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Electron Microscopi Salve a tutti, questo è il dottor Vishal Trivedi da dipartimento di bioscienze e bioingegneria IIT, Guwahati. E di cosa stavamo discutendo? Stavamo discutendo dei microscopi e in quella discussione abbiamo iniziato con i microscopi leggeri e poi successivamente si discute sui microscopi di fluorescenza. E nella lezione precedente abbiamo anche discusso di come si possa essere in grado di utilizzare il microscopio a fluorescenza per studiare la Phagocytosi.Così, ora nella lezione di oggi si discute di alcuni aspetti più legati alla microscopia. Quindi, uno dei fenomeni di base per cui la gente sta usando il microscopio è che sta effettivamente ingranando gli oggetti ed è così che si può essere in grado di vedere distintamente l'oggetto da 2 usando i microscopi. Così, la capacità di un microscopio di vedere distintamente i 2 oggetti diversi viene misurata da una proprietà nota come risoluzione.Se ricordate, quando stavamo discutendo della cromatografia, abbiamo discusso anche delle risoluzioni e dove si parlava della separazione dei 2 picchi diversi mentre in caso di microscopia, la risoluzione riguarda più la capacità di un microscopio di risolvere i 2 diversi oggetti e la distanza tra questi 2 oggetti. Vediamo quindi come si sta definendo la risoluzione.(Fare Slide Time: 02.24)Così, la risoluzione a termine è la distanza minima in cui il 2 punto distinto di un esemplare può ancora essere visto dal microscopio. E per definizione, la risoluzione di un microscopio è legata all'aperture numerica così come alla lunghezza d'onda della luce utilizzata per esaminare l'esemplare che significa che la distanza d è direttamente proporzionale alla lambda e inversamente proporzionale alle aperture numeriche.Anche se si utilizza il microscopio a fluorescenza o i microscopi leggeri, si va ad utilizzare la gamma visibile dello spettro. Quindi, se immaginate di usare la luce del colore verde e se uso una luce di colore verde che in realtà avrà una lunghezza d'onda di 514 nanometri e con un microscopio leggero dove si sta utilizzando l'obiettivo di immersione del petrolio, l'aperture numerica sarà di 1,45.Quindi, se mettete tutti questi valori in questa formula, quello che state per ottenere è, avete intenzione di ottenere il d è di 177 nanometri che significa con l'ausilio del microscopio leggero, potete vedere gli oggetti che sono vicini al nanometro 177 se si sta usando la luce verde come fonte di luce. Quindi, ci sono 2 opzioni grazie alla quale si può aumentare o si può essere in grado di diminuire questo numero e come si può vedere che d è direttamente proporzionale alla lambda che significa diminuire la lambda è possibile diminuire le distanze.E ricordare che diminuire in distanza significa aumentare la risoluzione che significa se sto guardando i 2 oggetti, molto lontani dal nanometro 1, quindi se i 2 oggetti sono 1 nanometri questa differenza e potrei vederli distintamente allora la risoluzione diquel particolare microscopio sarà migliore di questo microscopio che è in realtà andando a darvi una distanza di 177 nanometri.Così, diminuire di d non deve essere interpretato come d diminuzione della risoluzione. Quindi, diminuire in d significa che c'è un aumento delle risoluzioni, il che significa che ci sono 2 modi in cui poter fare il d è direttamente proporzionale alla lambda. Quindi, se diminuite la lambda, anche il d sarà diminuito ed è così che si può aumentare le risoluzioni. d è inversamente proporzionale a 1 / NA.Quale significa, se devo diminuire il d devo aumentare la NA. Ma c'è una limitazione fino a cui si può essere in grado di aumentare l'apertura numerica nucleare di un microscopio. Ecco perché voi non state modificando l'aperture numerica invece quello che stanno facendo è giocare con la diversa lunghezza d'onda della luce. Ed è così che si può essere in grado di ottenere le migliori risoluzioni.Così, se si vede lo spettro elettromagnetico dello spettro elettromagnetico, quello che vedrete è che per la luce visibile, si sta usando