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Module 1: Systèmes de mainlevée et hydrogels

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Bonjour, tout le monde. Bienvenue à une autre conférence sur le génie et les principes de la prestation de médicaments. Nous parlons actuellement des Hydrogels et nous allons continuer dans cette classe comme les deux dernières classes.
(Reportez-vous à l'heure de la diapositive: 00:42)

Reprenons rapidement ce que nous avons appris dans la dernière classe. Donc, nous avons parlé des hydrogels, nous avons parlé des hydrogels physiques, qui essentiellement nous avons parlé de l'ionique dans ce cas, puis nous avons parlé des hydrogels chimiques, nous avons parlé de la façon dont ils sont formés. Donc, il s'agit essentiellement de la différence majeure entre le produit chimique et le physique. Les propriétés physiques sont essentiellement des enchevêtrements de chaînes moléculaires alors que le produit chimique peut avoir un lien réel qui est présent entre ces chaînes de polymères.
Et puis nous avons parlé de processus de synthèse. Ainsi, en général, le processus de synthèse des hydrogels physiques implique soit le chauffage, soit le changement de pH, soit tout autre déclencheur qui amène ces chaînes à interagir entre elles et à former ces gels. Alors que, les hydrogels chimiques, tout ce que vous avez à faire est juste d'ajouter le croisé ou d'activer d'une manière ou d'une autre

Les groupes ; il pourrait être soit par la lumière, soit il pourrait être ajouté du glutaraldéhyde ou d'une autre sorte de linker qui fait que ce déclencheur se produise.
Puis nous avons parlé de quelques calculs de la taille des pores. Donc, très brièvement, nous en avons discuté. Nous allons en discuter davantage dans les classes futures et ensuite nous avons parlé de la cinétique de diffusion des médicaments. Alors, comment pouvons-nous modéliser, comment le médicament va se diffuser. Donc, nous avons découvert que nous pouvons juste utiliser la loi de Fick et tout ce que nous avons à vraiment changer, c'est le coefficient de diffusion D, qui sera alors affecté si le gel est micro poreux ou macro poreux.
Donc, ce micro-poreux D n'a pas vraiment beaucoup de rôle à jouer ici. Bien qu'il y ait quelques facteurs qui se sont ajoutés, alors que, s'il est micro poreux puis avec ces facteurs, nous ajoutons un autre coefficient de partage Kr parce que ces molécules de médicaments vont maintenant commencer à interagir avec ça aussi.
(Référez-vous à l'heure de la diapositive: 02:24)

