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Modèle d'expression spatiale et temporelle

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Bienvenue au cours de la biologie du développement des plantes.Donc, si vous vous souvenez des cours précédents, nous avons terminé l'identification et l'isolement du gène pour l'étude fonctionnelle, nous avons déjà une analyse des formes d'expression, particulièrement l'analyse globale ou l'expression de l'expression patternoù les gènes exprimés différentiels ont déjà été identifiés. Dans cette classe, nous nous concentrerons davantage sur l'analyse du patron d'expression spatiale. C'est donc très important dans le contexte de la biologie du développement, parce que le développement de tout organe ou de tout tissu est un processus dépendant du contexte. Si vous vous souvenez de nos quelques conférences très précédentes ou très d'une ou de la première ou de la deuxième conférence, nous avons discuté de ce que la communication cellule-cellule est un facteur de conduite majeur en cas de développement.Donc, si vous voulez étudier la fonction d'un gène particulier par une approche génétique inverse, la première chose et très importante ce que vous avez à faire, c'est de ce que vous devez faire avec très précisément ce qui est le modèle d'expression, en particulier son expression spatiale et temporelle, c'est-à-dire les tissus, les cellules ou les organes qui sont exprimés et les moyens temporels à quel stade du développement il est lancé Expressing.Donc, il y a plusieurs façons d'étudier pour analyser l'expression particulièrement spatiale et temporelle, une façon est l'hybridation in situ à ARN. Ici, vous pouvez faire dans l'ensemble du montage ou des sections.Donc, en gros, vous pouvez prendre un organe complet ou une structure complète, puis vous pouvez sonder cela avec une sonde spécifique à un gène spécifique et ensuite identifier où est une particule exprimée?Dans la section tissulaire, vous devez d'abord fixer la section, puis faire une coupe transversale des tissus, une épaisseur de 8 microns ; un tissu épais ou des coupes transversales épaisses de 10 microns, puis vous sonde cette section avec le probe.Donc, cette méthode que vous pouvez utiliser pour identifier l'activité transcriptionnelle de l'ARN messager, ce qui signifie que vous pouvez identifier l'activité transcriptionnelle d'un gène dans un tissu spécifique. Nous en discuterons un par one.Donc, d'abord nous prendrons des hybridations in situ à l'ARN. Donc, comme je l'ai dit ici, vous pouvez faire en deux soit vous pouvez faire l'hybridation in situ dans l'ensemble, soit vous pouvez faire sur la section, mais quelles sont les étapes que vous devez suivre?Donc, la première étape majeure de l'hybridation in situ de l'ARN est la préparation tissulaire. Ainsi, vous collectez l'échantillon en fonction du tissu ou des organes que vous allez étudier, vous pouvez collecter les racines, la tige, les fleurs selon votre intérêt. Ensuite, il est important de fixer les tissus. Il est très important de mettre fin à toute réaction biologique continue ou réactions biochimiques. Il existe différents fixatifs disponibles pour fixer le tissu végétal, puis ces deux traitements sont communs dans l'ensemble du montage in situ aussi bien que sur place sur les sections transversales ou longitudinalsection, mais si vous Vous voulez faire sur les sections alors une autre chose que vous avez à faire?Il est très important de prendre ce tissu et imbriqué dans les médias, ce qui est très important parce que vous voulez faire une section très fine, qui est de 8 microns ou 10 microns et l'enchevêtrements plus de préférence ce que nous utilisons est une paraffin.Donc, il y a un processus de déshydratation que nous faisons à travers l'éthanol seriesto retirer l'eau et ensuite vous infiltrez ça avec la paraffine. Et une fois que vos blocs de paraffine sont prêts, vous prenez ces échantillons vous faites une coupe transversale de cette section sur la poly lysine, Poly-L-lysine enrobée, c'est très important parce que vous voulez que votre section s'accrochez Une autre chose importante est que vous devez générer une sonde d'ARN. Comme vous pouvez le voir ici, il s'agit d'une hybridation in situ à ARN ARN, ce qui signifie que vous êtes un ARN messager pour un gène particulier et que vous utilisez l'ARN comme un probe.Donc, si vous devez faire une sonde, vous aurez l'ARN