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Antibody-Interaction Antigen
Bonjour tout le monde, c'est le Dr. Vishal Trivedi du département des biosciences et de la bio-ingénierie de IIT Guwahati. Et aujourd'hui, nous allons discuter de l'interaction des anticorps avec l'antigène dans les conférences précédentes, nous avons discuté de la façon de générer les anticorps que nous avons discutés sur la génération des anticorps polyclonaux et aussi bien que l'anticorps monoclonal. Donc, une fois que vous avez généré l'anticorps, vous avez généré le premier outil immunologique pour l'utiliser à diverses fins.Donc, l'un des objectifs de la génération d'un anticorps est d'étudier l'interaction de l'anticorps avec l'antigène. Alors, voyons comment l'anticorps et l'antigène interagissent les uns avec les autres et comment ils peuvent être exploités pour concevoir différents types d'expériences ou différents types d'outils pour étudier les différents processus biologiques.(voir Heure de la diapositive: 02:02)Donc, comme vous pouvez voir que vous avez un anticorps et que vous avez un antigène, cet antigène pourrait être composé d'une ou de plusieurs régions épitopiques, par exemple dans ce cas nous avons les 6 régions épitopiques comme 1 2 3 4 5 et 6. Et ce que vous pouvez voir, c'est que toutes ces régions épitopiques sont en faitproduisant les anticorps ou que toutes ces régions épitopiques sont de nature antigénique, de sorte qu'elles produisent effectivement les anticorps et que tous ces anticorps sont exclusifs à cette région épitopique.Ce qui signifie que l'anticorps et les antigènes sont en fait une paire de cognate où un anticorps est exclusif à un antigène spécifique spécifique à cette région épitopique spécifique. Ce qui signifie que si vous avez l'anticorps pour la région épitopique 6, il va en fait reconnaître cet épitope particulier et comme un global il va aussi vous permettre de reconnaître aussi l'antigène. Alors pourquoi l'antigène et les anticorps forment la paire de cognats.Parce qu'ils travaillent en fait sur les principes de reconnaissance exclusive où vous avez les déterminants exclusifs qui permettent à l'antigène et aux anticorps d'interagir entre eux et que l'interaction est très spécifique et exclusive.(Référez-vous à la diapositive: 03:42)Maintenant, voyons que vous avez un anticorps et que vous avez un antigène et comment et pourquoi il a les interactions exclusives ou la spasticité exclusive. Parce que l'antigène est constitué d'une structure tridimensionnelle. Donc, c'est vous qui avez une structure en 3 dimensions qui est composée de l'anticorps. Et ce que vous pouvez voir, c'est qu'il peut en fait permettre aux antigènes d'interagir et que les antigènes qui sont en fait de la cartographie avec des structures tridimensionnelles similaires sont en fait autorisés à interagir avec les anticorps.En plus de ce que les anticorps fournissent aussi les différents espaces où ils vont réellement fournir soit le site pour l'interaction électrostatique, soit les interactions hydrophobes. Par exemple, dans ce cas, ce site a en fait un résidu chargé positivement de sorte que ce qu'il se passera, c'est qu'il permettra en fait à l'antigène d'avoir une reidue chargée négativement. Ainsi, même la structure tridimensionnelle d'un anticorps et de l'antigène est mise en correspondance. Mais les résidus positifs présents dans ce côténe n'obtiennent pas un résidu négatif présent sur l'antigène.Il n'est pas en fait permis à cet antigène et à l'antigène particulier de se lier, ce qui signifie qu'il pourrait y avoir de multiples antigènes qui sont en fait en train de former ce genre de structures tridimensionnelles similaires. Mais jusqu'à ce que cette interaction ne soit pas satisfaite, l'anticorps ne va pas reconnaître l'antigène pour former le complexe stable. De même, vous avez un site pour la liaison hydrogène afin que l'anticorps puisse être un donneur d'hydrogène, c'est pourquoi il est en fait à la recherche d'un accepteur d'hydrogène sur l'antigène pour qu'il puisse former une liaison hydrogène stable.De même, vous avez les groupes qui participent réellement aux interactions de la paroi de l'émerveillement et, d'autre part, il a aussi les groupes qui sont en fait impliqués dans l'interaction de l'empilement du pipeline. Donc toutes ces interactions ainsi que les structures tridimensionnelles fournissent en fait la spécificité dans les anticorps pour reconnaître l'antigène ou la région épitopique présente dans l'antigène.