Parlons donc des hydrogels de réticulation in situ. Ceci pourrait être n'importe lequel des deux hydrogels précédents si nous parlions, à la fois physique ou chimique, mais ce qui signifie essentiellement in situ, c'est que ces gels peuvent traverser le lien sur le site. Donc, c'est très souhaitable lorsque vous parlez de n'importe quel type de livraison parce que ce que vous pouvez faire c'est que vous pouvez avoir des composants individuels. Vous pouvez mélanger ces deux composants ensemble et une fois que vous mélangez ces deux composants ensemble, le déclencheur est essentiellement donné pour que la polymérisation commence et ces choses polymérisent dans un certain laps de temps. Il peut s'agir d'une période de quelques secondes ou d'une période de minutes.
Alors, pourquoi c'est souhaitable? Disons que si je suis un clinicien, je suis médecin et j'essaie d'injecter quelque chose à travers une seringue et je veux avoir un système d'hydrogel pour que ce médicament soit libéré avec le temps. Donc, tout ce que je peux faire, c'est que je peux mélanger les deux composants ensemble dans la seringue et injecter directement dans le patient et ce qui va se passer est à ce moment ou dans ce déclencheur cette chose va polymériser et où qu'on l'injectera, il y restera et sorte de forme un dépôt. Donc, ils appellent in situ parce qu'ils forment de l'hydrogel à l'intérieur du corps.
Et le déclencheur de polymérisation pourrait être plusieurs types. Donc, un déclencheur est le temps. Donc, vous n'avez qu'à mélanger deux composants ensemble et ça peut être comme si j'ai dit quelques secondes 10 secondes, 20 secondes ou il pourrait être des minutes, 2 minutes, 3 minutes et dans la mesure où la polymérisation commencera. Il peut s'agir d'un droit de température, je veux dire que je n'ai peut-être même pas à faire quoi que ce soit dans cette seringue. Donc, en seringue est complètement stable je n'ai même pas besoin de me dépêchez, mais je veux dire la température nous laisse dire 25 degrés Celsius, mais quand j'ai injecté dans le corps notre température corporelle est de 37 degrés Celsius. Donc, parce que maintenant, il ya ce changement de température quelque chose a été activé qui cause la polymérisation, le gélier à se produire et que le déclencheur de 25 à 37 degrés Celsius suffit qu'il a fait des polymérizes nous laisser dire en quelques secondes. Ou il pourrait s'agir du pH. Disons et cela pourrait être de nouveau plusieurs types. Disons dans mes deux tubes que je mélange ensemble, le pH combiné du polymère ici nous laisse dire est le pH de 5 auquel il ne polymérise pas.
L'autre tube contient essentiellement de l'hydroxyde de sodium nous laisser dire avec un pH de 8, mais quand je les mélange ensemble qui conduit à un pH de 7 et au pH de 7, cette chose commence à polymériser. Donc, ça pourrait arriver que je ne m'inquiète pas du mélange avec le NaOH. Je viens de l'injecter dans le corps et un pH corporel est d'environ 7 voies et donc lorsque cette diffusion dans, il peut provoquer la polymérisation. Donc, l'une de ces choses peut être explorée si vous parlez de gélation in situ.
Il y a certains inconvénients. De toute évidence, il y a beaucoup et beaucoup d'avantages, mais il y a des inconvénients. La première est que cela sera diffus dans tout le corps. Je veux dire si je me laisse dire de l'injecter dans un espace qui est très fluidique, disons, si c'est dans mon estomac ou dans ma cavité péritonéale ou dans n'importe quel endroit qui a beaucoup de diffusion et de convection qui se déroule alors avant qu'il puisse polymériser il peut se diffuser dans tout le corps. Je n'ai pas vraiment de contrôle de la forme.
Donc, c'est un gros problème parce que, comme vous le savez, la plupart de ces cinétiques de diffusion dépendront de ce qu'est la région à travers laquelle elle sort du système. Donc, si la zone est compacte et que le médicament ne sort que de cette surface, vous aurez un taux de libération différent où, alors qu'en cas de croisement in situ ce qui se passera est une fois injecté dans le corps, il peut prendre n'importe quelle forme bizarre qu'il coule avant de se polymériser et maintenant vous avez une surface beaucoup plus grande et une surface beaucoup irrégulière à travers laquelle le médicament peut commencer à diffuser. Dans ce cas, il est très difficile pour moi de modéliser la quantité de médicament qui va sortir dans un certain temps.
Il s'agit donc de certains défis. Un autre avantage ici est évidemment, si je cherche à combler un défaut, disons, disons une blessure et une partie de mon muscle est partie et je veux le remplir avec un gel contenant des cellules, tout ce que je dois faire, c'est juste mettre un peu de liquide dessus. Le liquide prendra automatiquement la forme, disons si c'était mon muscle et il y a eu un accident par lequel il s'agit de la forme qui doit être remplie. Maintenant, je n'ai même pas besoin de vous soucier de concevoir la forme. Ce que je peux faire, c'est que je peux le remplir avec le polymère et une fois qu'il s'agit de gels, il suffit de prendre la structure que je veux.
Il y a donc certains avantages, mais il est évident qu'il faut examiner le type de demandes que nous examinons avant de pouvoir aller de l'avant. Donc, encore une fois, c'est très largement utilisé dans la recherche et il y a beaucoup d'espoir que cela soit traduit dans la clinique. Nous parlerons d'un grand document de recherche à ce sujet pour le comprendre.
Le document va également examiner différentes choses. Alors, allons-y.

