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Module 1: Adsorbimento proteico

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Salve a tutti, benvenuti a un'altra lezione per la Drug Delivery Engineering and Principles. Parlerò di ulteriori informazioni sull'adsorbimento proteico.
(Riferimento Slide Time: 00.36)

Quindi, facciamo solo un rapido recap di quello che abbiamo imparato nell'ultima classe. Così, nell'ultima classe abbiamo parlato di proteine pre - adsorbenti su superfici, che in sostanza significa che se voglio un certo tipo di risposta da una superficie, diciamo che se volessi legare quelle cellule, allora quello che posso fare, posso aggiungere le proteine di leganti sulla superficie anche prima di metterla con le cellule, quindi ciò che accadrà è, queste proteine si adagieranno sulla superficie e inizieranno direttamente a interagire con la cellula con il loro recettore cognato.
Quindi, il vantaggio qui è che mi viene molto più il controllo sulle mie superfici perché ora stanno interagendo al modo in cui voglio che interagiranno. E poi la certa ci sono molte applicazioni di questo che si può variare per modulare questa risposta che si sta ottenendo. Poi abbiamo parlato di un modello che viene utilizzato per studiare l'adsorbimento proteico uno di quello era un modello monolayer. Allora, che cos' è? Significa che diciamo che se ho una superficie, significa solo che ci sarà un solo strato di proteine, che si adagierà sulla superficie per coprire qualunque sia l'area esposta e una volta che lo strato avrà un adsorbo non accadrà più preassorbimento.
Ecco, questa è l'assunzione in questo modello monolayer e ancora oggi discuteremo che questo non è in realtà vero, ma per il gusto di questo modello sarà un orientamento come questo non ci sarà più proteine che qui entreranno in adsorio. E poi allo stesso tempo abbiamo discusso di proteine dure e morbide. Quindi, quello che stiamo dicendo è che ci sono alcune proteine che hanno un significato abbastanza duro con un loro abbastanza rigido non cambiano la struttura molto facilmente la struttura è molto stabile e poi ci sono alcune proteine che sono molto incline alla denaturazione, la loro struttura è facilmente modificabile. Quindi, queste sono chiamate proteine morbide.
E poi abbiamo parlato di orientamento proteico e di struttura essenzialmente dicendo che se ho di nuovo una superficie esposta a bassa concentrazione di proteine. Quindi, quello che accadrà è, nella proteina che inizialmente sta diventando adsorbito avrà tempo di espandersi sulla superficie perché ha ancora questo lato aperto accanto. Così, continuerà ad espanderlo fino a quando il sito non si riempirà o la proteina raggiunge il suo stato felice in termini di equilibrio.
Quindi questo è un caso in un'ambientazione a bassa concentrazione mentre, se ho alta concentrazione allora quello che accadrà è, la proteina che viene inizialmente adsorbita non avrà spazio a sinistra a causa dell'alta concentrazione come diverse altre proteine hanno anche adsorbo e tenderà ad essere ad un importo più alto su una determinata area unitaria o il dato tipo della struttura della proteina rimarrà anche più o meno rigido o non cambierà davvero molto.
E poi abbiamo parlato di bagnabilità della superficie stessa. Quindi, quello che dicevamo è se abbiamo superficie idrofobica, cioè ha una bassa bagnabilità; poi tenderà a formare legami molto forti con le proteine, perché l'ambiente dell'acqua esterna non è in competizione con esso e i domini idrofobici tenderanno ad interagire con questa superficie idrofobica così come la superficie non vuole interagire anche con l'acqua. Quindi, c'è un processo energicamente guidato, che causa molta più interazione tra proteine e superficie idrofobica rispetto a lasciarci dire che si tratta di una superficie molto idrofila e poi le proteine lo adsorbano, ma la loro affinità alla superficie sarà molto più bassa.

