Loading

Alison's New App is now available on iOS and Android! Download Now

Module 1: Adsorption des protéines

Study Reminders
Support
Text Version

Set your study reminders

We will email you at these times to remind you to study.
  • Monday

    -

    7am

    +

    Tuesday

    -

    7am

    +

    Wednesday

    -

    7am

    +

    Thursday

    -

    7am

    +

    Friday

    -

    7am

    +

    Saturday

    -

    7am

    +

    Sunday

    -

    7am

    +

Vidéos:

Bonjour tout le monde, bienvenue à une autre conférence pour l'ingénierie et les principes de la distribution de médicaments. Je vais vous parler davantage de l'adsorption des protéines.
(Reportez-vous à l'heure de la diapositive: 00:36)

Alors, faisons un bref résumé de ce que nous avons appris dans la dernière classe. Donc, dans la dernière classe, nous avons parlé des protéines pré-adsorbantes sur les surfaces, ce qui veut dire que si je veux une certaine réponse d'une surface, disons que si je voulais lier ces cellules, alors ce que je peux faire, je peux ajouter des protéines ligands à la surface avant même de les mettre avec les cellules, donc ce qui se produira est, ces protéines s'adsorberont sur la surface et commenceront directement à interagir avec la cellule avec leur récepteur de cognate.
Donc, l'avantage est ici, j'ai beaucoup plus de contrôle sur mes surfaces parce que maintenant ils interagissent de la façon dont je veux qu'ils interagissent. Et puis la certitude qu'il y a beaucoup d'applications de ce genre que vous pouvez varier pour moduler cette réponse que vous obtenez. Puis nous avons parlé d'un modèle qui est utilisé pour étudier l'adsorption des protéines, l'un d'entre eux était un modèle monocouche. Alors, qu'est-ce que c'est? Cela signifie que si j'ai une surface, cela signifie simplement qu'il n'y aura qu'une seule couche de protéine, qui s'adsorbe sur la surface pour couvrir tout ce qui est exposé et une fois que cette couche a un adsorb, il n'y aura plus de préabsorption.
Donc, c'est l'hypothèse dans ce modèle monocouche et nous discuterons à nouveau aujourd'hui que ce n'est pas vrai, mais pour le bien de ce modèle, ce sera une orientation comme celle-ci, il n'y aura plus de protéine qui va venir s'adsorber ici. Et puis en même temps nous avons discuté des protéines dures et molles. Donc, ce que nous disons, c'est qu'il y a certaines protéines qui sont assez dures, avec un assez rigide, elles ne changent pas la structure très facilement la structure est très stable et puis il y a des protéines qui sont très sujettes à la dénaturation, leur structure est facilement modifiable. Donc, ces protéines sont appelées protéines molles.
Et puis nous avons parlé de l'orientation et de la structure des protéines, en disant essentiellement que si j'ai une fois de plus une surface qui est exposée à une faible concentration de protéines. Donc, ce qui va se passer, c'est que dans la protéine qui est d'abord adsorbée aura le temps de se développer sur la surface parce qu'elle a toujours ce côté ouvert à côté. Ainsi, il continuera à s'étendre jusqu'à ce que le site soit rempli ou que la protéine atteigne son état heureux en termes d'équilibre.
Donc, c'est un cas dans un milieu de faible concentration alors que, si j'ai une concentration élevée, alors ce qui va se passer, c'est que la protéine qui est initialement adsorbée n'aura pas d'espace à cause de la concentration élevée comme plusieurs autres protéines ont également adsorbé et qu'elle aura tendance à être plus élevée sur une unité donnée ou que la structure de la structure de la protéine restera aussi plus ou moins rigide ou qu'elle ne changera pas vraiment beaucoup.
Puis nous avons parlé de la mouillabilité de la surface elle-même. Donc, ce que nous disions c'est que si nous avons une surface hydrophobe, ce qui signifie qu'elle a une faible mouillabilité, alors elle aura tendance à former des liaisons très fortes avec des protéines, parce que l'environnement extérieur de l'eau n'est pas en compétition avec elle et que les domaines hydrophobes auront tendance à interagir avec cette surface hydrophobe aussi bien la surface ne veut pas aussi interagir avec l'eau. Donc, il y a un processus énergétique, qui provoque beaucoup plus d'interactions entre les protéines et la surface hydrophobe par rapport à nous disons qu'il s'agit d'une surface très hydrophile et que les protéines seront alors adsorbées sur les cellules, mais leur affinité à la surface sera beaucoup plus faible.