(Référez-vous à la diapositive: 07:34)

Donc, dans ce cas, c'est un papier qui utilise une liaison croisée in situ, mais c'est là ce que j'essaie de faire, c'est en gros de vous donner quelques idées sur la façon dont ces hydrogels sont utilisés dans le système.
Ainsi, dans ce document particulier, ce qu'ils font, c'est qu'ils utilisent une liaison croisée à base de maléimide d'un hydrogel de PEG pour améliorer la cinétique de la réaction dans la réticulation à se produire tant pour l'encapsulation des cellules que pour le droit de livraison in situ. Donc, dans ce cas, le médicament est en fait des cellules et ils veulent faire un système qu'ils peuvent juste injecter dans le corps et ne pas avoir à s'inquiéter des chirurgies et de tous.

(Référez-vous à la diapositive: 08:13)

Donc, dans ce cas, l'objectif de l'étude est d'utiliser un maléimide comme une alternative de liaison croisée au polyéthylène glycol et quand je dis alternative, il y a différents types de méthodes de réticulation et voir qui est très largement utilisé.
Donc, avant que ce papier ne soit sorti, les gens utilisaient généralement l'acrylate ou nous disons certains LHN d'EDC ou d'autres utilisent une autre forme de couplage, mais maintenant ce document propose d'utiliser une liaison de base de maléimide. Donc, ce qu'ils ont fait, c'est qu'ils ont comparé les portions de réticulation qui sont de nouveau comme des acrylates, des diacrylates et du sulfone de vinyle qui est un autre groupe fonctionnel.

(Référez-vous à la diapositive: 08:57)

Ainsi, le maléimide tel que nous l'avons discuté dans le passé est une structure comme celle-ci en présence de thiols qui réagit avec le groupe sulfhydryle. Ainsi, les thiols ont tous une sulfhydryle. Donc, quelque chose comme la cystéine ou tout autre groupe thiol pourrait être présent à cause d'une autre molécule et cela va réagir directement avec ceci. Donc, ceci est de nouveau très largement utilisé dans les réactions peptidiques peptidiques, mais ici ils proposent maintenant de l'utiliser avec des hydrogels.
La cinétique de la réaction est très rapide, comme vous le verrez dans le reste des données de ce papier. Ceci a une très grande spécificité pour les thiols. Donc, à un pH physiologique, c'est à nouveau pour la plupart des applications biologiques que nous étudions le pH physiologique. Ce groupe de maléimide a donc une affinité et une spécificité très élevées pour les thiols. Donc, il n'y aurait pas trop de réactions qui se produisent.

(Heure de la diapositive: 09:50)

Alors, voyons ce qu'ils ont fait dans ce document. Donc, ils ont utilisé des hydrogels. Ce sont là encore, comme je l'ai dit, ces réseaux de polymères à liaison croisée hydratée. Il s'agit d'un analogue synthétique des matrices extracellulaires dans lesquelles se trouvent les cellules. Donc, c'est une structure très similaire comme je l'ai dit dans les deux dernières classes et il y a une facilité de modification et vous pouvez les modifier. Elles se traduiront par des propriétés bioactives qui sont indépendantes de ce que vous encapsulez dans ces propriétés.
Et dans ce cas, ils utilisent le PEG hydrogel. Encore une fois, comme je l'ai dit, le PEG est très largement utilisé.
Donc, et quelque part, nous savons déjà qu'il s'agit d'une très faible adsorption de protéines. Il est en fait utilisé dans différents domaines pour éviter que l'adsorption des protéines ne se produise. Il est à l'origine d'une inflammation minimale. Bien que nous ayons parlé de certains anticorps du PEG faibles, mais en général s'il n'y a pas d'anticorps du PEG, il provoque une très faible inflammation.
La sécurité de l'utilisation en vivo; encore une fois, elle a été très largement utilisée depuis quelques décennies et il y a beaucoup de produits disponibles sur le marché qui ont utilisé différentes fonctionnalités pour y être incorporés. Donc, tous ces deux sont un plus.

