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Antibody - Interazione Antigene
Ciao a tutti questo è il dottor Vishal Trivedi da dipartimento di bioscienze e bioingegneria da IIT Guwahati. E oggi discuteremo dell'interazione degli anticorpi con l'antigene nelle lezioni precedenti abbiamo discusso come generare gli anticorpi che abbiamo discusso sulla generazione degli anticorpi policlonali e come l'anticorpo monoclonale. Così una volta generato l'anticorpo ha generato il primo strumento immunologico per utilizzarlo per vari scopi.Così uno degli scopi di generare un anticorpo è quello di studiare l'interazione dell'anticorpo con l'antigene. Vediamo quindi come l'anticorpo e l'antigene effettivamente interagiscono tra di loro e come questo possa essere sfruttato per progettare diversi tipi di esperimenti o diversi tipi di strumenti per studiare i vari processi biologici.(Fare Slide Time: 02.02)Così come potete vedere che avete un anticorpo e poi avete un antigene questo antigene potrebbe essere composto da una o più regioni epitopiche per esempio in questo caso abbiamo le 6 regioni epitopiche come 1 2 3 4 5 e 6. E quello che si può vedere è tutta questa regione epitopica sono in realtàprodurre gli anticorpi o tutte queste regioni epitopiche sono antigeniche in natura così stanno producendo in realtà gli anticorpi e tutti questi anticorpi sono esclusivi di questa regione epitopica.Che significa che l'anticorpo e gli antigeni stanno effettivamente formando una coppia cognata dove un anticorpo è esclusivo di un particolare antigene specificamente anticorpo è specifico per quella particolare regione epitopica. Il che significa che se hai l'anticorpo per la regione epitopica 6 riconoscerà in realtà questo particolare epitopo e come globale ti permetterà anche di riconoscere anche l'antigene. Allora perché l'antigene e gli anticorpi stanno formando la coppia cognata.Perché in realtà stanno lavorando ai principi di riconoscimento esclusivi in cui si hanno i determinanti esclusivi che permettono all'antigene e agli anticorpi di interagire tra loro e che l'interazione è molto specifica ed esclusiva.(Fare Slide Time: 03.42)Ora vediamo di avere un anticorpo e poi di avere un antigene e come e perché in realtà sta avendo le interazioni esclusive o la spasticità esclusiva. Perché l'antigene è costituito da una struttura dimensionale 3. Ecco quindi che hai una struttura dimensionale 3 che è composta dall'anticorpo. E quello che si può vedere è che in realtà può permettere agli antigeni di interagire e agli antigeni che in realtà si stanno mappando con il tipo simile di strutture dimensionali a 3 si è in realtà permesso di interagire con gli anticorpi.Oltre a che gli anticorpi stanno anche fornendo i vari spazi in cui si stanno effettivamente a fornire il sito per l'interazione elettrostatica o le interazioni idrofobiche. Ad esempio in questo caso questo sito sta effettivamente avendo un residuo carico positivamente in modo che ciò che accadrà sarà in realtà permetterà all'antigene di avere un ricarico negativamente addebitato. Quindi anche la struttura dimensionale 3 di un anticorpo così come l'antigene è corrispondente. Ma i residui positivi che sono presenti in questo lato non stanno ottenendo un residuo negativo presente sull'antigene.Non è in realtà permettere a questo e particolare antigene di legare il che significa che ci potrebbero essere più antigeni che in realtà possono formarsi che simili tipo di strutture dimensionali 3. Ma fino a quando questa interazione non sarà soddisfatta l'anticorpo non riconoscerà l'antigene per formare il complesso stabile. Allo stesso modo si dispone di un sito per il bonding dell'idrogeno così l'anticorpo potrebbe essere un donatore di idrogeno che è il motivo per cui in realtà sta cercando un accettatore di idrogeno sull'antigene in modo che possa formare un bonding di idrogeno stabile.Allo stesso modo si hanno i gruppi che in realtà stanno partecipando alle interazioni da parete di meraviglia e dall'altra parte hanno anche i gruppi che sono stati effettivamente coinvolti nell'interazione impilata pipeline. Quindi tutte queste interazione così come le strutture dimensionali 3 effettivamente forniscono la specificità negli anticorpi per riconoscere l'antigene o la regione epitopica presenti nell'antigene.