(Référez-vous à la diapositive: 04:18)

Donc, après avoir fait tout cela, comme je l'ai brièvement mentionné, ce modèle monocouche est un modèle qui n'est pas vraiment bien accepté à ce moment-là parce que de plus en plus de recherches ont montré qu'il y a effectivement de multiples couches de protéines sur une surface. Donc, pour expliquer cela, on propose simplement un autre modèle, c'est un modèle multicouches.
Et ce qu'il signifie essentiellement, c'est qu'il y a une structure 3D à une protéine cette interface. Donc, même si j'ai une surface, il pourrait y avoir plusieurs couches de protéines qui vont venir s'y attacher. Et essentiellement ce qui va se passer est défini comme une sorte de corona dure et douce. Donc, une couronne dure est définie comme quelque chose qui est assez stable sur une surface, il est très difficile d'extraire cette protéine de la surface. Donc, quelque chose qu'il interagit directement avec le matériau et il est très proche du matériau est typiquement appelé une couronne dure et quelque chose qui vient ensuite et puis interagit avec cette couronne dure est appelé une couronne molle.
Et toute la raison de la corona douce à se produire et ceci pourrait être une nanoparticules ou l'implant, il n'est pas nécessaire qu'il s'agit d'une particule, il pourrait s'agir d'un dispositif en vrac et la raison pour laquelle cette couronne douce commence à interagir avec la corona dure parce que cette couronne dure a en fait un changement dans la structure. Donc, ceci n'est pas représenté dans cette image, mais disons que cette protéine circulaire est maintenant devenue elliptique où son adsorbe. Donc, il a maintenant exposé de nouveaux sites au corps qui n'ont jamais été exposés plus tôt. Donc, maintenant, il pourrait y avoir une autre protéine qui vient et qui s'attache à ces sites exposés et qui a une certaine affinité avec eux. Donc, c'est pour ça que vous obtenez la couronne molle et qu'il ne s'agit peut-être pas d'une interaction très forte à ce stade, mais ils ont une certaine interaction avec elle.
Donc, comme encore une fois est représenté ici aussi, donc vous avez une surface physique, puis vous avez une certaine quantité de protéines qui vient et puis il y a d'autres protéines qui viennent en tête de ces protéines et cela crée essentiellement une couronne entière de protéines autour d'une particule.
(Référez-vous à la diapositive: 06:34)

Et puis il y a un autre concept appelé "adsorption compétitive". Donc, ce que c'est, c'est l'équilibre de la protéine adsorbée dans la composition est défini par la quantité de protéine totale d'abord sur le site et ensuite ce qui est la concentration relative des protéines. Il s'agit donc de phénomènes très complexes et très mal compris pour la plupart des matériaux que nous utilisons, et la cinétique de ce phénomène est également devenue importante. Donc, ce qu'il dit essentiellement c'est que si j'ai une surface, d'abord la quantité de protéine qui arrive dépend de la quantité totale de protéines qui est adsorbée.
Cela dépend du nombre de types de protéines qui y sont, puis cela dépendra aussi de leurs concentrations. Donc, bien sûr, toutes les protéines n'auront pas la même concentration-certaines seront très élevées, d'autres seront très basses et la cinétique devient aussi importante. Donc, si nous disons une protéine même si elle est une concentration plus faible, elle est complètement adsorbée sur la surface très rapidement, alors elle dominera ou sinon l'inverse se produira pour d'autres types de situations.