(Heure de la diapositive: 11:08)

Voici quelques-unes des méthodes qu'ils ont utilisées. Comme je l'ai dit, ces maléimides vont réagir avec les thiols pour former ce lien thioéther et ce qu'ils ont fait est qu'ils ont acheté le PEG commercialement disponible qui a les quatre groupes d'acrylate, c'est un PEG à 4 bras. Donc, voici le lien croisé entre les quatre bras du PEG. Donc, c'est le bras 1, le bras 2, le bras 3, le bras 4 et chacun de ces bras contient un groupe maléimide à la fin. Donc, et au lieu de maléimide ils ont aussi fait des modifications similaires et j'ai un acrylate et un sulfone de vinyle qui sont deux des groupes qui ont été utilisés un peu au moment de la publication de cet article.
Et là encore, cette réaction se produit à un pH de 7,4. Le TEA est un catalyseur de ce genre, et donc pour l'acrylate, la polymérisation se produit sur la base d'une liaison de croisement UV et la sulfone de vinyle réagit aussi avec les thiols pour former des liaisons.

(Heure de la diapositive: 12:09)

Et donc, c'est ce qu'ils ont fait qu'ils ont fait des réactions. La réaction qu'ils ont faite est qu'ils ont un "PEG macromer", ils mettent un ligand adhésif. Pourquoi cela est-il nécessaire? Qu'est-ce que vous voulez dire par un ligand adhésif? Il s'agit d'un ligand qui réagit ou qui interagit avec les cellules et qui amène la cellule à y adhérer. Comme nous l'avons dit, le PEG n'autorise aucune adhésion. Donc, ils ont mis quelques ligands adhésifs sur ici qui permettront au PEG d'être compatible avec les cellules. Les cellules peuvent maintenant s'y lier.
Et donc, une fois qu'ils ont fait ça, ils ont une structure comme celle-ci, où disons à n'importe quel rapport qu'ils nous font dire qu'ils le mettent dans un rapport de 1 est à 1, puis chacun de ces macromères de PEG aura pour résultat une moyenne aura un de ce ligand adhésif et ensuite ils ont un autre marqueur de croix peptidique. Donc, c'est une sorte de linker qui contient des thiols. Donc, celui-ci contient aussi du thiol, mais ce n'est qu'un seul thiol. Donc, il peut réagir une fois, mais il ne forme pas de gel, mais dans ce cas maintenant ils parlent d'un peptide qui contient du thiol aux deux extrémités.
Donc, maintenant il peut essentiellement traverser le lien dans tout un réseau comme celui-ci. Et ils ont utilisé des conditions différentes qu'ils ont utilisé le peptide adhésif à 4 milli molaires ou 400 millimolaires, ils ont utilisé des temps différents jusqu'à une heure et puis la réticulation est faite par un peptide qui est aussi clivable qui est une protéase cléable, donc, cela signifie que les cellules peuvent sécréter des protéases. Alors, disons que la cellule veut se déplacer et qu'elle est piégée dans ce maillage géant, donc, si une cellule est ici et qu'elle veut sortir d'ici, elle ne peut que sécréter une certaine protéase, se dégrade, et cela s'ouvrira et la cellule pourra sortir.
Et donc, tout ceci a abouti à cette structure d'hydrogel comme vous pouvez le voir ici, c'est qu'ils l'ont formé en forme de disque. Donc, il a juste pris la forme du disque dans lequel ils se sont formés et il a résulté en hydrogel.
(Heure de la diapositive: 14:10)

Parlons d'une partie de la chimie des réticulation qu'ils ont utilisée. Donc, comme je l'ai dit, l'acrylate est une polymérisation radicale. Donc, si vous avez des méthodes basées sur l'UV, un initiateur de photo est utilisé, ce qui entraînera une polymérisation. Rappelez-vous que l'inconvénient est bien sûr que l'UV lui-même est toxique pour les cellules et que l'initiateur de la photo est également toxique pour la cellule. Donc, vous pouvez en fait avoir réduit la viabilité des cellules là. Donc, c'est un problème qui a été identifié avec l'acrylate, un peu de temps.
Et il n'est pas vraiment très favorable à une livraison in situ et nous en parlerons que cela ne se fait pas vraiment très rapidement. La réaction est très lente et dans la réaction est lente et si vous l'injecte, disons que c'est si ça prend 30 minutes et ensuite 30 minutes tous vos composants d'hydrogel seront juste diffus dans votre corps et il ne forme pas vraiment un dépôt sur le site où vous l'injecte.

