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Module 1: Ingegneria dei tessuti

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Salve a tutti, benvenuti a un'altra lezione per la Drug Delivery Engineering and Principles. Io sono Rachit e continuo a continuare quello che abbiamo discusso. Così, per le ultime classi, ci siamo ora trasferiti in un modulo che si occupa di ingegneria tissutale. Vediamo cosa abbiamo imparato nell'ultima classe. Quindi, in sostanza abbiamo parlato di ingegneria tissutale nelle ultime due tre classi circa, perché è importante e cosa comporta realmente.
E così, sta essenzialmente usando materiale, cellule, qualsiasi concetto ingegneristica per ripristinare la funzione di un tessuto o di un tessuto rigenerato e applicazioni simili. E tra questi ci sono diverse classi di ingegneria tissutale, ne abbiamo discusso pochi nelle precedenti classi. Nell'ultima classe abbiamo parlato di rigenerare parte di un tessuto.
(Riferimento Slide Time: 01.18)

Che significa, diciamo, se qualche parte del mio polmone è in realtà danneggiata e voglio rigenerare questo tessuto. Quindi, quali sono le diverse opzioni che ho - posso generare questa parte in vitro, e poi una volta che il tessuto ha raggiunto una certa funzione in vitro, posso rimetterlo e suturarlo con il resto del tessuto per migliorare la funzione. O quello che posso fare è lasciare che il corpo se ne occupi. Così, posso solo mettere la scocca con alcune cellule. E lasciate che quelle cellule facciano la rigenerazione in quel tessuto stesso, che tipicamente è molto meglio in termini di integrazione con il tessuto.
E poi la cosa finale che posso fare è che posso solo mettere la matrice e permettere a queste cellule dell'area circostante, di migrare dentro e popolare questo con forse le cellule staminali del tessuto o alcune altre cellule che possono poi ripristinare e aumentare la funzione del polmone che si è perso.
E poi la cosa successiva di cui abbiamo parlato è stata la funzione di supporto di un tessuto. Quindi, molto simile al caso precedente, ma nel caso precedente il nostro grande obiettivo è tornare allo stato nativo.
Così, come se la persona fosse sana e così, che include sia funzioni sia come l'architettura dei tessuti, ma in termini di supportare una funzione di un tessuto non vogliamo assolutamente imitare lo stato nativo, tutto quello che cerchiamo di fare è sostenere una funzione. Così, questo potrebbe comportare una frattura nel lungo osso, permette di dire che questa è una frattura e non sono in grado di guarire immediatamente, ma la persona ha bisogno di camminare.
Quindi, quello che si può emanare è, con un intervento questo può essere unito con lasciarci dire una piastra in acciaio. E tutto quello che stiamo facendo, intendo dire che la nostra piastra in acciaio non è da mimare quello che era lo stato nativo, ma permette alla persona di muoversi. Quindi, la funzione è alquanto restaurata. E poi accadrà una guarigione movimentata e si spera che torni allo stato originale.
E poi abbiamo avuto una discussione su carta. In questa discussione di carta si parlava di come si può modificare una superficie di acciaio inox. E in questo caso stessimo guardando come gli autori hanno modificato la superficie con un polimero che è polenta oegma.
Abbiamo ovviamente discusso di poly OEGMA prima in una classe di farmaci antidroga in polimero, dove dicevamo questa è un'alternativa a PEG, che ha una risposta immunitaria minore rispetto a PEG. E quando si fa che impedisce l'adsorbimento cellulare. Quindi, una volta che si fa che prima di tutto impedisce l'adsorbimento proteico (blocca l'adsorbimento proteico) e se non c'è una proteina che si addolora sulla superficie e poi sappiamo che le cellule effettivamente mediano il loro attaccamento alla superficie attraverso queste proteine, quindi, anche l'aderenza cellulare è bloccata. E quando l'aderenza cellulare viene bloccata la maggior parte del rifiuto tissutale o del tessuto snello, la fibrosi tutto questo avviene attraverso percorsi mediati cellulari.

