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Vidéo:

Bonjour tout le monde, bienvenue à une autre conférence pour le génie et les principes de la distribution de médicaments ; dans cette catégorie, nous discuterons d'un article sur l'inhalation.
(Reportez-vous à l'heure de la diapositive: 00:37)

Donc, dans les classes précédentes, nous avons discuté de comment, si vous essayez de livrer quelque chose au poumon, vous pouvez utiliser directement des thérapies par inhalation pour fournir des effets indésirables dans les autres parties du corps. Cela n'a pas de sens si vous voulez que tout votre médicament aille aux poumons pour le livrer par voie orale ou par voie orale parce que, de cette façon, il sera distribué dans tout le corps. Ainsi, dans cet article, les auteurs ont étudié la façon dont ils peuvent traiter certaines infections à l'aide de particules polymériques et de bactériophages et nous les décrirons de façon beaucoup plus détaillée dans le présent document.

(Référez-vous à la diapositive: 01:13)

Donc, très vite tout d'abord ce qu'ils essaient de faire, donc, c'est un papier qui regarde l'infection de la fibrose kystique. Alors, la fibrose kystique d'abord de tout ce qui est ça? Il s'agit d'un trouble génétique causé par une mutation dans un gène appelé CFTR, qui est un gène de récepteur transmembranaire de la fibrose kystique. Et, parce que la sécrétion de l'ion chlorure n'est pas bonne et qu'elle cause beaucoup de problèmes en termes de diffusion dans la teneur en eau du mucus. La fibrose kystique affecte en fait beaucoup d'organes, y compris l'intestin, les poumons et d'autres, comme même les glandes sudatiques.
Mais le principal manifeste de cette maladie survient dans le poumon où, en général, dans le poumon normal, on a ces cellules épithéliales pulmonaires. Et ces cellules épithéliales du poumon continuent à sécréter beaucoup de mucus, ce qui provoque la génération de deux couches de mucus. Donc, vous avez une couche de mucus plus visqueux et vous avez une couche de mucus moins visqueux. Et, en général, dans une voie aérienne normale du poumon, ce mucus continue à monter et quand je le dis en gros dans le sens où il se déplace des poumons vers la bouche. Et ce qui se passe, c'est de dire que nous respirons tous les agents pathogènes ou toute sorte de particules que le corps ne veut pas que ces particules soient déposées dans cette couche épaisse de mucus.
Et puisque ce mucus se déplace constamment, ce que l'on appelle l'escalator mucociliaire, ils continueront à le démonter. Et, finalement, une homéostasie est maintenue là où de plus en plus de mucus est sécrété, quel que soit le mucus précédent. Donc, typiquement comme on le sait dans la littérature, il faut environ 18 heures pour que tout le mucus se régénère. Ainsi, dans les 18 heures qui ont une durée de vie normale, tout le mucus présent sera remplacé par un nouveau mucus. Mais ce qui se passe dans les voies respiratoires de la fibrose kystique, c'est que, en raison de ce problème dans le gène ici, le contenu en eau est beaucoup plus faible.
Et donc vous avez une très épaisse couche de mucus.
Maintenant, ce mucus étant si visqueux il ne se déplace pas vraiment comme il se déplace, dans le cas normal plus il est aussi très épais. Et donc, cela donne un peu d'accumulation dans le blocage des voies aériennes aussi. Donc, maintenant, vous respirez dans les bactéries, qui peuvent pousser dans vos poumons et y rester longtemps pour s'établir et causer la maladie. Donc, en général environ 80 à 95% des patients viennent en fait parce que, de cette insuffisance respiratoire. Parce que, il est causé par cette bactérie chronique comme des infections qui causeront une inflammation avec de plus en plus de cellules immunitaires.
Ils vont continuer à détruire le tissu environnant et cela provoque davantage de sécrétions de mucus et plus d'homéostasie pour perturber le blocage des voies aériennes. Donc, finalement, les patients meurent simplement parce que, même ils ne peuvent pas très bien respirer. Donc, comme je l'ai dit alors, l'une des cibles majeures, c'est cette infection bactérienne comme l'infection et parmi les infections bactériennes qui est observée dans cette maladie, il y a de nombreux types de bactéries qui commencent à coloniser votre poumon.
Mais, parmi eux, le genre de bactérie pathogène très répandue dans ce cas est Pseudomonas aeruginosa. Donc, c'est une bactérie gram-négative qui colonise vos poumons si vous avez une fibrose kystique et de telles infections.

