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. Dunque, gli svantaggi dell'estrazione di piante naturali, comprende la bassa concentrazione del prodotto nell'impianto. Può esserci a causa della domanda, la differenza di offerta può essere limitata, può essere un impianto in via di estinzione becausedi estenuanti da parte dell'industria. Poi può essere un impianto endemico non in grado di coltivare altrove solo su una determinata regione, quindi ci può essere offerta limitata per questi motivi. Ora, le specie in via di estinzione che ho detto possono essere una limitazioneche può portare in definitiva all'estensione dell'impianto. Poi la pianta naturale becauseit è stagionale il composto è la variazione temporale e spaziale c'è, quindi, perché l'ifit è stagionale allora c'è tempo a lungo richiesto forse si arriva solo quando la plantina matura, così non uniforme e incongruente qualità e quantità .Quindi, quali sono i metodi di produzione alternativi per tali fitochimici di alto valore come ho detto avevamo visto quanto sono complesse le strutture e i percorsi biosintetici. Quindi, questi con valori molto alti e a basso volume metaboliti molto complessi sono centri troppo maniacali, quindi si è osservato che la sintesi chimica è molto difficile. E anche se si tratta di persone sono in grado di farlo, diventa un processo multi step. Quindi, metodi basati sulla biotecnologia cosa possono essere i metodi di base biotech? Uno è il processo bio basato su cellule vegetali, whatelse? .Che non è menzionato qui. Ingegneria proteica. L'ingegneria proteica. .Dove significa espressione eterologa di cui si sta parlando, così in qualche altro sistema host systemeukaryote. Ma, alcuni metaboliti secondari stanno provando il sistema più frequentato è il lievito dove le persone che sono un organismo eucariotico cercano di esprimere. Ma la sfida è che alcuni di questi metaboliti di alto valore o di patologia biosintetica non sfuggono. Così, ora come ottenere quei passi intermedi, l'ingegneria proteica che è necessaria è necessario sapere quali sono le proteine coinvolte. Poi l'altra è che si tratta di uno spettro così ampio e grande come per esempio, 40 o 50 stese sono coinvolti e se si tratta di un sistema eterologo dove i percorsi non sono presenti. Quindi, tutti i thosestati devono essere inclusi, quindi è molto impegnativo che può causare i rendimenti molto meno che possono rendere il processo non economico e impegnativo .Così, il processo più fattibile che ci viene proposto è che vorremmo proporvi è un processo bio basato su cellule dove la macchina è presente. Ma devi lavorare intorno a tediversi altri colli di bottiglia che sono i bassi rendimenti e la scala in alto del loro processo. Quindi, il vantaggio di produrre questi metaboliti ad alto valore che sono a basso volume in natura usando la tecnologia delle cellule vegetali può essere. Ci può essere il controllo dell'offerta perché? Perché il prodotto è indipendente dalla disponibilità della pianta stessa e sono lontani da restrizioni climatiche, geografiche e governative. Poi alta crescita e produttività, così alta crescita e produttività come confronta con la pianta naturale come, alta crescita e produttività rispetto alle piante tonaturali. Produttività perché possiamo cultura loro inmeno quantità di tempo. Right.It può ottimizzare la produzione in base al nostro needs.Quindi, tasso di crescita perché questi sono amabili alle ottimizzazioni. Quindi, è possibile terminare thetime è il grande fattore che si può eseguire batch in batch alcuni sono mesi o anni in cui si dovrà aspettare qui puoi eseguire un reattore e il raccolto. Quindi, la riduzione del tempo e dello spazioè logico; requisito per la produzione del vostro compounds.Now desiderato, il miglioramento del ceppo è anche la linea cellulare stessa è amabile all'ottimizzazione. Così, è possibile manipolare i rendimenti cellulari per migliorare la y p by x che è il prodotto yieldper unità a biomassa. Quindi, c'è facilità di estrazione e purificazione perché?Perché non stiamo ottenendo una miscela di prodotti