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Hoy, estamos avanzando de la cromatina a la siguiente etapa en la expresión génica.
Eso es el procesamiento de ARN nuclear. Por lo tanto, esto es eukaryote específico. Dado que estamos hablando de empalme de organismos multicelulares, el procesamiento de ARN nuclear u otro procesamiento son esenciales.
(Hora de la diapositiva: 00:51)

Por lo tanto, en la diapositiva anterior, si usted mira A, hay dos tipos de células diferentes, y en ambos tipos de células, usted tiene cinco diferentes ARN mensajero (ARNm) que se transcriben de cinco genes diferentes. En el tipo de célula 1, el ARNm C, D, E entra en el citoplasma, pero en el tipo de célula 2, A, B, C salen al citoplasma. Así que se trata de una selección nuclear que decide qué ARNm debe exportarse y no exportarse. Así que incluso a ese nivel, podrías tener diferencias. Existen contextos específicos de desarrollo en los que las regulaciones a estos pasos se vuelven importantes, en el contexto general del desarrollo embrionario. No siempre podemos hacerlo a nivel de la metilación de la histona o del ADN y controlando la transcripción. Porque puede que no haya tiempo suficiente para ello, y estas transcripciones pueden ser utilizadas más adelante en alguna otra etapa. Por lo tanto, se hacen de antemano, por lo que es por eso que estas regulaciones en el paso de la transcripción post son importantes dependiendo del tiempo y el contexto espacial, y una de ellas es la selección nuclear. La otra regulación a nivel nuclear en el ARN es el empalme.

Por lo tanto, si mira B, el diagrama de la barra central le dice la estructura genética real tal como la ve en el ARN naciente que se acaba de transcribir, no empalmado. Por lo tanto, tienes 1,2,3,4,5 exones diferentes aquí, y estas líneas verticales en forma de V indican a qué se va a unir. Por ejemplo, las líneas en la parte superior del diagrama de barras central indican que se unirá el exon 1 y el exon 3, y no se unirá el exon 2, por lo que el exon 2 se tratará como un intrón en ese caso.

Por lo tanto, este donante de empalme, donde estoy apuntando, está conectado a este aceptador de empalme aquí. Así que, saltándose otras dos potenciales en el medio, de modo que es una forma de empalme para que estés reuniendo a los exones 1, 3, 5 y en otro te encuentras 1, 2, 4, 5, por lo que este es el empalme alternativo. Por lo tanto, el empalme alternativo no es un componente menor en la regulación de la expresión génica, por lo que como verá en las diapositivas posteriores ahora. Así que es ahí donde vamos a pasar el grueso del tiempo de hoy.
(Consulte la hora de la diapositiva: 03:46)

Por lo tanto, este es el verdadero ejemplo de la selección nuclear, por lo que se trata de un embrión de urchin en el mar en una fase temprana. Por lo tanto, en (A) Usted está mirando una imagen de contraste de fase que muestra todas las células. Así, en (B), se trata de una hibridación in situ que revela la localización de un determinado ARN mensajero, que aquí es CiIIIa. Por lo tanto, se expresa sólo en unas pocas células ectodermicas no en todo el embrión y, que se ilustra más en esta mancha septentrional (C). Aquí el ARN aislado del ectoderm en carril 1 y ARN aislado de endoderm y mesoderm en carril 2 se separan electroforéticamente y se transfieren a una membrana y se sondean con la sonda radiomarcada para CyIIIa, sonda específica intrón que revela el ARN más grande. Si se mira la imagen, la diferencia no es mucho, tienen un nivel de presencia más o menos similar, lo que indica que en todas las tres capas se está transcribiendo. Está allí en ectoderm y así como en el endodermo y mesoderm. Pero si usted mira la misma transcripción usando una sonda específica de exón, que va a hibridar en una gran fracción del ARN, habrá ARNm maduro presente en el citoplasma. Porque el procesamiento ocurre rápidamente, y vienen al citoplasma. Por lo tanto, se hibridiza en gran medida con el ARN citoplásmico maduro. Y su nivel es muy alto en ectoderm en comparación con los otros dos que indican que hay una selección del ARN en el citoplasma como lo que se está exportando.
Así, en el ectoderm, se exporta preferentemente pero no en las otras dos capas germinales.
(Consulte la hora de la diapositiva: 06:02)

Por lo tanto, continuaremos con el empalme alternativo. Hay cuatro formas diferentes de empalme alternativo. El primer tipo es el exón de cassette. Por ejemplo, en (A), el ARNm de procollagen tipo II está presente tiene un casete con exón 1,2,3 en condrocitos precursores y como otro casete con 1 y 2 en condrocitos maduros.

