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Salve a tutti, benvenuti a un'altra lezione per la Drug Delivery Engineering and Principles; in questa classe discuteremo un saggio sull'inalazione.
(Riferimento Slide Time: 00.37)

Così, nelle classi precedenti abbiamo discusso di come, se si sta cercando di consegnare qualcosa al polmone, si possono utilizzare direttamente terapie a base di inalazione per fornire qualsiasi effetto collaterale nelle altre parti del corpo. Non ha senso se volete che tutto il vostro farmaco vada ai polmoni a consegnarlo attraverso l'itinerario inter venoso o orale perché, in questo modo, distribuirà tutto il corpo. Così, in questa carta gli autori hanno approfondito come possono trattare alcune infezioni utilizzando alcune particelle polimeriche e batteriofagi e lo descriveremo in modo molto più dettagliato mentre andiamo avanti su questo foglio.

(Riferimento Slide Time: 01.13)

Quindi, molto rapidamente prima di tutto quello che stanno cercando di fare; così, questo è un foglio che sta guardando l'infezione da fibrosi cistica. Quindi, la fibrosi cistica prima di tutto quello che è? Si tratta di un disturbo genetico, causato da una mutazione in un gene che si chiama CFTR, ovvero un gene Cystic Fibrosis Transmembrane Receptor. E, a causa del fatto che la secrezione di ioni di cloruro non è buona e che provoca molti problemi in termini di diffusione nel contenuto d'acqua del muco. La fibrosi cistica colpisce in realtà molti organi tra cui il vostro intestino oltre che i polmoni e altri come anche le ghiandole sudorine.
Ma, il più grande manifesto di questo arriva nel polmone dove tipicamente nel polmone normale hai queste cellule epiteliali polmonari. E, queste cellule epiteliali polmonari continuano a secernare molto muco che provoca la generazione di due strati di muco. Quindi, hai uno strato di muco più viscoso e hai uno strato di muco meno viscoso. E, in generale in una normale vie respirabile del polmone questo muco continua a muoversi e quando dico il suo sostanzialmente in alto nel senso che, si muove dai polmoni verso la bocca. E, quello che succede è che diciamo che stiamo respirando eventuali agenti patogeni o qualsiasi tipo di particelle che il corpo non vuole che queste particelle si depositino in questo strato di muco.
E, dato che questo muco è costantemente in movimento che si chiama escalation di mucociliari, continueranno a sgombere questa cosa. E, alla fine un'omeostasi si mantiene dove si secerne sempre più muco, qualunque sia il muco precedente che si trova a muoversi. Quindi, tipicamente come è noto in letteratura, si tratta di circa 18 ore per l'intero muco per rigenerarsi. Così, entro 18 ore in una normale durata di vita tutto il muco che è presente verrà sostituito da un nuovo muco. Ma quello che succede nelle vie aeree di fibrosi cistica è che, a causa di questo problema nel gene qui il contenuto di acqua è molto più basso.
E, da qui si ha uno strato unico di muco.
Ora, questo muco essendo così viscoso non si muove proprio come se si muovesse, nel caso normale più è anche molto spessa. E così, che si traduci in un bel po' di accumulo anche in blocco delle vie respirabili. Quindi, ora si respira nei batteri, che possono crescere nei polmoni e rimanere davvero lì per un tempo piuttosto lungo stabilirsi e causare la malattia. Così, in generale circa 80 - 95% dei pazienti in realtà arrivano perché, di quella insufficienza respiratoria. Perché, è causato da questa batterica cronica come le infezioni che provocherà un'infiammazione con sempre più cellule immunitarie.
Continuano a continuare a distruggere il tessuto circostante e che causa più secrezione di muco e più omeostasi per disturbare il blocco delle vie aeree. Quindi, alla fine i pazienti muoiono solo perché, anche loro non riescono a respirare molto bene. Così, come ho detto allora, uno dei principali target, è questa batterica come l'infezione e tra l'infezione batterica che si vede in questa malattia ci sono molti tipi di batteri che iniziano a colonizzare il vostro polmone.
Ma, tra questi il tipo molto comune di batteri patogeni in questo caso è Pseudomonas aeruginosa. Quindi, è un batterio gram - negativo che colonizza i tuoi polmoni se hai la fibrosi cistica e simili infezioni.

