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Ieri si parlava di trasformazioni genetiche nella cellula vegetale. Ora ho detto che le cellule vegetali di trasformazione genetica in vitro è generalmente effettuata utilizzando vectors.Now, nella natura la trasformazione genetica avviene nelle cellule vegetali tramite una trasformazione dell'agrobatterio s.So, cosa succede nella trasformazione dell'agrobatterio? Ha un plasmide che si chiama plasmide plasmide o un percorso inducente plasmide. Ora, questi plasmidi hanno un certo gene che può essere integrato nel cromosoma vegetale provocando così la trasformazione in cellule vegetali. Ora questo può essere sfruttato in condizioni in vitro eliminando alcuni dei geni che non sono necessari per il trasferimento e mettendo in piedi i tuoi siti in polilinker o il tuo più cloningsite che conosci come NCS con unico sito di restrizione così, che puoi inserire il tuo desiredgene insieme al tuo sistema di marker in T-DNA.Generalmente l'agente selettivo inperché questi sono tutti vettori binari che parlavamo anche del loro sono plasmidi plasmidi e non ci sono plasmide trasmissibile. Quindi, ora, il plasmide non trasmissibile che non è coniugato; se per loro l'agevolazione viene fatto usingconjugate plasmid. Quindi, in quel caso usiamo il binario vectors.Now, a volte perché questi plasmidi Ti e Ri sono abbastanza grandi nelle dimensioni 200 kbp, Ri è più grande è 250kbp. Quindi, ora, beingmolto grandi plasmidi e bassi numeri di papavero per la moltiplicazione e l'agrobatterio il successo della trasformazione potrebbe essere meno. Così, in genere ciò che è doneis da rimuovere, la lampadina la regione di virulenza questo particolare plasmide che intrinsecamente presente è deassortita che significa gli oncogeni che sono presenti che in natureget trasmessi come parte di infezione nella cromosoma vegetale, oncogeni sono ciò che oncogeni sono la tua auxina e la sintesizzazione della citokinina che ne fanno capo a questo rapido moltiplicarsi di eventi di moltiplicazione e morfoogenesi nel trucco biochimico rispetto agli ormoni della crescita. Ora questi vengono rimossi e il tuo si chiama disarmedplasmid e il tuo gene di virulenza è in tak. Questa regione dei geni di virulenza nel disarmedplasmide viene conservata separatamente da un altro plasmide artificiale che si prepara che è di dimensioni molto piccole che si chiama vettore binario come pentiya che sentiamo in trasformazioni vegetali questi sono chiamati vettori binari perché hanno origine di replicazione per le ecolie bene come per l'agrobatterio. Quindi, che possono moltiplicarsi e ottenere l'ecoli maintaineo e anche in agrobatterio e avranno il vostro T-DNA. Ora si tratta di una deassmedinizzazione dell'intrinseco Ti plasmide, ma questo vettore avrà il T-DNA con il vostro pollinkersito e CS con il vostro sistema marcatore con il vostro promotore e il vostro 3 primo utr poler signal.Così, lì da quando questi due sono i loro lavori in trans e questa virulenza geni whichis presenti nel plasmide deassmed aiuteranno a confezionare il presente T-DNA e processare questo T-DNA che aiuta per la sua integrazione nel cromosoma vegetale e quindi l'espressiondel gene desiderato che avete inserito in questa area.Così, cosa succede nella natura? La malattia di incoronazione della corona è causata dall'infezione di agrobatterumtumefaciens e porta ad una crescita neoplastica. Utilizza i pareri prodotti dalla cellsapart ospitante dalle tue ossioni e sintetizzano i tuoi geni citokinin che sono geni opini alsopresenti in questo T-DNA che una volta integrato l'impianto iniziano a produrre questi alcuni compositi che in carbonio e azoto e questo plasmide che c'è nell'agrobatterio non tutto si sta integrando. Così, nel resto del plasmide, ci sono