(Référez-vous à la diapositive: 06:12)Maintenant, l'interaction des anticorps antigènes pourrait être de plusieurs types parce que, comme vous pouvez le voir, l'antigène peut être de plusieurs types. Par exemple, l'antigène pourrait être un antigène insoluble ou il pourrait être un antigène soluble, donc ce que signifie l'antigène insoluble c'est cela. Par exemple, les cellules comme par exemple vous avez le RBE de sorte que RBE est un antigène qui n'est pas soluble dans la solution qui va réellement former une matière particulaire. Par exemple, si vous gardez le RBC dans le tampon, il va en fait s'installer.Donc, c'est pourquoi il tombe sous la catégorie des antigènes insolubles les autres molécules qui sont aussi insolubles sont comme le virus ou certaines des bactéries sont également en train de tomber sous les antigènes insolubles. Les antigènes solubles sont principalement les substances protéiques telles que les protéines ou l'ADN ou l'ARN. Et parfois aussi les lipides de sorte que les molécules solubles dans les milieux aqueux tombent sous les antigènes solubles. Donc, si l'antigène est insoluble, il va interagir avec les anticorps et participer aux réactions d'agglutination.Les réactions d'Agglutination sont les réactions où l'anticorps va interagir avec l'antigène et il va en fait former un réseau ou le maillage. Parce que c'est en fait qu'il va s'accrochez, il va cliché tout l'antigène contenant des antigènes particulaires. Si l'antigène est soluble dans la nature, il va interagir avec les anticorps. Dans le cadre d'un processus, ses anticorps vont précipiter l'antigène du voisinage.L'exemple classique des réactions de précipitation est le test d'immuno-diffusion radiale ainsi que les immunoprécipitation. En plus de l'interaction de l'anticorps antigène qui participe à la réaction d'agglutination ou à la réaction de précipitation, l'interaction anticorps antigène est également responsable du développement de différents types d'immunodosage, tels que l'ARI RIA ou le buvardage de l'Ouest. Ainsi, lors de la conférence d'aujourd'hui, nous allons discuter de la plupart de ces techniques, et ensuite nous allons aussi voir comment cette technique peut être utilisée pour résoudre certains des problèmes scientifiques.Comment effectuer les tests d'hémagglutination le matériel que vous avez demandé pour effectuer l'épreuve d'hémagglutination est celui dont vous avez besoin pour les CVR que vous avez besoin des lecteurs de plaque de microtitrage ou plaque de microtitrage que vous avez besoin du PBS. Ensuite, vous avez besoin de la micropipette et des conseils dont vous avez besoin pour les tubes coniques, puis vous avez besoin de la centrifugeuse avec un rotor de godet gonflant et vous avez besoin d'une solution d'eau de Javel pour vous permettre de désinfecter le virus contenant des articles de sorte qu'il n'y aura pas de contamination croisée des virus vers les autres objets.(Référez-vous à la diapositive: 23:57)À l'étape 1, vous devez préparer les CVR de sorte que vous recueils de 1 à 2 ml de sang avec l'EDTA, de sorte qu'il contient l'anticoagulant, alors les CVR frais doivent être préparés pour ce test parce que les CVR frais vont avoir la très grande quantité de L'antigène ainsi que les RBCs frais ne vont pas montrer de dégradation de l'antigène qui est exprimé sur la surface de la cellule, puis vous faites tourner le produit pendant 10 minutes avec soin.Enlevez la couche de buffy blanche, ce qui signifie que vous retirez les BBE sur le dessus de la palette de globules rouges et que vous enlevez la partie sérique, puis que vous diluez la pelleteuse résultante dans le PBS et que vous la mélangez avec l'inversion de spin à 1500 tr / min pendant 10 minutes, et que vous préparez une solution de 3 à 4 fois et que vous préparez une solution de 1% RBC en utilisant le solution saline tamponnée 1 x phosphate comme diluant. Une fois que vos RBCs sont prêts, vous pouvez réellement faire les dilutions virales.