(Riferimento Slide Time: 05.19)

In realtà è molto difficile trattare prima di tutto e c'è già un sistema immunitario compromesso che è presente nel circostante. Dato che questo muco è così denso, che anche le cellule immunitari stanno trovando difficile muoversi in questo muco. Poi questo Pseudomonas aeruginosa sviluppa effettivamente la resistenza agli antibiotici a qualunque antibiotico che state dando, ed è un grosso problema in questi giorni. E, visto che ha un tempo di permanenza più lungo perché il muco non si muove, può formare questi biofilm.
E, i biofilm in generale sono estremamente difficili da trattare, ne abbiamo parlato nella nostra classe di infezione. Questi biofilm saranno molto difficili da trattare dato che gli antibiotici non funzionano molto bene, si mangia quasi 1000 volte la concentrazione antibiotica che potrebbe essere estremamente tossica anche per le cellule sane ed è molto difficile da curare. E, in generale intendo; ovviamente la resistenza agli antibiotici viene evidenziata parecchio in diverse riviste e diverse riviste di pubblicazione. Si tratta di un grosso problema che sta affrontando l'umanità in questo momento.

(Riferimento Slide Time: 06.17)

Così, questo articolo ha cercato di affrontare quello e quello che hanno fatto è che, si propongono, di nuovo non sono il primo a farlo, ci sono diverse persone che lo hanno proposto. Ma, in questo caso, stanno vagliando un metodo di consegna normale per questa soluzione che è batteriofagi per il trattamento. Allora, cosa sono i batteriofagi? I batteriofagi non sono altro, ma questi sono virus che infettano specificamente i loro batteri ospiti. Questa è solo un'immagine del modello; si può vedere che c'è un batterio e poi diversi tipi di virus sono attaccati fino in cima a questo batteri.
E così, questi sono virus che vanno e nel mettere il loro materiale genetico nei batteri alla fine causando la lisi di questo particolare batteri. Questi batteriofagi sono molto specifici per i loro batteri ospiti. Quindi, non danneggiano davvero i tuoi batteri commensali, quindi sappiamo di avere un sacco di batteri nel nostro corpo che in realtà è sano e il nostro corpo lo richiede. Quindi, questi batteriofagi non lo uccidono, diversamente dai vostri antibiotici, che spazzano via quasi tutti i vostri batteri alla volta; questi batteriofagi sono specifici per l'obiettivo. E, sono anche auto replicanti e autolimitanti e cosa significa esattamente che, quando trovano l'ospite inizieranno a moltiplicarsi. Quindi, si auto replicano e quando l'ospite non è lì non si moltiplica più.
Così, si limitano e si sdoganano alla fine, sono sicuri per l'uso umano che sono stati utilizzati per decenni negli esseri umani infatti, i loro sono stati utilizzati anche prima che gli antibiotici venissero scoperti. Quindi, c'è una lunga storia d'uso negli esseri umani e così, si sono dimostrati sicuri e si sono dimostrati effettivamente efficaci contro i biofilm così come non è il caso degli antibiotici. Quindi, questa è solo immagine di pseudomonas biofilm; si tratta di un'immagine SEM: Scanning Electron Microscope image. E, dimostra che la superficie è colonizzata dal biofilm di Pseudomonas che quando trattato con i fagi viene completamente debellato. Altra cosa è, come ogni altro virus o qualsiasi altro materiale genetico possono essere ingegnerizzati.
Così, potete mettere altri enzimi in questi batteriofagi anche per aumentare la loro potenza, possono aumentare anche l'efficacia antibiotica. Quindi, si può usare con la co - consegna con gli antibiotici o si possono avere anche alcune strategie alternative; tuttavia, una sfida è la dimensione è abbastanza piccola. Quindi, sono circa da 10 a 100 nanometri di diametro e che se guardiamo alla polvere di polvere secca al paziente, che è molto più conforme. Non vanno davvero ai polmoni profondi e ne abbiamo parlato nella nostra classe di inalazione, la riperderemo brevemente.
(Riferimento Slide Time: 09.03)

Quindi, tutto il punto di questa carta è stato possibile sviluppare una terapia che utilizzi un biomateriale; così, che possano aumentare la compliance del paziente oltre che garantire una profonda consegna polmonare di questi batteriofagi.