Quindi, se l'aderenza cellulare è bloccata, allora c'è più possibilità che il materiale impiantato non venga rifiutato. E poi quello che hanno ulteriormente fatto gli autori è poi modificato con specifici leganti peptidici. Così, in questo particolare esempio, hanno usato molecola chiamata RGD, che ha un sito di legame per integrarsi su questi recettori cellulari.
E una volta che ci si lega attraverso questo, si segnala attraverso che, si può avere la cellula eseguire una determinata funzione che è coinvolta attraverso quella segnalante. E in questo modo si può addirittura causare la riparazione per accadere ancora più velocemente di quello che avrebbe fatto il corpo nativo.
Ecco, queste sono solo alcune delle strategie che abbiamo discusso in quella carta. Quindi, per darvi ulteriore esempio di come qualcosa del genere possa essere usato, quali sono i problemi attuali, oggi discuteremo un altro articolo.

(Riferimento Slide Time: 05.55)

E quella carta è essenzialmente intitolata semplice rivestimento di frammento di tessuto che migliora l'integrazione di viti che vengono utilizzati per l'osteoporosi.

(Riferimento Slide Time: 06.08)

Allora, partiamo, prima di tutto, che cos' è l'osteoporosi? Quindi, solo un po' di concetti biologici qui. Quindi, ciò che tipicamente accade in un umano sano è che ci sono ossa e le ossa sono tipicamente sviluppate per essere abbastanza robuste. E ci sono poche ossa, che sono ossa porose. Quindi, soprattutto questo diventa importante nei casi di ossa lunghe. Quindi, diciamo se questo è un artico dell'anca. Quindi, diciamo che si tratta di una articola dell'anca e di tutte queste ossa che stanno connettendo le diverse parti del corpo, sono essenzialmente divise in due tipi di ossa - una si chiama osso corticale. Quindi, essenzialmente avrete il bavero più vicino alle articolazioni come potete vedere qui il suo abbastanza spesso, e poi una sorta di sconforto.
E così, in questo anche c'è una sorta di muro di un osso. E questo si chiama osso corticale. E poi all'interno di questo osso corticale, si ottiene questa struttura porosa che vedete qui e così, essenzialmente tutti i tipi di pori corrono da qui, questo si chiama osso trabecolare. Quindi, questo osso trabecolare è quello di supportare l'osso corticale, supporta il movimento in tutte e tre le dimensioni. Il suo non un supporto pesante come l'osso corticale è, ma ancora il suo un supporto abbastanza buono soprattutto nelle aree comuni.
Quindi, quello che accade nell'osteoporosi è essenzialmente l'osso trabecolare inizia a una sorta di sottile e come si può vedere l'osso tra i pori diminuisce con il passare del tempo. E alla fine il suo diventare così sottile che non riesce a sostenere tutto il peso. E così, ora questo sta indebolendo il dato di conseguenza anche il supporto sull'osso corticale si sta indebolendo. E come la persona invecchia e questo è legato all'invecchiamento piuttosto molto soprattutto nelle pazienti femminili. E quello che troverete è poi che saranno molto suscettibili alle fratture. E tipicamente questo accade dopo la menopausa, quindi, da qualche parte intorno all'età di 50 anni è quando questo diventa abbastanza grave.
E così, sostanzialmente un grosso problema che queste persone soffriranno di molte perdite nella loro forza ossea e soffriranno anche di fratture. Quindi, questo è un problema.
(Riferimento Slide Time: 09.14)

E così, quello che è attualmente fatto, come ho brevemente accennato prima, quindi, se hai una frattura ossea soprattutto su un osso di peso, allora tipicamente quello che è fatto è mettere delle lamiere di metallo. Quindi, diciamo se questo è uno dei miei lunghi ossei e soffre di una frattura, perché questo osso trabecolare è debole. Quindi, quello che viene tipicamente fatto è una placca di metallo. Quindi, ovviamente, a questo punto questo osso non può sopportare alcun peso dato che è disinvolto.
Quindi, quello che viene tipicamente fatto è una lastra di metallo di varie dimensioni e vari punti di forza possono essere messi dentro e tenere la piastra al posto, anche le viti sono messe in atto. Quindi, ci saranno delle viti, saranno punte nell'osso per tenere questa lastra di metallo. Ora a causa di questa piastra metallica presente, può effettivamente sostenere il peso. Quindi, questo è ciò che si fa tipicamente; tuttavia, con questa procedura ci sono poche questioni e che qui si parla.
Quindi, queste viti stanno fissando il piatto giusto, stanno fissando il piatto in posizione. Quindi, quello che si trova ora è che questa fissazione diventa allentata nel tempo.