che stiamo ottenendo. Perché si sta facendo l'ottimizzazione dei processi, quindi, si ottimizzeranno le condizioni in modo da aumentare la produttività dei composti desiderati. Quindi, quello che succede che la relativeabbondanza del tuo composto desiderato diventa più dell'altra piccola molecola o delle altre impurità, quindi lì dall'elaborazione a valle può diventare più facile .Quindi, cosa serve per la coltivazione delle cellule vegetali abbiamo ora studiato tutto questo, serve un adeguato mezzo di crescita; cosa fa il mezzo di crescita adatto; avrete sali maggiori, sali minori, fonti energetiche, regolatori di crescita in esso che completeranno la crescita delle cellule vegetali e questo può essere quale forma? Liquido, o semi solidi .Quindi, sono necessarie condizioni asettiche, in modo da prevenire la contaminazione appositamente da microbi. Ora, condizioni di cultura ottimali, quindi ci saranno condizioni di cultura esterna nel frattempo condizioni ambientali e altri parametri fisici e chimici .Così, questo è uno schematico come cominciamo? Sappiamo che iniziamo dalle parti vegetali poi lo portiamo sotto forma di forma de differenziata che è callus. Da quel callo è possibile selezionare le linee cellulari, portarla in sospensione fare le ottimizzazioni dove vengono implementate le strategie di potenziamento delle rese. Quindi, come migliorare la y p by x che tipo di strategie arrivano in questo? Il tuo miglioramento, l'ottimizzazione dei tuoi media, l'alimentazione precursore, l'elicitazione e l'ingegneria genetica che possono essere di ingegneria metabolica. Poi vieni sul palco del bioreattore una volta che una sospensione è stata ottimizzata in fase di bioreattore quello che si canta. Si ottimizzano nuovamente i parametri di operatinghe bioreattori che abbiamo anche chiamato come parametri di fermentazione. Poi si può ottimizzare la modalità operazionale, modalità di coltivazione che significa alimentare strategie per eliminare cosa, perché dobbiamo avere strategie di alimentazione, qual è l'obiettivo, perché qui si parla di aboutmodi di coltivazione qui ogni volta nei reattori, perché o i reattori non possono essere piste? .Per eliminare la limitazione dei nutrienti e l'innovazione dei nutrienti se c'è, quindi perché per migliorare la produttività il tuo rendimento di rendimento ti piacerebbe aumentare il biomassore il prodotto. E perché in un lotto si sta limitando? A causa dell'imitazione dei nutrienti, quindi l'alimentazione dei nutrienti è fatta per superare questa limitazione dei nutrienti. E ora con la logica che se la limitazione dei nutrienti può mollare in tutto il substrato, in modo che non sia mai limitata, quindi un'innovazione può avere un ruolo. Ecco, arriva il roledi come si nutre, quando si nutre. Quindi, poi dopo aver coltivato la biomassa che si comperda alla lavorazione a valle, lavorazione a valle significa separazione, purificazione del prodotto. Quindi, quali sono gli approcci di cui ci occupiamo di discutere, che possono portare a un miglioramento della resa e della produttività del secondarymetabolita, ottimizzazione della composizione mediatica, ottimizzazione dei fattori ambientali, aggiunta di precursori, permeabilizzazione delle cellule, aggiunta di elicitrici, immobilizzazione di cellule vegetali e coltivazione ad alta densità nei reattori. E in alcuni di questi è al fine di reducire il colpo e il processo e minimizzare il numero di esperimenti che vorreste condurre per raggiungere l'optima vedremo come la modellazione matematica sia usata con gli studi di caso .Now, ieri se ricordate di aver parlato di questo per sviluppare l'avvio del bioprocessuppo vorreste iniziare con l'.Highest. Linea cellulare più alta, quindi logicamente si vorrebbe prendere in piedi prima la varietà vegetale che è più alta, come è la sceneggiatura e la selezione è uguale o è diversa. Essere microbico, essere animale, essere la fomentazione della cellula, queste tecniche rimangono la stessa di ottimizzazione, quando diciamo screeningand selection. Screening.Lei era vicina, lo screening è una