quello nel microscopio leggero. E se si va dalla luce visibile verso l'ultravioletto così come x raggi e raggi gamma che significa se si va verso questo lato, si va in realtà a diminuire la lambda. E man mano che diminuite la lambda, alla fine si accelerano le risoluzioni.L'unico problema è che quando si diminuiscono i lambda si va effettivamente a raggiungere una regione che in realtà non sarà visibilmente attiva il che significa che non sarà percepito direttamente da un occhio umano. Ed è per questo che si richiede un intervento in modo da poter percepire i segnali. Così uno dei modi in cui si può essere in grado di percepire il segnale che sta arrivando o dai raggi x o dai raggi gamma è che si possono aggiungere in realtà alcuni x ray attivi o i raggi gamma attivi nel sistema.Quindi, se si vuole aumentare la risoluzione, quello che si può fare è davvero colorare le cellule con molecole che in realtà vi daranno il segnale o che in realtà risponderete a queste lunghezze d'onda. Ed è così che si può essere in grado di visualizzarli, non a occhio nudo, ma con l'aiuto dei diversi tipi di schermi sensibili. Così quando si diminuiscono la lambda, in questo caso, quello che le persone stanno facendo è usare l'elettrone come fonte delle illuminazioni.E la microscopia ciò che stanno usando è chiamata come microscopia elettronica. E come ho detto, se si vede la lunghezza d'onda dell'elettrone dal web e se si va a mettere quel valore in questa formula, è possibile calcolare la risoluzione teorica possibile di una microscopia elettronica. Quindi quello che suggerirei è che tu debba fare questo esercizio e vedere quanto grande è l'ingrandimento che otterrete quando si usano i microscopi elettronici.Così i microscopi elettroni stanno usando l'elettrone come fonte per illuminare gli oggetti e poi questi elettroni interagiranno con la materia presente all'interno della cellula. Ed è così che vi daranno l'immagine di quel particolare campione. Ci sono 2 modi in cui si può essere in grado di elaborare il campione ed è così che si può essere in grado di avere i 2 diversi tipi di microscopia elettronica.(Fare Slide Time: 07.52)Così, ci sono 2 modalità di base dei microscopi elettronici, uno è chiamato come microscopio elettronico a scansione o il SEM e altri chiamati come quel microscopio elettronico a trasmissione o il TEM. Quindi, se hai un campione, in realtà puoi avere le 2 cose da osservare, una come la superficie di questo oggetto particolare e che in realtà si può fare semplicemente guardando a fare con la SEM che si chiama microscopio elettronico a scansione.Così un microscopio elettronico a scansione, come suggerisce il nome in realtà sta andando a scansare la superficie di quel particolare oggetto. Ed è così che in realtà vi darà il, come appare la superficie. Quindi, in realtà vi darà la topologia, mentre se sono interessato a sapere qual è il materiale è e come sono le strutture all'interno, allora quello che posso fare è che possotagliare questo campione nelle sezioni multiple e poi posso essere in grado di vedere tutte le cose presenti all'interno e questo è quello che è chiamato il microscopio elettronico di trasmissione.Quale significa, posso davvero illuminare gli oggetti in 2 modi, in cui in un modo posso semplicemente illuminare la superficie superiore ed è così che posso essere in grado di monitorare la chimica di superficie o la topologia superficiale. L'altro modo è che illuminerò semplicemente l'oggetto passando e in questo modo l'elettrone passerà con il campione ed è così che sta andando a darmi i dettagli ciò che è presente all'interno del mater, campione e che viene fatto dai microscopi elettronici di trasmissione.Così in una SEM vengono rilevati gli elettroni secondari prodotti dall'esemplare per generare un'immagine che contiene la caratteristica topologica dell'esemplare, il che significa come la superficie sia in realtà che viene chiamata topologia. Ecco quindi il dettaglio cosa si ottiene quando si elabora un campione per il microscopio elettronico a scansione. L'immagine in un TEM invece, è generata dall'elettrone che ha trasmesso attraverso un esemplare sottile. Ed è così che in realtà vi darà i dettagli di quel particolare campione come il campione viene dall'interno.