Forse queste viti non interagiscono con l'osso molto bene, questo osso corticale che abbiamo e si libereranno nel tempo e quel tipo di cause questa vite uscirà e si traduce essenzialmente in fallimento del fissaggio. E una volta che questo accade il paziente è di nuovo in un sacco di dolore e non può camminare; quindi, questo è un problema. C'è molto dolore, si vede anche la perdita di allineamento spinale che può causare ancora più dolore.
E l'osso può anche iniziare a riscoprire ulteriormente. Quindi, intendo in questo caso tu vuoi che questo osso torni a crescere, ma ora quello che sta accadendo è per via di tutto questo movimento, tutto questo fissaggio improprio, quello che vedrete è che questa vite sta sgocciolando l'osso, l'osso si sta rimettendo in realtà dalla vite e dal piatto. Quindi, il suo un grosso problema in campo.
(Riferimento Slide Time: 11.58)

Quindi, cosa si può fare ora per migliorare il fissaggio a vite. Se siamo in grado di impedire alla vite di allentare, allora possiamo alleviare alcuni di questi problemi. Alcune delle strategie che vengono applicate sono; prima di tutto usare la rugosità superficiale. Quindi, molto del tempo queste viti, se zoompiamo a farci dire, se questa è una vite, se la guarda microscopicamente, la gente lo rende molto poroso.
Quindi, ora, se zoom a lasciarci dire questa zona, quello che vedrò è che ci sono un sacco di porzioni o forse in realtà mostrerò una vista transazionale. Quindi, se mostro una vista transazionale ci sono moltissimi piccoli crevizi e creste. E ciò che permette è che la vite possa poi legarsi all'osso molto bene, perché l'osso può effettivamente crescere in queste scanalature presenti su questa vite. E fornisce essenzialmente una superficie molto più superficie per la vite da tenere sull'osso.
Quindi, quella è una strategia che viene utilizzata, ma poi il problema è stato che anche dopo tanto della ricerca la sua non molto chiara su quello che dovrebbe essere la rugosità superficiale e la topografia che provoca una maggiore integrazione e qualunque cosa si veda di solito è un miglioramento abbastanza minore, non è un miglioramento di rilievo.
(Riferimento Slide Time: 13.47)

L'altra strategia che è stata utilizzata è quella di utilizzare poche molecole come l'idrossiapatite e il fosfato di calcio, questi sono essenzialmente qualcosa che sono nativamente presenti nell'osso, l'osso in realtà ama la superficie. E hanno dimostrato di promuovere realmente l'osseointegrazione; ottenere l'instabilità meccanica per andare via, ma poi il problema è stato che, anche con queste strategie c'è ancora instabilità che è presente. E sono un po' difficili da applicare, sono molto complessi questi rivestimenti non sono banali richiede abbastanza lavoro per codificarlo in modo uniforme. E soprattutto in una forma come una vite, dove si hanno tutti questi tipi di creste che si giocano presenti, diventa molto difficile ottenere un rivestimento uniforme anche in queste creste e tutto ciò, che ne limita l'uso.
E poi un altro rivestimento che è molto raramente usato bifosfonati; i bifosfonati sono una classe di composti che hanno mostrato un bel po' di promessa con il fissaggio osseo e che però il problema è che le procedure di rivestimento hanno di nuovo abbastanza complesso un bel po' di chimica che è necessario modificare le protesi chimicamente in questo le causa ad avere proprietà diverse magari diverse quantità di cose che si sfondono.
E ci sono stati alcuni rischi con il bisfodedio, da soli inducono alcune tipiche fratture femorali nelle donne; soprattutto questo viene usato nelle cliniche parecchio. E la sua era stata vista come alcune fratture femorali fanno un inizio di vita nelle donne. Anche se seppur in bassa percentuale, ma è un problema. Ecco, queste sono alcune delle carenze di queste strategie.
(Riferimento Slide Time: 15.33)