(Riferimento Slide Time: 04.18)

Quindi, ora avendo fatto tutto questo, come ho brevemente accennato a questo modello monolayer è un modello che non è davvero ben accettato in questo momento perché sempre più ricerca ha dimostrato che in realtà ci sono più strati di proteine su una superficie. Così, per spiegare questo suo semplicemente un altro modello è proposto questo è un modello multistrato.
E ciò che essenzialmente significa è che c'è una struttura 3D ad una proteina questa interfaccia. Quindi, anche se ho una superficie, potrebbero esserci diversi strati di proteine che ci verranno ad allegare. E sostanzialmente quello che accadrà è il suo definito come una sorta di corona dura e morbida. Quindi, una corona dura è definita come qualcosa di abbastanza stabile su una superficie, è molto difficile strappare questa proteina dalla superficie. Quindi, qualcosa che interviene direttamente con il materiale ed è molto vicino al materiale si chiama tipicamente una corona dura e qualcosa che poi arriva e poi interagisce con questa corona dura si chiama corona morbida.
E tutto il motivo per cui la corona morbida capita e questa potrebbe essere la nanoparticella o l'impianto, non deve essere una particella potrebbe essere un dispositivo sfuso e il motivo per cui questa corona morbida inizia ad interagire la corona dura perché questa corona dura ha in realtà un cambiamento nella struttura. Quindi, questo non è raffigurato in questa immagine, ma diciamo che questa proteina circolare è ormai diventata ellittica dove il suo adsorbo. Così, ora ha esposto nuovi siti all'organismo che non sono mai stati esposti in precedenza. Quindi, ora, potrebbe esserci un'altra proteina che arriva e si attacca a questi siti esposti e ha qualche affinità con loro. Ecco, ecco perché si ottiene la corona morbida e potrebbe non essere un'interazione molto forte a quel punto, ma ci cellulari qualche interazione.
Così, come di nuovo qui è raffigurato anche qui, quindi si ha una superficie fisica, poi si ha una certa quantità di proteine che arrivano e poi c'è qualche altra proteina che arriva sopra di quelle proteine e questo essenzialmente crea una corona intera di proteine intorno a una particella.
(Riferimento Slide Time: 06.34)

E poi c'è un altro concetto chiamato adsorbimento competitivo. Quindi, di cosa si tratta, è l'equilibrio adsorbito proteico nella composizione è definito da quanto è la proteina totale prima nel sito e poi qual è la relativa concentrazione proteica. Quindi, si tratta di fenomeni molto complessi e molto mal intesi per la maggior parte dei materiali che utilizziamo e poi anche la cinetica di questo è diventata importante. Quindi, quello che essenzialmente sta dicendo è, è di nuovo se ho una superficie, prima di tutto la quantità di proteine che sta arrivando dipende dalla quantità totale di proteine che si sta adagiando.
Dipende da quanti tipi di proteine ci sono, poi dipenderà anche da quali sono le loro concentrazioni. Quindi, ovviamente, non tutte le proteine avranno la stessa concentrazione - alcuni avranno molto alti, alcuni avranno molto basso e poi anche la cinetica diventa importante. Quindi, se diciamo una proteina anche se si tratta di una concentrazione più bassa, si addolora completamente sulla superficie molto velocemente, allora quelle domineranno o comunque viceversa accadranno per altri tipi di situazioni.

Quindi, la cinetica di questi adsorbenti proteici e di nuovo la cinetica di diverse proteine sarà diversa e poi dipende anche dal tempo e dalla posizione dell'impianto e perché sto dicendo che è perché quello che accadrà nel tempo ci fa dire che l'ambiente sta cambiando, ci sono più cellule in arrivo, stanno cambiando più proteine e le concentrazioni di proteine stanno cambiando, i tipi di proteine stanno cambiando e a causa di ciò ciò che accadrà è questo equilibrio che si sta mantenendo o se l'impianto in realtà si muove o ci lascia la sua particella che è attraversando il corpo e poi naturalmente avrete effetti diversi che si svolgeranno in quel momento.
Quindi, essenzialmente dicendo che lo strato adsorbito di questa composizione è abbastanza dinamico e tipicamente come ho descritto in precedenza la corona dura è ancora abbastanza stabile, ma può essere dinamica e ciò che può accadere anche è che inizialmente le proteine adsorate possono essere sfollate da altre proteine nel tempo con altissimo affinità. Quindi, diciamo se ho un adsorbente proteico su una superficie con una certa affinità x e poi ho un'altra proteina con affinità di 4 x, anche se questa proteina è ad una concentrazione più bassa e forse ha preso tempo a diffonderlo alla superficie e x è già addolorata, ciò che accadrà è questa proteina alla fine sarà in grado di visualizzarlo lentamente e di farsi addolorare lì perché un equilibrio dice che l'affinità più alta dominerà l'affinità più bassa. Quindi, a questo particolare fenomeno in cui essenzialmente le proteine di affinità più elevate possono sostituire le proteine di affinità più basse dalla superficie è nota anche come effetto Vromani - vedrete che abbiamo usato un bel po' in letteratura. Quindi, solo qualcosa da ricordare.