(Fare Slide Time: 10.08)Così, in un microscopio elettronico a scansione e se avete la pistola a elettroni, quindi avete la pistola elettrone che sta effettivamente andando a generare gli elettroni e poi in realtà avrà le bobine magnetiche, il lavoro di questi rotoli magnetici è solo quello di concentrare gli elettroni quello che viene dalla pistola a elettrone e poi si ha una lente a condensatore. Quindi, la lente del condensatore è in realtàandando a focalizzarlo e poi in realtà vi permetterà di bombardare il campione che andrà a collocarsi su un portacampioni.Così l'acqua ciò che è presente all'interno di un campione biologico sta effettivamente andando a far diffamare il campione o spargere i fasci di elettroni ed è così che in realtà renderà lo sfondo sempre più pronunciato. Quindi per evitare di dover effettivamente rimuovere l'acqua. Quindi i campioni biologici sono fragili e contengono una grande quantità di acqua, l'acqua presente nel campione biologico in realtà diffonde i raggi di elettroni e può aumentare il segnale di fondo.Come aumenteranno il segnale di fondo è che se si dispone di una molecola d'acqua, le molecole d'acqua in realtà aumenteranno gli elettroni alla schiena, quando si vedono gli elettroni indietro e uno sfondo di elettroni di schiena, in realtà renderà le cose più nocciole. Ed è così che in realtà si maschera il segnale dei vostri elettroni sparsi. Ed è così che in realtà deve essere rimosso dal campione per ottenere un contrasto molto chiaro.Così seguendo le fissazioni di ossido di osmio, tsi estrae chimicamente dal campione utilizzando una serie ponderata di etanolo. Quindi sta eseguendo i seguenti passaggi. Quindi quello che fai è semplicemente bagnare il campione in una diversa concentrazione di alcol. Così che e l'alcol è igroscopico in natura, quindi in realtà comincera a succhiare l'acqua, ma non si può fare la disidratazione in modo brusco.Così bisogna fare la disidratazione in un incremento molto lento. Ad esempio, prima si va a prendere il campione e a incubare con l'etanolo del 50% per 30 minutes minuti. Quindi che sia così 50% di etanolo vuol dire che riprenderà l'acqua molto lentamente. Ed è così che in realtà sta per iniziare a togliere l'acqua una volta raggiunta l'equilibrio,poi si va a incubare il campione con 70% di alcool, quindi si è aumentato ulteriormente l'alcol.Così che in realtà ritirerà qualche altro liquido, allora si andrà ad incubare il campione con 80% minuti e poi si andrà ad incubare il campione con 90% minuti e poi si andrà ad incubare il campione con 95%. Quindi in quella fase il campione è quasi che non c'è acqua presente, ma poi quello che si sta andando a fare è incubare il campione con 100% di etanolo per 30 minutes.Così che in realtà si rimuoveranno anche se c'è una quantità minore di acqua presente all'interno del campione. Ed è così che il nostro campione è ora privo di acqua. Così il campione viene incubato con alcool anidro, quindi è il 100% o l'alcol assoluto. Quindi si avrà l'alcol anidro e che in realtà rimuoveranno l'ultima goccia d'acqua. Allora perché stiamo facendo la disidratazione di classificazione è perché se si fa una brusca disidratazione.Che significa che se prendo solo il campione e lo metto al 100% di alcol prima di tutto la rimozione dell'acqua non sarà liscia. In realtà sarà più da alcune estremità e meno dalle altre estremità. Così che in realtà cambierà la chimica di superficie e questo è tutto in realtà che cambierà la struttura o la morfologia di quel particolare campione. E a parte questo, l'alcol può danneggiare anche il campione.Così quando si fa una disidratazione graduata, il che significa che si inizia dagli anni 50% e poi si va lentamente in più passi al 100% e poi all'alcol assoluto anidro. In realtà si permette al campione di acclimatarsi a quel particolare ambiente. Questo significa che in realtà si permette al campione di rimanere morfologicamente integro.