(Riferimento Slide Time: 09.17)

Quindi, ancora se ricordate una delle cose che provoca la consegna nel polmone profondo è il diametro aerodinamico. Allora, quel d aero e abbiamo detto che il d aero deve essere compreso tra 1 e 5 micron. E, questo perché se è inferiore a 1 micron poi tipicamente, non hanno abbastanza inerzia e poi continuano ad andare in snellimento con l'aria che si respira e si smezzano anche. Se sono più grandi di 5 micron poi tendono ad avere un'inerzia molto alta e finiscono per accumularsi dove, hanno colpito per la prima volta la trachea nella bocca superiore, le vie aeree superiori. E così, la gamma ideale che volete consegnarle, da 1 a 5 micron.
Ecco, questo è ciò che il sistema era immaginato da questi autori dove si dice che useremo una particella che è in questa fascia. E, poi caricare questi batteriofagi o il farmaco qualunque cosa si stia cercando di consegnare su queste particelle e in questo modo si assicurerà che queste particelle si spingano in profondità nel polmone, nelle sacche alveolari. E, poi c'è quando il farmaco può rilasciare e ovviamente, vogliono usare gli inalatori di polvere secca perché è molto più paziente compatibile, il paziente può solo usarlo da solo.

(Riferimento Slide Time: 10.37)

Quindi, ancora quali sono i requisiti? Come ho detto dobbiamo avere da 1 a 5 micron per il polmone profondo e il d aero per la particella polimerica di cui avevamo discusso anche prima. Non è nulla, ma i suoi correlati al diametro fisico e alla radice quadrata della densità. Quindi, ora, lo sappiamo anche e ne abbiamo discusso; anche che il macrofaggio ha una ripresa molto alta nell'intervallo da 2 a 5 micron. Quindi, se consegnate qualcosa in quel range quello che accadrà è la maggior parte del vostro farmaco finirà nei macrofagi: macrofagi alveolari, che sorvegliano la zona e perderete molti vostri farmaci.
Quindi, non è questo l'esito che volete; non volete davvero consegnare questo farmaco al macrofaggio perché questo batterio non risiede nei macrofagi. Quindi, una cosa che hanno inventato è che hanno deciso di rendere queste particelle porose e più grandi. Così, in realtà hanno cambiato la dimensione fisica di queste particelle a 8 a 10 micron e diminuiscono la porosità di questo per mantenerle a 2 a 5 micron, range per quel diametro aerodinamico. Quindi, a quel range di dimensioni da 8 a 10 micron non sono troppo grandi.
Non sono più di questa gamma da 2 a 5 micron che i macrofagi possono assumere, ma sono ancora nella fascia aerodinamica giusta per poter depositare nel polmone profondo.
E, poi un altro beneficio che osservano da questo è quanto più grande è la dimensione delle particelle più facile è per esso aerosolare. Quindi, se avete una polvere e portate, diciamo se avete questa grande polvere di particelle. Quindi, il rapporto di superficie in volume è basso.