El segundo tipo es exones mutuamente excluyentes en los que a partir de un premRNA después de empalmar un exón se incluirá en un tipo de tejido y se excluirá en otros tipos de tejido. Así que aquí en (B) si el rojo está presente púrpura se excluye y si el morado es rojo presente es exclusivo, ambos son mutuamente excluyentes.
(Consulte la hora de la diapositiva: 07:03)

Y el tercer tipo en el empalme alternativo es la variación del sitio de 5 ' splice. En (C), a partir del pre-ARNm, el exón 2 está completamente incluido en Bcl-xL pero en la otra presencia de un donante de empalme al principio del exón 2 resulta en excluir la mayoría de exón 2 y forma Bcl-xs. Así, dos líneas en forma de v muestran el comienzo de un intrón en ambos tipos. Por lo tanto, en este caso esto tiene graves consecuencias.
Bcl-xL inhibe la muerte celular programada y Bcl-xs inducen la muerte celular. Tiene consecuencias opuestas y, en la mayoría del cáncer, las líneas celulares, la versión xL es común; como resultado, la apoptosis se inhibe y la célula sigue proliferando. El cuarto tipo es similar al tipo anterior pero con el empalme de los 3 '. Por lo tanto, en (D) debido a la presencia de 3 ' splice donador dos variantes diferentes se producen. Por lo tanto, estos son los cuatro mecanismos por los cuales puede suceder el empalme alternativo.

Estos tipos de empalme ocurren a casi todos los genes, más del 90% de los genes de codificación de proteína humana están sujetos a empalme alternativo. Para darle una idea el número de genes en C. elegans y humanos no son muy diferentes, pero si usted mira la complejidad del organismo ya sea anatómico o funcional, el Homo sapiens puede aprender todo esto y venir y enseñar una clase, pero C. elegans no puede hacer eso. C. elegans tiene una anatomía muy simple con un par de tubos pero luego tiene todos los procesos biológicos básicos; tiene un sistema nervioso; puede sentir dolor y así sucesivamente. Por lo tanto, el grueso de la complejidad entre C. elegans y Homo sapiens viene de splicing alternativo. Por lo tanto, esto es algo importante, así que no lo tome como una aberración en la expresión génica. Veremos algunos ejemplos más.
(Hora de la diapositiva: 10:23)

Por lo tanto, el siguiente ejemplo es α-tropomiosina en la rata. En diferentes músculos diferentes exones se incluyen. Así, estos colores verdes son exones presentes en todas las diferentes variantes y otra cosa importante es a veces el empalme alternativo puede afectar a la secuencia de 3 ' UTR.
MRNAs de músculo estriado tienen un 3 ' UTR diferente de los otros ARNm musculares. Por lo tanto, la importancia de 3 ' UTR será más clara cuando vayamos a la regulación de la traducción en las diapositivas futuras. Así que aquí algunos exones incluidos son suaves y específicos del músculo y algunos exones son específicos de los músculos tirados y sólo ellos están incluidos en el mRNA maduro del músculo estriado.

Por lo tanto, por estas diversas combinaciones de permutacion se pueden generar una variedad de proteinas, incluyendo exones. Por lo tanto, por lo tanto, la definición de un gen-una enzima que se convirtió en un polipéptido-un polipéptido ahora en realidad se convierte en un gen y una familia de proteínas. Estas son familia de proteínas porque tienen alguna similitud, alguna secuencia de exón está ahí en todas ellas.
(Hora de la diapositiva: 11:59)

El empalme alternativo más complejo que conocemos actualmente es Dscam, el ARNm neuronal Drosophila que se expresa en las neuronas. Veremos la importancia funcional de esto en la siguiente diapositiva, pero esto ilustra, de un solo gen se obtienen 38.016 mRNAs diferentes que son casi el doble que los genes de codificación de proteínas en Drosophila. Drosophila tiene sólo unos 14.000 genes, por lo que es casi el doble del genoma de C. elegans. Así que aquí están presentes 24 exones diferentes en esta proteína. A partir del ARNm naciente en los segmentos rayados, cualquiera puede ser seleccionado como Exón 4; 12 diferentes alternativas son posibles para servir como exon 4, 12 diferentes secuencias adyacentes.
Del mismo modo, para el exon 6, son posibles 48 alternativas, y luego exon 9, 33, exon 17, 2. Ahora si trabajas todas las combinaciones que funciona para ser 38.016 y los datos experimentales apoyan que la gran mayoría de ellos son todos producidos.
(Consulte la hora de la diapositiva: 13:23)