antisens comme sonde parce que cet antisenseARN va s'hybrider avec le sens RNA.Mais comme un contrôle, vous allez aussi vérifier ce qui est le backgroundsignal. Et comment vous faites cette sonde peut-être que je vais décrire en détail, il y a deux façons d'effectuer la synthèse de la sonde par PCR ou vous Depuis que nous produisons des sondes d'ARN, nous utilisons soit la transcription in vitro de l'ARN polymérase T7, soit l'ARN polymérase T3, selon le type de promoteris disponible, et ensuite vous pouvez utiliser l'étiquette NTP.So, il y a deux façons de le faire d'une façon initiale où les gens ont utilisé la sonde à l'aide d'une sonde radioactive et maintenant, à cause de beaucoup de problèmes avec l'activité radio, nous nous acheminons vers la sonde non radioactive, et dans cette synthèse de sonde, ce qui est Vous prenez l'un des NTP comme isotope labelledor vous pouvez utiliser une partie de la substance chimique synthétisée NTP.Par exemple, c'est la biotine marquée UTP, DIG ou digoxigenin label UTP et ensuite thisprobe selon ce qui est la taille de votre gène, vous pouvez les utiliser et vous pouvez hydrolysethem.So, what you do fondamentalement?Vous prenez votre fragment spécifique de gène que vous clonez dans un vecteur de clonage, l'important est que votre vecteur de clonage doit avoir un promoteur T3 et T7 ou que vous pouvez utiliser le promoteur SP6 dépendant du vecteur disponible. Et si votre fragment spécifique de gène est dans le sens de l'orientation, vous devez utiliser le promoteur T 3 et l'ARN polymérase T 3 et ensuite pour faire ce que vous faites linéariser ce vecteur à partir d'ici, puis utiliser l'ARN polymérase T 3 pour transcribethis en tant que sonde anti-sens. Est appelé dans DIG-UTP, puis si cette sonde de synthèse ou si la taille de la sonde est supérieure à ce que vous allez, vous préférez l'hydrolyser et faire une taille de sonde d'environ 75 à 100 nucléotide long. C'est important parce que si la taille de la sonde est très élevée, elle ne pénétrera pas correctement les tissus au moment de l'hybridation.Donc, par exemple, il s'agit d'une image de gel qui montre comment générer le probe.Donc, il s'agit d'un plasmide linéarisé ; ainsi, vous avez un plasmide avec votre gène spécifique fragmentcloné, vous avez fait la transcription in vitro et vous avez généré la sonde est la sonde à ARN. High then we have hydrolysed this probe and we have madea small hydrolysed probe.Now, this hydrolysed probe is ready for hybridation. For hybridation what we do?Avant de passer à l'hybridation, il y a un traitement avec les tissus, et un traitement important, il y a un traitement protéinase K, c'est très important pour partiallydigest le tissu pour permettre une meilleure pénétration de la sonde. Et une fois que vous avez traité vos tissus, alors vous utilisez cette sonde d'ARN et faites des hybridations de 16 à 20 heures à 50 à 55 degrés centigrade, puis une fois que votre hybridation est terminée, il est très important pour vous de retirer les sondes non liées, sinon ils vont aussi givesbackground signal.Donc, ce que nous faisons pour les éliminer un traitement que nous faisons qui est le traitement par la RNase Le typicallywe utilise ici la RNase A. RNase A qui dégrade spécifiquement les ARN non liés uniques, ce qui éliminera tous les ARN non liés des tissus, alors nous faisons des lavages rigoureux, même s'il y a quelque chose de non hybridisé, ce qui est très important avant d'aller pour la détection du signal, si vous n'y faites pas correctement, alors vous allez avoir beaucoup de signaux de fond. Ensuite, le processus se poursuit une fois que vous avez déjà des sections, vous avez déjà sondé avec les sondes d'ARN antisens, puis vous utilisez des anticorps.Donc, typiquement on utilise l'anticorps anti-DIG.Donc, vous savez que notre sonde d'ARN antisens est balisée avec DIG.Now, nous utilisons un anticorps qui reconnaît digoxigenin.Donc, ces anticorps anti-DIG que nous utilisons et ensuite selon la méthode ou le mode de détection, si vous voulez faire l'essai colorimétrique, alors que les anticorps anti DIG de la DIG qui ont des phosphatases alcalines, mais si vous voulez détecter par la détection de la base de la phosphatase alcaline, vous pouvez utiliser un anti DIGanticorps avec une partie de la protéine marquée par fluorescence, par exemple, Rhodamine.Donc, en gros, vous avez maintenant traité des diapositives avec l'anticorps, puis