Donc, la cinétique de ces protéines d'adsorption et de nouveau la cinétique des différentes protéines sera différente et ensuite elle dépend aussi du temps et de l'emplacement de l'implant et pourquoi je dis que c'est parce que ce qui se passera au fil du temps nous permet de dire que l'environnement est en train de changer, qu'il y a plus de cellules qui arrivent, qu'elles sécrètent plus de protéines et que les concentrations de protéines changent, que les types de protéines sont en train de changer et que ce qui va se passer, c'est que cet équilibre qui est maintenu va changer en permanence ou si l'implant est en train de bouger ou de nous laisser sa particule qui est Traverser le corps et, bien sûr, vous aurez des effets différents à ce moment-là.
Donc, en disant essentiellement que la couche adsorbée de cette composition est assez dynamique et typiquement comme je l'ai décrit précédemment, la couronne dure est encore relativement stable, mais elle peut être dynamique et ce qui peut aussi se produire, c'est que les protéines qui sont adsorbées peuvent être déplacées par d'autres protéines au fil du temps avec une très haute affinité. Alors, disons que si j'ai une protéine adsorbant sur une surface avec une certaine affinité x et ensuite j'ai une autre protéine avec une affinité de 4 x, même si cette protéine est à une concentration plus faible et peut-être qu'elle a pris du temps pour diffuser à la surface et x est déjà adsorbée à elle, ce qui va se passer, c'est que cette protéine sera finalement capable de le déplacer lentement et lentement, car un équilibre dit que l'affinité plus élevée dominera sur la plus faible affinité. Donc, à ce phénomène particulier où essentiellement les protéines de haute affinité sont appelées à remplacer les protéines d'affinité inférieure de la surface est aussi connue comme effet Vroman -vous verrez que nous avons utilisé un peu dans la littérature. Alors, juste quelque chose à retenir.

(Référez-vous à la diapositive: 10:08)

Donc, encore une fois juste pour résumer cette adsorption protéique, nous disons que les matières étrangères synthétiques n'acquièrent de la bioréactivité qu'après avoir d'abord interagissant avec des protéines dissoutes.
Donc, je veux dire, même si j'ai un matériau qui n'a pas de sites qui peuvent se lier à la cellule, ce qui se passera est que les protéines s'adsorberont sur elle, ces protéines auront des sites qui peuvent se lier à la cellule et c'est ainsi qu'elles peuvent médier l'interaction cellulaire et donner une bioréactivité à la surface.
Et tout type d'interaction cellulaire ou d'interaction enzymatique qui va se produire sera médié par cette couche protéique. Et puis il y a quelques principes d'adsorption des protéines.
Il y a un site d'adsorption limité et donc, il y a beaucoup de compétition qui se passe entre les protéines pour se faire représenter à la surface et ensuite il y a des forces motrices qui pourrait être plusieurs choses-pourrait être l'hydrophobicité et tout.
Les surfaces elles-mêmes vont changer ; je veux dire si j'utilise PLGA contre PEG par opposition à la PLA versus PCL, tous ces éléments ont une hydrophobicité différente, l'hydrophilicité, ont des groupes de surface différents, ont une interaction différente avec les protéines.
Ainsi, le type de protéines qui peuvent absorber sur ces surfaces sera très différent et, encore une fois, l'activité biologique de la protéine adsorbée varie sur différentes surfaces comme nous venons de l'examiner.
Ainsi, une fois que la protéine s'adsorbe, plus elle change de conformation, le moindre sera son activité. Donc, si une protéine qui a une structure comme celle-ci, est absorbée et devient une structure comme celle-ci, elle a changé beaucoup de structure. Ainsi, son activité peut être gravement endommagée ou ne pas être même active du tout, alors que, si la même chose s'apparente à cela, elle est assez similaire. Donc, vous pouvez penser à un scénario où cela peut être encore 70 à 80% actif que lorsqu'il était en solution, de sorte que ces choses peuvent aussi varier.
(Référez-vous à la diapositive: 12:11)