Así que ahora vamos a ver por qué eso es importante y cómo eso ayuda. Por lo tanto, esto es más como la recombinación de VDJ en células b humanas, haciendo un propósito similar aquí, pero para el auto-reconocimiento. Así que aquí en la neurona, tienes dendritas ramificados y estos dendritas necesitan saber que pertenecen al mismo cuerpo celular. Así que esencialmente, son hermanas y no necesitan conectarse. Cuando reciben una señal, necesitan conectarse a las neuronas adyacentes u otra neurona en esa cadena, entonces sólo será útil para la conducción de los impulsos nerviosos. Por lo tanto, esta auto-repulsión es proporcionada por esa única versión splied alternativa de Dscam producida en esa neurona y otra neurona tiene diferente empalme alternativo. Por lo tanto, tiene su Pincode en términos de composición de exón de Dscam y eso ayuda en las conexiones. En (B) verde y morado forma una conexión y verde y rojo forman otro. Supongamos que digamos que este Dscam está mutado y no se produce así que ¿qué esperarías? Estos no sabrán repeler y todos se adherirán y harán una masa de estructura neuronal conectada.
(Hora de la diapositiva: 15:03)

Así que eso es lo que pasa. Por lo tanto, el tipo silvestre (C) es altamente ramificado y (D) la neurona que carece de la Dscam. Por lo tanto, esto es un empalme alternativo.
(Hora de la diapositiva: 16:00)

Otro ejemplo interesante es el empalme específico del músculo. Este trabajo ocurrió exactamente alrededor del tiempo que me uní al departamento como un postdoc, y este artículo había salido de otro laboratorio en el mismo edificio. Fue en la prensa, y se habló de ello, por lo que estaba emocionado de leer, y eso está ahí en el libro de texto, así que vamos a leer sobre esto, por lo que aquí tienes un tema de empalme específico del músculo. Ahora vamos a ver las condiciones de la enfermedad, así que dentro de Drosophila, vimos que podemos mutar y encontrar la función. Así que, en los pacientes humanos, ¿hay una consecuencia cuando estas astillas no suceden como se supone que están sucediendo? Por lo tanto, veremos un ejemplo.

En (A), entre el exón 1 y el 2 se presenta un codón de parada. Durante el empalme, este intrón se excluye, por lo que se hace una proteína funcional. Pero en el mutante, usted tiene una mutación en el intrón donde un G se convierte en un A y debido a que promueve el empalme. Por lo tanto, se incluye una parte de este intrón,

y debido a eso, la traducción se termina y usted no hace una proteína funcional. Por lo tanto, en el tipo wild, que stop codon nunca sería encontrado porque toda esa cosa está excluida, y como un

resultado, usted directamente ir a exon 2, y el marco de lectura sigue haciendo la proteína de tipo salvaje.
Por lo tanto, el nombre de esta proteína es miostatina. Esta proteína previene la proliferación de células musculares en un momento específico, y se diferencian en los músculos de inmediato, lo que ayuda a hacer la cantidad necesaria de músculo. Así que, en una familia donde encontraron esta mutación, cuatro tipos ya eran atletas, y un niño pequeño era capaz de sostener una campana de 3 kg con ambas manos completamente extendidas. Esto era posible porque sus músculos eran tan fuertes, y esto se puede hacer en los organismos modelo también.
(Hora de la diapositiva: 19:06)

Por lo tanto, en esta diapositiva, el del lado derecho es el poderoso ratón, el izquierdo es un ratón normal.
Esto atrajo la prensa, el papel vino en la naturaleza, y entonces esta facultad estaba en la prensa para reunirse con la televisión, la radio, y los periódicos. Por lo tanto, se ve la diferencia muscular entre los dos porque la proliferación celular no se detuvo en el momento adecuado, por lo que hicieron muchas más células, y cuando se diferenciaron, hicieron muchos músculos.

Entonces, ¿un biólogo del desarrollo de inmediato recomendará a un médico que usted mute y haga más músculos? No lo hará porque los biólogos del desarrollo pensarán en las otras consecuencias. Por ejemplo, se preocupan por los patrones de metilación cuando se piensa sólo en la secuencia de codificación. Así que de manera similar, esperarán que habrá otras complejidades como, por ejemplo, una razón filogenética y ontogenética para por qué esa división celular se detuvo en ese momento. Por lo tanto, usted no se estropear inmediatamente, pero esto le da una idea de lo que sucede cuando usted tiene un defecto de empalme.