(Référez-vous à la diapositive: 25:02)Les dilutions virales que vous allez faire comme dilution en série pour chaque puits vous ajoutez le 50 microliter de PBS et ensuite vous allez faire une dilution en série des virus pour que vous prenez les virus d'abord vous ajoutez le virus dans le premier échantillon et ensuite vous allez faire une dilution en série simplement en transférant les virus d'un puits à un autre bien et c'est ainsi que vous allez préparer une dilution en série des échantillons de virus.Ce qui signifie que vous allez préparer un pli. Dilutions jeter le 50 microliter du dernier puits dans les solutions d'eau de Javel, puis vous préparez le témoin positif et négatif approprié, le témoin positif devrait être d'un échantillon où le virus est déjà présent, alors que le témoin négatif serait seulement d'avoir la BRC et le PBS, alors vous ajoutez le 50 microliter de la BRC à tous les puits la quantification du travail serait les CVR de 0,5 pour cent., vous les mélangez délicatement et fermez le couvercle, puis gardez-les à la température de la pièce pendant 15 à 30 minutes pour développer ou pour effectuer les réactions de sorte que si elle va vous montrer la Test d'hémagglutination.(Référez-vous à la diapositive: 26:26)En fin de compte, ce que vous allez voir, c'est que ce que vous avez fait, c'est que vous venez de mettre les virus dans les différentes dilutions comme 1 est à 1 1 est à 4 1 est à 4 1 est à 8 donc chaque fois qu'il est diluant dans la moitié et finalement vous allez avoir les dilutions multiples comme jusqu'à 1 est à 128, puis dans le contrôle positif ce que vous voyez, c'est que jusqu'à 1 est à 32, vous obtenez un pastille de globules rouges avec un motif brumeux de sorte que ce que vous voyez est en fait un motif nuageux qui est en fait un représentant avec l'indication de l'épreuve d'hémagglutination.Alors que vous voyez cette RBC, c'est un bouton RBC lisse qui indique en fait que le test d'hémagglutination ne fonctionne pas dans cette concentration particulière une fois que la concentration du virus sera descendu à un niveau donné. Ne sera pas suffisant pour agglutiner les RBCs et c'est ainsi que vous allez voir un bouton de RBC en douceur maintenant vous avez un échantillon 1 et un échantillon 2 donc dans l'échantillon 1 ce que vous voyez c'est qu'il est en fait exempt de virus parce qu'il ne montre pas un test d'hémagglutination.Les boutons RBC sont présents à partir du premier puits lui-même, alors que dans l'échantillon numéro 2 vous avez la réaction d'agglutination ici le motif de la brume ici et le profil de la brume ici, mais dans le de 1 est à 8 vous êtes en train de commencer à obtenir le bouton RBC qui indiquent que les virus ont le titre de 1 est à 8 dans l'échantillon 2 alors que le négatif est négatif. Le contrôle vous montre le bouton RBC du haut vers le bas, donc ce que vous voyez c'est que le titre d'hémagglutination du témoin positif est le 32 ou le 2 au pouvoir 5.considérant que le non-virus a été observé dans l'échantillon 1, donc il a l'unité HA 0 et le titeur à haute disponibilité de l'échantillon 2 est 4 ou le 2 à la puissance 2 est en fait dans 50 microlitains, donc ceci est en fait pour vous dire que l'échantillon a la plus grande quantité de virus et que l'échantillon a la plus faible quantité de virus et que vous pouvez quantifier le nombre de virus présents dans chaque échantillon et ceci est un essai très utile pour détecter le virus dans un échantillon particulier et comme avons discuté des réactions d'agglutination dans lesquelles nous avons aussi discuté de l'hémagglutination et de l'agglutination que nous avons discutée au sujet des réactions d'agglutination directe, ainsi que des réactions d'agglutination indirectes, maintenant nous discutons des antigènes solubles, alors que l'antigène est soluble, il va former le précipité en interagissant avec les anticorps.Et aussi. Dans les réactions de précipitation, vous avez les 2 dosages comme le test de diffusion de l'immunité radiale ainsi que les immunoprécipitation pour étudier l'interaction entre l'antigène et les anticorps.