Et puis l'autre réaction est l'addition de type Michael et donc, il s'agit essentiellement d'une réaction de Michael où un ajout nucléophile se produit sur un autre nucléophile. Donc, c'est ce qu'ils ont utilisé pour réagir le maléimide aux thiols.
(Référez-vous à l'heure de la diapositive: 15:27)

Donc, encore une fois, comme nous avons dit qu'ils ont incorporé un ligand adhésif cellulaire de façon à ce que l'un des ligands ait été incorporé est cette molécule RGD. Il s'agit d'une molécule très largement trouvée dans la fibronectine ou la vitronectine et d'autres molécules de la MEC à travers lesquelles ces cellules ont des ligands et lorsqu'elles trouvent RGD dans une chaîne de polymère, elles peuvent se lier à elle et s'y donner une sorte de téther. Donc, c'est ce qu'ils ont utilisé.
Ils ont également modifié ceci pour qu'il contienne également un thiol, de sorte qu'il y a un groupe sulfydryle présent dans lequel il peut réagir, puis le groupe RGD est toujours disponible pour que les cellules se lient à. Donc, c'est ce qu'ils ont fait. Ainsi, ils ont utilisé le PEG à 4 kDa avec du thiol contenant un peptide adhésif. Et puis dans une deuxième étape, ce qu'ils ont fait est le peptide dégradable. Dans ce cas, c'est tout le peptide et ce site VPM est l'endroit où les cellules le nettoie.
Donc, quand la protéase est dans la solution, ils nettoieront ce peptide VPM, une fois que vous le voyez et ensuite ils l'ont modifié avec deux cystéines contenant chacun un thiol et donc, encore une fois ce que cela fait, cela vous permet de trier d'avoir un contrôle sur le système où maintenant vous pouvez avoir polymérisation à partir de ceci ainsi que son dégradable. Donc, j'espère que c'est clair.

Donc, maintenant, vous parlez de nous dire que c'est notre chaîne à 4 bras qui contient RGD qui est capable de lier à une cellule et les autres bras sont ensuite reliés par ce VPM. Donc, si j'utilise une autre couleur. Donc, maintenant, vous avez une chaîne contenant VPM à partir du reste d'entre elles qui seront alors liées à un autre PEG à 4 bras. Donc, c'est ainsi que l'ensemble de la structure est formé. Donc, ceci est zoomé à l'un de ces et c'est comme ça. Donc, maintenant, les cellules peuvent vraiment dégrader cette partie de VPM pour se déplacer et se lier à cette structure RGD.
(Référez-vous à l'heure de la diapositive: 18:01)

Donc, ici vous allez, c'est juste la même chose que je viens de dessiner. Donc, vous devez d'abord réagir à un ratio de 1 à 1. Donc, vous avez essentiellement le droit fonctionnalisé avec RGD et ensuite vous mélangez ceci avec le ratio let nous disons 1 est à 3. Donc, maintenant, vous avez trois sites sur lesquels tous les VPM sont liés, il commence à traverser le réseau.

(Référez-vous à l'heure de la diapositive: 18:29)