(Riferimento Slide Time: 10.08)

Così, di nuovo solo per sintetizzare questo adsorbimento proteico, quindi stiamo dicendo che i materiali esteri sintetici acquisisce la bioreattività solo dopo la prima interazione con le proteine disciolte.
Quindi, intendo anche se ho un materiale che non ha siti che possono legarsi alla cellula, quello che accadrà sono le proteine ad addolorarsi, queste proteine avranno siti che possono legarsi alla cellula ed è così che possono mediare l'interazione cellulare e dà bioreattività alla superficie.
E qualsiasi tipo di interazione cellulare o interazione enzimatica che sta per accadere sarà mediata da questo strato proteico. E poi ci sono alcuni principi di adsorbimento proteico.
Ci sono un sito di adsorbimento limitato e quindi, c'è molta concorrenza che accade tra le proteine per una sorta di farsi rappresentare sulla superficie e poi ci sono forze di guida che potrebbero essere diverse - potrebbe essere l'idrofosia e tutto.
Le superfici stesse vanno a cambiare; intendo se sto usando PLGA versus PEG versus farci dire PLA versus PCL, tutti questi hanno un'idrofobicità diversa, l'idrofilicità, hanno gruppi di superficie differenti, hanno un'interazione diversa con le proteine.
Quindi, il tipo di proteine che possono assorbire su queste superfici sarà molto differente e poi ancora l'attività biologica della proteina adsorata varia su diverse superfici come abbiamo appena discusso.
Così, una volta che l'adsorbente proteico, più cambia conformazione la minore sarà la sua attività. Quindi, se una proteina che ha una struttura come questa, viene assorbita e diventa una struttura come questa, ha cambiato parecchio struttura. Quindi, la sua attività può essere gravemente danneggiata o potrebbe non essere nemmeno attiva affatto mentre, se la stessa cosa diventa così la sua abbastanza simile. Quindi, si può pensare a uno scenario in cui questo può essere ancora 70 - 80% attivo rispetto a quando era in soluzione, quindi queste cose possono anche variare.
(Riferimento Slide Time: 12.11)

Quindi, ancora questa volta si sta solo mostrando come una nanoparticella che effettivamente interagisce con la cellula, la cellula non vede in realtà la superficie della nanoparticella direttamente perché è già adsorbito proteine in superficie entro meno di millisecondi e il suo effettivamente interagisce attraverso la proteina adsorata. Quindi, diventa molto importante studiare l'adsorbimento proteico.
E poi un'altra cosa interessante è che si può coniugare una particella con vari leganti pensate che possano essere usate per interagire con la superficie cellulare, ma guardate cosa è successo una volta che l'avete messo nei media c'è un intero strato di adsorbimento proteico che è arrivato e questo particolare targeting ligand non è nemmeno accessibile alla cellula. Può essere accessibile in alcuni casi dipende dalla superficie e dal legante stesso, ma questo è qualcosa da considerare mentre si mettono questi leganti che magari non interagiscono direttamente con la cellula.

(Riferimento Slide Time: 13.08)

E parliamo di come possiamo studiare questa quantificazione di proteine sulla superficie. Quindi, una cosa è fare un PAGE SDS. E così, è abbastanza semplice quello che si fa è mettere l'impianto o la particella e incubare con lasciarci dire siero e così, ciò che accadrà è, ciò che le diverse proteine ci saranno e il siero è solo un esempio è possibile metterlo in qualche altro fluido, magari se si va a darlo ai polmoni all'innovazione, si va a metterlo nel fluido polmonare o in lavanda, se lo si dà attraverso oralmente si può magari metterlo con saliva.
Quindi, ci sono tutti i diversi tipi di fluidi biologici che possono essere utilizzati - dipende dall'applicazione. Quindi, una volta che queste proteine hanno rivestito su questo impianto, prendete questo impianto intendo di nuovo come ho detto che è una questione di millisecondi di cui stiamo parlando. Quindi, puoi lasciarli per qualche minuto e prendere l'impianto da centrifugare per rimuovere qualsiasi cosa che sia esterna e risospenderla ci faccia dire in acqua e una volta fatto, è possibile utilizzare un PAGE SDS.
Così, SDS è di nuovo un detergente molto forte. Quindi, quello che fa è questo denaturare completamente la proteina e interagisce con la proteina in una così alta affinità che si stacca da questo impianto sia la corona dura che la corona morbida. E poi si può semplicemente eseguire un gel PAGE che non è niente, ma come gel che separa la proteina in base alla sua dimensione o peso molecolare e in questo per poi si può studiare cosa sono tutte le proteine attraverso la blotting occidentale.