(Fare Slide Time: 06.12)Ora l'interazione antigene dell'antigene potrebbe essere di più tipi perché come si può vedere che l'antigene potrebbe essere di più tipi. Ad esempio l'antigene potrebbe essere un antigenico insolubile o potrebbe essere un antigene solubile quindi ciò che si intende per l'antigene insolubile è quello. Ad esempio le celle come ad esempio si hanno la RBE così RBE è un antigene che in realtà non è solubile nella soluzione che sta effettivamente per formare un particolato. Ad esempio se si tiene la RBC nell'eventuale buffer si sta effettivamente sistemando.Così è per questo che è in calo sotto la categoria degli antigeni insolubili anche le altre molecole che sono anche insolubili sono come il virus o alcuni batteri sono in calo anche sotto gli antigeni insolubili. Gli antigeni solubili sono perlopiù le sostanze proteinacee come le proteine o il DNA o l'RNA. E a volte anche i lipidi così le molecole che sono solubili nei media acquosi cadono sotto gli antigeni solubili. Quindi se l'antigene è insolubile in realtà si interagisce con gli anticorpi e parteciperà alle reazioni di agglutinazione.Le reazioni di Agglutination sono le reazioni in cui l'anticorpo interagisce con l'antigene e sta effettivamente per formare una rete o la mesh. A causa di ciò si sta effettivamente andando a gobbare tutto l'antigene contenente un antigene antiparticolato. Mentre se l'antigene è solubile in natura si interagisce con gli anticorpi. E in un processo i suoi anticorpi stanno per far precipitare l'antigene dalle vicinanze.L'esempio classico nelle reazioni di precipitazione sono l'assaggio di immunizzazione radiale così come le immunoprecipitazioni. E a parte l'interazione antigene antigene che stanno partecipando alla reazione di agglutinazione o alle reazioni di precipitazione antigene l'interazione antibody è anche responsabile dello sviluppo di diversi tipi di immunoassaggio come l'ELISA RIA o la blotting occidentale. Così nella lezione di oggi ci occupiamo di discutere la maggior parte di queste tecniche e poi ci piacerà anche andare a vedere come questa tecnica possa essere sfruttata per risolvere i problemi scientifici.Come eseguire l'emagglutinazione assaggia il materiale che hai richiesto per fare l'assaggio di emagglutinazione è necessario che i RBCs richiedano i lettori di piastre di microtitolazione o la piastra di microtitolazione che richiami il PBS. Poi si richiede la micropipetta e i consigli che si richiedono i tubi conici poi si richiede la centrifuga con un rotore del secchio e si richiede una soluzione di sbiancamento in modo da poter disinfettare il virus contenente gli articoli in modo che non ci sarà alcuna contaminazione incrociata dei virus agli altri oggetti.(Fare Slide Time: 23.57)Nel passo 1 bisogna preparare i RBCs in modo da raccogliere da 1 a 2 ml di sangue con EDTA in modo che contenga l'anticoagulante poi i RBCs freschi devono essere preparati per questo assaggio perché i RBCs freschi avranno l'altissima quantità di antigene così come i RBCs freschi non mostrano alcuna degradazione dell'antigene che viene espresso sulla loro superficie cellulare poi si fa girare il questo per 1500 rpm per 10 minutes minuti con cura.Rimuovete lo strato di buffy bianco che significa che si rimuovono i WBSs sulla parte superiore della tavolozza RBC e poi rimuovete il pellet risultante in PBS e mescolatelo con l'invertitura lo sprigionare a 1500 rpm per 10 minutes scarti il supernatante ripetere il lavaggio da 3 a 4 volte e poi si prepara una soluzione 1% RBC usando la salina tamponata da 1 x fosfato come diluente. Una volta che i vostri RBCs sono pronti allora potrete effettivamente fare le diluizioni virali.