vous devez laver toremove Donc, si vous avez utilisé une sonde radioactive, alors vous pouvez détecter le signal par autoradiographie, si vous avez utilisé un anticorps anti-DIG qui a une phosphatase alcaline ou d'autres isoenzymes de couleur, alors vous pouvez faire la réaction de couleur, mais si vous avez des anticorps marqués fluorescents, alors vous pouvez faire la microscopie fluorescente pour détecter le signal. Je vous donnerai certains des examples.Donc, c'est un cas de montage entier in situ et un du gène qui est le facteur de transcription du riz. MADS2 a été détecté ou analysé pour son modèle d'expression à l'aide d'une sonde à ARN antisens non radioactiveDIG-UTP et ceci a été détecté par microscopie à fluorescence. Donc, juste pour savoir rapidement que c'est l'organe où nous voulons voir l'expression, cet organe est appelé lodicule, c'est un petit organe de fleur de riz, vous pouvez voir ici très clairement que c'est l'organe ici, et nous voulons voir comment MADS2 s'exprime à travers les organs.Donc, nous avons essentiellement pris cette lodicule complète et nous avons réalisé l'ensemble du montage d'hybridations in situ à l'aide d'une sonde antisens contre le MADS2, puis détecté à l'aide de la rhodamine. Labelledanticorps.Et vous pouvez clairement voir ici qu'avec cette méthode in situ nous pouvons dire que l'expression de MADS2 est distribuée asymétriques. Si c'est un lodicule vous pouvez voir que les extrémités et la région périphérique du lodiculeont plus de signal MADS2 que comparé à la région proximale et basale de this.Donc, cette analyse nous permet non seulement de vérifier l'expression dans un particule, mais elle nous permet aussi de vérifier si la transcription est distributed.De même, si vous prenez cet exemple, ici, en gros, ils ont été faits sur les sections longitudinales du panicle.Donc, c'est encore du riz. Panicule, et la panicule de riz est comme l'inflorescence, elle a des fleurons différents, des fleurons à des stades de développement différents et ce panneau supérieur si vous regardez qu'ils ont été marqués avec une sonde d'ARN antisens pour un autre gène appelé MADS1, mais la radio de la ite étiqueté probe.Donc, vous pouvez voir clairement l'expression est tout au long de l'étape, puis plus tard le stageit est plus limité au lemme et à la palea et l'expression dans les organes internes du sporl sont disséques.Donc, il s'agit d'un exemple typique d'hybridation in situ à l'ARN de l'étiquette radioactive sur la section. Le gène qui est régulé par MADS1 et ce qui se produit si vous voyez ici ce stage.Donc, ceci est fait par une sonde d'ARN antisens étiqueté non radioactive et si vous regardez sur scène vous pouvez voir que très similaire à la MADS 1 il montre le haut niveau d'expression dans les primordiums floraux. Mais dans le stade ultérieur, lorsque les organes floraux sont des organogenèse, vous pouvez voir l'expression dans le lemme et la palea est diminuée, mais les organes internes de sporl ont un haut niveau d'expression.Donc, cette méthode nous permet d'étudier où exactement un gène particulier est expressed.Donc, il s'agit d'un exemple d'ARN ARN. L'hybridation in situ, mais nous savons tous que l'ARN dans la plupart des cas de la molécule fonctionnelle est protéinique et non la RNA.Of bien sûr, il y a beaucoup d'ARN qui fonctionnent sans être traduits dans une protéine, mais dans les cas généraux ou typiquement les ARN sont en train de faire la traduction et ils font le protéin.Donc, si vous voulez détecter la protéine dans un tissu ou si vous voulez détecter la localisation spatio-temporelle de la protéine, vous pouvez réaliser des hybridations in situ des protéines qui est aussi appelé immunohistochimie et ce que vous pouvez faire c'est un exemple typique d'une monture complète. Comme dans le cas de l'hybridation in situ à ARN, à l'exception de la méthode de détection légèrement différent.Donc, ici aussi, vous collecez le tissu puis faites la fixation, puis après la fixation, vous faites la perméabilisation de la membrane, puis vous pouvez ajouter l'anticorps.Donc, il y a deux possibilités si vous voulez détecter une protéine contre laquelle vous alreadyez des anticorps, alors vous pouvez utiliser cet anticorps, si vous n'avez pas d'anticorps contre une particule d'intérêt, vous pouvez étiquetez la protéine, vous pouvez étiquetez votre protéine avec une étiquette. Par exemple, vous pouvez ajouter