Alors, regardons maintenant quelles sont les données qu'ils obtiennent à partir de ça. Donc, tout d'abord, le PEG-4MAL montre une augmentation de l'incorporation de RGD et VPM. Donc, cette réaction est plus efficace que ce qu'ils essayent de proposer. Alors, regardons ça. Donc, dans les cas de PEG-4MAL ce qu'ils voient est même s'ils ont peu de TEA qui est un catalyseur ici, même en 10 minutes vous obtenez presque toutes les réactions. Donc, sur l'axe des y, vous avez le thiol qui n'a pas réagi. Ils mesurent donc la quantité de thiol qui n'a pas réagi. Donc, s'ils étaient stoechiométriquement mélangés, en supposant que tout le thiol aurait dû être fini, c'est ce qu'ils voient qu'ils obtiennent presque 100% de conversion thiol et la même chose arrive à 60 minutes. Alors que, si vous regardez le PEG vinyle sulfhone ou le PEG acrylate au moins pour les concentrations de TEA pendant 10 et 60 minutes, vous ne voyez que très peu d'incorporation. Donc, je veux dire que vous ne parlez que de 40% ou dans ce cas très peu.
Si maintenant vous augmentez la concentration de TEA qui est à nouveau un catalyseur ici, vous obtenez 100 fois. Donc, je veux dire que c'est essentiellement que nous parlons d'environ 100 fois augmenter la concentration du catalyseur, même alors vous ne voyez pas une très bonne incorporation seulement après un certain temps, vous commencez à voir presque 100% de réaction et la même chose s'applique avec un PEG-4-acrylate. Donc, il est clair que cette réaction chimique est beaucoup plus efficace pour continuer avec ce système particulier.

(Référez-vous à la diapositive: 20:07)

Ensuite, quelles sont les différentes concentrations de polymères que nous pouvons utiliser pour former cet hydrogel. Alors, quel est le poids le plus bas possible? Donc, et si vous continuez à réduire les chaînes de polymères, vous ne pouvez pas obtenir un hydrogel à un certain moment. Donc, ils ont trouvé qu'avec le PEG-4MAL même un gel de 3% peut être formé alors que, avec l'acrylate, vous pouvez seulement obtenir un gel à un minimum de 7,5% de ce polymère et avec le PEG-vinyl-sulfate vous obtenez à 4% et ensuite le PEG-DA se forme aussi au moins à 7,5%.
Et les temps de gélose sont aussi très différents. Ainsi, le PEG-4MAL se forme dans un délai de 1 à 5 minutes, tandis que l'autre prend jusqu'à 30 minutes et des durées plus longues. Comme je l'ai dit, elles ne sont pas très propices à la gelation in situ car si elle prend 60 minutes pour former un gel, alors au moment où elle est injectée en 60 minutes, tout le polymère PEG sera dispersé dans tout le corps. Donc, et pas seulement que si vous encapsulez des cellules et si vous nous laissez dire de le faire dans un plat de culture cellulaire ce qui va se passer, vous avez pris la gravité les cellules sont maintenant en train de s'installer.
Et donc, si c'est votre structure de gel 3D. Disons que c'est votre structure en gel 3D. Toutes vos cellules seront peuplées à la base et le reste du gel aura une population très clairsemée en raison de la gravité de ces cellules. C'est pourquoi vous n'aurez pas une très bonne distribution des cellules si le temps de gelation n'est pas rapide.

(Référez-vous à la diapositive: 21:51)

Puis ils sont allés de l'avant et ont examiné le rapport de gonflement de l'hydrogel. Donc, ce qu'ils ont trouvé, c'est que le PEG-4MAL a un gonflement très élevé à un pourcentage inférieur. Donc, c'était le 3% qui est le minimum qu'ils peuvent obtenir et lorsque vous augmentez la concentration de polymère, le gonflement diminue. Alors que, dans d'autres cas, vous n'avez pas vraiment beaucoup de gonflement parce que vous avez besoin d'un pourcentage assez élevé.
(Référez-vous à la diapositive: 22:24)

Et donc, ils sont allés de l'avant et ont encapsulé des cellules pendant 3 jours et voici les données pour ça. Donc, ce que nous regardons maintenant c'est sur cette direction de ligne, vous voyez chacun