(Riferimento Slide Time: 12.23)

E così, l'aria può arrivare in modo molto facile e aerosolizzarlo e così, è quello che sono andati avanti e hanno usato il polimero chiamato PLGA; di nuovo abbiamo discusso abbastanza attraverso questo corso che è un polimero omologato FDA. E, sono stati in grado di realizzare questa particella porosa, come potete vedere i suoi molto porosi.
Quindi, la sua densità è molto bassa, è biodegradabile, è biocompatibile perché PLGA si può avere una degradazione più veloce e la densità che hanno modificato era di circa 0,3 grammo per cc. Così, dal 1 sono crollati a 0,3; questo significa, che ora questa particella è abbastanza leggera e ora se si applica quell' equazione di daero, diciamo se questo è 8 micron moltiplicato per la radice quadrata della densità.
Quindi, ora se risolvi questo troverete che questo è più compreso tra 3 e 5 micron. Ecco, questo è quello che hanno usato qui; poi quello che hanno fatto è che hanno usato i batteriofagi.
Hanno trovato dei batteriofagi, che specificamente mirati contro le pseudomonas e hanno purificato usando una procedura chiamata cromatografia liquida ad alte prestazioni. E, alla fine sono andati avanti e hanno caricato questi phage su queste particelle e quello che hanno trovato è che ottengono un carico di circa milioni di fagi per milligrammo di particella e il carico è fatto da semplice adsorbimento.

(Riferimento Slide Time: 13.49)

Quindi, i phages sono appena incubati con questa particella e li hanno lasciati interagire tra loro e adsorbi sulla superficie. E, poi, scopri che possono mettere circa 10 alla potenza 6 phage per milligrammo di particella. È importante notare in questo caso che stanno usando una miscela di 5 fagi e il motivo per cui vogliono usare miscela di phages è perché diciamo che questo è il batterio e diciamo che questo è un phage. Quindi, forse c'è un recettore sulla superficie batterica per adattarsi a dove il phage va e si lega.
Quindi, se usano un solo tipo di phage quello che accadrà sono i batteri possono potenzialmente mutare questo recettore a cui poi il phage non può legarsi. Quindi, per evitare che da accadere abbiano usato 5 fagi alla volta e così, questo è il phage 1 forse l'altro phage usa un recettore diverso. Quindi, forse c'è un altro recettore ora, che viene usato da un phage diverso. E quindi questo significa che anche se diciamo che un batterio è in grado di annullare in qualche modo uno dei fagi, sarà comunque suscettibile agli altri quattro foni.
E, questo assicura che la terapia abbia successo e poi siano state in grado di dimostrare che questi fagi caricati sulle particelle sono ancora attivi e vanno avanti e lisci i batteri.

(Riferimento Slide Time: 15.23)

Ecco, ecco cosa hanno mostrato. Così, hanno usato batteri GFP, e nel controllo; così, ha tutto questo è un prato batterico e il rosso sono le loro particelle. Quindi, ovunque le particelle si sbarcano non si vede alcuna morte batterica. Tuttavia, se caricano le loro particelle con il phage si vedono non solo i batteri verdi che si sdoganano ovunque la particella sbarca e si sta effettivamente propagando. Così, come ho detto che i phages sono auto replicanti. Quindi, stanno infettando i batteri, lo stanno lisciando, si stanno diffondendo e poi stanno anche uccidendo anche i batteri accanto a loro.
(Riferimento Slide Time: 16.15)

Poi qui hanno dimostrato che questi phage sono efficaci anche contro i biofilm. Allora, ora quello che state guardando, è un biofilm che viene macchiato dal vivo. Così, si vede che in questo caso ci sono abbastanza del biofilm che è vivo contro i morti.
Mentre, se danno le loro particelle di faggio, vedono piuttosto una bassa intensità di batteri vivi e abbastanza alta intensità dei batteri morti ed ecco l'immagine sommersa; questo per la quantificazione del vivo da morto nel tessuto.
E, nei casi in cui stanno dando il phage combinato con micro particelle, scopri che il rapporto è molto più basso in realtà significativamente inferiore. Quindi, sono efficaci anche contro i biofilm.
(Riferimento Slide Time: 17.01)

Poi sono andati avanti e hanno fatto le formulazioni in polvere secca. Quindi, quello che hanno fatto è che hanno liofilizzato la loro polvere o hanno liofilizzato le loro particelle per fare una polvere e scopri che c'è una perdita minima dell'attività. Così, vi ho detto che sono stati in grado di ottenere 10 minuti alla potenza 6 fagi al milligrammo e scopri che non c'è molta perdita e questa polvere è abbastanza stabile a temperatura ambiente. Così, qui, potete vedere che qui è il titolone e non fa davvero cadere molto su un periodo di 2 settimane a temperatura ambiente anche. Quindi, questa potrebbe essere una buona terapia per le località anche del villaggio che potrebbero non avere abbastanza accesso per lasciarci dire un deposito freddo o qualsiasi impianto di questo tipo.