une étiquette à haute disponibilité, une étiquette MYC ou n'importe quel type d'étiquette, et ensuite vous pouvez utiliser un anticorps contre la balise pour détecter la localisation des protéines. Anticorps.Et puis vous pouvez utiliser des anticorps secondaires qui sont contre l'anticorps primaire et puis vous pouvez le faire, vous pouvez visualiser le signal. La visualisation du signal que vous pouvez faire de façon différente, la co staine avec differente.Donc, si vous prenez cet exemple ici une protéine qui est une protéine du transporteur d'Axin qui est une protéine du PIN1 a été vue pour sa localisation et vous pouvez voir le signal vert est pour la protéine PIN. Et puis une autre molécule ou une autre protéine qui est fondamentalement balisée avec le signal rouge est l'ATPase donc fondamentalement ceci va marquer la protéine membranaire et ensuite le DAPI le bleu dans Couleur DAPI se lie essentiellement à la DNA.So, elle va rester dans les nucléeus.Donc, ces trois ensemble ont été utilisés pour vérifier la localisation de PINprotein.Donc, si vous regardez ici ; Donc, il peut s'agir d'une version agrandit et vous pouvez dire clairement que c'est la limite de la cellule et dans la limite cellulaire la protéine PIN est très spécifique ou asymétrique sur un côté de la membrane cellulaire, mais elle a l'aspect de la membrane de la membrane, mais elle est très petite. Donc, je ne prends qu'un exemple, mais il y a plein d'exemples disponibles où vous pouvez détecter cette protéine par Protéine in situ, hybridation in situ ou immunohistochimiok.Donc, la méthode suivante qui est utilisée pour surveiller l'expression des gènes dans le temps et dans l'espace est la méthode promoterreporter, très couramment utilisée. Donc, si vous vous souvenez d'un de nos cours précédents, nous avons discuté de l'existence de deux types de tests pour les journalistes promoteurs.Vous pouvez créer une construction de fusion transcriptionnelle ou construire une construction de fusion translationnelle, quelle est la différence entre eux?Dans une construction de fusion transcriptionnelle, vous ne prenez que le promoteur ou la séquence d'amont de votre géné.Donc, si c'est votre gène, vous prenez seulement la région promotrice et cette construction basicallywill vous indique l'activité transcriptionnelle ou promotionnelle, où qu'elle soit disponible. Et puis vous utilisez un gène rapporteur ici, un gène rapporteur soit vous pouvez utiliser GUS de gène ou vous pouvez utiliser GFP, RFP tout type de gène rapporteur que vous pouvez utiliser ici. Si vous générez ce type de construction, il s'agit de la construction de fusion transcriptionnelle, et cette construction vous dira où est le domaine d'activité du promoteur. Cela ne peut être utilisé seul parce que dans les plantes la plupart du temps il a été observé que les promotresne sont pas très localisées, il y a des éléments régulateurs cis qui sont essentiels à l'activité du promoteur et ils sont même trouvés dans le gène dans l'introns.Donc, il est toujours difficile de choisir la quantité de région ou le segment de l'ADN à prendre pour l'activité promotrice.Donc, si vous prenez un fragment, supposons que si vous prenez 3 Ko la séquence en amont du côté de départ de la transcription, alors vous allez le cloner et vous verrez un motif expressionniste, mais si vous voulez le valider ou si vous voulez être très sûr que l'actiallythis est l'activité du promoteur, vous aurez à faire cette analyse avec le dans situhybridization.Donc, l'hybridation in situ juste maintenant que nous avons discuté, il y a là que vous allez et vous arenot de faire quelque chose que vous détecez juste le patron d'expression endogène d'une génére d'une RNA.Et puis vous faites la construction de la fusion transcriptionnelle et quand vous Si votre activité de promoteur ou si votre activité de rapporteur de promoteur est la même que l'hybridation in situ, vous pouvez dire que l'élément promoteur ou la région promotrice que vous avez sélectionnée, elle est complète et qu'elle possède tous les éléments régulateurs cis qui font partie de ce promoteur. Dans la fusion translationnelle, ce que nous faisons, c'est plus important car itwill tell domaines of the expression as well as sub cellulaire protein localisation.So, here what we do?En gros, nous prenons le promoteur désiré et ensuite nous prenons le gène aussi, mais nous fusethis ce gène avec une partie du