Donc, encore une fois, ceci montre comment une nanoparticules interagissant réellement avec la cellule, la cellule n'est pas réellement vue la surface de nanoparticules directement parce qu'elle est déjà adsorbée à la surface en moins de millisecondes et qu'elle interagit effectivement par l'intermédiaire de la protéine adsorbée. Il devient donc très important d'étudier l'adsorption des protéines.
Et une autre chose intéressante, c'est que vous pouvez conjuguer une particule avec divers ligands, vous pensez qu'ils peuvent être utilisés pour interagir avec la surface de la cellule, mais regardez ce qui s'est passé une fois que vous l'avez mis dans les médias il y a tout un tas de couche d'adsorption de protéines qui est entrée et ce ligand spécifique de ciblage n'est même pas accessible à la cellule. Il peut être accessible dans certains cas dépend de la surface et du ligand lui-même, mais c'est quelque chose à considérer pendant que vous placez ces ligands qu'ils peuvent ne pas être en fait directement interagir avec la cellule.

(Heure de la diapositive: 13:08)

Et parlons de comment nous pouvons étudier cette quantification de la protéine à la surface. Donc, une chose est de faire une PAGE de SDS. Et donc, c'est assez simple ce que vous faites est de mettre votre implant ou votre particule et d'incuber avec nous dire du sérum et donc, ce qui se passera, ce qui va se passer, quelles que soient les différentes protéines, il y aura des protéines différentes, l'adsorb et le sérum ne sont qu'un exemple que vous pouvez mettre dans un autre fluide, peut-être que si vous allez le donner aux poumons à l'innovation, vous allez le mettre dans le liquide pulmonaire ou le lavage, si vous allez le donner par voie orale, vous pouvez peut-être le mettre avec de la salive.
Donc, il y a toutes sortes de fluides biologiques qui peuvent être utilisés-dépend de l'application. Donc, une fois que ces protéines ont été enrobées sur cet implant, vous prenez cet implant, je veux dire encore une fois, comme je l'ai dit, il s'agit d'une question de millisecondes dont nous parlons. Donc, vous pouvez les laisser pendant quelques minutes et prendre l'implant que vous centrifuger pour enlever tout ce qui est externe et de le suspendre nous disons dans l'eau et une fois que vous l'avez fait, vous pouvez utiliser une PAGE SDS.
Donc, la SDD est à nouveau un détergent très fort. Donc, ce qu'il fait c'est que cela dénote complètement la protéine et interagit avec la protéine dans une telle affinité qu'elle vient de cet implant à la fois la corona dure et la couronne molle. Et puis vous pouvez juste exécuter un gel PAGE qui n'est rien, mais comme un gel qui sépare la protéine sur la base de sa taille ou de son poids moléculaire et à cet égard, vous pouvez étudier ce que toutes les protéines sont là par transfert de l'ouest.

Donc, j'espère que tout le monde connaît le buvardage de l'ouest-tout ce qu'il est pour le transférer à une membrane, puis une fois qu'il est transféré à une membrane, disons maintenant que c'est la membrane elle-même que vous pouvez venir avec des anticorps contre les protéines connues. Donc, disons que si je prédis la fibronectine est une des protéines qui s'implique, je vais entrer avec l'anticorps de la fibronectine et incuber avec ceci. Donc, si la fibronectine est une des protéines qui était sur l'implant, alors ce corps vide va aller et se lier à la fibronectine et je peux marquer cet anticorps avec un peu de fluorophore dans un premier temps, donc ça va commencer à fluorescer ou je peux mettre un peu d'enzyme et laisser une certaine couleur autour de cette bande.
Ainsi, je sais que la fibronectine présente dans ce milieu ou qu'elle n'est pas présente dans ce milieu et que vous pouvez aussi le faire pour plusieurs autres protéines. Donc, encore une fois, cette méthode est assez semi-quantitative, elle n'est pas très quantitative. Une autre bonne façon de le faire est d'utiliser quelque chose de bien une résonance plasmon de surface qui est encore très largement utilisée. Donc, son très sensible et dépend du diélectrique de la surface. Donc, ce que vous pouvez faire est, vous pouvez prendre votre surface que vous voulez tester. Donc, c'est ici ; vous pouvez le recouvrir avec une couche de métal. Donc, dans ce cas, disons que si nous avons recouvert d'or.
Donc, une fois que les protéines s'adsorbent, le diélectrique de cette couche protéique particulière va être différent de votre surface initiale et parce que sa différence vous permet de briller une lumière-elle va être dispersé différemment et vous pouvez le lire à travers un détecteur et cela va vous donner un effet plasmon de surface parce que le diélectrique est changé et que vous pouvez ensuite quantifier en exécutant certaines normes de quantités connues, vous pouvez ensuite quantifier si la protéine est d'abord adsorbant et interagissant avec la surface.
Ensuite, si c'est alors la quantité de protéines qui vient à la surface parce que ce diélectrique sera directement lié à la quantité de la protéine qui est venue et s'adsorbe sur la surface. Donc, c'est une façon de pouvoir étudier l'adsorption des protéines.