(Référez-vous à la diapositive: 05:19)

En fait, il est très difficile de traiter tout d'abord et il y a déjà un système immunitaire affaibli qui est présent dans les environs. Comme ce mucus est si épais, les cellules immunitaires trouvent aussi difficile de se déplacer dans ce mucus. Ensuite, ce Pseudomonas aeruginosa développe une résistance aux antibiotiques quel que soit l'antibiotique que vous donnez, et c'est un gros problème ces jours-là. Et puisqu'il a un temps de résidence plus long parce que le mucus n'est pas en mouvement, il peut former ces biofilms.
Et les biofilms en général sont extrêmement difficiles à traiter, nous en avons parlé dans notre classe d'infection. Ces biofilms seront très difficiles à traiter car les antibiotiques ne fonctionnent pas très bien, vous mangez presque 1000 fois de concentration antibiotique qui pourrait être extrêmement toxique pour les cellules saines également et il est très difficile de traiter. Et, en général, je veux dire, évidemment, la résistance aux antibiotiques est mise en évidence beaucoup dans plusieurs revues et plusieurs magazines de publication. C'est un gros problème auquel l'humanité est confrontée en ce moment.

(Référez-vous à la diapositive: 06:17)

Donc, ce document a essayé de s'attaquer à ça et ce qu'ils ont fait, c'est que, ils proposent, encore une fois ils ne sont pas le premier à faire cela, il y a plusieurs personnes qui l'ont proposé. Mais, dans ce cas, ils examinent une méthode de livraison normale pour cette solution qui est des bactériophages pour le traitement. Alors, qu'est-ce que les bactériophages? Les bactériophages ne sont rien, mais ce sont des virus qui infecte spécifiquement leur bactérie hôte. C'est juste une image modèle ; vous pouvez voir qu'il y a une bactérie et que plusieurs types de virus sont attachés sur le dessus de cette bactérie.
Et donc, ce sont des virus qui vont aller et qui mettent leur matériel génétique dans la bactérie à l'origine de la lyse de cette bactérie particulière. Ces bactériophages sont très spécifiques pour leur bactérie hôte. Donc, ils ne nuisent pas vraiment à vos bactéries commensales, donc nous savons que nous avons beaucoup de bactéries dans notre corps qui est en fait en bonne santé et notre corps en a besoin. Donc, ces bactériophages ne vont pas le tuer, contrairement à vos antibiotiques, qui éliminez presque toutes vos bactéries à la fois ; ces bactériophages sont spécifiques à la cible. Et ils sont aussi auto-répliquants et auto-limitants et ce que cela signifie exactement, c'est que, lorsqu'ils trouvent l'hôte, ils vont commencer à se multiplier. Donc, ils vont se répliquer et quand l'hôte n'est pas là, ils ne se multiplient plus.
Donc, ils se limitent et finissent par se débarrasser, ils sont sans danger pour l'usage humain qu'ils ont été utilisés depuis des décennies chez les humains en fait, ils ont été utilisés avant même que les antibiotiques aient été découverts. Donc, il y a une longue histoire d'utilisation chez les humains et donc, on a montré qu'ils étaient sûrs et qu'on leur a montré qu'ils étaient efficaces contre les biofilms, ce qui n'est pas le cas avec les antibiotiques. Donc, c'est juste une image du biofilm de pseudomonas ; il s'agit d'une image SEM: Scanning Electron Microscope image. Et cela montre que la surface est colonisée par le biofilm de Pseudomonas qui, lorsqu'il est traité avec les phages, est complètement éradiqué. Autre chose, comme tous les autres virus ou tout autre matériel génétique qu'ils peuvent être manipulent.
Donc, vous pouvez mettre d'autres enzymes dans ces bactériophages aussi pour augmenter leur puissance, ils peuvent augmenter même l'efficacité des antibiotiques. Donc, vous pouvez utiliser en co-administration avec des antibiotiques ou vous pouvez aussi avoir des stratégies alternatives ; cependant, un défi est que la taille est assez petite. Donc, ils sont d'environ 10 à 100 nanomètres de diamètre et que si nous regardons la livraison de poudre sèche au patient, ce qui est beaucoup plus conforme. Ils ne vont pas vraiment dans les poumons profonds et nous en avons parlé dans notre classe d'inhalation, nous allons la reprendre brièvement.
(Heure de la diapositive: 09:03)

Donc, tout le but de ce document était de développer une thérapie qui utilise un biomatériau, de sorte qu'ils peuvent augmenter la compliance du patient et assurer une livraison pulmonaire profonde de ces bactériophages.