(Référez-vous à la diaporama: 30:00)Ainsi, les réactions de précipitation de la réaction d'un antigène soluble avec les IgG ou les anticorps IgM pour former un gros agrégat entrelacé sont appelées réactions de précipitation. Les réactions de précipitation sont formées par les anticorps sont connues sous le nom de précipitants, de sorte que le précipité qui est forméles anticorps est connu sous le nom de précipitants qu'il se produit en 2 étapes, de sorte que l'interaction anticorps antigène se produit en 2 étapes pour former le précipité à l'étape 1, il s'agit en fait d'une réaction rapide.Lorsque vous ajoutez les anticorps à l'antigène, il y aura une interaction rapide dans une seconde entre l'antigène et l'anticorps pour former le complexe d'anticorps antigène une fois que cette interaction rapide se produit et que l'antigène et l'anticorps forment un complexe stable Alors ils passent à l'étape 2 où il y aura un faible taux de réaction qui se termine même en quelques minutes ou quelques heures et formant un réseau à partir des complexes d'anticorps anti-antigènes qui signifie à présent à l'étape 2, qui est en fait une réaction lente.Tous ces complexes d'anticorps anti-antigènes vont former un clump ou le réseau et, ce faisant, ces complexes seront si lourds qu'ils ne seront pas solubles dans les milieux aqueux et c'est ainsi qu'ils vont réellement être retirés ou qu'ils vont former une matière particulaire qui peut en fait être visible à l'œil nu. Non-concordance des anticorps et du rapport de l'antigène de l'anticorps de façon à ce qu'il soit très important pour le complexe d'anticorps antigène ou les anticorps antigènes de former le précipité.Est-ce que vous êtes censé fournir la quantité adéquate d'antigène ainsi que les anticorps car s'il y a une mauvaise concordance entre l'antigène ou l'anticorps si vous avez un antigène trop bas ou un antigène trop élevé, les anticorps ne vont pas former le précipité optimal et il est important que vous les ajoutez-les dans un rapport particulier pour observer les précipités optimaux qu'aucun précipite visible ne se forme si vous avez le rapport inadapté (voir le diaporama: 32:34)Maintenant, la première expérience dont nous allons discuter, c'est les tests d'immunodiffusion ou les tests d'immunodiffusion, les tests d'immunodiffusion sont effectués dans un milieu gélosé gélosé, un test d'immunodiffusion est appelé comme le test d'Ouchterlony dans les puits d'essai de l'Ouchterlony est coupé de sorte que vous avez un bloc d'agarose et dans ce bloc d'agarose ce que vous allez faire est que vous allez couper le puits et que ces puits vont contenir l'antigène ou les anticorps et que vous allez ajouter les anticorps ou l'antigène dans ces puits.Et ce qui va se passer. Est que l'antigène va en fait se diffuser à partir de ces puits dans toutes les directions de même que vous pouvez imaginer que l'antigène 2 est également diffusé dans ce but et que l'anticorps se diffuse aussi dans la gélose et que ce qui va se passer est bien quand ils vont se rencontrer et que, à leur point de rencontre, ces 2 vont former le précipité, donc ce que vous voyez c'est que dans ce cas particulier l'antigène 1 et aussi bien que l'antigène 2 forment en fait un précipité continu.Ce qui signifie que l'antigène 1 et aussi bien que l'antigène 2 sont en fait Ils sont semblables les uns aux autres, c'est pourquoi ils montrent en fait le précipité visible et ils forment en fait un précipité continu quand à côté des anticorps, par la suite, une ligne de précipité visible se forme entre le puits où après diffusion le rapport optimal de l'antigène est formé de façon à ce que l'antigène et l'anticorps aient une concentration très élevée.Mais lorsqu'il diffuse sa concentration, il est dilué de la même façon lorsque l'antigène est diffusé, il est également très élevé à côté du puits, mais quand il est diffusé et que tout ce que vous êtes En fait, il est possible d'obtenir des concentrations optimales d'anticorps antigènes pour voir le précipité visible.