(Fare Slide Time: 25:02)Così le diluizioni virali che state per fare come diluizione seriale così ad ogni pozzetto aggiungete la microlitri di 50 microlitri di PBS e poi state andando a fare una diluizione seriale dei virus in modo da portare i virus prima di aggiungere il virus nel primo campione e poi state effettivamente andando a fare una diluizione seriale semplicemente trasferendo i virus da un pozzo all'altro bene ed è così che state andando a preparare una diluizione seriale dei campioni di virus.Quale significa che prepariate una sola piega le diluizioni scartano il 50 microlitri dall'ultimo pozzo nelle soluzioni di candeggina poi si prepara il controllo positivo e negativo il controllo positivo dovrebbe essere da un campione in cui il virus è già noto per essere presente mentre il controllo negativo sarebbe solo avere la RBC e la PBS allora aggiungete il 50 microlitri della RBC a tutti i pozzetti la quantità di lavoro sarebbero i 0,5% RBCs.Poi mescolate delicatamente e chiuderete il coperchio e poi tenete o incubateli per temperatura ambiente per 15 a 30 minutes minuti per sviluppare o per eseguire le reazioni in modo che se vi mostri la l'assaggio di emagglutinazione.(Fare Slide Time: 26:26)Infine il risultato che si sta andando a vedere è questo così quello che hai fatto è che hai appena messo i virus nelle diverse diluizioni come 1 1 è a 2 1 è a 4 1 è che ogni volta che si sta dilatando a metà e in definitiva si sta andando ad avere le diluizioni multiple come fino a 1 è a 128 poi nel controllo positivo quello che si vede è che il fino al 1 è a 32 si sta effettivamente ottenendo un modello di RBC con uno schema di nocciola così quello che si vede è in realtà un modello nuvoloso che è in realtà un rappresentante con l'indicazione dell'assaggio di emagglutinazione.considerando che si vede questo RBC questo è un pulsante RBC liscio che in realtà è l'indicazione di che l'assaggio di emagglutinazione non sta funzionando in questa particolare concentrazione una volta che la concentrazione del virus scenderà a un determinato livello allora it non sarà sufficiente agglutinare i RBCs ed è così che vedrete un pulsante RBC liscio ora avete un campione 1 e campione 2 quindi nel campione 1 quello che vedete è che è effettivamente privo di virus perché non sta mostrando un assaggio di emagglutinazione.I pulsanti RBC sono presenti dal primo pozzo mentre nel campione numero 2 avete la reazione di agglutinazione qui lo schema di nocciola qui e lo schema di nocciola qui ma in da 1 è a 8 siete in realtà iniziato a ottenere il pulsante RBC che indicano che i virus hanno il titer del 1 è al 8 nel campione 2 mentre il negativo controllo vi mostra il pulsante RBC dall'alto verso il basso così quello che vedete è che il titolo di emagglutinazione del controllo positivo è il 32 o il 2 al potere 5.considerando che il no virus è stato osservato nel campione 1 quindi ha la 0 HA e il titer HA del campione 2 è 4 o i 2 microlitri in realtà sono in 50 microlitri così questo vi sta a dire che quale campione ha la quantità maggiore di virus e si può essere in grado di quantizzare il numero di virus presenti in ogni campione e questo è un saggio molto utile per rilevare il virus in un particolare campione e come beh come si può essere in grado di quantizzare il livello di virus presenti in quella particolare soluzione.Ora torniamo alle interazioni antigene antigene finora abbiamo discusso degli antigeni insolubili e abbiamo discusso delle reazioni di agglutinazione in cui abbiamo discusso anche dell'emoagglutinazione e all'interno dell'agglutinazione abbiamo discusso della diretta così come delle reazioni di agglutinazione indiretta ora ci facciamo discutere sugli antigeni solubili così una volta che l'antigene è solubile si forma il precipitato interagendo con gli anticorpi.E all'interno delle reazioni di precipitazione si hanno i 2 assaggi come l'assaggio di diffusione immunitaria radiale così come le immunoprecipitazioni per studiare l'interazione tra l'antigene così come gli anticorpi.