(Consulte la hora de la diapositiva: 20:29)

Creo que eso transmitió el mensaje sobre la importancia del empalme. Así que, a continuación, pasaremos a la regulación de la traducción. Por lo tanto, la regulación de la traducción es muy vital en ciertos contextos; hay dos ejemplos sobresalientes para ilustrar este punto; uno es la embriogénesis temprana, y otro es el sistema nervioso adulto. Usted toma una neurona; por ejemplo, tiene un cuerpo celular y tiene un axón largo, y al final del axón, usted tiene sinapsis. En la sinapsis, los neurotransmisores se producen y secretan. Entonces la neurona postsináptica debe tener el receptor para aceptar la señal.
Si estas cosas tienen que ser hechas y degradadas muy rápidamente para sincronizarse con la conducción del impulso del nervio, no se puede ir y deshacer el ADN modificando la cromatina y luego transcribir, empalmar, y luego obtener el permiso del núcleo para salir.

Las neuronas no tendrán tiempo suficiente para ello y después de eso, la proteína tiene que ser transportada hasta el final del axón para llegar al sitio de las sinapsis. Por lo que ese problema se suele resolver haciendo el ARN y manteniéndolo almacenado donde se quiere y cuando llega la señal correcta, se traduce.
Ese es un contexto; el otro contexto es el escote en el embrión. Es rápido, y durante la embriogénesis, la nueva transcripción está ausente. Por lo tanto, para llevar a cabo el desarrollo embrionario, particularmente coordinando el ciclo celular y produciendo una gran cantidad de membrana celular, los factores requeridos deben ser ya hechos y almacenados en el ovocito. También, durante la división celular, se hacen muchos núcleos, por lo que necesitamos que gran parte de un cromosoma. Entonces el ciclo de división celular necesita ser regulado. Una vez que se ha completado la división en algunos organismos, en ese momento, la especificación del destino celular ocurre; por ejemplo, en C. elegans en la primera división en sí, el destino de las dos células hija es diferente.

Por lo tanto, todo eso no puede ser controlado a nivel transcripcional. Así que de nuevo, la regulación de la traducción del ARNm producido por la madre y depositado en el ovocito juega un papel crítico. Tanto que en algunos organismos, se puede deshacerse de los componentes nucleares, pero aún así, el ciclo celular puede ocurrir sin el material nuclear; el citoplasma tiene las cosas necesarias para simular eso, y estos son contextos donde la traducción se vuelve importante. Así que ahora, veamos cómo ocurre la regulación de la traducción.
(Hora de la diapositiva: 23:58)

Por lo tanto, un mecanismo por el cual la regulación de la traducción puede suceder es aumentar o disminuir la estabilidad del ARN mensajero, lo que significa una vez transcrito, cuánto tiempo sobrevivirá el ARN mensajero antes de degradarse. Por lo tanto, usted puede tener una vida media para eso, la duración tomada para la mitad del ARN mensajero a ser degradado. Por lo tanto, en una madre lactante, el ARNm de prolactina generalmente producido en la glándula mamaria se degrada rápidamente. Primero debería explicar el método. Así, se trata de células de glándula mamaria del ratón cultivadas, e incubadas con nucleótidos radioactivos como en este caso, probablemente UTP. Por lo tanto, todos los ARN sintetizados se etiquetan radioactivamente. Entonces las células de ese medio que contiene el nucleótido radiactivo se lavan y se ponen en un medio fresco sin nucleótidos radioactivos, pero usted no tiene la etiqueta de uno, por lo que se llama el período de persecución.

Ahora ves cuánto tiempo se queda el ARN etiquetado. Por lo tanto, sin esta hormona estimulante de la lactancia prolactina el ARNm se degrada rápidamente, la vida media es probablemente de aproximadamente dos horas o una hora y media, pero con la hormona se queda por más de dos días. Por lo tanto, al aumentar la estabilidad el ARNm está disponible para múltiples rondas de traducción, por lo que aumenta el producto proteico.