Condition. Et donc, si vous pouvez voir, donc, le bottommost est un PEG-4MAL et sur cette colonne vous voyez essentiellement quel pourcentage de gel a été utilisé. Donc, ça va de 10 à 4% et ce que vous voyez ici, c'est que le PEG-DA ne forme pas vraiment de gel au 5 et le 4% comme on l'a montré avant comme le même cas avec le PEG-4A.
Et le PEG vinyle sulfone forme des gels, mais si vous regardez toutes ces cellules, elles sont toutes assez arrondiées. Le seul moment où vous voyez un peu d'élongation est sur celui-ci, mais tous les autres sont assez arrondis ; cela veut dire, quand les cellules sont dehors, elles veulent dire qu'elles ne peuvent vraiment pas aller à quelque chose. Donc, quand les cellules sont en train de s'étirer, elles commencent à s'allonger et se répandent sur la surface ou sur un gel, mais dans ce cas vous ne voyez pas ça.
Alors que, si vous regardez le PEG-4MAL à des concentrations plus élevées, oui, les cellules sont en forme d'arrondi, mais comme vous décrochez la concentration du polymère à 4 et 5%, vous les voyez très bien allongées. C'est ainsi qu'une matrice ECM typique ressemblera à ça. C'est un gel de collagène qui est la matrice de ECM naturelle que nous trouvons dans notre corps et ainsi, c'est ainsi que les cellules se regardent généralement. Et puis les deux seules conditions qui sont capables de reproduire ce sont ces deux conditions. Donc, le reste d'entre eux ne sont même pas en mesure de faire quelque sorte de mimétisme comme le collagène.
Donc, les taches ici utilisées sont essentiellement de la Calcein AM, qui est un colorant perméable à travers la membrane cellulaire et il se passe. Et une fois qu'il est là, il est réduit à l'intérieur du système à un sous-produit qui a ensuite une fluorescence. Donc, seules les cellules vivantes sont fluorescresce.
Et puis vous avez une tache non viable qui est un iodure de propidium, qui est un colorant qui est incapable de diffuser dans les cellules est vivant, mais la membrane est compromise. Il se diffuse et se lie à l'ADN, puis donne le rouge fluorescent. Donc, vous pouvez voir lequel est vivant et mort. Donc, la plupart d'entre eux sont en vert, ce qui signifie qu'ils sont des cellules vivantes.

(Référez-vous à la diapositive: 24:42)

Puis, ils ont continué et ont fait une activité métabolique. Ils ont donc découvert que l'activité métabolique était élevée chez les maléimides. Donc, ici vous avez des maléimides dans le rouge et tous vous voyez que comparé à un contrôle 2D, donc, dans ces derniers sont tous comparés à un contrôle 2D dans lequel il n'y a pas de gel, vous trouvez qu'ils sont relativement bien métaboliquement actifs alors que, l'activité métabolique diminue dans d'autres conditions et ceci est à nouveau juste une commande de collagène. Le collagène, bien sûr, est une activité métabolique plus élevée pour ces cellules.
Il s'agit de C2C12 qui sont essentiellement des cellules myoblasques musculaires et vous voyez que même si l'activité n'est pas aussi bonne que le collagène, mais comparé aux autres chimies de polymères synthétiques, elles ont une activité métabolique beaucoup plus efficace.

(Référez-vous à la diapositive: 25:31)

Et puis, voyons ce qui se passe lorsque vous appliquez ceci in vivo. Donc, ce que ces auteurs ont fait c'est qu'ils le mettent sur un cœur de souris, donc, sur un animal vivant. Donc, c'est ce qui se passe. Donc, quand vous vous débarrasser de la petite partie de liquide sur le coeur de la souris, le cœur bat. Ce que vous voyez est alors le liquide a été ensuite étalé pour un peu, mais il a ensuite commencé à polymériser. Donc, vous obtenez un gel polymérisé prenant la forme de la surface externe du mur cardiaque.
Et pas seulement que ce que les auteurs ont fait ils ont encapsulé un peu de FITC ici, ce qui est vert de fluorescence. Donc, c'est un gel, c'est tout le tissu, le tissu cardiaque dans ce cas et ce que vous voyez c'est qu'il y a une sorte d'interface. Donc, le gel est en fait capable de diffuser et de polymériser, puis les cellules ont aussi pu se déplacer ici. Donc, ce que vous voyez, c'est une région qui se recoup. Donc, vous avez cette région de chevauchement dans laquelle ces cellules interagissent avec le tissu et c'est une surface très compatible.
Donc, c'est essentiellement sur les hydrogels in situ pour cette classe. Nous allons continuer avec une discussion hydrogel et quelques autres calculs de la taille des pores du réseau et tous dans la classe future.
Je vous remercie.