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Comprendre les notions de base de l'électrophorèse

Maître le processus qui sépare les particules chargées dans un fluide en utilisant un champ de charge électrique dans ce cours gratuit.

Publisher: NPTEL
Découvrez les composants et les procédures impliqués dans la compréhension des bases de l'électrophorèse, qui fait référence à un procédé électrocinétique qui sépare les particules chargées dans un fluide à l'aide d'un champ de charge électrique. Les sujets abordés comprendront la définition de l'électrophorèse horizontale sur gel de polyacrylamide, l'utilisation de différentes taches et la façon de procéder à l'électrophorèse sur gel d'agarose.
Comprendre les notions de base de l'électrophorèse
  • Durée

    1.5-3 Heures
  • Students

    211
  • Accreditation

    CPD

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Description

Dans ce cours en ligne gratuit, vous êtes introduit dans le monde de l'électrophorèse. Découvrez si cette technique convient à la séparation et à l'analyse d'échantillons biologiques complexes. Discutez des quatre taches différentes qui sont disponibles pour la détection des protéines dans les gels de polyacrylamide. Vous serez introduit dans les deux types de gels qui sont coulés dans une électrophorèse sur gel vertical et vous verrez comment le système vertical fonctionne différemment avec un système de gel horizontal. Vous découvrirez si une staine de tangerine sypro peut être utilisée pour détecter les bandes de protéines en pot. Des démonstrations, des problèmes, des exemples et des questions d'évaluation dans ce cours de formation vidéo dirigé par un instructeur sont conçus pour vous fournir une base complète en électrophorèse.

Le matériel vous présente la définition de l'électrophorèse sur gel horizontal et vertical et les différents types de taches qui sont utilisés pour détecter les protéines dans les gels de polyacrylamide. Ensuite, l'électrophorèse dans le système de gel horizontal, qui est réalisée en continu avec des électrodes et des cassettes de gel submergées dans la zone tampon, sera discutée. Vous étudierez le fait que le réactif persulfate d'ammonium est utilisé comme initiateur dans le processus de polymérisation de l'acrylamide, alors que le dodécyl sulfate de sodium est un réactif qui est utilisé pour la dénaturation et fournit une charge négative à la protéine. Vous découvrirez le fait que le réactif d'agarose est utilisé dans la préparation du gel horizontal pour l'analyse de l'ADN et les accessoires supplémentaires nécessaires à la coulée du gel d'agarose. On précisera qu'il y a deux électrodes de platine dans la chambre d'électrophorèse qui font partie du système d'électrophorèse sur gel horizontal.

Ensuite, vous apprendrez que les échantillons biologiques complexes sont efficacement résolus par électrophorèse sur gel de 2-D, ce qui implique la combinaison de charge et de poids moléculaire pour fournir une séparation beaucoup plus grande par rapport à l'utilisation de la propriété individuelle. Vous y trouverez un aperçu du fait que lors de l'expérience d'électrophorèse sur gel d'agarose sur la page native, l'échantillon préparé dans le colorant de chargement ne contient pas de détergent ou d'agent dénaturant et, par conséquent, l'échantillon est basé sur la charge. Vous découvrirez alors que dans l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide horizontal, l'échantillon biologique complexe est résolu en fonction de sa charge et ensuite déplacé à l'électrode de compteur. On vous enseignera que dans la méthode de la page de l'urée, les protéines insolubles sont dissoutes dans l'urée et que les échantillons sont séparés en fonction de leur masse de sous-unités. Enfin, vous étudierez les réactifs dans l'électrophorèse sur gel, la coloration et l'analyse d'images, les variantes de l'électrophorèse sur gel et les composants de l'électrophorèse sur gel. Ce cours intéressera les étudiants en biotechnologie ou les professionnels de la biotechnologie expérimentale qui souhaitent perfectionner leurs connaissances techniques.

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