Quindi, allora una della strategia che, questa particolare carta viene mostrata è quella di utilizzare piastre in acciaio inossidabile e sviluppare un rivestimento sopra di esso. Parleremo del rivestimento, ma parliamo del perché di queste piastre in acciaio inossidabile. Quindi, l'acciaio inossidabile di nuovo è uno dei principali materiali utilizzati per il fissaggio osseo. E ce ne sono diverse ragioni, intendo come probabilmente si è a conoscenza, l'acciaio inox è un materiale abbastanza resistente, ha molte buone proprietà meccaniche.
È in grado di sopportare il peso in un lungo periodo di tempo. Non corrode molto.
Quindi, questo è un bene. È abbastanza economico. Quindi, gli impianti non sono molto costosi. Ci sono anche gli impianti da titanio, ma quelli tendono ad essere abbastanza costosi. E poi hanno migliorato la forza di taglio rispetto anche al titanio. Quindi, intendo dire ancora titanio è di nuovo un grande materiale da usare. Quindi, è in acciaio inossidabile, ma in questa carta si concentrano di più su acciaio inossidabile. Quindi, ne parleremo qui.

(Riferimento Slide Time: 16.24)

E così, gli autori hanno ideato un'idea per utilizzare un piccolo frammento di una proteina, che si chiama fibronectina frammento. Quindi, il fibronectina qualcuno di voi potrebbe sapere è una grande proteina ECM. Ed è un po' una proteina beata. Quindi, ci sono diversi domini in fibronectina che sono collegati tra loro e così uno del frammento su cui si stanno concentrando è il fibronectina da 7 a 10 e il motivo per cui si stanno concentrando su questo è che il frammento stesso contiene un paio di siti principali.
Uno è poi il sito RGD lo stesso peptide di cui abbiamo parlato nell'ultima classe. E poi c'è anche un sito sinergico chiamato PHSRN. E cosa fa questo sito, promuove una particolare integrina per legarsi a questo RGD. Così, RGD di nuovo è questo poco di legante legante promiscuo, può legarsi a due o tre tipi diversi, ma questo PHSRN promuove il legame di questo RGD attraverso un integrino sulla cellula che si chiama alfa 5 beta 1.
Ora questa alfa 5 beta 1 integrin è stata mostrata che, se le cellule stanno ricevendo segnali attraverso questo particolare integrin, favorisce in realtà la formazione ossea. Ecco, questo è l'intero concetto che questi autori hanno usato qui in grado di sviluppare un qualche semplice rivestimento di adsorbimento proteico su questi materiali a cui quando questi particolari frammenti si adsorprendono provocherà la segnalazione attraverso alfa 5 beta 1.
E che la segnalazione favorirà la formazione ossea piuttosto che il desorbimento osseo sul sito.
Ecco, questo è quello che hanno fatto. Quindi, prima cosa che hanno letto è da quantificare, che queste proteine possano effettivamente adsorare sulle cedole in acciaio inox e se sì, poi quantificarla. Quindi, quello che hanno visto che il profilo di assorbimento della fibronectina ha esibito una dipendenza iperbolica dalla concentrazione. Quindi, questo è di nuovo molto simile a quello che abbiamo discusso nella classe di adsorbimento proteico.
Così, poiché si sta aumentando la concentrazione della vostra proteina, si tratta di una concentrazione proteica in microgrammi per mL, la densità adsorbita è in aumento. E perché questo è in aumento e il suo stesso motivo, perché se si ha una superficie e diciamo che la proteina è a forma ci lascia dire così. Quando si addice e non c'è molto proteine intorno. Quindi, altre proteine ci vorrà tempo per diffondarsi attraverso il mezzo e la superficie. Ha il tempo di espandersi sulla superficie e occupare molto più superficie. Quindi, forse per questa data area solo due proteine sono in grado di adsorbirsi sopra, mentre, se si ha molta concentrazione di proteine nel circondario, il tempo di diffusione è minore, allora questa proteina non può espandersi tanto e forse si possono avere 4 proteine adsorbenti. Quindi, ecco perché si vede che come la vostra concentrazione della proteina nella soluzione sta aumentando la concentrazione iniziale, anche l'importo di adsorbimento sta salendo. Quindi, molto classico, come avevamo già discusso nell'adsorbimento proteico e poi circa a 30 microgrammi per mL a 40 microgrammi per mL si inizia a ottenere una concentrazione satinata. Dopo di che, la diffusione della proteina alla superficie non è più il passo limitante e a quel punto non aumenta davvero la sua sorta di plateaus. (Tempo di riferimento: 20.04)
E così, questo è ciò che si vede tipicamente. Così, allora da questo costante gli autori hanno deciso di andare avanti con la concentrazione di saturazione. Così, per gli studi futuri, hanno sempre usato 50 microgrammi per mL di concentrazione proteica a cappotto sulla superficie.