rapport. Donc, en gros ce que nous faisons ici, nous mutantes le codon d'arrêt du gène d'intérêt, puis dans le cadre nous sommes en train de fusionner avec une partie du reporter et ensuite ce qui est heureux?Ceci et si vous utilisez cette construction, c'est ce que l'on appelle la fusion translationnelle. Donc, on dira tout d'abord que, là où est l'activité du promoteur, c'est la localisation subcellulaire de votre protéine.Donc, parce que votre protéine est maintenant étiqueté avec le GUS et le GFP donc, où que votre protéinwill bougera, le rapporteur fera rapport de sa présence, mais ici il y a une question qui est que puisque vous créez une protéine de fusion, il est possible que cette fusionpourrait inactiver vos protéins.Donc, votre protéine pourrait ne pas être dans sa bonne confirmation et Alors si vous signalez son localisationil est toujours contestable que la localisation est à cause de l'artefact ou c'est la truelocalisation pattern.Donc, ceci doit être validé, vous pouvez le valider, comment vous pouvez valider votre construction en faisant la complémentation qui signifie que, si vous prenez un mutant de thisgène d'intérêt, où vous voyez un phénotype et prenez ensuite la construction de fusion translationnelle, si le phénotype de mutant est complété par cette construction, ce qui signifie que votre fusionprotéine est fonctionnelle et que vous pouvez compter sur sa localisation pattern.So, I Par exemple, si vous regardez ce gène SHORTROOT, le gène SHORTROOT est très important pour le développement des racines chez Arabidopsis et si vous créez une hybridation in situ à ARN ou si vous générez une fusion transcriptionnelle. Donc, il s'agit d'une détection d'ARN endogène par hybridation in situ à ARN et ici vous avez le promoteur takenSHORTROOT et fuse ici GFP ici GUS.Dans tout ce cas si vous regardez le domaine d'expression de la protéine SHORTROOT Si vous voyez ceci dans l'endoderme, vous ne voyez aucun signal, mais le tissu après l'endoderme comme le péricycle, le xylème, le phloème, le procambium ils ont l'activité que vous pouvez voir ici et c'est aussi ce que vous pouvez voir quand vous faites l'hybridation in situ ici dans le root.Donc, ceci indique que le promoteur SHORTROOT est actif dans le tissu vasculaire, mais que vous faites une fusion translationnelle, où vous utilisez le même promoteur SHORTROOT, mais maintenant SHORTROOT La protéine a été utilisée de façon translationnelle avec le GFP.Ce que vous observez qu'à l'exception du domaine d'expression qui se trouve dans le tissu vasculaire, vous voyez aussi que la protéine est également présente dans l'endoderme et dans l'endoderme il est gettinglocalised au noyau, et cela a beaucoup d'importance peut-être dans certaines des classes futureclasses, nous discuterons de ce qui est l'importance fonctionnelle de this.Donc, comment cela est possible?Si votre promoteur est actif ici les transcriptions ne se produisent que dans le tissu vasculaire, la protéine est présente dans le tissu où la transcription n'est pas en train de se produire?Donc, ceci donne une information qu'il pourrait y avoir une possibilité que votre protéine soit gettingsynthétisé dans le tissu vasculaire, puis du tissu vasculaire il migre vers les cellules de voisinage qui est endodermis dans ce cas. Et ceci n'est possible que si vous étudiez à la fois la fusionconceptuelle et la traduction transcriptionnelle pour le gène. Un type d'étude similaire a été réalisé dans le méristème apical de la tige d'Arabidopsis thaliana, et ici la protéine très importante appelée WUSCHEL.WUSCHEL est importante pour réguler et maintenir l'activité méristématique, vous verrez dans la classe suivante, mais ici Ce que je voulais montrer si vous regardez le modèle d'hybridation in situ de WUSCHEL.Vous verrez toujours que cette WUSCHEL est exprimée quelque part ici dans ce domaine, mais ce domaine qui est la couche L 1 et L 2, c'est le méristème floral. Dans tous les cas, vous pouvez voir que les couches L 1 et L 2 ne possèdent pas d'ARN qui mésème la transcription de WUSCHEL. Mais quand vous prenez et quand vous regardez la localisation des protéines de WUSCHEL, alors ce que vous voyez ici, c'est le promoteur WUSCHEL qui conduit GFP fused avec la protéine WUSCHEL, vous pouvez voir la couche L 1 et L 2 couche Les couches ont le protéin.Donc, la transcription est ici, l'ARN est ici et ensuite la protéine est également présente dans cette