Quindi, spero che tutti conoscano la blotting occidentale - tutto quello che è per trasferirlo ad una membrana e poi una volta che il suo trasferito ad una membrana ci fa dire ora che questa è la membrana stessa si può arrivare con anticorpi contro le proteine conosciute. Quindi, diciamo che se sto prevedendo la fibronectina è una delle proteine che si sta coinvolgendo, entrerò con l'anticorpo in fibronectina e vivrò con questo. Quindi, se la fibronectina è una delle proteine che c'era sull'impianto, allora questo corpo vuoto va a legarsi a fibronectina e posso etichettare questo anticorpo con qualche fluorofo inizialmente, quindi che comincera ' a fluorescente o posso mettere qualche enzima e lasciare qualche colore intorno a questa banda.
Così, in questo modo posso sapere che il fibronectina presente in questo milieu o il suo non presente in questo milieu e similmente lo si può fare per diverse altre proteine. Così, di nuovo in questo modo è abbastanza semi - quantitativo, il suo non molto quantitativo. Un altro buon modo per farlo sta usando qualcosa di ben una risonanza plasmon di superficie che è di nuovo molto diffusa. Quindi, il suo altamente sensibile e dipende dalla dielettrica della superficie. Quindi, quello che puoi fare è, puoi prendere la tua superficie che vuoi testare. Quindi, questo è qui; potete poi guardarlo con qualche strato di metallo. Quindi, in questo caso diciamo se abbiamo rivestito d'oro.
Così, una volta che le proteine si adagiano, il dielettrico di questo particolare strato proteico sarà diverso dalla tua superficie iniziale e perché il suo diverso si può far brillare una luce - la sua va a sciare in modo diverso e lo si può leggere attraverso un rivelatore e questo vi darà un effetto plasmon superficiale perché il dielettrico è cambiato e attraverso il quale si può poi quantificare eseguendo alcuni standard di quantità note, si può quindi quantificare se la proteina è prima di tutto adsorbente e interagendo con la superficie.
E poi, in secondo luogo, se è allora qual è la quantità di proteine che arriva sulla superficie perché questo dielettrico sarà direttamente correlato con la quantità di proteine che è venuta e adsorbi sulla superficie. Quindi, questo è un modo in cui si può studiare l'adsorbimento proteico.

(Riferimento Slide Time: 17.23)

Quindi, quello che faremo sarà, faremo un esempio dalla letteratura - questo è solo per darvi un'idea di come sta accadendo la ricerca. Quindi, questo è un articolo che è stato pubblicato piuttosto un po' indietro ora nel 2010 e si tratta di come la nanoparticella possa indurre l'unfolding di una proteina chiamata fibrinogeno e questo intrecciarsi poi i risultati nel segnalarsi attraverso un recettore chiamato Mac- 1 recettore e che provoca infiammazioni. Quindi, ecco solo un esempio di come un materiale straniero che viene introdotto provoca infiammazioni. Così, il suo più un tavolo meccanicistico.
(Riferimento Slide Time: 17.59)

Quindi, quello che hanno fatto gli autori in questa carta è che hanno preso delle nanoparticelle d'oro. Quindi, questa è la nanoparticella d'oro, hanno rivestito questa nanoparticelle d'oro con polimeri - durante la sintesi utilizza vari polimeri e uno di essi è PAA che è Poly Acrylic Acid.
Allora, cosa hanno fatto? Hanno rivestito l'oro con l'acido acrilico lucido e poi lo hanno incubato con una proteina chiamata fibrinogeno - la sua proteina molto diffusa e si trova abbastanza abbondante anche nel nostro siero. Quindi, e quello che hanno mostrato in questa carta è bene questo adsorbimento, si attivano Mac-1 su cellule immunitarie o in realtà su altre cellule dei mammiferi.
E una volta che si attivano Mac - 1 - Mac- 1 va nel nucleo che segnalano di entrare nel nucleo e provoca la regolazione up - kB patway che è un noto regolatore per l'infiammazione e che provoca il rilascio di lotti di citochine infiammatorie e che possono causare alcune reazioni nel corpo, si può iniziare a prendere febbre - risposta molto simile a quando ci ammaliamo.
(Riferimento Slide Time: 19.41)