(Riferimento Slide Time: 20.27)

Poi hanno praticamente guardato come le cellule si comportavano su una superficie in acciaio inox non rivestito. Così, qui hanno seminato cellule staminali mesenchimali umane, queste sono cellule staminali che si trovano anche nelle ossa. E queste sono alcune delle cellule che sono responsabili di una nuova formazione ossea. Così, così come insieme ad osteoblasti e cose come queste differenziate alle cellule ossee.
Quindi, quello che hanno fatto è che macchiano queste cellule con calceina, ovvero un colorante che macina le cellule vive, in tutto il citoplasmo o di fatto, in tutto il corpo cellulare. E quello che vedete è se non hanno alcun rivestimento che le cellule si attaccano alla superficie, lo fanno e hanno una certa area di diffusione, ma quando hanno cappotto la superficie, si vedono le cellule davvero così e si stanno davvero diffondendo sulla superficie piuttosto un po '.
Questo è ulteriormente quantificato qui, che una superficie non rivestita la densità delle cellule è inferiore. Quindi, se si fa da seme uguale numero di cellule trovate più celle su questa superficie e non solo che la zona cellulare è anche più alta, la diffusione delle cellule è molto più elevata su queste superfici rispetto alle superfici non rivestite. Quindi, la conclusione qui è che il rivestimento in fibronectina potenzierà l'aderenza cellulare e si diffonderà su superficie in acciaio inox.

(Riferimento Slide Time: 21.55)

Poi hanno capito, se l'effettiva segnalazione che dicevano che la fibronectina da 7 a 10 sta segnalando attraverso alfa 5 beta 1 se quella segnalatrice stia effettivamente accadendo oppure no. Quindi, quello che hanno fatto è che hanno bloccato le cellule con un anticorpo alfa 5 e quello che sta accadendo ora è che l'anticorpo blocca il legame dell'alfa 5 integrin alle vostre superfici rivestite in fibronectina. E proprio per questo si vede che la densità delle cellule è diminuita.
Quindi, hanno provato il blocco anche con gli altri integrini e non mostrano davvero alcun effetto, ma solo quando hanno alfa 5 iniziano a vedere qualche diminuzione della densità cellulare. E su superfici non rivestite non lo vedono davvero. Infatti, quando bloccarono qualche altro integrino, il cui legante è presente quantità abbastanza abbondante nel siero, iniziano a vedere qualche goccia, ma non molto significato è qui. Quindi, la conclusione è che sì, queste cellule interagiscono con la superficie di rivestimento in fibronectina tramite alfa 5 beta 1 integrin, che è ciò che gli autori hanno voluto come viene dimostrato per poi favorire la formazione ossea.

(Riferimento Slide Time: 23.04)

Poi hanno esaminato se queste cellule; queste cellule staminali mesenchimali umane si differenziano realmente nelle cellule ossee e se stanno producendo marcatori per le ossa. Così, ALP è uno sui marcatori, la sua cosiddetta fosfatasi alcalina come uno degli enzimi utilizzati per la formazione delle ossa. Così, di nuovo si vedono che, se si hanno superfici non rivestite si ottiene poca quantità di attività ALP. Mentre, se si hanno superfici rivestite, si ha un'attività ALP molto più elevata e questo è ulteriormente quantificato qui.
(Riferimento Slide Time: 23.33)