(Reportez-vous à l'heure de la diapositive: 17:23)

Donc, ce que nous allons faire, nous allons prendre un exemple de la littérature-c'est juste pour vous donner une idée de la façon dont la recherche est en cours. Donc, c'est un article qui a été publié tout à l'heure en 2010 et il s'agit de la façon dont la nanoparticules peut induire le déploiement d'une protéine appelée fibrinogène, ce qui se traduit ensuite par une signalisation par un récepteur appelé récepteur Mac- 1 et qui provoque une inflammation. Donc, voici un exemple de la façon dont un matériau étranger introduit provoque une inflammation. Donc, plus une table mécaniste.
(Reportez-vous à l'heure de la diapositive: 17:59)

Donc, ce que les auteurs ont fait dans ce document, c'est qu'ils ont pris des nanoparticules d'or. Donc, c'est une nanoparticule d'or, ils ont enduit ces nanoparticules d'or avec des polymères-au cours de la synthèse, il utilise divers polymères et l'un d'eux est l'AAP qui est l'acide polyacrylique polychimique.
Alors, qu'est-ce qu'ils ont fait? Ils ont enrobé l'or avec de l'acide polyacrylique, puis ils l'ont incubé avec une protéine appelée fibrinogène-sa protéine très largement disponible et il est trouvé assez abondant dans notre sérum aussi. Donc, et ce qu'ils ont montré dans cet article est bien cette adsorption se produit, il active Mac-1 sur les cellules immunitaires ou en fait sur d'autres cellules de mammifères.
Et une fois qu'il active Mac-1-Mac- 1 va dans le noyau que la signalisation va dans le noyau et provoque la régulation de la voie NF-kB qui est très connue pour être un régulateur maître de l'inflammation et qui provoque la libération de lots de cytokines inflammatoires et qui peut provoquer des réactions dans le corps, vous pouvez commencer à faire de la fièvre-une réponse très similaire à quand nous tombons malades.
(Référez-vous à la diapositive: 19:41)

Alors, allons un peu plus en profondeur, donc ce qu'ils ont fait, c'est qu'ils font trois tailles différentes de particules. Donc, 5,10 et 20 nanomètres de taille-c'est le diamètre et ensuite ce qu'ils ont fait, ils ont incubé ceci avec le sérum et ensuite le même processus que je viens de décrire avec le SDS-PAGE. Donc, c'est juste une SDS-PAGE. Donc, ce que vous pouvez voir ici, c'est que plusieurs types de protéines sont présentes et adsorbés sur ces protéines et ce que vous voyez ici est 5 nanomètre a un peu de protéines et 20 nanomètres a moins de protéines pour le même montant de protéines.

L'or. Et ce qu'ils ont surtout observé, c'est que les chaînes de 65, 55 et 45 kDa du fibrinogène étaient très abondantes.
Donc, essentiellement quand je parle de ça, je regarde 65 qui est ce type, le 55 qui est ce type, puis le 45 qui est ce type. Donc, ces trois bandes ont été très en vue chaque fois qu'elles ont fait cette expérience. Donc, ils ont découvert que ce n'est en fait rien, mais trois chaînes différentes de fibrinogène.
(Référez-vous à la diapositive: 20:48)