(Heure de la diapositive: 09:17)

Donc, encore une fois, si vous vous souvenez de l'une des choses qui provoque la livraison dans le poumon profond, c'est le diamètre aérodynamique. Donc, ce d aero et nous avons dit que le d aero doit être compris entre 1 et 5 microns. Et c'est parce que si elle est inférieure à 1 micron, alors typiquement, ils n'ont pas assez d'inertie, et ensuite ils continuent à aller dans les lignes avec l'air que vous respon et ils se sont exhalés. S'ils sont plus grands que 5 microns, ils ont tendance à avoir une très haute inertie et ils finissent par s'accumuler où, ils ont d'abord frappé, c'est-à-dire la trachée dans la bouche supérieure, les voies respiratoires supérieures. Et donc, la gamme idéale que vous voulez les livrer, à 1 à 5 microns.
Donc, c'est ce que le système a été imaginé par ces auteurs où ils disent que nous allons utiliser une particule qui se trouve dans cette gamme. Ensuite, chargez ces bactériophages ou le médicament que vous essayez de livrer sur ces particules et cela permettra de s'assurer que ces particules vont profondément dans le poumon, dans les sacs alvéolaires. Et puis il y a quand le médicament peut sortir et évidemment, ils veulent utiliser les inhalateurs à poudre sèche parce qu'il est beaucoup plus conforme au patient, le patient peut juste l'utiliser seul.

(Référez-vous à la diapositive: 10:37)

Alors, quelles sont les exigences? Comme je l'ai dit, nous devons avoir entre 1 et 5 microns pour le poumon profond et le d aero pour une particule polymérique dont nous avons également discuté auparavant. Ce n'est rien, mais son rapport avec le diamètre physique et la racine carrée de la densité. Donc, maintenant, nous savons aussi et nous en avons discuté ; aussi que le macrophage a une absorption très élevée dans la gamme de 2 à 5 microns. Donc, si vous livrez quelque chose dans cette gamme, la plus grande partie de votre médicament se finira dans les macrophages: les macrophages alvéolaires, qui font le relevé de la région et vous perdrez beaucoup de vos médicaments.
Donc, ce n'est pas le résultat que vous voulez ; vous ne voulez pas vraiment livrer ce médicament au macrophage parce que cette bactérie ne réside pas dans les macrophages. Donc, une chose qu'ils ont fait est, ils ont décidé de rendre ces particules poreuses et plus grandes. Donc, ils ont en fait changé la taille physique de ces particules jusqu'à 8 à 10 microns et ils diminuent la porosité de ces particules pour les garder à 2 à 5 microns, intervalle pour ce d diamètre aérodynamique. Donc, à cette échelle de 8 à 10 microns, ils ne sont pas trop gros.
Ils ne sont pas plus que cette gamme de 2 à 5 microns que les macrophages peuvent prendre, mais ils sont encore dans la gamme aérodynamique droite pour être en mesure de déposer dans le poumon profond.
Et puis un autre avantage qu'ils observent à partir de ceci est que plus la taille des particules est grande, plus il est facile de l'aérosoliser. Donc, si vous avez une poudre et que vous couchez, disons si vous avez cette grosse poudre de particules. Le rapport surface / volume est donc faible.