(Référez-vous à la diapositive: 34:54)Now the next is radial immunodiffusion assay. Le test de l'immunodiffusion radiale est une technique d'immuno-diffusion quantitative utilisée pour détecter la concentration de l'antigène en mesurant le diamètre de l'anneau précipitant formé par l'interaction de l'antigène et de l'anticorps à une considération optimale dans cette méthode, l'anticorps est incorporé dans le gel d'agarose alors que l'antigène se diffuse dans un motif radial.conséquent, l'anticorps est uniformément réparti sur l'ensemble du gel. Que cela signifie que le bloc d'agarose va avoir la concentration homogène des anticorps, de sorte que vous avez un bloc d'agarose qui contient en fait les anticorps dans une considération homogène par rapport aux tests immunologiques radiaux de celui-ci que vous avez en fait en comparaison avec les tests d'immunodiffusion.Dans celui-ci, vous avez en fait la concentration constante des anticorps dans tout le bloc d'agarose et ensuite ce que vous faites est que vous allez vraiment couper un puits et que vous allez en fait ajouter l'antigène à ce moment une fois que vous ajoutez l'antigène ; l'antigène va àdiffuser Et il va en fait atteindre à une concentration particulière il va en fait continuer à interagir avec l'anticorps qui est présent dans ce bloc d'agarose et ensuite il commence à faire le précipité en fonction de la quantité d'antigène que vous avez dans ce puits particulier.Il va en fait vous donner un anneau de précipitation proportionnel à la concentration de l'antigène ce que vous avez ajouté dans le puits le diamètre de l'anneau de précipitation est proportionnel à la concentration de l'antigène avec une augmentation de la concentration de l'antigène, le cycle de précipitation avec le avec sera plus grand. Le diamètre est formé de la taille de l'anneau de précipité dépend des 4 facteurs suivants: 1 il est en fait présent sur la concentration de l'antigène de ce que vous prenez bien dans l'échantillon.Le numéro 2 dépend également de la concentration d'anticorps agarose ce que vous prenez dans ce bloc d'agarose particulier parce que si l'anticorps est le facteur limitant, alors l'antigène ne sera pas suffisant si l'anticorps est limité alors l'antigène même dans l'antigène est plus le cycle de précipité sera proportionnel à la fin de la concentration de l'anticorps, alors vous Dépend également de la taille de l'échantillon de manière à ce que la quantité du puits que vous allez prendre commence à partir de là.Ainsi, la taille de l'anneau de précipitation sera également proportionnelle à cela, puis le volume de l'échantillon est également très important pour voir le diamètre de l'anneau précipitant.(Voir Heure de la diapositive: 38:08)Comment réaliser cet essai la courbe standard peut être obtenue à partir de laquelle on peut déterminer la quantité d'antigène dans une concentration inconnue, par exemple, vous pouvez faire l'échantillon inconnu de différentes concentrations pour que vous puissiez faire un antigène de Un montant différent et qui va en fait vous donner l'anneau de précipitation de diamètre différent. Donc ce que vous pouvez faire c'est simplement tracer les diamètres de ces anneaux sur l'axe des y.Et vous pouvez représenter la concentration de l'antigène sur l'axe des x et ensuite ce que vous pouvez faire, c'est que vous pouvez simplement utiliser la concentration inconnue et vous pouvez déterminer la concentration de cet antigène particulier si plus d'un anneau apparaît dans le test, par exemple, si vous avez les 2 anneaux comme celui-ci, cela implique en fait que vous avez plus d'un antigène présent dans votre mélange de réaction.Ce qui signifie que ces antigènes sont en fait des réactions différentielles avec les anticorps être le mélangeQue l'anticorps que vous ajoutez n'est pas pur pour que l'on ait les 2 anticorps différents et que ces 2 anticorps différents aient les différents types d'interaction avec l'antigène et parce que vous obtenez en fait les 2 bagues d'un anneau qui est pour l'anticorps 1 l'autre anneau qui est pour l'anticorps 2 ou dans d'autres cas vous avez l'anticorps unique.Mais vous avez 2 antigènes qui ont aussi l'interaction avec l'anticorps de sorte que le plus petit anneau que vous obtenez pour l'antigène 1 en fonction de sa concentration et de la Un anneau plus grand que vous obtenez pour l'antigène 2, qui est également en fonction de sa concentration particulière, ce test est couramment utilisé dans les laboratoires cliniques pour la détermination de l'étiquette d'immunoglobuline dans les patients, de sorte que vous pouvez déterminer les antigènes que vous pouvez déterminer les anticorps.Parce qu'il va en fait vous donner l'anneau de précipitation afin que vous puissiez réellement détecter ou que vous pouvez diagnostiquer la présence de l'anticorps dans l'échantillon ou la présence de l'antigène.