Quindi, andiamo un po' più in profondità, quindi quello che ha fatto è che fanno tre diverse dimensioni di particelle. Quindi, 5,10 e 20 nanometri di dimensioni -questo è il diametro e poi quello che hanno fatto è, hanno incubato questo con il siero e poi lo stesso processo che ho appena descritto con la SDS - PAGE. Quindi, questo è solo un SDS - PAGE. Quindi, quello che potete vedere qui sono diversi tipi di proteine che sono entrate e adsorb su questi e quello che vedete qui è 5 nanometro ha un bel po' di proteine e poi 20 nanometri ha meno proteine per la stessa quantità di

l'oro. E ciò che hanno osservato principalmente è stato che le catene da 65, 55 e 45 kDa di fibrinogeno erano molto abbondanti.
Quindi, essenzialmente quando ne parlo, sto guardando il 65 che è questo ragazzo, il 55 che è questo ragazzo e poi il 45 che è questo ragazzo. Allora, queste tre band erano molto prominenti ogni volta che facevano questo esperimento. Così, poi hanno scoperto che questo non è in realtà niente, ma tre diverse catene di fibrinogeno.
(Riferimento Slide Time: 20.48)

Ecco, questo è quello che stanno descrivendo qui. Così, il fibrinogeno comprende di tre catene proteiche l'alfa, la beta e la gamma e questa è la molecola di conferma - abbastanza grande 45 nanometro ed è un dimer. Quindi, ciò che si dimostrano ulteriormente è che questo capolinea C abbastanza coperto da una normale struttura proteica come potete vedere qui ha un sito di legame per un recettore chiamato Mac- 1 su una cella.
Quindi, il recettore Mac- 1 può venire a legarsi a questo sito sebbene il sito non sia tipicamente esposto. Quindi, il Mac- 1 non si lega a fibrinogeno da solo a meno che la struttura fibrinogeno non sia alquanto danneggiata o denaturata, in modo che questo sito Mac- 1 sia esposto. E poi quello che ha dimostrato è che l'aggiunta di queste nanoparticelle d'oro rivestite da PAA ha comportato la perdita della struttura secondaria proteica. Così, come potete vedere qui, quindi quello che hanno dimostrato è, questo è un dicroismo circolare il suo un suo metodo che misura le strutture secondarie nella proteina. Quindi, proteine quando si piegano hanno strutture come alfa helix e fogli beta e altri anche. Quindi, queste lamine alfa e beta hanno una certa lunghezza d'onda attraverso la quale danno segnali.
Quindi, se si tratta di una normale struttura proteica che la C in questo caso. Quindi, questa linea rossa è una proteina normale, quindi il che significa che se si sta ottenendo questa linea rossa la proteina è in questa particolare configurazione; ma come si aggiungono sempre più nanoparticelle d'oro alla vostra soluzione quello che trovate è che la struttura sta effettivamente cambiando e si può vedere questo segnale che si arriva dalla struttura secondaria in realtà diminuiscono man mano che si va avanti.
Quindi, questa dovrebbe essere la concentrazione più alta. Quindi, a questo punto si parla di 10 microgrammo per ml di fibrinogeno e lo danno a questo 40 microgrammo per ml delle vostre particelle d'oro.
E solo per dimostrare che l'oro stesso non ha alcuna struttura secondaria che eseguiranno solo l'oro. Ma così, quello che si può vedere è che c'è un bel po' di cambiamento nella struttura o nella perdita nella struttura secondaria, che sta effettivamente dimostrando il punto che una volta che questa proteina va sulle particelle, cambia struttura.
(Riferimento Slide Time: 23.24)

Poi hanno dimostrato che questo fibrinogeno ha un legame selettivo per i vostri recettori Mac- 1. Quindi, quello che hanno dimostrato è che hanno usato cellule THP-1 che sono un monociti umano; e questo THP-1 ha un recettore Mac- 1. E poi un altro hanno usato HL-60 che non ha un recettore Mac- 1.