(Référez-vous à la diapositive: 12:23)

Et donc, l'air peut arriver très facilement et l'aérosoliser et donc, c'est ce qu'ils ont fait et ils ont utilisé le polymère appelé PLGA ; encore une fois, nous avons discuté un peu de ce cours qui est un polymère approuvé par la FDA. Et ils ont pu rendre cette particule poreuse, comme vous pouvez le voir très poreux.
Donc, sa densité est très faible, elle est biodégradable, elle est biocompatible parce que PLGA vous pouvez la rendre plus rapide et la densité qu'ils ont modifiée était d'environ 0,3 gramme par cc. Donc, de 1 ils ont chuté à 0,3 ; cela signifie, que maintenant cette particule est assez légère et maintenant si vous appliquez cette équation de daero, disons si c'est 8 microns multiplié par la racine carrée de la densité.
Donc, si vous le résolrez, vous découvrirez que c'est plus dans la gamme de 3 à 5 microns. Donc, c'est ce qu'ils ont utilisé ici, puis ce qu'ils ont fait c'est qu'ils ont utilisé des bactériophages.
Ils ont trouvé des bactériophages, qui visaient spécifiquement le pseudomonas et ils ont été purifiés à l'aide d'une procédure appelée chromatographie liquide à performance rapide. Et ils ont fini par charger ces phages sur ces particules et ce qu'ils ont trouvé, c'est qu'ils ont un chargement d'environ un million de phages par milligramme de particules et que le chargement est effectué par simple adsorption.

(Référez-vous à la diapositive: 13:49)

Ainsi, les phages sont simplement incubés avec cette particule et ils les ont laissés interagir les uns avec les autres et s'adsorber sur la surface. Et puis ils trouvent qu'ils peuvent mettre environ 10 à la puissance 6 phage par milligramme de particule. Il est important de noter dans ce cas qu'ils utilisent un mélange de 5 phages et la raison pour laquelle ils veulent utiliser un mélange de phages est parce que nous disons que c'est la bactérie et disons que c'est un phage. Donc, il y a peut-être un récepteur sur la surface de la bactérie à l'endroit où le phage se lie et se lie.
Donc, s'ils n'utilisent qu'un seul type de phage, ce qui se produira, c'est que les bactéries peuvent potentiellement muter ce récepteur auquel le phage ne peut se lier. Donc, pour éviter que cela ne se produise, ils ont utilisé 5 phages à la fois et donc, c'est phage 1 peut-être que l'autre phage utilise un récepteur différent. Donc, peut-être qu'il y a un autre récepteur maintenant, qui est utilisé par un autre phage. Et donc cela signifie que même si nous disons qu'une bactérie est capable d'annuler d'une manière ou d'une autre l'un des phages, elle sera encore sensible aux quatre autres phages.
Et cela garantit que le traitement a réussi et ensuite ils ont pu montrer que ces phages qui sont chargés sur les particules sont toujours actifs et vont de l'avant et lyse les bactéries.

(Référez-vous à l'heure de la diapositive: 15:23)

Donc, voici ce qu'ils ont montré. Donc, ils ont utilisé une bactérie GFP, et dans le contrôle, donc, a tout ceci est une pelouse bactérienne et le rouge est leurs particules. Donc, partout où se trouvent les particules, vous ne voyez pas de mort bactérienne. Cependant, s'ils chargent leurs particules avec le phage, vous ne voyez pas seulement que les bactéries vertes sont dégagées partout où la particule est en train d'atterrir et se propage. Donc, comme je l'ai dit, les phages sont auto-répliqués. Donc, ils infectent les bactéries, ils les lysent, ils se répandent et ils tuent aussi les bactéries à côté d'eux aussi.
(Référez-vous à la diapositive: 16:15)

Ensuite, ils ont montré que ces phages sont aussi efficaces contre les biofilms. Donc, maintenant ce que vous êtes en train de regarder, c'est un biofilm qui est coloré par des morts vivants. Donc, vous pouvez voir que dans ce cas il y a beaucoup de biofilm qui est vivant contre les morts.
Alors que, s'ils donnent leurs particules de phage, ils voient une faible intensité de bactéries vivantes et une très forte intensité des bactéries mortes et voilà l'image fusionnée ; c'est pour la quantification de la vie à mort dans le tissu.
Et, dans les cas où ils donnent le phage combiné à des micro particules, ils constatent que le rapport est beaucoup plus faible en fait significativement plus bas. Ils sont donc efficaces même contre les biofilms.
(Heure de la diapositive: 17:01)

Puis ils sont allés de l'avant et ont fabriqué les formulations de poudre sèche. Donc, ce qu'ils ont fait c'est qu'ils ont lyophilisé leur poudre ou qu'ils ont lyophilisé leurs particules pour fabriquer une poudre et ils constatent qu'il y a une perte minimale de l'activité. Donc, je vous ai dit qu'ils ont pu obtenir 10 à la puissance 6 phages par milligramme et vous trouvez qu'il n'y a pas beaucoup de pertes et que cette poudre est relativement stable à température ambiante. Donc, ici, vous pouvez voir qu'ici c'est le titeur et il ne baisse pas vraiment beaucoup sur une période de 2 semaines à la température de la pièce aussi. Donc, ça pourrait être une bonne thérapie pour même les villages qui n'ont peut-être pas assez d'accès pour nous laisser dire un stockage à froid ou de telles installations.