(Reportez-vous à la page Diapositive: 40:33)Maintenant, voyons Comment effectuer cette épreuve et quel que soit le matériau que vous avez besoin de la matière que vous avez besoin est la verrerie comme le flacon conique de mesure de cylindre et les réactifs bécher dont vous avez besoin d'agarose pour pouvoir préparer le bloc d'agarose, alors vous avez besoin de la mémoire tampon d'essai, alors vous avez besoin des antigènes standard, alors vous avez besoin des antigènes de test de gel de plaque de verre et l'eau distillée et l'alcool le matériel dont vous avez besoin est l'incubateur de l'incubateur à 37 degrés Celsius un micro-ondes ou le brûleur.Donc vous serez en mesure de préparer le bloc d'agarose, alors vous avez besoin d'un vortex. Mixer spatula micropipette and all this kind of minor items.(Reportez-vous à la diapositive: 41:18)Pour les procédures d'abord vous devez préparer 10 ml de gel d'agarose pour que vous puissiez en fait peser la quantité d'agarose dont vous avez besoin et ensuite vous l'avez placé dans les 10 ml de la solution d'essai dans un tube d'essai permet de refroidir jusqu'à 55 à 60 degrés Celsius. Il s'agit d'une étape très importante que vous devriez laisser refroidir pour que lorsque vous ajoutez les anticorps aux anticorps de solution ne soient pas dénaturés et ajouter le 80 microliter de l'antisérum à 6 ml de Solutions d'agarose.Bien mélanger pour une distribution uniforme des anticorps, alors vous versez les solutions d'agarose contenant l'entasra sur une plaque de verre libre de graisse non graisseuse placée sur la surface horizontale permet au gel de s'installer pendant 30 minutes, ce qui signifie que vous allez prendre un bloc de verre et que ce bloc de verre ne doit pas avoir la graisse parce que le verre est là où vous avez un revêtement brillant, donc si vous avez un revêtement brillant, ce bloc brut ne va pas s'en tenir à cela.Donc ce dont vous avez besoin est un verre qui n'a pas le revêtement brillant et qui devrait être rugueux en fait pour qu'il puisse contenir le verre. Bloc brut, alors vous allez déverser l'agarose et ensuite vous laisser laisser l'agarose se solidifier une fois que l'agarose est solidifié, puis vous allez frapper les puits avec l'aide d'un puncher sur gel qui est en fait vous savez juste que vous devez faire les trous pour que vous puissiez charger les antigènes dans cette utilisation de gélatines une fois dans le trou vous pouvez enlever ce bloc d'agarose.Donc il y aura un puits pour charger les échantillons, puis vous pouvez ajouter le 10 microliter de l'antigène standard et l'antigène de test dans le puits et ensuite vous incuber cette plaque de verre dans une chambre humide. Parce que si vous laissez l'eau s'évaporer, l'agarose ne sera pas conservé comme une mince feuille, donc vous devez arrêter l'évaporation de l'eau pour que ce que vous pouvez faire, c'est simplement ajouter des tissus qui sont mouillés dans l'eau pour que le contenu en eau reste intact à l'intérieur de cette chambre.(Se reporter à la diapositive: 43:39)Maintenant, l'incuber pour la nuit et ensuite vous allez voir les résultats alors vous observez l'anneau de précipitation autour de l'antigène marque le puits de puits et mesure le diamètre de sorte que ce que vous allez voir est voir par exemple que c'est le puits et Ce que vous allez voir est un anneau précipitant autour de ceci, c'est aussi l'autre antigène qu'il va voir le cycle précipité, alors ce que vous allez faire, c'est juste décrire cette bague et ensuite vous allez déterminer le diamètre de cet anneau de précipitation particulier.Et ce que vous allez observer, c'est que le contre la concentration, vous devez noter le diamètre et ensuite vous pouvez aussi noter le diamètre pour les échantillons de test, alors ce que vous allez faire, c'est que vous les placiez dans une courbe.