Donc, c'est ce qu'ils décrivent ici. Donc, le fibrinogène comprend trois chaînes de protéines, l'alpha, le bêta et le gamma, et c'est la confirmation-une molécule assez grande de 45 nanomètre et c'est un dimère. Donc, ce qu'ils sont en plus démontré, c'est que ce terminal C qui est assez couvert dans une structure protéique normale comme vous pouvez le voir ici possède un site de liaison pour un récepteur appelé Mac- 1 sur une cellule.
Le récepteur Mac- 1 peut donc se lier à ce site même si le site n'est généralement pas exposé. Ainsi, le Mac- 1 ne se lie pas au fibrinogène en soi, à moins que la structure du fibrinogène soit quelque peu endommagée ou dénaturée, de sorte que ce site Mac- 1 soit exposé. Et puis ce que cela a montré, c'est que l'addition de ces nanoparticules d'or enrobées de l'AAP a entraîné la perte de la structure secondaire des protéines. Donc, comme vous pouvez le voir ici, donc ce qu'ils ont montré c'est qu'il s'agit d'un dichroïsme circulaire de sa méthode qui mesure les structures secondaires de la protéine. Ainsi, les protéines lorsqu'elles se plient ont des structures comme l'alpha-hélice et les beta-feuilles et d'autres aussi. Donc, ces hélices alpha et bêta ont une certaine longueur d'onde à travers laquelle elles donnent des signaux.
Donc, s'il s'agit d'une structure protéique normale que le C dans ce cas. Donc, cette ligne rouge est une protéine normale, donc cela signifie que si vous obtenez cette ligne rouge la protéine est dans cette configuration particulière ; mais comme vous ajoutez de plus en plus de nanoparticules d'or à votre solution ce que vous trouvez c'est que la structure est en train de changer et vous pouvez voir ce signal que vous obtenez de la structure secondaire est en fait en train de diminuer à mesure que vous allez de l'avant.
Donc, c'est censé être la plus forte concentration. Donc, à ce stade, vous parlez d'environ 10 microgrammes par ml de fibrinogène et donnez-le à ce microgramme de 40 microgrammes par ml de vos particules d'or.
Et juste pour montrer que l'or lui-même n'a pas de structure secondaire, ils vont juste courir seul l'or. Mais ce que vous pouvez voir, c'est qu'il y a un peu de changement dans la structure ou la perte de la structure secondaire, ce qui prouve qu'une fois que cette protéine va sur les particules, elle change de structure.
(Référez-vous à la diapositive: 23:24)

Ils ont ensuite montré que ce fibrinogène a une liaison sélective pour vos récepteurs Mac- 1. Donc, ce qu'ils ont montré, c'est qu'ils ont utilisé des cellules THP-1 qui sont des monocytes humains ; et ce THP-1 a un récepteur Mac- 1. Et puis un autre, ils utilisent HL-60 qui n'a pas de récepteur Mac- 1.

Donc, ce qu'il y a ici c'est si vous venez de mettre des protéines, la quantité de protéines qui est liée à la surface de la cellule est relativement faible, mais une fois que vous avez mis des protéines plus d'or nanoparticule que vous avez une quantité de protéines qui va sur la cellule et la raison de cela est maintenant parce que le site récepteur Mac- 1 est maintenant accessible, le récepteur Mac- 1 sur la surface de la cellule peut maintenant se lier à

Ceci.
Alors que, dans la lignée cellulaire négative, vous ne voyez pas ça et si vous couvrez avec l'albumine aussi vous ne voyez pas ça, parce que déjà l'albumine a enrobé la particule. La particule ne peut donc pas se lier au fibrinogène. Donc, juste décrire ce que je viens de dire qui provoque le dépliage et c'est pourquoi il peut interagir avec le récepteur Mac.
(Référez-vous à la diapositive: 24:47)

Et puis ces gars sont allés plus loin et ont montré que les expériences qu'il a faites avec 20 nanomètres n'ont montré aucune protéine liée significative. Donc ce qu'ils ont fait c'est de nouveau votre protéine liée sur ces cellules THP-1 et ce qu'il faut voir si vous n'avez que le fibrinogène, sa structure est préservée. Donc, ça ne cause rien. Si vous avez 5 nanomètres exactement comme la dernière figure, il cause beaucoup de liaison de la protéine. Si vous utilisez 20 nanomètres, ce que nous avons montré plus tôt, il ne se lie pas et change la structure que beaucoup, vous voyez à nouveau il y a une réduction de cette protéine qui est adsorbée.

