, e o outro é eles são mais estáveis do que o calo ou culturas de células. Na última aula também, eles estavam mostrando para micro propagação embriões somáticos canbe cultivados em reactors.Então, uma vez que a somática vai dar origem a outros embriões somáticos, a multiplicação deve acontecer. O cultivo em grande escala significa o quê?Isso na multiplicação dos reatores está acontecendo .Então, uma vez embriões somáticos formarão outro embrio.Então, ele tem que começar a partir do cells.Então, um logicamente você pode dar a propor uma solução para ela?Qual deve ser o material de partida?Que tipo de células?Todas as células, as somáticas ou muito mais próximas que terão maior probabilidade.Você lembra que tínhamos falado sobre células com embriogênicos que são determinadas a produzir embriões, e aquelas que são induzidas a produzir embriões, potencial.Assim, as células que agora você tem conseguido encontrar se, se é possível encontrar aquelas celsas que possuem potencial embriogênico, você usará essas células trazê-las em suspensão, fazer cultivo em larga escala e, em seguida, dar-lhes condições para formar estruturas organizadas calledsomatic embrios.Agora, cultura meristema nós estávamos discutindo. A cultura Meristem não é nada, mas você faz uso das regiões meristemáticas do plantão que são regiões de budas laterais, regiões de broto axilar ou meristemas apical e que serão úteis na fabricação de plantas livres de vírus. Também discutimos sobre a razos.Agora, a distribuição de vírus é desigual em toda a planta e é muito menos em um meristema, os motivos foram os vírus não podem viajar rapidamente o suficiente através do plasmodesmata. Estes são conecção.Assim, como essas regiões meristemáticas as células estão dividindo-se rapidamente .Então, a taxa em que eles estão dividindo e informando novas células, o vírus para viajar de através dessas conexões é a taxa é menor do que that.Assim, uma é essa, a probabilidade de transferência de vírus é reduzido. O segundo é como estávamos falando sobre a presença de vasculatura está faltando, vascularbundles nas regiões meristemáticas está faltando. Eles ainda são para formar elemento.Então, a transferência de portanto, vírus difíceis para estes regions.Então, portanto, a cultura meristema é preferida para gerar plantas livres de vírus. Vinda sobre protoplast culture.Agora, o que é protoplast?Células desprovidas de. Cell muralha. Cell wall.Então, onde você pensa, por que você acha que a cultura protoplana as pessoas fazem?. Pode ser de uso. Cell não pode ser usado para hibridização .. Mesmo com plantas inteirinhas que vemos em agriculturehíbridos são produzidos, mas é sobre o que é muito mais fácil, tornando o processante easier.Então, quando dizemos hibridização somática, vai facilitar porque células somáticas podem ser combinadas juntas. O que são híbridos?O que são híbridos?Quando eu digo um híbrido, ele é usado para hibridização. Means o quê?Assim, quando duas células podem ser combinadas tal que os dois núcleos se combinam para fazer um único núcleos, todo o seu conteúdo celular, um citoplasma e um nucleus.Então, os núcleos eu tenho que combinar e o citoplasma fica mixed.Então, que is.Então, o que é feito?As células que conhecemos que as células vegetais estão apegadas umas às outras, elas são anexadas através da camada rica de pectina. Qual é essa camada chamada?Lamela do meio. médiolamella.Assim, essa camada tem que ser removida antes que a parede celular seja removida, portanto, agora, a nexos off.Agora, a parede celular é removida para o protoplasma vir together.Então, agora, como a parede celular é removida. Há duas maneiras de remover a célula uma é mecânica, a outra é enzimatica.Então, em mecânica você usamos uma lâmina muito afiada para cortar a parede celular .Agora, se a membrana de plasma em geral vai ficar mais perto da parede celular, então há chancesque a membrana pode fazer ruptured.Então, o que deve ser feito para evitar isso?Para amenizar esse processo, separação mecânica das células o que deve ser feito?Você pode dar uma solução?Tudo é feito sob o microscópio. Primeiro pré-requisito é o quê?Para se desintegrar, para separar as cells.Então, agora, isso é operação requer tratamento de pectineus ou, então uma vez que as células tenham sido separadas você tem uma única cell.Agora, há uma parede celular e a membrana do plasma, preciso cortar a parede celular. Sabendo que a membrana do plasma está muito perto de como evitar que a membrana de plasma seja rompida .. .Muito bom, muito bom .Então, agora, você pode simplesmente elaborar sobre isso?Plasmolise vai ajudar como? conteúdo como ambos e colocando um hipocótipo. Você concorda?Hm.Então, isso é o que é done.Então, você muda a pressão osmótica adicionando osmóticos tais que tal que a membranedistraia celular contrai tal que a parede celular pode ser facilmente cortada off.Agora, que cuidados devem ser tomados nisso?. A viabilidade não deve ser perdida .. Então, como é cortado o saldo tem que ser mantenedora porque agora ela está se tornando mais frágil com a única membrane.Então, então você tem que trazer de volta a pressão osmótica tal que se for plasmolysed andonce a parede celular está fora a, a célula está fora a membrana do plasma é a única barrierentre o exterior e o interior agora foi plasmolysed.Então, agora, o que vai acontecer?Foi plasmolysed por causa?. Maior ou menor concentração fora dos tais olumentos dos sais?Hyper significa?Ele disse .. Acordado .. Então, se é maior concentração e a membrana do plasma ou do plasmolysed ou da sua membrana de plasma é a única barreira que restou. É muito alto .Então, agora, o que vai acontecer?A viabilidade irá reduce.Assim, agora, você gostaria de equilibrar it.Agora, enquanto balanceia você gostaria de reduzir a concentração. Recomenda-se não reduzir subitamente a pressão osmótica. O que é; por que é recomendado assim? água de pressão por. E a célula queimará. Então, esse cuidado tem que ser tomado. O equilíbrio da pressão osmótica quando você está criando protoplasm.Então, estes são células individuais funcionais com membrana de plasma como a única camada de outermostlayer. Quais podem ser as diferentes aplicações de fazer protoplast ou fazer culturas protoplast?Você pode obter células únicas. Por que células únicas?É você quer fazer propagação clonal a partir de células únicas você quer então dividir a farmacaluse depois regenerada em plantlets.Então, esta é uma propagação clonal. Transformação celular ou transformação de animais e é a absorção de geneticmaterial.Assim, ou até mesmo desejável modificação genética em você precisa fazer algumas atualizações de extracelularto intracellular.Agora, qual é o que facilita essa absorção?Em célula vegetal, se você quer fazer transformação o que é a barreira, primeira barreira?Parede celular. Cell wall.Então, protoplast é desprovido de wall.Então, agora a transformação é muito mais fácil porque a única barreira é a membrana de plasma, a completoplanta de origem única de células pode ser produzida, então a transformação é facilitada .Agora, você pode até estudar.Uma vez que você tem protoplast dependendo da composição da mídia, uma vez que o protoplast startsdividindo as condições de nutrientes dessas células divididas pode ser diferente do originalprotoplast.Assim, as condições de nutrientes podem até lead.Now, as novas células não precisam ser protoplast porque elas são o machineryali genético é para reduzir as paredes celulares, portanto, as células mais recentes que serão produzidas irão eventuallydesenvolver célula wall.Então, seus requisitos nutricionais seriam diferentes e também podem ser usados para isolaçãode diferentes organelas de células se os estudos depois de serem done.Então, então eu estava falando sobre quais são as diferentes formas de fazer protoplast, uma ismecânica a outra é enzimatic.Agora, mecânica envolve corte de células plasmolatizadas com lâmina afiada para liberar o protoplast.Agora, enzimática envolveria a exposição das células a vários tipos de enzimas que conhecemos. Que tipo de enzimas?Precisamos remover a célula wall.Então, todas aquelas enzimas que podem degradar a parede celular ou decompor a parede celular, forexemplo .. O que são então, você deve saber o que é thecomposição da parede celular vegetal, celulose, hemicelulose, pectinase.Hm.So, não é nada, mas uma mistura de macerozyme, driselase, estes são nomes dados por alguns companheiros de origem de organismo é geralmente fungus.Então, essas classes de enzimas em conjunto como uma mistura também são chamadas como para degradação de parede celular, degradação.Então, como ele é feito?Use esterilize a explant.Assim, geralmente você esteriliza os explantados de folhas. A epiderme é removida, e então e o explicador é incubado com essas enzimas mixturespor algum tempo. E é dito que folhas flácidas facilitam o peeling, as folhas flácidas significam. Pense logicamente, o que pode significar?Está se referindo às folhas secas ou algo assim?Right.Drooping sai. Drooping folhas significa o quê?Menor .. Turgor pressure.Assim, quando estamos usando células então são usadas células que crescem ativamente que são do lugar exponencial para o isolamento do protoplast.Agora, condições que devem ser otimizadas se você quiser isolar protoplast há concentração enzimática, tempo de exposição, composição enzimática, quais são as diferentes gensdas enzimas que estamos usando, então a pressão osmótica, a presença de osmoticums.Então, a pressão osmótica, que tipo de solutos, que concentrações estamos usando para osmoticums.Agora, a enzima geralmente utilizada estão na faixa de concentração de 0,5 2, wheremacerozyme que é uma mistura desses tipos de enzimas ou separadamente você pode usar celulose, pectinase, hemicelulose, outra enzima mix como drieselase.Assim, solução enzimética. E sorbitol, manitol, qual é o objetivo?Osmoticbalance.Muito nice.Então, eles são usados