(Fare Slide Time: 30:00)Quindi le reazioni di precipitazione la reazione di un antigene solubile con gli anticorpi IgG o IgM per formare un grande aggregante interattivo è chiamata come le reazioni di precipitazione. Le reazioni di precipitazione sono formate dagli anticorpi sono noti come i precipitanti così il precipitare ciò che èformato dagli anticorpi sono noti come i precipitanti si manifesta in 2 stadi così l'interazione antigene dell'antigene si verifica in realtà in 2 stadi per formare il precipitato nella fase 1 è in realtà una reazione rapida.Dove appena si aggiungono gli anticorpi all'antigene ci sarà una rapida interazione entro un secondo tra l'antigene e l'anticorpo per formare il complesso antigene dell'antigene una volta che questa rapida interazione si verifica e l'antigene e l'anticorpo stanno formando un complesso stabile poi procedono verso la fase 2 dove ci sarà un lento tasso di reazione che si sta completando anche nel giro di pochi minuti o ore e formando un reticolo dai complessi antibody antibody che significa ora nella fase 2 che è in realtà una reazione lenta.Tutti questi complessi di anticorpi antigene stanno per formare un clump o il reticolo e facendo così i questi complessi saranno talmente pesanti da non essere effettivamente solubili nei media acquosi ed è così che andranno effettivamente a formare un particolato che in realtà può essere visibile ad occhio nudo. Mismatch degli anticorpi e rapporto antigene antigene così ciò che è molto importante per gli anticorpi antigene complessi o antigeni per formare il precipitato.È che si dovrebbe fornire l'adeguata quantità di antigene così come gli anticorpi perché se ci sarà una mancata corrispondenza tra l'antigene o l'anticorpo se si ha un antigene troppo basso o troppo alto gli anticorpi non si forma il precipitato ottimale e questo è tutto ciò che è importante aggiungerli in un particolare rapporto per osservare i precipitati ottimali non si formano precipitati visibili se si ha il rapporto inadeguato di antigene e anticorpo.(Fare Slide Time: 32:34)Ora il primo esperimento quello che stiamo per discutere sono i test di immunodiffusione o test di immunodiffusione sono eseguiti in un agar medio uno degli esami di immunodiffusione è chiamato come il test di Ouchterlony nei pozzi di prova di Ouchterlonia sono tagliati in modo da avere un blocco agarosio e in questo blocco agarosio ciò che si sta andando a tagliare il pozzo e questi pozzetti stanno per contenere l'antigene o gli anticorpi e poi si va ad aggiungere gli anticorpi o l'antigene in questi pozzetti.E cosa accadrà è che l'antigene si diffonde da questi pozzi in tutte le direzioni analogamente si può immaginare che anche l'antigene 2 sia diffuso anche in questo e l'anticorpo si diffonde anche nell'agar e ciò che accadrà è bene quando si diffondono in modo che al loro punto di incontro questi 2 stanno effettivamente andando a formare il precipitato così quello che vedete è che in questo caso particolare l'antigene 1 e come l'antigene 2 stanno effettivamente formando un precipitato continuo.Che significa l'antigene 1 e così come gli antigeni 2 sono in realtà identico l'uno all'altro e sono simili l'uno all'altro che è il motivo per cui stanno effettivamente mostrando il precipitato visibile e stanno effettivamente formando un precipitato continuo quando accanto agli anticorpi si formano poi una linea di precipitazione visibile tra il pozzo dove dopo la diffusione un rapporto ottimale di antigene si forma così antigene e l'anticorpo sta andando ad avere una concentrazione molto alta qui.Ma quando si diffonde la sua concentrazione si sta diffondendo similmente quando l'antigene si diffonde è molto alto accanto al pozzo ma quando si diffonde e questo è tutto ciò che sei in realtà andando a realizzare concentrazioni di anticorpi antigene ottimali per vedere il precipitato visibile.