(Fare Slide Time: 19.36)Così, dopo aver fatto un passo di asciugatura. Quindi al Passo 5 bisogna fare un'essiccazione così durante il prelievo di disidratazione deve impedire l'essiccazione dell'aria. Una volta che il campione essiccato viene rimosso, deve essere conservato in un ambiente essiccato, fino alla visualizzazione. Quindi questo significa che una volta che il tuo campione è stato disidratato devi fare un'essiccazione sotto il vuoto e poi devi tenere il campione sotto il vuoto in modo che non catturino l'umidità dall'atmosfera.Che significa, perché il tuo campione è ora disidratato sta avendo in realtà la tendenza a catturare l'umidità dall'atmosfera. Ed è per questo che bisogna fare un passo di asciugatura e poi dopo l'essiccazione è finita, poi bisogna tenere questo campione in essiccatori. E essiccatore se non sai sull'essiccatore, essiccato è un tipo di scatola dove in realtà puoi generare un vuoto molto alto come 10 a potenza -5 o 10 a potenza -7 vacuums.E poi quel vuoto in realtà renderà il sistema inerte. Così rimuoverà tutta l'aria. Ecco allora come non ci sarà umidità presente in quella particolare camera ed è per questo che il vostro campione sarà conservato. Ora bisogna tenere quel campione in condizioni disseccate fino a quando non si è pronti ad analizzare i campioni. Così poco prima dell'analisi bisogna fare il passo 5.Così il passo 5 è il rivestimento del provino. L'esemplare deve essere rivestito con il materiale conduttivo da visualizzare con il microscopio elettronico a scansione. Quindi, come ho detto bisogna aggiungere qualcosa in modo che o si debba colorare il campione in modo tale da rispondere alle travi degli elettroni. Quindi, in questo caso, si sta andando a ricopre il campione perchésono semplicemente semplicemente interessati a vedere come appare la morfologia di superficie. Quindi e che è quello che lo scopo sta scansando la microscopia elettronica.Così, che si fa con l'aiuto di uno sputter. Così in uno sputter si forma una scarica tra un anodo e un catodo che utilizza un gas adatto. Quindi, questo è uno sputter d'oro, quello che hai è che hai un obiettivo, il che significa che in realtà questo sta avendo l'oro e che in realtà è presente a un negativo e poi lo sei, questo è sotto il vuoto. Quindi sotto il vuoto si sta tenendo il campione in realtà a questo blocco e poi ci si chiede e poi si sta facendo davvero un bombardamento delle ioni di gas.Così quando si sta facendo il bombardamento di ioni di gas, quello che accadrà è in realtà che sta riprendendo l'oro, e sta effettivamente facendo la doccia l'oro sopra di questo campione ed è così che sta andando a fare un liscio uno strato di rivestimento d'oro sul campione. Così, il bombardamento delle ioni di gas sul materiale catodico, di solito l'oro, erode il materiale di destinazione e lo deposita sull'esemplare.Così, quando si fa un bombardamento della tua sostanza bersaglio come l'oro in questo caso, con gli ioni verrà fuori il materiale che significa che l'oro uscirà e poi si va a depositare sul campione e in realtà si va a depositare come per la morfologia di quel particolare campione. Quindi, non disturba la morfologia del campione, invece si va solo a fare un rivestimento a vapore.Così da poter studiare la morfologia di quel particolare campione perché ovunque l'oro sia presente, in realtà si diffonde e sta andando a spaccare l'elettrone ed è così che si può riuscire a catturare l'elettrone posteriore così come gli elettroni sparsi. L'obiettivo utilizzato nello sputter è costituito da 60% oro e il 40% palladio. La deposizione uniforme del materiale sputato che è l'oro forma anche rivestimento sulla superficie dell'esemplare.E rendere l'esemplare conduttivo per eseguire il microscopio elettronico a scansione. Quindi, una volta fatto con questo rivestimento del campione, allora il tuo campione è, non è necessario tenere il campione sotto il vuoto e poi puoi solo caricare questo campione nel microscopio elettronico a scansione e poi puoi essere in grado di visualizzare con l'utilizzo del microscopio elettronico.