Quindi, quello che qui vediamo è se si mette solo proteine, la quantità di proteine che si lega alla superficie cellulare è piuttosto bassa, ma una volta che si mettono proteine più nanoparticelle d'oro si ottiene un bel po' di proteine che vanno sulla cellula e il motivo è ora perché il sito del recettore Mac- 1 è ora accessibile, il recettore Mac- 1 sulla superficie cellulare ora può legarsi a

questo.
Mentre, nella linea cellulare negativa non si vede che e se si incubano con albumina anche lei non lo si vede, perché già l'albumina ha rivestito la particella. Quindi, la particella non può legarsi al fibrinogeno. Quindi, solo descrivendo quello che ho appena detto che provoca lo sfolding ed è per questo che può interagire con il recettore Mac.
(Riferimento Slide Time: 24:47)

E poi questi ragazzi sono andati avanti e dimostrano che gli esperimenti che avrebbe fatto con 20 nanometri non hanno mostrato alcuna proteina legata significativa. Quindi quello che hanno fatto è che questa è di nuovo la tua proteina legata su queste cellule THP-1 e cosa vedere se hai solo fibrinogeno la sua struttura è conservata. Quindi, questo non provoca nulla. Se hai 5 nanometri proprio come l'ultima cifra che provoca un sacco di legame della proteina. Se si usa 20 nanometri, che abbiamo mostrato in precedenza, non si lega e cambia la struttura che molto, si vede di nuovo c'è una riduzione di quella proteina che si sta adagiando.

(Riferimento Slide Time: 25:27)

E poi hanno dimostrato di poter usare qualche inibitore di questo particolare recettore di Mac- 1 e quindi, se mettete recettori che si lega al Mac - 1, allora la vostra proteina rivestita in fibrinogeno sulla particella non può legarsi a questo e così è quanto hanno mostrato qui. Quindi, la proteina legata è in realtà decrescente mentre, se si usa un altro peptide che non ha affinità, non fa nulla. Quindi, è un'ulteriore conferma che si tratta di un recettore Mac-1 che sta effettivamente interagendo con la vostra proteina.
(Riferimento Slide Time: 26:02)

E poi sono andati avanti e hanno dimostrato che il legame del fibrinogeno attiva la segnalazione NF-kB. Quindi, se prendi questo ultimo esempio quello che hanno fatto è che hanno aggiunto tutte le fibre di fibrinogeno, le nanoparticelle d'oro PAA, così come l'anticorpo che si lega al dominio NF - kB P65 e così, quello che potete vedere è per questo che si ottiene un grande turno.

Quindi, se la NF-kB ci lascia dire è stato per un esempio x kda e diciamo in un gel normale il x kD arriverà qui. Una volta che si lega all'anticorpo ora il suo peso molecolare è aumentato di x più il peso molecolare anticorpo, quindi che ora è andato e si è spostato lassù. Quindi, ulteriore conferma che in realtà questo fibrinogeno legato alla nanoparticella d'oro non solo sta attivando Mac-1, ma che stanno causando ulteriore segnalazione in realtà sta nel causare un'espressione NF-kB.
(Riferimento Slide Time: 27:09)

E poi ancora come ho detto che NF-kB è un regolatore master. Così, secreterà un sacco di citochine.
Quindi, in questo caso si sta vedendo IL-6, IL-8 e TNF alfa che sono entrambi citochine infiammatorie. Quindi, il loro livello di espressione sale quando si ha la segnalazione NF-kB e che è di nuovo una causa importante dell'infiammazione che sta accadendo. Così, di nuovo le cellule THP-1 sono state usate qui che hanno dimostrato che la secrezione di IL-8 e TNF alfa.

(Riferimento Slide Time: 27:38)

E così, la caratteristica superficiale influenza effettivamente il legame proteico? Quindi, quello che hanno fatto è, ora il cambio di superficie.
(Riferimento Slide Time: 27:45)

Così, in questo caso quello che hanno fatto è quando hanno fatto queste particelle d'oro che continuavano a diminuire la concentrazione di PAA, la PAA, come ho detto è Polyacrylic Acid, altamente negativamente carica. Quindi, quando si usa il 100 PAA si ottiene una particella carica abbastanza fortemente negativa il potenziale zeta è un modo per misurare l'addebito e man mano che diminuite questa quantità di PAA la carica aumenta perché questa carica negativa sta scendendo e così, quello che mostrano ulteriormente ora è che il vostro legame proteico sta effettivamente diminuendo alle particelle d'oro mentre si sta cambiando la carica.
Così, hanno sostituito PAA con questo PDHA e ti stanno ulteriormente mostrando quella carica è ciò che è responsabile del legame di questa proteina a queste cellule e se hai la carica inferiore, allora il tuo fibrinogeno non è vincolante per la tua particella d'oro o anche se il suo legame, non espone Mac - 1. Quindi, questo come densità di carica superficiale è critico o fibrinogeno vincolante in questo caso. Quindi, penso che sia lì che ci fermeremo e lo porteremo più in là nella prossima classe.
Grazie.