(Fare Slide Time: 34:54)Ora il prossimo è l'assaggio di immunodiffusione radiale. L'assaggio di immunodiffusione radiale è una tecnica di assaggio di immunodiffusione quantitativa utilizzata per rilevare la concentrazione di antigene misurando il diametro dell'anello precipitante formato dall'interazione dell'antigene e dell'anticorpo ad un esame ottimale in questo metodo l'anticorpo è incorporato in gel di agarosio mentre l'antigene si diffonde in uno schema radiale quindi l'anticorpo è uniformemente distribuito in tutto il gel.Così, rispetto agli assaggi di immunodiffusione in questo uno ciò che si sta facendo è semplicemente prendere un blocco agarosio e in realtà si sta aggiungendo gli anticorpi in che questo significa che il blocco agarosio avrà la concentrazione omogenea degli anticorpi così si ha un blocco agarosio che contiene in realtà gli anticorpi in una considerazione omogenea così rispetto agli immunoassaggi radiali in questo uno si sta effettivamente avendo rispetto agli assaggi di immunodiffusione.In questo uno si sta effettivamente avendo la concentrazione costante degli anticorpi in tutto il blocco agarosio e poi quello che si fa è in realtà andando a tagliare un pozzo e poi si va ad aggiungere l'antigene in quello una volta che si aggiunge l'antigene; l'antigene va adiffuso e in realtà si arriverà a realizzare ad una particolare concentrazione sarà in realtà continuare a interagire con l'anticorpo che è presente in questo blocco agarosio e poi si comincia a far precipitare il precipitato a seconda di quanto l'antigene si sta avendo in questo particolare pozzo.In realtà vi darà un anello di precipitazione proporzionale alla concentrazione dell'antigene ciò che avete aggiunto nel pozzo il diametro dell'anello precipitante è proporzionale alla concentrazione dell'antigene con una concentrazione crescente dell'antigene l'anello precipitante con il con sarà più grande diametro sono formati la dimensione dell'anello precipitato dipenderà dai seguenti 4 fattori 1 it è in realtà essere presente sulla concentrazione di antigene ciò che si sta assumendo nel campione bene.Numero 2 dipende anche dalla concentrazione di anticorpi agarosio ciò che si sta assumendo in questo particolare blocco agarosio perché se l'anticorpo sarà il fattore limitante allora l'antigene non sarà sufficiente se l'antigene anche nell'antigene è più l'anello precipitato sarà proporzionale alla fine la concentrazione dell'anticorpo allora si dipenderà anche dalle dimensioni del campione bene così perché la quantità di bene ciò che si sta andando a prendere la diffusione partirà da lì.Così anche la dimensione dell'anello precipitato sarà proporzionale a quella e poi il volume del campione è anche molto importante per vedere il diametro dell'anello precipitante.(Fare Slide Time: 38:08)Come eseguire questo saggio la curva standard può essere ottenuta da cui si può determinare la quantità di antigene in concentrazioni sconosciute per esempio si può fare davvero il campione sconosciuto di diverse concentrazioni in modo da poter fare un antigene di quantità diversa e che in realtà vi darà l'anello di precipitazione di diametro diverso. Quindi quello che si può fare è semplicemente tracciare i diametri di questi anelli sull'asse y.E in realtà si può tracciare la concentrazione dell'antigene sull'asse x e poi quello che si può fare è semplicemente utilizzare la concentrazione sconosciuta e si può essere in grado di determinare la concentrazione di quel particolare antigene se gli oltre un anello appaiono nel test ad esempio se si hanno i 2 anelli come questo allora che effettivamente implica che si abbia più di un antigene presente nella miscela di reazione.Che significa che questi antigeni stanno effettivamente avendo le reazioni differenziali con gli anticorpi che questo potrebbe essere il mixture di antigene o dell'anticorpo così questo potrebbe essere perché qualunque sia l'anticorpo che si sta aggiungendo non è puro così è in realtà avere i 2 diversi anticorpi e che fanno questi 2 diversi anticorpi hanno i diversi tipi di interazione con l'antigene e a causa di ciò si sta effettivamente ottenendo l'anello 2 l'altro anello che è per l'anticorpo 2 o in altro caso hai il singolo anticorpo.Ma hai 2 antigeni che stanno anche avendo l'interazione con l'anticorpo così l'anello più piccolo che stai ottenendo per l'antigene 1 secondo la sua concentrazione e la anello più grande che si sta ottenendo per l'antigene 2 che è anche secondo la sua particolare concentrazione questo test è comunemente usato nei laboratori clinici per la determinazione dell'etichetta immunoglobuline nei pazienti così con questi esami immunitari radiali potrete effettivamente determinare gli anticorpi.Perché in realtà vi darà l'anello di precipitante in modo da poter essere in grado di rilevare o di poter diagnosticare la presenza dell'anticorpo nel campione o la presenza dell'antigene.