(Voir Heure de la diapositive: 44:31)Et vous pouvez utiliser cette courbe pour calculer la concentration. De l'antigène dans un échantillon inconnu pendant que vous effectuez l'essai que vous pourriez avoir à vous faire face aux différents types de problèmes et c'est ainsi que vous pouvez faire le dépannage aussi. Quel est le problème que vous ne voyez pas un anneau de précipitation dans ce cas, vous n'avez peut-être pas fait le moindre sentiment adéquat des puits ou vous pouvez être en mesure d'incuber le gel d'agarose a été séché pendant que vous avez fait l'incubation.Donc, alors qu'il sera séché, il va en fait affecter la diffusion de l'antigène et c'est comme ça qu'il ne va pas vous donner les anneaux précipitant lorsque vous ajoutez les antisérums dans l'agarose la température d'agarose n'était pas de 55 à 60. Mais c'était un peu plus haut et c'est comme ça que les anticorps ont été inactivés si vous voulez résoudre ce problème ce que vous devez faire, c'est que vous devez remplir la quantité adéquate des solutions dans le puits vous devez vous assurer qu'il y a assez d'hydratant dans la chambre.Et puis vous devez aussi vous assurer que l'agarose a été refroidi venez à assez pour que les antisérums ne soient pas inactivés parfois ce que vous allez observer aussi est l'anneau de précipité flou qui signifie que la bague précipitée ne sera pas très claire coupée. En fait, il va être dangereux dans ce cas vous pourriez la première raison c'est qu'elle pourrait être à cause de l'inactivation du sérum ou elle pourrait être à cause du coulage inégal du gel, ce qui signifie que votre épaisseur de gel est inégale.Ce qui signifie qu'il ne va pas former la surface très lisse et parce qu'il montre en fait un anneau de précipitation flou vous pouvez simplement résoudre ce problème soit en s'assurant que les antisérums n'ont pas été inactivés et que l'agarose est complètement refroidi avant de la verser dans la plaque de verre. Ensuite, vous pouvez également placer la plaque de verre sur une surface plane tout en versant le gel pour qu'il n'y ait pas de coulée irrégulière de l'agarose sur ces plaques de verre, donc tout ceci concerne les essais d'immunodiffusion radiale où nous avons discuté de chaque détail des protocoles.(Référez-vous à la diapositive: 46:54)La prochaine est l'immuno-électrophorèse. Le principe de l'immuno-électrophorèse est basé sur le mouvement de l'antigène et des anticorps sur le pôle opposé après l'application du courant électrique si la réaction se produit, jusqu'à ce que vous voyiez une ligne de précipitation. Nous étions simplement en train de nous fier à la diffusion de l'antigène ou des anticorps et dans ce cas, vous allez observer un anneau de précipitation ou une ligne de précipitation, mais parfois l'antigène ou l'anticorps que vous manipulez sont très gros et ils sont très lents.A cause de ce qu'il n'est pas possible pour ces antigènes d'être testés dans un test d'immuno radiale ou les essais d'immunodiffusion, c'est ce que vous faites, c'est que vous faites simplement un gel d'agarose et dans ce cas vous savez juste verser l'agarose pours l'antigène dans un puits et les anticorps dans un autre puits et ensuite vous Appliquer le courant électrique de façon à ce qu'il se produise l'antigène et les anticorps vont s'exécuter dans une direction opposée, puis pendant qu'ils courent, ils vont interagir les uns avec les autres et c'est ainsi qu'ils vont former le précipité.Donc, ce que vous allez faire, c'est que vous allez simplement ajouter l'antigène dans un des puits et que vous allez appliquer le champ électrique de sorte que lorsque vous appliquez les champs électriques, l'antigène va s'exécuter dans cette direction, l'anticorps va s'exécuter dans cette direction et quand ils se réuniront au point central que vous allez voir. Une ligne de précipitation pour que la ligne de précipitation vous dise que cet antigène et cet anticorps interagissent entre eux.Et c'est ce genre de test qui est utile pour le diagnostic de la méningite bactérienne et des autres maladies, c'est donc sur l'étude de l'interaction de l'antigène et de l'anticorps jusqu'à présent que nous avons discuté des réactions d'agglutination que nous avons discutées sur les réactions de précipitation et dans les réactions de précipitation que nous avons discutées au sujet des essais immunitaires radiaux, de sorte que j'aimerais conclure mon exposé ici dans les conférences suivantes: En fait, nous allons discuter des réactions d'immunoprécipitation.Et ensuite, nous allons reprendre les tests immunologiques pour discuter de la façon d'effectuer les tests immunologiques et comment vous pouvez être en mesure de les utiliser pour répondre à certaines des questions biologiques, de sorte que j'aimerais conclure ma conférence ici merci.