Por lo tanto, el objetivo final de la expresión del gen diferencial es variar el tipo y la cantidad de proteínas de un tipo de célula a otro tipo de célula. Así que ese es el último punto final de la expresión génica cuando se habla de genes de codificación de proteínas. Por lo tanto, este es un ejemplo para la estabilidad diferencial, por lo que aquí la estabilidad está bajo dos condiciones diferentes.
(Consulte la hora de la diapositiva: 26:19)

El siguiente que vemos es lo que sucede típicamente en los ovocitos. Esto se describió por primera vez con buen detalle en los ovocitos de Xenopus; por lo tanto, vamos a ver ese ejemplo, y este es el tipo de regulación que es crítica en casi todo el desarrollo de ovocitos que la gente estudia. Así, de hecho, en nuestro laboratorio, estudiamos exclusivamente la regulación traslacional de la línea germinal. Así que, veamos esto; antes de eso, debo presentarles a esta idea de mirar el ARNm.

Por lo general, el ARNm se escribe como una línea larga con 5 'cap a 3' poli-A cola, pero en las células, no existen así; en su lugar, se encuentran en la forma de anillo. Así, el extremo 5 'y 3' se unen por proteínas que se unen a la tapa 5 ', por ejemplo, factores de iniciación de la traducción que se unen a la tapa 5' o a 5 ' UTR etc. Interactúan con proteínas que se unen a la cola de 3 ' UTR o poli-A, y esas interacciones de proteínas hacen que el ARNm se convierta en una estructura circular.

Así que eso es lo que se ve en (A) un micrografo de electrones. Así que aquí está un ejemplo (B), por lo que normalmente los factores de iniciación que se unen a la tapa 5 ' interactúan con una proteína que se une a la cola poli-A, llamada proteína de unión poli-A (PABP), que resulta en la circularización. Y eso es necesario para la unión de otro factor de iniciación-como el 4G, que recluta la pequeña subunidad ribosomal e inicia la traducción. Así que eso es lo que ocurre típicamente pero en el oocito de Xenopus, la mayoría de ARNm que no se traduce en un momento dado se encuentran en forma circular pero no por la interacción de 4E y 4G con el PABP; en cambio, una proteína llamada Maskin se une a 4E y que Maskin interactúa con una proteína llamada proteína de unión de elementos de poliadenilación citoplasmática, CPEB que se une a la secuencia de señal de poliadenilación. Ahora CPEB interactúa con Maskin, y este tipo de forma circular excluye totalmente los otros factores de iniciación, y por lo tanto, se encuentra en estado de latencia. No se traduce hasta que llega la señalización apropiada. Por ejemplo, la hormona progesterona, que estimula la maduración de los ovocitos y completa la división mitótica en la fecundación, conduce a la activación de una cinasa que fosforila el CPEB. Y cuando el CPEB es fosforilado, recluta una proteína llamada escisión y factor específico de poliadenilación, y que recluta una poli (A) polimerasa. Por lo tanto, esta poli (A) polimerasa extiende la cola de poli-A en el citoplasma.
Recuerde, cuando nos enteramos de la estructura genética eucariota, dije que alguna poliadenilación ocurre en el núcleo. En algunos de los aspectos del desarrollo de la poliadenilación adicional regulada ocurre en el citoplasma, por lo que este es un ejemplo de eso. Por lo tanto, usted tiene una extensión adicional de la cola de poli-A, y esta cola poli-A ahora se une al PABP, y que puede interactuar directamente con el 4G, y esta fosforilación también lanza la Maskin fuera de la interacción con el 4E, y ahora comienza la traducción. Aunque esto no ha sido totalmente elaborado como cómo esto es coreografiado, esto le da un mecanismo de cómo sucede la activación.

Pero luego hay una ola de activación secuencial. Algún mRNA se expresa en una etapa determinada, y algún mRNA se expresa más tarde y así sucesivamente. Así que todavía se está estudiando intensamente, por lo que todo este mecanismo fue elaborado a principios del 2000, ustedes saben que los papeles estaban saliendo en el 2001, 2002 alrededor de ese tiempo. Así que ahora, este mecanismo se ha encontrado en muchos otros organismos donde se puede hacer mucha genética.