E, per aiutare ulteriormente con l'aerosolizzazione, hanno utilizzato il lattosio che è un crioprotettore oltre che un buon agente aerosolizzante. Quindi, non è essenzialmente niente, ma uno zucchero e così, hanno mescolato questo insieme alla formulazione delle particelle in modo che inizi a scorrere meglio. Il PLGA stesso non scorre molto bene. Quindi, devono mescolarlo con il lattosio per farlo e nel loro risultato vedrete che trovano che questa è un'ottima consegna al polmone profondo. Ecco, ecco cosa hanno fatto; qui l'hanno fatto su un topo e poi hanno isolato vari organi.
Quindi, questo processo si chiama insufflazione dove si accede alla trachea del topo e poi attraverso una siringa, stanno puffando la polvere direttamente nella trachea; quindi, quel processo è insufflazione. Quindi, come previsto si vede e queste particelle sono etichettate fluorescentemente e poi stanno utilizzando una specie di sistema di imaging di imaging di sistema di imaging. E quello che trovano è, si ottengono specificamente la consegna nei polmoni mentre, gli altri organi non mostrano alcuna consegna fine a tutto ciò che ti aspetti se stai facendo nella simulazione. Questa è un'ulteriore quantificazione che tutto il segnale di fluorescenza viene dal polmone stesso e tutti gli altri organi non mostrano nulla.
(Riferimento Slide Time: 19.25)

Poi sono andati avanti e hanno eutanizzato alcuni di questi animali e poi hanno fatto la criosedizione e così, quello che vedete qui è il polmone criosettato. Questo blu è il DAPI che sta colorando il nucleo delle cellule dei mammiferi e rosso sono le vostre particelle e potete vedere che anche nel polmone profondo. Quindi, si sa che questo è un polmone profondo perché, si può vedere abbastanza gap di aria che suggerisce che si tratta di alveoli nell'istologia.
E, si può scoprire che queste particelle si depositano nei polmoni profondi e quindi sono buone in termini di gamma di diametro aerodinamico e questa è l'ulteriore quantificazione sugli animali vivi. Così, hanno fatto l'intero imaging dal vivo animale e quello che trovano è la maggior parte del segnale viene dal polmone mentre, in un animale sano, se si aspetta per circa 18 ore viene sdoganato.
Quindi, la sua generalmente sicura per un animale sano non rimane davvero nel polmone per molto, non blocca nulla. Viene sdoganato entro le 18 ore, che è quello che ci si aspetta come ho detto in un animale sano il muco si rigenera in circa 18 ore e poi mostrano che la porosità è in realtà essenziale. Quindi, se fanno le stesse particelle di dimensione che non sono porose e poi insufflano quelle particelle nei polmoni del topo. Quello che trovano è, prima di tutto se confrontati con un phage libero, scopri che le particelle porose sono in grado di dare un elevatissimo titolo di phage ai polmoni.
Quindi, l'esperimento è fatto che hai insufflato sia il phage libero o il phage caricato sulla particella porosa uguale quantità. E, poi si omogeneizza il polmone e il titer per quanto il phage è presente in quegli omogenati. E, scopri che quasi 4 ordini di grandezza, soprattutto perché, più alte le particelle e la stessa cosa che hanno osservato con la particella non porosa versus porosa. Quindi, la porosità è essenziale per i polmoni profondi e ciò che trovano è nella regione del polmone profondo le particelle porose vi danno circa un ordine di grandezza superiore dei fagi rispetto alla particella non porosa; di nuovo, ricordate che questo è titolante per le placche. Quindi, tutti questi phages sono in realtà dei phages attivi.
Quindi, tutto in tutto questo processo sono stati in grado di raggiungere l'attività di phage nel polmone e poi, infine, mostrano che si tratta in realtà di infezioni rispondenti. Quindi, e cosa significa, che ci faccia dire se si tratta di un polmone sano poi si scopre che se si consegnano delle particelle di phage si ottiene un certo titer dei vostri fagi nel polmone ricordate e questo è in milligrammo ora, ecco perché si vede una goccia nella scala e questo era in microgrammo, questo era in grammo. Quindi, ma in ogni caso, se si usano queste particelle di faggio, danno un certo accumulo nel polmone. Tuttavia, se avete infettato un polmone questi fagi poi replicano così, questo viene fatto 24 ore dopo.