Poi l'hanno effettivamente usato in un modello di ratto. Quindi, prima di tutto usano ratti sani e lo hanno dimostrato, se mettono una vite nell'osso, in quella zona trabecolare dell'osso. Poi cosa succede dopo che diciamo 1 mese, quando si prende quell' osso e si cerca di staccare la vite. Quindi, quello che stanno misurando ora è, vediamo se questo è un osso, avete messo una vite qui e ora che cosa fate è tirarlo fuori mentre tenete l'osso mentre fissano l'osso.
Quindi, questa forza che si sta facendo osservare nell'estrarre questo fuori vi darà una sorta di quanto l'adesività questa vite sia ora sull'osso. E quello che fanno bene è come aumenti significativi sia a 1 mese che a 3 mese, il che suggerisce che in realtà i rivestimenti promuovono l'aderenza ossea di queste viti.
(Riferimento Slide Time: 24:30)

E poi hanno usato un modello di ratto ovariectomizzato che è essenzialmente questi ratti femmine.
Le loro ovaie sono eliminate e poi sono autorizzate a muoversi per un paio di mesi, ciò che fa è perché le ovaie sono eliminate alcuni enzimi e alcuni degli ormoni che sono necessari per la formazione ossea soprattutto la formazione ossea trabecolare sono sparite.
E così, si può vedere una differenza, questo è sostanzialmente un micro CT. Mostrando la rete di mesh trabecolare su questi ratti e si può vedere che la quantità di osso presente nell'animale ovariectomizzato è molto più bassa, rispetto agli animali sciolti e questo è di nuovo

quantificato qui. Quindi, questo è il volume osseo nella regione trabecolare. Quindi, sostanzialmente imitando ciò che accade negli esseri umani in casi di osteoporosi (Fare Slide Time: 25:33)

E così, in questi si possono chiamare animali malati. In questi animali malati hanno fatto lo stesso test con il pullout osseo. E quello che l'osserva è abbastanza simile a quello che hanno visto negli animali sani, che conosci gli animali ovariectomizzati che vedi a 1 mese e a 3 mese. Le forze sono più alte per tirarlo fuori e lo stesso può essere visto in sham così come l'animale ovariectomizzato.
Quindi, le truffe sono essenzialmente ratti che non sono finiti in chirurgia. Quindi, sono maggiorenni e sono ospitati insieme. Così, questi tipi di animali imitano tutto tranne l'intervento. Quindi, si possono potenzialmente chiamarli sani, sono passati attraverso un intervento chirurgico, ma non hanno realmente avuto ovuli rimossi. Quindi, quello che tipicamente si vede sono quasi 57% e 32% forze di pullout superiori a 1 mese e 3 uomini rispettivamente quando si confronta con la vite non rivestita.
Quindi, quello che questo ti dice è che questi rivestimenti sono abbastanza facili da usare, perché tutto quello che devi fare è essenzialmente dip queste viti in questi rivestimenti. Non c'è problema in termini di forma complessa di rivestimento, perché il liquido penetra in ogni tipo di forma. E non solo, mostrano ulteriormente che questo effettivamente si traduce in una forza di tiratura superiore.

Così, notate come negli animali ovariectomizzati a 3 mesi contro lo sham a 3 mesi, si vede che le forze tiranti sono molto diverse. Quindi, una vite non rivestita qui, stiamo parlando di circa 65 Newton mentre, si tratta di quasi 100 - 105 Newton. Ti mostra dove l'osso è danneggiato in quello ovariectomizzato. Quindi, anche nel modello di malattia sono in grado di mostrare un aumento delle forze di tiratura rispetto agli animali di scocca.
(Riferimento Slide Time: 27:24)

E poi, infine, sacrificano questi animali hanno preso l'osso macchiato le ossa e fatto una istologia. Quindi, questa è un'immagine istologica, quindi, qui si ha una vite rivestita in fibronectina e una vite non rivestita. E quello che si può apprezzare qui è guardare quanto questa vite sia aderente all'osso. Guardate qui tutta questa colorazione rosa, che sta chiaramente dimostrando che quasi tutta la parte della vite ha l'osso sopra.
Mentre, se lo si confronta con un non rivestito si vedono queste zone in cui non c'è davvero nessun osso presente che mostra che l'osso fa come queste viti rivestite e si forma su quella superfici rispetto alla vite non rivestita. Quindi, se si misura solo questa area di contatto si scopre che il 30% di aumento dell'osso ingrossato rispetto alla vite non rivestita in fibronectina da 7 a 10 viti rivestiti. Quindi, ci fermeremo qui e continueremo ulteriormente nella prossima classe; ci vediamo allora.
Grazie.