geni opinionanti. Ora, una volta che la pianta produce questi opinesche, hanno indotto il gene del catabolismo opino presente nell'agrobatterio Ti plasmidtale che l'agrobatterio possa utilizzarlo. Quindi, in natura l'agrobatterio è un parassita della pianta. La trasformazione è associata a un compiuta tramite trasferimento di replicante stabile di Ti plasmid DNA alla cellula vegetale. Quindi, la porzione replicante del plasmidis Ti plasmidis il tuo T-DNA. Vedremo come succede. Il meccanismo preciso è sconosciuto, ma la molecularanalisi ha dimostrato che 25 nucleotidi che sono chiamati come ripetizioni dirette; ripetono direttamente alcune coppie di base che si trovano dopo un gap ininterrottamente presente per essere presenti inpiù di una coppia. Quindi, più di un tempo sono continuati. Sequenziamento ripetuto che affiancano i confini dei siti di integrazione sinistra andretta si legge da destra a sinistra. I geni che devono essere introdotti nelle cellule vegetali devono essere inseriti tra la sinistra e quindi, il border.Così, ciò che accade nella struttura del plasmide Ti, ci sono quattro regioni; una è la regione yourtDNA questo è il principale DNA di trasferimento responsabile dell'induzione tumorale che si addice a tutti quei geni. Il secondo motivo in questo plasmide di Ti è responsabile della replicazione, la terza regione è responsabile della coniugazione. Quindi, formazione tale che il trasferimento possa decollare la regione forth responsabile della virulenza dove ci sono i geni. Quindi, è importantiper l'elaborazione e il trasferimento del T-DNA. Ora, la struttura del T-DNA è suddivisa in tre parti il trasferimento di T-DNA in cromosoma vegetale porta cambiamenti fisiologici e morfologici nel tessuto dovuto all'espressione di geni che si trovano nella regione T-DNA.Onc che è oncogenica tms uno. Ora questi sono diversi locus o positionsdei geni tms 1 e tms 2, rappresenta la spartizione che significa che rappresentano orche esprimono per produrre citocinini. Quindi, ecco perché sono chiamati come sparatite. Whatkind di cytokinin? generalmente è ipa; ipa è la vostra iso adolescenza pentile. Poi la regione tmr, il locus rooty è responsabile di una sintesi auxina in genere che tipo di auxina IAA, Indole Acetic Acid. Poi la regione di OS è la tua regione di Opine Synthesis responsive per sintesi di aminoacidi e derivati dello zucchero non sono altro, ma aminoacidi e sugarderivati collettivamente chiamati come pareri. Si tratta di composti organici a basso peso molecolare contenenti composti organici. Ci sono molti tipi diversi di opina alcuni di loro areoctopina menopina nopalina e a volte l'agrobatterio stesso. Sono classici a seconda del tipo di opina, stanno producendo, alcuni sono chiamati mono monopinetype di agrobatterio, alcuni sono ottoppi. Così, in termini di classe oper i tipi di pareri prodotti agrobatterici sono classificati anche. Ora, 25 coppie di coppie di base ripetono sequenza che si iscriva come un bordo sinistro e il confine giusto è essenziale per il trasferimento T - DNA. Ora howlo si svolge? Questi sono alcuni dei link che si possono percorrere attraverso l'aiuto per la comprensione. Quindi, questa è una semplice rappresentatività pittorica dell'intero plasmide Ti. Ora avrete dei geni oncogenici, avrete dei geni cytokininproducenti, avrete dei geni sintesizzanti dell'opina, poi questo intero è chiamato oncogenicregion. Poi avrai la regione d r; r regionis includerà la tua frontiera sinistra il confine giusto e tutti questi geni poi conjugativetransfer te l'ho detto. Quindi, questo è il motivo che è responsabile del trasferimento coniugativo, poi sono presenti anche i geni del catabolismo opino, è presente l'origine della replicazione, l'allegoregione è presente. Quindi, il T-DNA non contiene