Et pour aider davantage à l'aérosolisation, ils ont utilisé du lactose qui est un cryoprotecteur ainsi qu'un bon agent d'aérosolisation. Donc, ce n'est essentiellement rien, mais un sucre et donc, ils ont mélangé ça avec la formulation des particules pour qu'elle commence à mieux s'écouler. PLGA elle-même ne va pas très bien. Donc, ils doivent le mélanger avec le lactose pour le faire et dans leur résultat, vous verrez qu'ils trouvent que c'est une excellente livraison au poumon profond. Donc, voici ce qu'ils ont fait ; ici ils l'ont fait sur une souris, puis ils ont isolé divers organes.
Donc, ce processus est appelé l'insufflation où l'on accède à la trachée de la souris, puis à travers une seringue, ils bouffent la poudre directement dans la trachée ; ainsi, ce processus est l'insufflation. Donc, comme on pouvait s'y attendre, ces particules sont marquées par fluorescence, puis elles utilisent un système d'imagerie animale du système d'imagerie. Et ce qu'ils trouvent, c'est qu'ils reçoivent spécifiquement la livraison dans les poumons, alors que les autres organes ne montrent aucune livraison finale à tout ce qui est ce à quoi vous vous attendez si vous faites la simulation. Ceci est une autre quantification que tout le signal de fluorescence provient du poumon lui-même et que tous les autres organes ne montrent rien.
(Référez-vous à l'heure de la diapositive: 19:25)

Puis ils sont allés de l'avant et ont euthanasié certains de ces animaux, puis ils ont fait la cryosectioning et ainsi, ce que vous voyez ici est un poumon à section cryo. Ce bleu est le DAPI qui est la coloration du noyau des cellules de mammifères et le rouge est vos particules et vous pouvez voir que même dans le poumon profond. Donc, vous savez que c'est un poumon profond parce que, vous pouvez voir beaucoup d'espace aérien qui suggère que ce sont des alvéoles dans l'histologie.
Et vous pouvez constater que ces particules se déposent dans les poumons profonds et donc qu'elles sont bonnes en termes de leur diamètre aérodynamique et ceci est la quantification supplémentaire sur les animaux vivants. Donc, ils ont fait l'imagerie de l'animal entier et ce qu'ils trouvent c'est la plus grande partie du signal est du poumon alors que, chez un animal en bonne santé, si vous attendez environ 18 heures il est éliminé.
Donc, son innocuité généralement pour un animal sain, il ne reste pas vraiment dans le poumon depuis longtemps, il ne bloque rien. Il est éliminé dans les 18 heures, ce qui est attendu comme je l'ai dit dans un animal sain, le mucus va se régénérer dans environ 18 heures et ensuite ils montrent que la porosité est en fait essentielle. Donc, s'ils font les mêmes particules de taille qui sont non poreuses et ensuite ils insufflaient ces particules dans les poumons de la souris. Ce qu'ils trouvent, c'est d'abord s'ils ont comparé avec un phage libre, ils ont trouvé que les particules poreuses sont capables de donner un très haut degré de phage aux poumons.
Donc, l'expérience est faite que vous avez insufflé un phage libre ou un phage chargé sur la particule poreuse égale quantité. Et puis vous homogénéisez le poumon et le titer pour la quantité de phage présent dans ces homogénats. Et vous trouvez que près de 4 ordres de grandeur, principalement parce que, plus les particules et la même chose qu'ils ont observée avec la particule non poreuse versus poreuse. Donc, la porosité est essentielle pour les poumons profonds et ce qu'ils trouvent est dans la région pulmonaire profonde les particules poreuses vous donnent un ordre de grandeur plus élevé des dépôts de phages par rapport à des particules non poreuses ; encore une fois, souvenez-vous que c'est un titrage pour les plaques. Donc, tous ces phages sont en fait des phages actifs.
Donc, tout au long de ce processus, ils ont pu atteindre l'activité du phage dans le poumon puis, enfin, ils montrent qu'il s'agit en fait d'une infection réactive. Donc, et ce que ça veut dire, disons que si c'est un poumon sain, alors vous trouvez que si vous livrez des particules de phage, vous obtenez un certain nombre de vos phages dans le poumon se souviennent et c'est en milligramme maintenant, donc c'est pour ça que vous voyez une baisse de l'échelle et que c'était en microgrammes, c'était en gram. Donc, mais en tout cas, si vous utilisez ces particules de phage, elles donnent une certaine accumulation dans le poumon. Cependant, si vous avez des poumons infectés, ces phages se répliquez, ceci est fait 24 heures plus tard.