région où la transcription active de WUSCHEL n'est pas heureuse. Donc, ceci dit que cette protéine pourrait se déplacer d'une cellule à une autre. La méthode finale qui est utilisée pour étudier l'expression temporelle et spatiale est promoterpiégeage ou activateur de piégeage ou de piégeage de gènes, qu'est-ce que ce piégeage?C'est une méthode très importante et ce que vous pouvez faire il y a différents types de pièges que vous pouvez faire. Il s'agit d'ADN génomique typique, puis, par exemple, vous voulez identifier un gène avec une particule très particulière avec un motif d'expression défini comme vous pouvez le faire?Une façon de faire du piégeage de l'enrichisseur ici nous nous concentrerons davantage sur le piégeage du promoteur, je pense que dans le piégeage de l'enrichisseur nous avons déjà discuté dans une des classes précédentes. Mais ce qui se passera si vous devez piéger un promoteur de votre intérêt, si vous voulez identifier un gène qui nous a laissé supposer l'expression dans la feuille ou s'il n'est exprimé que dans les pétales et que vous voulez identifier ce type de gène pour le studyhow basé sur la génétique inverse que vous pouvez faire?Donc, en gros, vous pouvez générer une construction dans cette construction, ce qui se passe, vous puta reporter le gène, mais dans le gène rapporteur simplement promoteur moins le gène rapporteur, et mettre, transférer faire une construction dans l'ADN T et utiliser cet ADN T pour élever la plante transgénique. Donc, en gros ce qui se passe, l'ADN T sera inséré au hasard dans le génome, mais si cet ADN T a été inséré nous supposons dans le gène de l'intérêt qui est exprimé dans le pétale et si nous supposons que s'il s'agit d'un promoteur, c'est le gène et ici letassume si votre construction a été insérée, alors il a une activité promotrice d'ici du gène qui est En gros, vous êtes au hasard en intégrant un rapporteur dans le génome et en essayant d'identifier une lignée transgénique, où votre rapporteur a été intégré en aval d'un stimulateur qui est actif dans un tissu particulier, et ensuite vous pouvez essentiellement les isoler, de la même façon vous pouvez faire le piégeage des gènes ; vous pouvez faire du piégeage de l'enrichisseur dans le piégeage de l'enrichisseur ce que nous faisons en gros?Nous prenons un promoteur minimal et ensuite reporters.So, promoteur minimal promoteur as well as reporter et puis essayez de piéger l'enrichisseur, ici weare essayer de piéger le promoteur. Et vous pouvez voir certains de l'exemple que ceci a été très bien utilisé pour identifier de nombreux gènes dont les expressions sont de façon très restreinte par exemple, ce généis exprimé dans la feuille ce qui est exprimé dans le trichome, alors ceci est exprimé dans le méristème apical de la racine de façon similaire ici si vous regardez la racine latérale comme des racines latérales comme sont les racines latérales comme sont coming.Donc, alors, en gros alors, alors que vous connaissez la séquence d'ADN T Vous pouvez utiliser une partie de la technique basée sur la biologie moléculaire pour cartographiez le gène où est le site d'intégration, puis vous pouvez identifier le gène pour l'étude fonctionnelle.Oui, c'est un très bon exemple, où les gènes ou les lignées ont été identifiedwhich show either petal or stamen and or some of them are exprimés both in petal and stamen.So, you can see they has been generated.So, large number of gene trap line has been generated and if you look theyare where a different expression pattern. Some of them are spécifiquement exprimée in the petal or spécifiquement exprimée in thestamen some of them has been exprimés both in pétales and stamens, then you can go mapthis gene and then identity and take this gene for the complément functional study.Donc, si je récapitulation ce que nous avons discuté aujourd'hui.Donc, aujourd'hui, nous avons terminé l'analyse du modèle d'expression, en particulier nous avons pris les moyens et d'étudier le patron d'expression spatiale et temporelle d'une plante de gènes. Et surtout, ils sont très importants quand vous étudiez le développement d'un particule ou si vous identiez un régulateur putatif d'un processus de développement, andif vous voulez étudier leur fonction spécifique dans le processus de développement. Donc, je m'arrêtera ici, dans la prochaine classe, nous discuterons de la caractérisation fonctionnelle d'un gène. Merci beaucoup.