tecnica passiva, la selezione è una tecnica attiva. Screeningè quello che ha detto per la selezione in cui si scherma la linea cellulare in base a come si farebbe a supporre, ad esempio. .Hm. Come migliorare per schermo culture.Ok, quindi si ingegnerà prima le celle. Per il bianco blu. Per il bianco blu .. Mam, c'è certo che c'è qualche batterio che canutina l'organo sanguigno alcuni che non possono. Così, in questo processo di screening whenwe sottoposto a questo stesso supporto, possiamo capire quali sono le cellule che utilizzano il mediae che sono quelle che non possono, quindi, cioè il processo di screening .No, così estrapolato ai metaboliti secondari da cellule vegetali .. Dobbiamo selezionare la callustina più alta. Quindi, una volta. O la linea cellulare callus è un mix di un certo numero di cellule non è così. Ecco perché diciamo che la callus porterebbe a differenza con le successive sub culture potreste scoprire che il keepson di rendimento varia. Giusta la cultura e vedere i batteri si sta ottenendo. Batteri dove arrivano i batteri?Come dire se la pianta sta producendo una particolare metaita che si difenderanno contro il batterio che sarà una specie di organismo di prova per scoprire la produzione sta effettivamente accadendo o meno in batteri da trovare. Sulla carta questo si può fare, pensare in termsof ti viene dato e devi sviluppare un bioprocesso. Quindi, pensate semplici che possono costarvi di meno, che possono essere facilmente implementate e poi dovete prendere la lines.Quindi, una volta che iniziate a coltivare batteri insieme alle cellule vegetali delle cellule vegetali non sopravviverete. Mam, prendendo il nostro punto possiamo solo introdurre una quantità di condizioni di stress in cui si offre un metabolita secondario. E il soggetto sottoposto a tutte quelle linee di callus e vediamo quali di essi produce la quantità di metaboliti secondari. Questo è corretto, ma l'unico assegno di qui in poi che si sta ottenendo ha optato per un materiale noto per produrre quel composto si ha una serie di linee cellulari. Quindi, uno è controllare la resa del prodotto e selezionare la linea cellulare più alta e l'altra se supporre che sia qualche secondo se si tratta di metabolita secondaria a base di pigmento. Quindi, allora si può prendere quel pezzo di callusche che dimostra quel colore se si tratta di un pigmento di pigmento colorato o di qualsiasi pigmento di colouredother. Poi si sa da quella miscela di cellule che le cellule produrranno quella callus o come lei ha detto che se ora sta arrivando alla selezione che si cimenterà per prendere solo le linee cellulari desiderate le altre non si care.Così, lasciateli morire solo quelli che volete selezionare dovrebbero sopravvivere, sarà utile quando si seleziona una linea di celle vegetali per quello che per darmi qualche esempio per quale scopo. Se sto cercando di trovare una linea cellulare altamente resistente, supponiamo che io stia cercando stress da salinità come si sta dicendo, quindi solo quelli che possono resistere sopravviveranno agli altri non sopravviverebbero. Quindi, quale successivo sub di coltura e acclimatizzation.inoltre finirà per avere una linea cellulare resistente allo stress e quindi, è possibile prelevare la linea di celle a velocità desiderata nella linea cellulare. Quindi, ora i cultori delle cellule vegetali sappiamo che sono geneticamente eterogenei cosa, che cambiano in cromosomica. Così, è stato quello che quando dico cambiamento in numero cromosomico, disposizione, che tipo di variatore sto parlando. Variazione clonale .Soma, quindi instabilità epigenetica, instabilità epigenetica significa cambiamento nell'espressione tegene o fenotipo cellulare causato da meccanismo diverso da cambiamenti nella loro DNAsequenza. Quindi, che causa l'instabilità genetica che porta all'accumulo di prodotto solo in una parte di cellule che è il problema che il calco eterogeneo avrebbe. Ora, la produttività in una popolazione così mista di cellule rischia di essere instabile, quindi generalmente la whenwe induce da un espiante una callus