como um osmóticospara equilibrar a pressão osmótica. Depois, o cloreto de cálcio, para a estabilidade de membrana.Isso, ele neutraliza neutraliza a carga superficial, reduz o charge.Então, isso .. É protoplast ou hibridização.Assim, geralmente, se eles tiverem que ser reunidos para hibridização o chargeshould de superfície seja neutralizado, para que não se repitam, as membranas têm que fundir, é notícia, portanto, ela é tratada com cloreto de cálcio. E também é dito que o genótipo e os fatores ambientais também podem impactprotoplast isolation.Então, os fatores que afetarão a cultura protoplast, se você só quer fazer cultura ofprotoplast então obviamente, porque a única barreira é a membrane.Portanto, a pressão osmótica tem que ser balanceada cuidadosamente.Portanto, pressão osmótica, osmolaridade do meio é ajustada ao mesmo nível da enzima a solução de lavagem a que você está expondo-a, caso contrário a célula pode romper ou getnão-viable.Então, a cultura prolongada em alta pressão osmótica pode resultar na navegação das células. A osmolaridade navegando significa necrose ou viabilidade loss.Agora, a osmolaridade do meio o que é feito?Ele é diminuído gradativamente com formação de parede celular e divisão celular. Gradativamente diminuir a gente discute, a razão sendo de repente se você diminuir ele a água pode corar dentro da célula e a célula pode burst.Assim, como a parede celular está se formando, com a barreira está se formando a osmoticpressão é reduzida. Abrupt diminua portanto, deve-se evitar na pressão osmótica. Quais são os requisitos nutricionais neutros?Como eu disse geralmente para começar com eles podem ser parecidos com a cultura celular ou callus, butonce as células começam a se dividir em ou então você precisa da composição da mídia pode precisar de tobe reviso.Presença de alta concentração de amônio pode ser tóxica para protoplast.Por quê?Estávamos naquele dia discutindo que o nitrato e o amônio são a fonte de nitrogênio para as células da planta, não é ela. E a assimilação fácil é o amônio. Nitrato também uma vez que ele é assimilado levado para cima, ele é convertido em íons de amônio integrado em aminoácidos de amônia ou muitos outros diferentes onde quer que seja needed.Então, então por quê?De um modo geral, observa-se que se você der concentrações mais elevadas de amônio, um deles é perda de viabilidade, há perda no crescimento da planta. Isso é chamado como toxicidade de amônio.Sabendo disso, não é interessante. Amônio afinal é necessário, nitrato também está sendo convertido em amoníaco apenas previamente ele entra no metabolism.Então, por que não dar amônio em diretamente.Se você der amônio, tente dar amônio diretamente nas plantas pode ser tóxico para as células vegetais o amônio. Por que então?Nós conseguimos. Muito bacana, muito good.Então, a assimilação de amônio é encontrada também relacionada com a liberação de uma chance porque ela tem que ser levada em, portanto, para se equilibrar por lá são canalizados. Então, até o transporte de íons ocorre com algo entrando em algo, há um refluxo andafil.Então, isso é chamado como para manter a membrana potencial.Então, uma vez que os íons de hidrogênio são refluidos, então há acidificação no ambiente das células e há o pH da célula fica perturbado.Então, o que é dito ser uma das razões pelas quais as plantas então o crescimento é inibido. Você geralmente tem vitaminas de nitrogênio em carbono Reguladores de crescimento de plantas, eles são manipulados para facilitar o que é caso de qualquer forma de cultures.Agora, reguladores de crescimento. Combinação de auxina e citokinina ela estimula o crescimento e a divisão sabemos que .Assim, combinação similar de cultura de célula e protoplast pode ser usada para que callus ou cultura de células possam funcionar inicialmente para as culturas de protoplast, mas uma vez que a cultura protoplast divide-se em células então ela pode necessitar de revisão. E fatores ambientais, luz, intensidade, altíssima intensidade de luz podem inibir o protoplasma divisionin protoplast.Então, lá geralmente é preferido que você use dim light ou você realiza em dark.Assim, e o que mais, temperatura de pH é geralmente o mesmo o que usar para sua célula vegetal cultures,right.Heat Tratamento e impulso elétrico é encontrado para induzir a divisão em protoplast. É dito que a imobilização às vezes ajuda em culturas de protoplast o que é muito óbvio. Por que você acha que a imobilização seria útil em culturas de protoplast?Não ler só pensar?Pense que é apoio na cell.Right.Protection.Então, porque sabemos que é muito frágil existe apenas a membrana da célula barrier.Então, encapsulando-a em forma de gel está dando-lhe mais protecção.Agora, a escultura de enfermagem e a mídia de condição às vezes é encontrada para ser útil para protoplastculturas. Técnica de cultura de tecidos de Nurse que tínhamos lido anteriormente o que era aquilo?Usando o calo. Não utilizar outro, podem ser os extratos das outras células podem ser úteis para o crescimento de seu desejado culture.Então, protoplast fusão de hibridização somática como é feito e o que é?