Quindi, questi phages replicano e in realtà aumentano di nuovo il loro numero da quasi 3 a 4 ordini di grandezza; indicando che si tratta in realtà di sistema responsive e di infezione.
(Riferimento Slide Time: 23.05)

Poi sono andati avanti e hanno usato questo sistema su un modello di infezione acuta. Quindi, quello che hanno fatto è che hanno consegnato i batteri nei fagi al topo nei polmoni. E così, questi sono animali sani, in questo caso animali di tipo selvatico e hanno consegnato circa 0,5 milligrammo di particella. Ha un carico dei fagi in quello e PAO1 che è un ceppo di laboratorio di pseudomonas è stato usato e questo è un modello di 24 ore. Quindi, entrambe queste cose hanno dato e poi stanno testando quello che succede 24 ora dopo in termini di entrambi i batteri del phage.
E, quello che trovano è solo nel caso in cui abbiano il phage caricato sulle particelle.
Allora, ecco il tuo phage gratis, ecco i tuoi unici batteri, ecco la tua unica particella. Quindi, non si vede alcuna riduzione, ma solo nel caso in cui si ha particelle caricate con il phage si vede una riduzione della quantità di CFU, qualche numero di batteri presenti nel polmone omogeneo. E, poi i phage sono misurati e i batteri sono stati poi l'animale è stato poi cercato per la sopravvivenza e quello che trovano è che si ottiene una massiccia riduzione della sopravvivenza tra i due gruppi.

Quindi, se non si dà alcun trattamento la maggior parte di questi animali muore; solo forse 10 - 15% di loro sopravvivono. Ma, se si sta dando un trattamento di phage quasi in effetti, il 100 degli animali è finito per sopravvivere per tutta la durata dello studio.
(Riferimento Slide Time: 24:49)

E, poi, usano un topo CFKO che è un topo mutato e imita la fibrosi cistica. Qui anche loro sono in grado di mostrare che di fatto, a una velocità molto migliore che se si usano solo i phages c'è qualche effetto. Ma se usate i phages plus batteri quasi debellate tutti i batteri presenti nel sistema e qui, stanno anche dimostrando se i batteri si stanno diffondendo o meno. Così, hanno analizzato per il fegato dove se i batteri si diffondono sistemicamente, si accumulerà anche nel fegato. E, scopri che se danno ai batteri solo il trattamento quasi tutti gli animali hanno colonie batteriche nel fegato. Tuttavia, se utilizzano una microparticelle di faggio nessuno dei batteri si trova nel fegato.
Quindi, non solo impedisce il polmone, sta anche impedendo anche altri organi e questo è più dati di istologia. Quindi, in un animale infetto si vede se si danno solo batteri che vedono una risposta massiccia delle vostre cellule immunitari. Si può vedere dove alveoli, che ora sono completamente pieni di tutte queste cellule immunitari che potete vedere qui. Se si dà un trattamento di phage allora questo si riduce un po', ma quasi diventa come un tessuto sano; se lo si fa con la micro particella di phage. E, questo è di nuovo ulteriormente mostrando il numero di batteri presenti in queste sezioni polmonari. Così, potete vedere tutte queste bobine che vengono rappresentate come batteri e che si riducono ulteriormente man mano che il trattamento è dato.
(Riferimento Slide Time: 26:33)