all'esterno gli altri geni né i catabolismgeni né di origine della replicazione. Il gene della virulenza che sono io quando diciamo deassmedplasmide che significa la regione T-DNA è stato fatto fuori sostitued.Ora, la regione di virulenza è lunga generalmente 35 kbp, è organizzata in 6 operons virulenceA, B, C, D, E e G e ognuna di queste regioni svolgono un ruolo diverso durante questo transferiter. Non è solo il trasferimento che avviene dal momento in cui ci sono i segnali che ci sono i segnali come la vostra difesa o alcune molecole che come i composti di poli fenoli che vengono liberati dalle piante ferite, agiscono da sole che inducono alcune regioni di tesevirulenza nell'agrobatterio. E queste diverse proteine saranno responsabili per la prima induzione delle successive altre regioni di questo gene di virulenza che alcune proteine saranno utilizzate in imballaggi, alcune proteine saranno utilizzate in creatinga alcune proteine sono utilizzate per proteggere il T-DNA mentre entra nelle cellule vegetali alcune proteine sono responsabili della coniugazione. Quindi, la virulenza a è una proteina innermembrana specifica del prodotto che riconosce ed è rispondente alla componentistica fenolica vegetale. Questo è ciò che è responsabile di riconoscere i composti fenolici vegetali. Quindi, agisce come arecettore. Virulenza G come agisce come attivatore di trascrizione di altri loci della regione di virulenza. Il prodotto di Vir C e D è coinvolto in generazione e lavorazione di T-DNA che mescola un nig e poi replicano e poi la confezionano che significa i cinque primeed è scambiato. Virulenza B e R sono coinvolti a seguire formando componenti strutturali che facilitano il movimento del T-DNA. La virulenza H permette ai batteri di sopravvivere nella presencedei composti battericida da pianta durante l'infezione .Quindi, come avviene? L'evento precoce è il nicking del plasmide Ti tra theterzo e le basi del filone di fondo della base 25 per ripetere la virulenza Doperon encodifica e endonucleasing che produce nick nella sequenza di confine. Poi la sigla di sintesi del DNA inizia nelle 5 prime a 3 prime end.Now, è accompagnata da sintesi e secrezione di alcune altre molecole come il glucosio, le proteine di superficie di cellulosa che hanno caratteristiche patogene. Il filo T ora che si è replicato. Ora è un unico punto. Ora è come entrare nel cromosoma vegetale e poi la membrana nucleare attraverso la membrana nucleare nella cromosoma vegetale. Ora, il filone T al fine di transondare attraverso la membrana cellulare della cellula di membrana batterica e poi la membrana nucleare durante questo intero processo. Deve evitarne la degradazione con nucleasi il T-DNA esiste come la proteina del DNA compless.Pertanto, ho talkedabout cappione che la protegge e mediana i suoi viaggi il T-DNA viene convertito al doppio filone del DNA prima di. Quindi, questo doppio filamento di DNA sta accadendo prima di integrarsi nel cromosoma vegetale. Posizionando i geni stranieri in cellule T - DNA del plasmide Ti plasmide è possibile clonare molti make copie significa fare copie. I geni introdotti con la moltiplicazione del plasmide residente all'interno del batterio con la crescita batterica. Ecco, questo è quello che parlavamo di tisis come avviene i vari eventi che si stanno parlando dei vari diversi tipi di. Così, si può leggere che e si può correlare con la figure.Quindi, hanno dimostrato le varie proteine di virulenza mezzi che sono responsabili di una isatta come recettore, poi induce altre regioni dell'induzione a induzione genica di virulenza comporta la produzione di dove D dove E dove E è coinvolta. Onceit entra nel cromosoma vegetale per proteggerlo dai nucleasi, poi dove B è coinvolta nelle coniugazioni. Così, è possibile correlare