(Fare Slide Time: 40:33)Ora vediamo come eseguire questo assaggio e qualunque sia il materiale che si è richiesto al materiale quello che si richiede è il materiale glasswares come il cilindro di misura conico e i reagenti beaker che si richiedono agarosio poi si richiede il buffer di assaggio poi si richiede l'antigens standard poi si richiede l'antigens gel punture in vetro e l'acqua distillata e l'alcol l'attrezzatura ciò che si richiede è l'incubatore il 37 ° incubatore Celsius un microonde o il bruciatore.Così che sarà possibile preparare il blocco agarosio poi si richiede un vortice mixer spatola micropipette e tutti questi tipi di elementi minori.(Fare Slide Time: 41:18)Per le procedure prima devi preparare un gel da 1% di agarosio gel per poter effettivamente pesare la quantità di agarosio che ti serve e poi metterlo in 10 ml di questa soluzione di prova in un tubo di prova permettere alla soluzione di raffreddare fino a 55 a 60 gradi questo è un passo molto importante che si deve permettere a questa soluzione di raffreddare in modo che quando si aggiungono gli anticorpi agli anticorpi della soluzione non deve essere denaturato e aggiungere il 80 microlitri di antisiero a 6 ml di soluzioni di agarosio.Mix bene per la distribuzione uniforme degli anticorpi allora si versano le soluzioni di agarosio che contengono l'entasra su una lastra di vetro senza grassi posta sulla superficie orizzontale, permettono al gel di accontentarsi di un blocco di vetro e questo blocco di vetro non dovrebbe avere il grasso perché si ha un rivestimento lucido così se hai un rivestimento lucido questo un blocco lordo non si atterrà a quello.Quindi ciò di cui hai bisogno è un vetro che non ha il rivestimento lucido e dovrebbe essere grezzo in modo che possa reggere il blocco lordo poi si va a versare l'agarosio su questo e poi si lascia lasciar solidificare l'agarosio una volta che l'agarosio sarà solidificato poi si va a prendere a pugni i pozzetti con l'aiuto di un gel puncher che in realtà si va a fare i fori in modo da poter caricare gli antigeni in questo uso gelatini una volta che si può rimuovere questo blocco agarosio.Così ci sarà un pozzo per caricare i campioni poi è possibile aggiungere il 10 microlitri dell'antigene standard e l'antigene di prova nel pozzo e poi incubare questa lastra di vetro in una camera umida perché se si permette all'acqua di evaporare da questo l'agarosio non rimane come un foglio sottile quindi bisogna fermare l'evaporazione dell'acqua così quello che si può fare è semplicemente aggiungere un po' di tessuto che è bagnato nell'acqua in modo che venga mantenuto intatto il contenuto di umidità all'interno di questa camera.(Fare Tempo di slide: 43:39)Ora basta incubarlo per la notte e poi si va a vedere l'anello precipitante intorno all'antigene ben segnare i bordi dell'anello precipitoso e misurare il diametro così quello che vedrete è vedere ad esempio questo è il pozzo e quello che state andando a vedere è un anello precipitante intorno a questo similmente questo è l'ennesimo antigene che sta andando a vedere l'anello precipitoso poi quello che state per fare è solo delineare questo anello e poi si va a determinare il diametro di questo particolare anello di precipitazione.E quello che state per osservare è che il contro la concentrazione bisogna notare il diametro e poi si può anche notare il diametro per i campioni di prova poi quello che state per fare è tracciarli in curva.