Poi hanno voluto vedere se qualcosa di simile sta andando a lavorare su ceppi clinici.
Così, ho detto che gli autori hanno inizialmente usato il ceppo di laboratorio che era PAO1. Quindi, i ceppi di laboratorio sono buoni per fare la tua ottimizzazione, ma ovviamente i ceppi clinici sono molto più virulenti e molto più difficili da curare. Quindi, quello che hanno fatto è stato controllato su vari ceppi di batteri isolati dal paziente. E, quello che trovano sono le loro microparticelle di phage è in grado di uccidere la maggior parte di questi; qui ci sono un ordine, che non era in grado di uccidere. Ma, quasi tutti questi isolati clinici sono stati in grado di essere uccisi da questa formulazione micro particella.

(Riferimento Slide Time: 27:21)

E poi, hanno fatto un esperimento in vivo usando uno di questo ceppo clinico, che è PA103 e quello che trovano è di nuovo lo stesso risultato che, se danno solo dei fagi, non vedono davvero molto la riduzione. Infatti, non vi è una riduzione significativa mentre, se danno la loro micro particella di phage, vedono piuttosto una riduzione del numero di batteri presenti nei polmoni. L'altra cosa che hanno fatto è ovviamente questa funziona bene con un singolo batterio per infezione nel sistema di mouse. Ma gli esseri umani sono esposti a diversi tipi di batteri, diversi tipi di Pseudomonas, diversi ceppi di Pseudomonas alla volta.
Alla volta, il paziente può avere molti tipi di ceppi di Pseudomonas che stanno colonizzando i polmoni. Allora, come può funzionare con tutto questo? Perché usano i 5 fagi e poi hanno dimostrato che questi phage sono efficaci contro la maggior parte dei ceppi che si trovano negli esseri umani. Sono andati avanti e ci hanno provato e hanno scoperto che, anche se si hanno due ceppi diversi mescolati e poi si dà la terapia di phage anche allora può causare la riduzione del numero di batteri presenti.

(Riferimento Slide Time: 28:33)

E poi una domanda che si pone ripetutamente con il trattamento dei phage è quella che riguarda la risposta immunitaria contro il phage stesso; così, perché i fagi sono stranieri e possono suscitarle qualche risposta immunitaria. Quindi, in questo caso poi gli autori hanno voluto testare cosa succede se danno i phages prima e poi si cerca in terapia. Così, in questo particolare esperimento hanno usato per la prima volta il mouse per consegnare la microparticella di phage senza batteri. Hanno atteso circa 21 giorni che sono un tempo abbastanza buono per lasciare sviluppare la risposta immunitaria adattativa.
E, poi quello che hanno fatto, poi sono andati avanti con i loro originali con il loro normale studio dove usano gli stessi topi per poi, dare entrambi i fagi nei batteri e vedere la risposta 24 ore dopo. E così, quello che trovano è se hai pre - trattamento versus senza pre - trattamento di phage. Così, in questo caso c'era il pre - trattamento con il phage, in questo caso il pre - trattamento è solo con particelle e ovviamente, questo è stato mai esposto a fagi. Quello che trovate è che entrambi funzionano bene e non c'è differenza tra le terapie?
Quindi, se ci fosse stata la risposta immunitaria contro i fagi il corpo avrebbe cercato di cancellare i fagi e non avreste ottenuto questo sdoganamento. E così, almeno in termini di efficacia funzionale che non vedono alcuna riduzione. Inoltre hanno cercato anticorpi contro i fagi nel sangue e non hanno potuto trovare anticorpi e usare i fagi almeno per un'amministrazione. Ovviamente questo deve essere fatto a una durata molto più lunga e in una

modello cronico per poter dire con successo che questo funzionera ' o no. Ma c'è molta promessa in questa particolare terapia. Ok! Quindi, ci fermeremo qui e continueremo nella prossima classe.
Grazie.