e ricordare come gli eventi assumono place.Quindi,. Ora i plasmidi Ti non possono essere utilizzati direttamente a causa di come stavo dicendo, generalmente abbiamo dei vettori binari e questi vettori sono inseriti in agrobatteristi che sono disarmed.Now, disarmati ti ho detto che il plasmide T DNA è stato sostituito e viene conservato solo virulencegene. La ragione è che sono grandi in assenza di site.it di restrizione unica, è difficile inserire il tuo gene di interesse. Poi l'induzione dei tumori, perché si pensa che l'induzione dei tumori debba essere evitata? Se non si disarma ci saranno gli oncogeni presenti. Quindi, l'evento morfogenico starebbe causando tumori o causando radici addolorate che non era lo scopo se questo dovesse accadere cosa accadrà? Dipende dall'obiettivo dello studio. Si sta cercando di fare una trasformazione mirata nella cellula vegetale. Quindi, più il numero di trasformazione genetica; più il burden.Quindi, qualsiasi integrazione lì sta portando alla rimozione di alcuni geni endogeni e la sostituzione, c'è un'alta possibilità. Quindi, più la rimozione più c'è la possibilità che alcuni crociati sappiate se eventuali geni endogeni cruciali si silenziano o vengono sostituiti e questo è adiseasi. Solo se desiderato, ti piacerebbe avere altrimenti perché ti piacerebbe avere una crescita inutile sulla tua crescita di plastica nella pianta. A seconda di se lavorate per intere piante allora; ovviamente, non si vuole avere una nuova crescita di plastica intutta la pianta. Ma se lo scopo della produzione metabolica secondaria usando le colture di piante di piante? Se supponiamo che sia per la produzione metabolica secondaria utilizzando colture cellulari vegetali, è utile o no?Sì sì utile. Perché?Becausela cresce. Cresceranno molto in fretta, non avranno bisogno di ormoni nel mezzo in generale questo è ciò che si osserva. Se i geni oncogenici; questo è ultra sfruttati per la produzione metabolica secondaria perché se prendete un argobatterio selvatico con il loro wild Ti plasmid naturale Ti o Ri plasmide che chiamiamo erry roots.So, loro cosa sta accadendo? Non abbiamo alcuna mca specifica per gene specifico che ha inserito questa è un'infezione naturale che sfruttiamo in laboratorio. Quindi, porterebbe a cosa?Integrazione dell'intrinseco incidente T-DNA T-DNA in modo da portare all'espressione di oncogeni. Questo è ciò che porta alla crescita ormonale libera nelle culture di trasformazione. E una volta che hai una crescita ormonea più veloce la crescita più branca e perché è lo stress associated.Quindi, la possibilità è più alta che la resa metabolica secondaria aumenti, allora l'untrasformedis è utile o no? E sono vantaggi, ma poi ancora c'è una selezione bisognosa di una selezione di trasformazione della linea cellulare perché? Si capisce quello che sto provando a chiedere, infetto l'agrobatterio e avrò più di una linee cellulari dico che c'è una selezione necessaria. Anche in se si tratta di una trasformazione mirata e usata in meno c'è una selectionnecessaria nelle trasformazioni dell'agrobatterio. La selezione di perché finirete vi finirà la sindaca in molte linee cellulari diverse non è come si finisce in intrasformazione callus induction.Quindi, perché ora la selezione è necessaria? Abbiamo ricevuto una volta che ho confermato che questa linea di particolarcella si trasforma generalmente usando pcr, parleremo di quei metodi una volta che avrò affermarsi perché non posso rimanere fedele a quella linea. Potrebbe non essere rigenerata in tutte le generazioni i plasmidi. In quanto si tratta di un evento di trasformazione stabile perché si ottiene, non è espressionit transitoria come è stato integrato nel cromosoma vegetale. Darò un suggerimento che parlavamo di stress: è stato scoperto in