É um suplente de reprodução convencional. A fusão Protoplast pode superar a incompatibilidade sexual e a obtenção de híbridos somáticos, se você quer que use células somáticas para produzir cels.Agora, fusão de células somáticas e produção de híbridos é conhecida como hibridização somática .Agora, fusão por tratamento de somatic.Então, o que tudo é necessário?Você precisa de íons de sódio, por isso é tratado com nitrato de sódio, talvez seja o cloreto de thencálcio, então peg. Peg é?Polietileno glicol. Polietileno glicol.Então, é facilitado que é dito que você precisa se fundir, você precisa trazer as células together.Então, portanto, você vai gostar de tratá-la com cações como íons de sódio ou íons de cálcio e polietilenoglicol. Como é o polietilenoglicol?A Peg é usada em transformação, não é. Sim O que está fazendo?Permeabilidade.Então, está manipulando a permeabilidade da reversibilidade da membrana celular, reversivelmente.Então, se for usado, facilitaria o que?As membranas celulares têm que se fundir juntas, para que haja transferência de núcleos, organela, o citoplasma tem que se tornar um em híbridos, não é it.Então, então os poros transitórios têm que ser formados e as membranas têm que ser fused.Então, o polietileno glicol está ajudando na fusion.Então, tudo isso está facilitando nada, mas vindo junto das células, fusão de themembranas alterando a permeabilidade das membranas, fluidez das membranes.Então, quais são as etapas envolvidas?Isolamento de protoplast primeiro, então indução da fusão de membrana, mistura de organelas citoplasmose ocorreria então, então formação de vagões de pecado. Formação de vagões de pecado após a mixagem acontecer lá se formarão os vagões de pecado. Sin carrions significa?. Dois núcleos estão se unindo para formar onenuclei. Então seleção de product.Assim, uma vez obtido você selecionaria o direito, o desejável se a correta fusão aconteceu não sob o microscópio você irá selecionar as células fundidas ou hybrids.Agora, esta então você usa aquelas células você lhes dá condições ideais para aquelas hibridsto se multiplicam, uma vez que elas se multiplicam então elas se formariam callus e então do callus youcan regenerate into hybrid plants.Então, protoplast fusion membrane properties isto é o que fomos discussing.Agora, processo de fusão de protoplast ele requer o quê?Exigiria o contato direto do protoplast.Então, o que é facilitado?A adição seria facilitada através de crescentes cações divalentes que significa cálcio ou sodiumions.Assim, já discutimos isso. Isso mudaria as propriedades de superfície das membranas das células, e usando polietileneglicol mudaria a fluidez das membranas, alterando reversivelmente a ou reversível permeabilidadeaumentada na alteração da permeabilidade das membranas para ocupar o material.Agora, o DNA direto ou molécula de molécula que é agora membranas de células que conhecemos são semi-solidares.Isto é o que aprendemos e fluido mosaico model.Agora, fluidez deste membrana é uma característica fisiológica. Então, agora, o que é necessário?Como é feito?Precisamos ter como disse reversivelmente aumentar o poro size.Generally, isto é o que está acontecendo nas células também. São as células se querem tomar algumas macromoléculas, existem poros que são poros que estão se formando e então mesmo quando ele fica danificado, há poreformação, mas há processo que está presente na célula para voltar a trazer de volta a membraneto sua posição e fechando os holes.Então, o mesmo processo está sendo facilitado através do uso do seu polietileno glicol ou qualquer quimioterapia ou mesmo curta duração de. Você deve ter ouvido para tratamento de choque de calor de transformação ser feito ou elétrica pulseseletroporação é feita, então mesma coisa pode ser usada aqui para melhorar resultados de somatichybridizations.Então, este é um dos protocolos que é usado para a fusão de protoplast em que você usealta concentração de íons de cálcio, carga elétrica e o pH também é alterado porque é saidto ter um efeito profundo sobre a thefusão destes protoplast.Então, o que é feito?Você mistura sódio, nitrato peg e sacarose, sacarose sendo um osmoticumsabendo que uma vez os protoplastos são there.Então, você precisa equilibrar a pressão osmótica. Então, você precisa equilibrar a pressão osmótica em 35 grau C ou, assim, o youcentrifugar as diferentes células que você deseja produzir um híbrido somático aquelas celsare centrifugadas e depois novamente ela é deixada em 30 grau C por algum tempo para o fusionto casu.Assim, uma é você está facilitando a difusão e então você está dando tempo para a forma do pecado carrionsto, uma vez que os vagões do pecado são formados então você confere a sua fazer a triagem e a então troque a composição da mídia para que ela se divida e forme as culturas.