che non viene chiamata come linea di cellule vegetali. Perché dalla ferita che si crea e la cellula si avvia intorno a quella ferita la cantina inizierà rapidamente a dividersi e formando una massa de differenziata. Ora, tutte queste cantine un trucco diverso e come lo crescerebbe su un mezzo solidificato si moltiplicherebbero.Quindi, alcune delle cellule che sono vicine al mezzo avranno più approccio alle sostanze nutritive di cui sono più i nutrienti sono più disponibili a quelle cellule rispetto alle cellule che sono in cima. Quindi, ci sono sfumature biochimiche che possono formare che possono portare ad un ultimatelychange nel loro potenziale biosintetico. Quindi, si osserva generalmente che quando si inizia con le linee di callus, o si porta per la prima volta a sospensione e attraverso la cantina se ricordate di aver parlato della tecnica del cucito cellulare. Per ottenere una cultura sincrona di toa in base alle dimensioni con un presupposto che le cellule di stessa forma sizee si possono assumere nello stesso stato metabolico .Così, lì portando a una cultura sincrona o si continua a sottocularle in modo tale che le condizioni siano preferibili per il metabolita secondario di interesse tale che, durante la selezione naturale della sottocultura capita. Così, si avrà solo la preferite le cantine che sono in grado di produrre in quelle condizioni il metabolita secondario wouldcontinuerà a crescere e successivamente sarebbero la maggioranza .Così, è sempre il tipo di cellule nel callo e il numero di quelle cellule in quella callus che sono in grado di produrre il vostro metabolita secondario. Quindi, come aumentare quel numero e si osserva generalmente che quando si inizia con il callus ad induzione i rendimenti per l'anno iniziale o quindi oh si vedrà una grande variazione. Solo dopo 3 4 yearsof sub cultura scoprirete che si scende ad una resa del prodotto coerente .Così, la produttività in una popolazione così mista di cellule rischia di essere instabile dal passaggio in qualsiasi fattore. Questo è il motivo stesso per cui noi in laboratorio insistiamo sempre a tenere la conditionscoerente non si può o prendere alla leggera la sottocultura del callo che il genitore materialche sta andando a formare la vostra banca cellulare padronale. Quindi, nelle condizioni che si sottocultura, il tempo in cui si sottocultura non si può pensare che se sono 30 giorni, lasciatemi fare in quaranta giorni non importa. Tutto conta il tempo in cui si è sub culti, le condizioni oggi che hai messo al punto otto domani hai messo il 0,6 che va a variare. Quindi, uno deve essere davvero attento mentre sta subculando la tua banca di cella padronale. Dal momento che cambia in qualsiasi ambiente di fabbrica, o nutrizionalche favorisce la crescita di una particolare sottopopolazione di cellule lì cambiando la composizione della cultura la variazione della cultura .Ora, perché è qualcosa che può tessere il potenziale bio sintetico della tua massa cellulare, quindi diventa anche uno strumento di variazione. Quindi, la variazione della cultura offre l'opportunità di isolarsi dalla popolazione mista di cellule varianti, quelle ad alta produttività. E quindi sviluppare da loro linee cellulari di alta produttività .Così, il tasso di accumulo all'interno delle cellule produttive e la proporzione di tali cellule inla cultura è ciò che governa la resa o la selezione della linea cellulare ad alto rendimento. La bassa produzione nella cultura cellulare può essere dovuta ad una è la concorrenza tra le primarie e le vie secondarie, gli stessi intermedi di cui abbiamo visto i percorsi che poi il biforcateper il metabolismo secondario. Così, ci sarà sempre un concorso di flux di carbonio. L'espressione inferiore degli enzimi chiave nella velocità di limitazione della velocità nell'espressione del gene patwayor del metabolismo secondario può essere una limitazione. Poi lo screening è la tecnica apassiva con la quale vengono analizzate diverse cellule per la tariffa desiderata .Quindi, in generale come dicevamo che avremmo cercato la linea cellulare