(Fare Slide Time: 24:00)E poi quando visualizzerai, ti sembrerà questo. Quindi, quello che vedete è questo in realtà i batteri e quello che vedete è la superficie dei batteri è così, perché abbiamo fatto un po' di trattamento e questo è come tutti i batteri che vedete è in realtà avere un cambiamento nella chimica di superficie e ciò che vedete è in alcune formazioni come questa è la scala attraverso la quale questa foto è stata scattata.Così la scala è di 2 micron, l'ingrandimento quello che vedete è 3.63k e questo è stato raccolto nella modalità elettrone secondaria, si può avere anche l'altro tipo di modalità, che ci dà qualche informazione in più sulla chimica di superficie del molecole. Così ora da qui passeremo al microscopio elettronico di trasmissione e discuteremo di come potrete essere in grado di utilizzare il microscopio elettronico di trasmissione per rispondere alle alcune domande biologiche.(Fare Slide Time: 24:56)Così il microscopio elettronico a trasmissione è molto semplice come è come un microscopio leggero tranne che si sta utilizzando il fascio elettronico come fonte di illuminazione invece della luce. Così ti ho dato un paragone. Quindi in questo caso hai un microscopio leggero. Così il microscopio leggero sta usando una lampadina e che sta effettivamente mandando la luce e poi viene focalizzata da una lente a condensatore e poi viene illuminata gli oggetti.E poi una volta che è illuminato l'oggetto è possibile catturare l'immagine con l'ausilio delle lenti oggettive e poi si può vedere che con l'aiuto del pezzetto. Allo stesso modo, in caso di microscopio elettronico a trasmissione, si ha la pistola elettronica attraverso la quale arrivano gli elettroni, e poi si hanno le bobine magnetiche attraverso le quali è possibile focalizzare questi elettroni.E poi si ha la lente focalizzata e che focalizzare la lente sta effettivamente andando a focalizzare i fasci e poi si sta effettivamente andando ad eliminare il campione che sta per essere conservato sul palco e poi qualunque sia gli elettroni che escono dal campione saranno concentrati dalla lente di proiezione e poi si va ad andare avanti in un rivelatore. Quindi in questo caso, in realtà si sta andando ad avere un rivelatore sensibile per gli elettroni rispetto a quello qui si può semplicemente usare gli occhi per percepire il segnale.Così allora si può avere la stessa informazione. Qui anche le luci passano attraverso il campione ed è così che si stanno effettivamente ottenendo i dettagli della cellula così come quello che è presente all'interno della cella. Allo stesso modo, nel caso di microscopio elettronico a trasmissione si otterrà anche i dettagli di interno della cella. Quindi il microscopio elettrone di trasmissione di solitoha le pistole ad emissione termoionica e gli elettroni sono accelerati ovunque tra 40 e 200 kilo volt le potenzialità.Tuttavia, TEM con più di 1000 kilo volt accelerazione potenziale sono stati sviluppati per ottenere risoluzioni più alte. A causa della loro luminosità e di una leggerezza di emissione di un fascio di elettroni molto fine stanno diventando più popolari come le pistole di elettroni.(Fare Slide Time: 27:20)Ora, quando si fa un elettrone di trasmissione il microscopio il trattamento del campione è poco diverso da quello che hai fatto per il microscopio elettronico a scansione e devi fare un passo in più perché ora si desidera che il campione, gli elettroni passino attraverso il campione e poi in realtà vi darà l'immagine. Allora, quello che devi fare è il primo il passo è lo stesso che devi fermare il movimento della macromolecola biologica che significa, devi fare un passo di fissaggio.Dopo la fissazione il secondo passo è anche lo stesso che devi rimuovere l'acqua in modo che tu debba fare una disidratazione, in modo che anche l'acqua non interferi nell'aumentare dello sfondo perché l'acqua interagisci con gli elettroni e si diffonde questi elettroni e che in realtà come si sta andando ad avere lo sfondo pesante. Quindi, devi rimuovere l'acqua.Dopo di che, visto che devi fare