(Référez-vous à la diapositive: 25:27)

Et puis ils ont montré que vous pouvez utiliser un inhibiteur de ce récepteur Mac- 1 particulier et donc, si vous mettez des récepteurs qui se lient au Mac-1, alors votre protéine enduit de fibrinogène sur la particule ne peut se lier à ceci et donc c'est ce qu'ils ont montré ici. Donc, la protéine liée est en fait décroissante alors que, si vous utilisez un autre peptide qui n'a pas d'affinité, elle ne fait rien. Donc, c'est une confirmation supplémentaire qu'il s'agit d'un récepteur Mac-1 qui interagit réellement avec votre protéine.
(Référez-vous à la diapositive: 26:02)

Et puis ils sont allés de l'avant et ont montré que la liaison du fibrinogène active la signalisation NF-kB. Donc, si vous prenez ce dernier exemple ce qu'ils ont fait c'est qu'ils ont ajouté tous les fibrinogènes, les nanoparticules d'or de l'AAP, ainsi que les anticorps qui se lient au domaine NF-kB P65 et ainsi, ce que vous pouvez voir, c'est parce que vous obtenez un grand changement.

Donc, si NF-kB nous a laissé dire a été pour un exemple x kDa et nous disons dans un gel normal le x kD viendra ici. Une fois qu'il se lie à l'anticorps, son poids moléculaire est augmenté par x plus le poids moléculaire des anticorps, de sorte qu'il est maintenant allé et s'est déplacé vers le haut. Donc, une nouvelle confirmation que ce fibrinogène lié à la nanoparticules d'or n'est pas seulement en train d'activer Mac-1, mais que cela provoque une nouvelle signalisation dans l'est en fait à l'origine d'une expression de NF-kB.
(Référez-vous à la diapositive: 27:09)

Et puis, comme je l'ai dit, NF-kB est un régulateur maître. Donc, il sécrète beaucoup de cytokines.
Donc, dans ce cas, vous voyez IL-6, IL-8 et TNF alpha qui sont deux cytokines inflammatoires. Donc, leur niveau d'expression augmente lorsque vous avez une signalisation NF-kB et qui est à nouveau une cause majeure de l'inflammation qui se produit. Ainsi, de nouveau les cellules THP-1 ont été utilisées ici qui ont montré que la sécrétion d'IL-8 et de TNF alpha.

(Référez-vous à la diapositive: 27:38)

Et donc, est-ce que la caractéristique de surface influence en fait la liaison aux protéines? Donc, ce qu'ils ont fait c'est, maintenant le changement de surface.
(Référez-vous à la diapositive: 27:45)

Donc, dans ce cas, ce qu'ils ont fait c'est quand ils ont fait ces particules d'or qu'ils ont continué à réduire la concentration de l'AAP, l'AAP, comme je l'ai dit est l'acide polyacrylique, qui est fortement chargé négativement. Donc, quand on utilise 100% de l'AAP, on obtient une particule chargée assez fortement négative, le potentiel zêta est un moyen de mesurer la charge et, comme vous diminuez cette AAP, la charge augmente parce que cette charge négative est en baisse et donc, ce qu'ils montrent maintenant, c'est que votre liaison protéique est en fait à la baisse sur les particules d'or lorsque vous changez la charge.
Donc, ils ont remplacé l'AAP par cette PDHA et ils vous montrent de plus que la charge est ce qui est responsable de la liaison de cette protéine à ces cellules et si vous avez des charges plus basses, alors votre fibrinogène n'est pas lié à votre particule d'or ou même si sa liaison, il ne s'expose pas à Mac-1. Donc, ceci comme une densité de charge de surface est une liaison critique ou fibrinogène dans ce cas. Donc, je pense que c'est là que nous arrêterons et que nous allons aller plus loin dans la prochaine classe.
Je vous remercie.