più alta, wewill farà qualche parte del callo che faremo fuori faremo estrazione e faremo analisi di yieldin. Oppure se si tratta di un pigmento colorato puoi visualizzarlo direttamente dal tuo è visibilto gli occhi, se se è se si tratta di fluorosi sotto UV allora a te può farlo con UV light.Quindi, che il callo che hai ottenuto stia producendo il tuo composto o non ti canta. Ora, la selezione è cosa? La selezione è un processo attivo con il quale deliberare favorisce solo la sopravvivenza della variante desiderata e l'altro tipo di cellule selvatiche. Quindi, i sistemi di callus sono utilizzati per la sceneggiatura e la selezione. Le linee cellulari che accumulano alti livelli di composti colorati possono essere selettive attraverso l'osservazione visiva. Il callus può essere controllato visivamente per alterazione pigmentata a occhio nudo per macchie colorate sotto lampada UV. Screening di pigmenti per esempio, se supponete di sapere dalla letteratura che greener è thecallus è da qualche parte legato al metabolismo secondario della biosintesi metabolita secondaria, quindi, si vorrebbe selezionare la linea di callus più green, quindi screening sulla base di pigmenti come clorofilla, antocianine, napolechinoni, carotenoidi, questi sono tutti pigments.Così, se si è in cerca di simili pigmenti diventa molto facile fare la proiezione. Ora la selezione può essere eseguita utilizzando le vostre tecniche di screening, screening meansmezzi utilizzando diverse dimensioni di maglia e cercando di ridurre ad esempio le dimensioni di maglia, fromda 100 micron a meno di 100. Quindi, alcuni supponiamo 500 più grandi di 500 micron a meno di cento micron. Quindi, la stessa cosa che si può finire in una cultura sincrina, la selezione può essere eseguita con la multa in rapida crescita rapida costituita da aggregati di 50 cellule o così. Ora, la sospensione della cella fine è adatta in selectionfor resistenza perché si pensa ogni volta che le sollecitazioni sulla sospensione delle cellule fini per il selectionprocess, come funzionerà rispetto alla cultura lump. Così tutta la divisa dei sensori in un'attività metabolica. Stiamo parlando in termini di selezione, selectionmezzo. Quindi, la variazione di dimensione non influenzerà il processo di selezione, come tutte le cellule avranno lo stesso. Quella era vendere cucito, ora in generale ci possono essere più che distanti i metodi di cucito cellulari come per esempio, se si cerca la resistenza. Così, il resto verrà ucciso solo quelli resistenti sopravviveranno o questo resistente può essere risolto resistendo, oppure può essere contro il metabolita tossico o antimetabolita resistanza.Così, se supponiamo che l'altro venga ucciso e hai bisogno di ora l'unico sopravvive perché si consiglia di utilizzare sospensioni cellulari diluite. Come si stava dando degli esempi per i batteri si cresce in un mezzo solidificato tale che solo i batteri possono degradedire quel particolare metabolita. O che sia resistente lascerebbe e poi cosa fai a pickup quello che scegli tu. Colonia.Colonia, quindi c'è anche quello che si consiglia di use.Solution. Soluzioni diluite si possono arrivare al purposescosa? Selezionando la linea di celle cellulari più alta un callo è cosa? Un massaggio eterogeneo. Quindi, quindi, quello che è preferito lo si porta in sospensione, fare un dilutethen selezionare per una linea cellulare resistente e permettere di crescere e moltiplicarlo per givele una callus fresca utilizzando quali tecniche di coltura singola che abbiamo imparato prima. Così, nel programma di selezione per la coltura delle cellule resistenti si può rilevare la crescita della popolazione resistente. Ma perché si sopporta nelle singole cellule diventerà che ci vorrà tempo perché il callo riappara e la cultura torni ad essere di nuovo a uno stato in rapida crescita. Quindi, dunque, si dice che ci vorranno circa 1 o 2 mesi per tornare a raggiungere una callus uniforme una sola linea di calorie a base di cantine. Ora, per evitare problemi intrinseci nell'uso della callus o della coltura cellulare per la