il, supponga che questa sia la tua cella o questa è la tua effettivamente cella. Quindi, in realtà non è possibile eliminare una cella e poi si può essere in grado di guardare ciò che si deve fare è necessario tagliare questa cella in più pezzi. E che come il singolo strato diquel particolare oggetto deve essere illuminato con l'elettrone perché questi elettroni sono elettroni ad alta energia ma non sono così alti da poter illuminare l'oggetto spesso e che in realtà passerà grazie a quello.Così, ecco come si deve illuminare e poi sarà possibile raccogliere gli elettroni ciò che sta arrivando attraverso l'oggetto ed è così che in realtà si riesce a ricostruire le immagini. Quindi, per questo bisogna fare un blocco duro per il taglio e che è stato fatto con l'ausilio di un processo chiamato embedding. Una volta fatto con l'embedding, il che significa che avete messo questo in un blocco allora potete tagliare la sezione in modo da tagliarle una sezione, da 10 a 80 nanometri.E che farete con le sezioni. Una volta fatto con i sedici, poi il passo successivo è che bisogna nascondere il lato non antigenico, il che significa che bisogna fare un passo di blocco e poi bisogna fare una colorazione con l'anticorpo che significa dover fare una colorazione con le primarie oltre che gli anticorpi secondari. Ricordate che si tratta di un microscopio elettronico a trasmissione.Così rispetto alla microscopia fluorescente, qui bisogna usare un anticorpo secondario che in realtà è accoppiato o etichettato con il metallo pesante in modo che risponda o che interagga con gli elettroni, quello che userete per illuminare gli oggetti. Poi bisogna macinare con i reagenti di contrasto, in modo da poter vedere meglio il contrasto del campione. Ed è così che si prepara davvero a preparare il vostro campione e si può essere in grado di osservare le cellule con l'ausilio del microscopio elettronico di trasmissione per maggiori dettagli e che in realtà i dettagli saranno all'interno della cella.Poi bisogna anche fare una macchia per visualizzare le strutture cellulari. Così puoi avanzare il tuo campione sono presenti sulla griglia poi puoi incubare la griglia in un acetato di uranyl per 2 ore e successivamente in un citrato di piombo per ulteriori 2 ore. Così l'acetato di uranyl si macchierà permetterà di osservare le strutture cellulari e di studiare i cambiamenti della cellular o della morfologia cellulare sub. Quindi se macchiate le cellule con l'acetato di uranyl, in realtà vi permetterà di vedere tutti i diversi tipi di organelli come mitocondri, corpi golgi, reticolo endoplasmatico, nucleus e tutto ciò.(Fare Slide Time: 39:25)Poi bisogna fare l'etichettatura immunogold. Quindi quello che fai è bloccare la griglia con l'aiuto della BSA, l'incubare la griglia in 5 anticorpi primari e poi fare un lavaggio per rimuovere gli anticorpi non legati. Così si digita la griglia in un PBS per 3 volte. E questo in realtà rimuovera gli anticorpi non legati. E poi immergete davvero la griglia in PBS contenente tween 20.E questo vi darà in realtà anche il lavaggio aggiuntivo degli anticorpi ed è così che si eliminano tutti gli anticorpi non specifici. E poi lo incubate con gli anticorpi secondari. Gli anticorpi secondari vanno accoppiati ad una nanoparticelle d'oro da 10 nanometri. Quindi si hanno le opzioni multiple o si può usare l'anticorpo che è accoppiato ad una particella d'oro da 10 nanometri o a una particella d'oro da 5 nanometri. Quindi, si hanno le scelte perché si può essere in grado di vedere molto chiaramente queste nanoparticelle.Ed è così che si può essere in grado di dire molto pindamente che questa è la posizione della particolare proteina. E poi bisogna fare un lavaggio esattamente allo stesso modo in cui si deve fare prima lavaggio con il PBS e poi PBS contenente il tween. Infine si colorano di nuovo le griglie con l'acetato di uranyl, in modo che tu, qualunque cosa l'acetato di uranyl sia stato perso mentre stai facendo questa colorazione di immununo è di nuovo tornare indietro e ti darà in realtà la morfologia dei diversi organelli.