Donc, ces phages se reproduisent et augmentent leur nombre de près de 3 à 4 ordres de grandeur, ce qui indique qu'il s'agit en fait d'un système auto-réplicateur et sensible à l'infection.
(Heure de la diapositive: 23:05)

Ils ont ensuite utilisé ce système sur un modèle d'infection aiguë. Donc, ce qu'ils ont fait c'est qu'ils ont livré les bactéries dans les phages à la souris dans les poumons. Et donc, ce sont des animaux sains, dans ce cas les animaux de type sauvage et ils ont livré environ 0,5 milligramme de particules. Il a un chargement des phages dans ce et PAO1 qui est une souche de laboratoire de pseudomonas a été utilisé et il s'agit d'un modèle de 24 heures. Donc, ces deux choses ont donné et ensuite ils sont en test pour ce qui se passe 24 heures plus tard sur les deux bactéries dans le phage.
Et ce qu'ils trouvent n'est que dans le cas où ils ont le phage chargé sur les particules.
Donc, voici votre phage libre, voici votre seule bactérie, voici votre seule particule. Donc, vous ne voyez aucune réduction, mais seulement dans le cas où vous avez une particule chargée avec le phage, vous voyez une réduction de la quantité de CFU, un certain nombre de bactéries présentes dans l'homogénat pulmonaire. Et puis les phages sont aussi mesurés et la bactérie était alors l'animal a ensuite été recherché pour survivre et ce qu'ils trouvent, c'est que vous obtenez une réduction massive de la survie entre les deux groupes.

Donc, si vous ne donnez aucun traitement, la plupart de ces animaux meurent ; seulement 10 à 15% d'entre eux survivent. Mais si vous donnez un traitement de phage presque en fait, 100% des animaux ont fini par survivre pendant toute la durée de l'étude.
(Référez-vous à la diapositive: 24:49)

Et puis ils utilisent une souris CFKO qui est une souris qui est mutée et imite la fibrose kystique. Ici aussi, ils sont en mesure de montrer qu'en fait, à un taux beaucoup plus élevé que si vous utilisez seulement des phages, il y a un effet. Mais si vous utilisez des phages plus des bactéries, vous éliminez presque toutes les bactéries présentes dans le système et ici, elles montrent également si les bactéries se répandent ou non. Donc, ils ont analysé pour le foie où si les bactéries qu'il se propage systémiquement, il s'accumulera aussi dans le foie. Et ils trouvent que s'ils ne donnent à la bactérie qu'un traitement, presque tous les animaux ont des colonies bactériennes dans le foie. Cependant, s'ils utilisent des microparticules d'un phage, aucune de ces bactéries n'est trouvée dans le foie.
Donc, non seulement il empêche le poumon, il empêche aussi d'autres organes, et il s'agit plus de données histologiques. Donc, chez un animal infecté, vous voyez si vous ne donnez aux bactéries que vous voyez une réponse massive de vos cellules immunitaires. Vous pouvez voir où alvéoles, qui sont maintenant complètement remplis de toutes ces cellules immunitaires que vous pouvez voir ici. Si vous donnez un traitement par phage, cela réduit un peu, mais il devient presque comme un tissu sain ; si vous le faites avec la micro-particule phage. Et ceci montre encore une fois le nombre de bactéries présentes dans ces sections pulmonaires. Donc, vous pouvez voir toutes ces rouges qui sont représentées comme des bactéries et qui se réduit davantage au fur et à mesure que le traitement est donné.
(Référez-vous à la diapositive: 26:33)