letteratura che le infezioni dell'agrobatterio sono stress per le cellule vegetali. Quindi, dove si comprometterà? Alcune cellule potrebbero essere resistenti a quel stressante potrebbe non essere effettuata da quel stress. Dipende da; agiscono come elementari traspiranti, sometimesche il numero di copia e la posizione non è in mano. Quindi, se la numerazione della copia non è in mano e la posizione non è nella tua mano, le linee cellulari che arrivano outilizzeranno in crescita così come la resa ed essendo uno stress, ci sarà un compromesso e growth.Quindi, c'è bisogno di un altro passo di selezione anche dopo la trasformazione per raggiungere il più alto rendimento e con una crescita migliore o con una crescita migliore rispetto ad others.So, tra ciò che è stato trasformato, generalmente si seleziona in base al tuo metaboliteyield secondario e all'indice di crescita. Quindi, allora le cellule tumorali non possono svilupparsi in normali germogli. Il disarmingof Ti plasmid o la rimozione della proprietà di induzione del tumore è un passo essenziale. Generallyit si osserva che una volta che si fa infezione da agrobattertirio anche se si è finita nelle cantine la loro capacità di rigenerazione è ostacola a causa dello stress in tutto il plant.Così, quando si lavora per le piante transgeniche tutte le regioni tumorali o le oncoregioni devono essere decollate. Questo è fatto mediante sostituzione di geni induttori di tumori intransfer T - DNA da marker selezionabili che forniscono resistenza contro gli antibiotici come la kanamicina. Ora tornando alla mia domanda, ho detto che si consiglia che il gene desiderato debba essere inserito nei pressi del traguoso 5. Che si tratti di cinque prime finali è scacciato in protted.Quindi, il nostro DNA inserito è più sicuro lì. E i tuoi sistemi marcatori il tuo gene di antibioticresistenza alla resistenza è dall'altra parte. Quindi, che se è nicchiata una volta che la trasformazione è fatta, non vi piacerebbe avere il gene della resistenza agli antibiotici nella pianta perché qualsiasi inserzione extragena è un peso metabolico. I promotori e i segnali di poliadenilazione hanno isolato i geni della sintasi fromnopalina. Così, perché in natura già questi pareri si stanno ottenendo espressed.Così, le persone hanno utilizzato lo stesso promoter di espressione come il promoter CaMV 35S; CaMV 35Spromoter è stato usato poi qui la sintesi nopalina 3 prime utr è usata perché è stata profondamente espressa nelle piste. Quindi, quali sono i vettori binari questi sono basedati sul principio che i geni di virulenza possono essere collocati su un helper Ti plasmid avendo tutto il T - DNA dislocato. Così, questo disamed Ti plasmid viene chiamato come il plasmide Ti plasmide. In questo caso il T-DNA si trova su un vettore separato che è il progetto vettoriale binario per replicare sia E. coli che agrobatterio. Quindi, ha l'origine della replicazione sia dell'E. coliand l'agrobatterio e capace di. Ora perché secondo lei c'è bisogno di E. coliorigine della replicazione, perché inutilmente avere questo passo di E. coli tra?Per rinfrescarsi per trasferirlo in modo da poterlo far crescere in batterio perché si sta moltiplicando. Hm.Perché questa è la figura coniugata plasmide. Quindi, i numeri di copia non possono moltiplicarsi qui di seguito, è necessario avere più copie e poi trasformare quelli in agrobatterio e poi questo agrobatterio viene usato trasformarsi; l'agrobatterio viene utilizzato per trasformare le cellule plantari. Mi fermerò qui. Lì l'altro tipo di vettori presenti anche chiamati come vettori intermedi e helper, ma generalmente troverete in letteratura il tasso di successo è molto alto con vettore binario. Quindi, la maggior parte di queste trasformazioni avviene utilizzando vettori binari.