(Fare Slide Time: 40:54)E poi stai per mettere in carica la griglia nel microscopio elettronico di trasmissione e ciò che accadrà è una volta inserito che nel microscopio sarà in realtà illuminato dalla pistola elettronica e che per l'elettrone passerà e che ovunque l'elettrone non passerà, ad esempio, questo è il vostro campione e questi sono i luoghi dove si ha l'oro.Così, quello che accadrà è che quando si illuminerà questo oggetto in tutti gli altri posti, gli elettroni passeranno attraverso mentre, l'elettrone non sarà in grado di passare da queste località dove si hanno le particelle d'oro o le particelle pesanti e a causa di questo, in realtà vi darà un dote colorato nero. Ed è così che si può essere in grado di sapere che queste sono le località delle mie proteine.Così questa è l'immagine tipica che otterrete quando si fa un'immagine TEM, l'analisi TEM. Quindi quello che vedrete è che non vedrete la membrana molto elegante e tutto ciò. Quello che vedrete è che vedrete un puntino come questo e questi sono i doti che in realtà si formano quando l'anticorpo accoppiato all'oro da 10 nanometri era vincolante per un anticorpo primario.E così, queste sono le località della proteina del vostro interesse che si trovano nella cellula. Se volete vedere potete vedere queste cellule con l'aiuto della colorazione dello stato interno ed è così che vi dirà se questi doti sono presenti nei corpi mitocondri o golgio reticolo endoplasmatico o nucleus e tutto ciò. Questa immagine viene fornita dal, uno del mio amico in CDRI, Dr Amogh.(Fare Slide Time: 42:38)Ora, se si desidera utilizzare il microscopio elettronico di trasmissione, è possibile utilizzarlo anche per gli studi di co localizzazione. Quindi, se ricordate quando stavamo discutendo del microscopio fluorescente, ho detto che si può essere in grado di utilizzare 2 diverse serie di anticorpi secondari per localizzare la proteina a e proteine b e si può essere in grado di porre le domande se la proteina a e la proteina b sono co localizzabili tra loro oppure no, che siano localizzazioni sono diverse e tutto ciò.Così, in questo caso anche tu puoi essere in grado di fare quel tipo di esperimenti in cui puoi fare i 2 anticorpi che puoi prendere l'anticorpo 1, puoi prendere l'anticorpo 2 e similare, puoi prendere gli anticorpi secondari come x e y e quello che devi fare è il x te può prendere l'oro da 5 nanometri e in questo caso si può prendere l'oro da 10 nanometri. Quindi, quello che accadrà è ovunque il ab2 sia presente, in realtà vi darà un cerchio del nanometro 10.Ovunque il ab1 sia presente vi darà effettivamente un cerchio di 5 nanometri. Per esempio, in questo caso si vedono questi sono in realtà i cerchi da 5 nanometri e questi sono i cerchi da 10 nanometri. Così, in alcuni punti quello che si vede è che ad esempio, qui si vedrà che i 10 nanometri così come i 5 nanometri sono in realtà, si infilano tra loro, il che significa, in questo luogo la proteina ab1 e ab2 si interagiscono tra loro, il che significa che in realtà stanno co - localizzando e probabilmente formando un complesso.considerando che l'altro pone il 10 nanometro oltre che il segnale di 5 nanometri è diverso. Quindi, ecco come si può essere in grado di essere in grado di dire con precisione che se la proteina a e proteina b interagisce tra di loro o meno, e se si sta localizzando in uno stesso comparto o meno. Ecco, questo riguarda tutti i diversi tipi di tecniche di microscopia. Quindi, di gran lunga quello che abbiamo discusso abbiamo discusso della microscopia a luce, abbiamo discusso della microscopia fluorescente.E poi nella lezione di oggi in cui abbiamo discusso della scansione oltre che della microscopia elettronica di trasmissione, abbiamo anche capito come elaborare il campione per tutti questi microscopia. Così nella nostra successiva lezione andiamo a discutere di pochi degli esperimenti legati a queste tecniche di microscopia. E poi discuteremo anche di alcuni aspetti più correlati agli strumenti biologici cellulari. Quindi con questo vorrei concludere qui la mia lezione. Grazie.