selezione e lo screening, si può preferire la placcatura delle cellule o dei supporti solidi o dei materassi. Ora, a placare le cellule, la prima steppa è quella di preparare singole cellule o aggregati di piccole dimensioni per la placcatura. Le cellule devono essere placate a densità più basse permettendo la crescita delle colonie individuali, chiaramente separatedine che possono essere isolate e poi sottoculate. A differenza delle cellule microbiche, le cellule di coltura richiedono una densità minima di inoculo questo anche noi abbiamo studiato che le cellule vegetali avranno bisogno di una densità minima di inoculo per la crescita per iniziare. Generalmente le cellule vegetali sono cellule vegetali sono .. Sono crescere. Comunicarsi a vicenda. Comunicano tra loro attraverso. Trasferiti come parti. Quindi, c'è cella a contatto cellulare che è necessario, c'è la comunicazione che avviene, per facilitare e portarla a quel condizionatore che è necessaria la densità minima dell'inoculo. Ora, la preparazione di singole cellule o protoplasti ha già studiato per filtrare le cellule successiveleprime di raffinata cultura della sospensione attraverso, quindi usiamo tecniche di cucito cellulari. Quindi, dove da circa 500 a 75 micron si sta superando la sospensione cellulare questo finirà nella cultura sincrona. Le sospensioni ottenute sono costituite da singole cellule o piccoli aggregati, che molto probabilmente hanno originato da singlecconia perché come si può supporre. Quando utilizziamo queste tecniche di cucitura delle cellule si avviano da grandi dimensioni e ci troviamo a finire ad una dimensione molto piccola 75 micron di dimensione areless. Quindi, generalmente le cellule di cui abbiamo detto 50 o 100cells insieme ci sarebbero in aggregati cellulari e la dimensione è intorno alle dimensioni delle celle vegetali che sono anche la media morta. Se si sa che la media si arriverà alla logica perché questa tecnica di sewingor da 500 a 75 finirà in celle singole o finirà in piccolissimi aggregati che sarebbero, ovviamente, provenienti dalle singole cellule. Perché si sono moltiplicate e formate un po' più grandi della singola cellula .Quindi, grandi aggregati di sospensione che aggiungono pectinasi aiutano a come questo abbiamo fatto anche questo è il motivo per cui stavamo facendo tutto questo. Generalmente si scoprirà che anche quando si avrà inducea callus da diversi tipi di esploratore che tutti varieranno non solo nel loro trucco biochimico che a volte varieranno anche nella loro morfogenetica o morfologia.Alcuni saranno molto duri e compatti, alcuni saranno molto friabili che toccheranno solo una spatola e si disperderanno nel mezzo. Quindi, questo a causa della friabilità è becausedel contenuto d'acqua nel callo. Quindi, grandi sospensioni aggregate che stiamo usando pectinasenow perché si preferisce che il callo sia friabile in natura. Se si vaga per generare una sospensione, perché può facilmente disperdersi nel mezzo liquido. La sceneggiatura e la selezione dovrebbero essere effettuate da una sospensione cellulare appena preparata dall'impianto grazie a una sospensione molto antica perché? .Perché preferire i giovani? Perché saranno cellule in crescita più attivamente. Il tessuto mostarideale per l'isolamento della singola cellula è le cellule a foglia e mesofio che possono essere meccanicalmente isolate. Al fine di selezionare una singola cellula per la sospensione delle sospensioni cellulari deve essere diluita a densità dove le cellule vegetali non crescono senza speciale supplementation.Quindi, quali sono i metodi di screening e di selezione, i metaboliti secondari possono presentare un colore intenso, quindi il rilevamento visivo si può prendere quel pezzo di calco e startpropagando quella callus. Così, finirete in una linea di callus che darà il prodotto di interesse. Le aree pigmentate alterate del callus possono essere facilmente rilevate o la regia dell'estratto di cella è fatta per conoscere la qualità del clone. I cloni sottoindagati devono essere divisi per la sottocultura e l'analisi chimica.