(Fare Slide Time: 44:31)E si può essere in grado di utilizzare quella curva per calcolare la concentrazione dell'antigene in un campione sconosciuto mentre si sta eseguendo questo assaggio potreste dover affrontare i diversi tipi di problemi ed è così che in realtà si può fare anche la risoluzione dei problemi. Qual è il problema che non si può vedere un modulo ad anello di precipitazione in quel caso potreste non aver fatto la minima inadeguata sensazione dei pozzetti o si può essere in grado di incubare il gel di agarosio si è asciugato mentre si stava facendo l'incubazione.Così mentre si asciugherà si altera in realtà la diffusione dell'antigene ed è così che in realtà non vi darà gli anelli precipitosi quando si sta effettivamente aggiungendo l'antisiero nell'agarosio la temperatura dell'agarosio non era da 55 a 60. Ma è stato leggermente più alto ed è così che gli anticorpi si sono inattivati se vuoi risolvere questo problema quello che devi fare è riempire la quantità adeguata delle soluzioni nel pozzo devi assicurarti che ci sia abbastanza crema idratante in camera.E poi devi anche fare in modo che l'agarosio si sia raffreddato a sufficienza così che l'antisera non venga disattivato qualche volta quello che stai per osservare è l'anello precipitante blur che significa che l'anello precipitato non sarà molto chiaro. In realtà si tratterà di nocciolo in quel caso si potrebbe il primo motivo che potrebbe essere proprio a causa dell'inattivazione del siero o potrebbe essere a causa dell'insindacabile versante del gel che significa che il tuo spessore del gel è disomogeneo.Il che significa che non si forma la superficie molto liscia e perché in realtà sta mostrando un anello precipitante sfocato si può semplicemente risolvere questo problema, facendo in modo che l'antisera non sia stato disattivato e l'agarosio sia completamente raffreddato prima di versarlo nella lastra di vetro. E poi si può anche posizionare la lastra di vetro su una superficie piana mentre versando il gel in modo che non ci sarà alcuna angosciatura dell'agarosio sulle piastre di questa lastra di vetro in modo che questo sia tutto relativo agli assaggi di immunodiffusione radiale dove abbiamo discusso ogni dettaglio dei protocolli ci facciamo passare alla slide successiva.(Fare Slide Time: 46:54)Il prossimo è l'elettroforesi il principio della immune - elettroforesi è basato sul movimento dell'antigene e anticorpi verso il polo opposto dopo l'applicazione della corrente elettrica se la reazione si verifica si vedrà una linea di precipitazione fino ad ora ci stavamo facendo semplicemente affidarci alla diffusione dell'antigene o degli anticorpi e in quel caso si va ad osservare un anello di precipitazione o precipitazione ma qualche volta l'antigene o l'anticorpo ciò che si sta gestendo sono molto grandi e sono lì che sono molto lenti.A causa di ciò non è possibile che questi antigeni siano sperimentati in un assaggio radiale o l'immunodiffusione così in quel caso è quello che si fa è semplicemente fare un gel di agarosio e in quel caso appena si sa versare l'agarosio si versa l'antigene in un pozzo e gli anticorpi in un altro bene e poi si applicare la corrente elettrica su di loro così quello che accadrà è che l'antigene e gli anticorpi si correranno in direzione opposta e poi mentre stanno correndo interagiranno tra loro ed è così che andranno a formare il precipitato.Quindi quello che farete è semplicemente andare ad aggiungere l'antigene in uno dei ben anticorpi in un altro pozzo e poi si va ad applicare il campo elettrico così una volta applicate i campi elettrici l'antigene correrà in questa direzione l'anticorpo si correrà in questa direzione e quando si incontreranno al punto centro che vedrete andare a vedere una linea di precipitazioni in modo che la linea di precipitazione vi dica che questo antigene e questo anticorpo si interagiscono tra loro.E questo è questo tipo di assaggio è utile per la diagnosi della meningite batterica e delle altre malattie così si parla di studiare l'interazione dell'antigene e dell'anticorpo finora abbiamo discusso delle reazioni di agglutinazione e nelle reazioni precipitose solo abbiamo discusso degli assaggi immunitari radiali così con questo vorrei concludere la mia lezione qui nelle successive lezioni che siamo anzi parlerà delle reazioni di immunoprecipitazione.E poi ci occuperemo degli immunoassaggi per discutere su come eseguire gli immunoassaggi e come poter essere in grado di usarli per rispondere alle domande biologiche così con questo vorrei concludere la mia lezione qui grazie.