Ensuite, ils voulaient voir si quelque chose comme ça allait fonctionner sur des souches cliniques.
Donc, j'ai dit que les auteurs ont d'abord utilisé la souche de laboratoire qui était PAO1. Donc, les souches de laboratoire sont bonnes pour faire votre optimisation, mais évidemment, les souches cliniques sont beaucoup plus virulentes et beaucoup plus difficiles à traiter. Donc, ce qu'ils ont fait, c'est qu'ils l'ont vérifié sur diverses souches de bactéries isolées du patient. Et ce qu'ils trouvent c'est que leurs microparticules de phage sont capables de tuer la plupart d'entre eux ; il y a une commande ici, qu'elle n'a pas pu tuer. Mais presque tous ces isolats cliniques pouvaient être tués par la formulation de micro-particules de ces phages.

(Référez-vous à la diapositive: 27:21)

Et puis, ils ont fait une expérience in vivo à l'aide de l'une de cette souche clinique, ce qui est PA103 et ce qu'ils trouvent est à nouveau le même résultat que, s'ils ne donnent que des phages, ils ne voient pas vraiment beaucoup de réduction. En fait, il n'y a pas de réduction significative alors que, s'ils donnent leur micro-particule phage, ils voient une réduction assez faible du nombre de bactéries présentes dans les poumons. L'autre chose qu'ils ont fait est bien évidemment cela fonctionne bien avec une seule bactérie d'infection dans le système de souris. Mais les humains sont exposés à plusieurs types de bactéries, plusieurs types de Pseudomonas, plusieurs souches de Pseudomonas à la fois.
À un moment, le patient peut avoir de nombreux types de souches de Pseudomonas qui colonisent les poumons. Alors, comment ça peut fonctionner avec tout ça? Parce qu'ils utilisent les cinq phages et qu'ils ont montré que ces phages sont efficaces contre la plupart des souches trouvées chez les humains. Ils sont allés de l'avant et ont essayé de le faire, et ils ont trouvé que, même si vous avez deux souches différentes mélangées et que vous donnez la thérapie du phage, même cela peut entraîner la réduction du nombre de bactéries présentes.

(Référez-vous à la diapositive: 28:33)

Et puis une question qui se pose à plusieurs reprises avec le traitement du phage est celle de la réponse immunitaire contre le phage lui-même, ainsi, parce que les phages sont étrangers et qu'ils peuvent provoquer une réponse immunitaire. Donc, dans ce cas, les auteurs ont voulu tester ce qui se passe s'ils donnent des phages avant et ensuite essayer le traitement. Ainsi, dans cette expérience particulière, ils ont d'abord utilisé la souris pour livrer le microparticon de phage sans aucune bactérie. Ils ont attendu environ 21 jours, ce qui est un bon moment pour laisser la réponse immunitaire adaptative se développer.
Et puis ce qu'ils ont fait, alors ils ont poursuivi leurs originaux avec leur étude normale où ils ont utilisé les mêmes souris pour ensuite, donner les deux phages dans les bactéries et vu la réponse 24 heures plus tard. Et donc, ce qu'ils trouvent, c'est si vous avez prétraité par rapport à aucun prétraitement de phage. Donc, dans ce cas, il y a eu un prétraitement avec le phage, dans ce cas le prétraitement n'est qu'avec des particules et évidemment, c'est ce qui n'a jamais été exposé aux phages. Qu'est-ce que vous trouvez est à la fois efficace et il n'y a pas de différence entre les thérapies?
Donc, s'il y avait une réponse immunitaire contre les phages, le corps aurait essayé d'effacer les phages et vous n'aurais pas obtenu cette autorisation. Et donc, du moins en termes d'efficacité fonctionnelle, ils ne voient aucune réduction. Ils ont également cherché des anticorps contre les phages dans le sang et ils n'ont pu trouver aucun anticorps et utiliser les phages au moins pour une administration. De toute évidence, cela doit être fait à une durée beaucoup plus longue et dans un

Un modèle chronique pour être capable de dire avec succès que cela va fonctionner ou non. Mais il y a beaucoup de promesses dans ce traitement particulier. Ok ! Donc, nous allons arrêter ici et nous allons continuer dans la prochaine classe.
Je vous remercie.