Por lo tanto, allí han hecho mucho más trabajo en muchos ejemplos de este tipo. Por lo tanto, veamos uno de esos ejemplos.
(Hora de la diapositiva: 31:18)

Por lo tanto, este es el ovocito de Drosophila, donde se tiene una proteína llamada Bicioide. Por lo tanto, este Bicioide es una proteína interesante; es un regulador de la transcripción, así como un regulador de la traducción. Aquí lo vemos como un regulador de la traducción. Por lo tanto, se une a una secuencia llamada Elemento de reconocimiento de Bicioide en un ARNm que codifica una proteína llamada Caudal. Por lo tanto, este Caudal es necesario para prevenir el desarrollo posterior en la región anterior. Así que Caudal necesita ser suprimido, y eso lo hace un Bicoide, que generalmente promueve el desarrollo anterior. Cuando el Bicoide se une a este ARNm, recluta otra nueva proteína que se une a la tapa de metilo, y esto excluye todos los factores de iniciación. Por lo tanto, así es como Bicioid impide la traducción de ARNm de Caudal. Así que ahora te das cuenta de que el tema general aquí son las proteínas que interactúan con la secuencia de ARN puede interferir con la activación traslacional. Algunos de ellos aumentan o disminuyen la cola poli-A en algunos contextos, no en el contexto del oocito de Xenopus; donde incluso con cola poli-A más corta, el ARNm es estable, es sólo que no pueden atar PABP, y por lo tanto, no se traducen, pero no se degradan. En algunos casos, si se elimina la cola poli-A, el ARN se marca para la degradación.
(Consulte la hora de la diapositiva: 32:58)

Así que aquí, hay algunos ejemplos de las moléculas de ARNm que están reguladas, donde funcionan, y en qué organismos provienen. La ciclina que está en la lista no es sorprendente porque está involucrada en la regulación del ciclo celular.
(Consulte la hora de la diapositiva: 33:17)

Por lo tanto, continúa, por lo que de múltiples organismos, por lo que este es un mecanismo evolutivo bien conservado.
(Consulte la hora de la diapositiva: 33:27)

A continuación, uno es obvio, pero luego tomó mucho tiempo para que la gente encontrara un ejemplo de esto. Si las proteínas pueden unirse a la secuencia 3 'UTR y 5' UTR, ¿por qué no otro ácido nucleico?
La complementariedad de la secuencia debe darle más especificidad a la secuencia dada, y eso fue encontrado en una pantalla emocionante en C. elegans embriogénesis. Por lo tanto, en la embriogénesis de C. elegans, un patrón específico de división puede terminar reiterando si no ocurren cambios específicos de expresión genética.

Digamos, en el cuarto nivel de división celular, se genera un patrón específico de asimetría durante la división celular, y no se quiere que eso se reitere porque terminarás produciendo similar tipo de fatos de células en otra generación también y eso se evita al bloquear alguna expresión génica. Por lo tanto, las mutaciones en ellas se llaman heterocrónicas porque, en el orden de tiempo, están en el momento equivocado. Entonces, lo que debería haber estado en la tercera etapa terminará repitiendo en la cuarta etapa o en la quinta etapa o incluso más tarde, y por lo tanto se llaman mutaciones heterocrónicas. El laboratorio que identificó la mutación que tenía el fenotipo heterócrónico finalmente mapeó la mutación a un locus, pero no encontraron allí ninguna secuencia apropiada de codificación de proteínas. Tenían confianza en el fenotipo y en el locus que mapearon, y sabían que el locus importa aunque no sea la codificación de las proteínas. Cuando miraron cuidadosamente, encontraron que codifica un ARN corto, una secuencia de ARN pequeño que es complementaria a la 3 ' UTR de otro ARN que está involucrado en esta especificación de linaje. Así que lin hebras para el linaje en C. elegans, la mayoría de los genes tienen tres alfabetos y guión y un número.

El número por lo general es el orden en el que se identificó ese gen particular perteneciente a esa clase. Así que lin significa linaje defectuoso, en que es el gen decimocuarto que identificaron.
Por lo tanto, si se mira la secuencia de mRNA lin-14 en el 3 ' UTR, hay secciones de color 1 a 7, y esas son las secuencias a las que se une este lin-4. lin-4 es una de las mutaciones heterocrónicas que no estaba codificando una proteína y se encontró que era un pequeño ARN.

Los bucles indican dónde no hay ningún complemento, donde se ve una cosa lineal; hay coincidencia de base. Entonces, este fue el primer descubrimiento, y es esto algo específico de nematodo? NO, en los últimos veinte años, la gente ha descubierto que este pequeño ARN está naturalmente codificado en el genoma al igual que el genoma de C. elegans, y regulan la traducción de la gran mayoría de los ARNm.

La estimación actual es de aproximadamente 30 a 40% de todos los ARNm humanos están sujetos a la regulación por estos pequeños ARNm llamados miRNAs, micro moléculas de ARN interferentes, o micro ARN en breve.
(Consulte la hora de la diapositiva: 37:10)

Y así es como se hacen; suelen existir en múltiples copias repetidas en tándem. Una vez transcrito, una nucleasa llamada Drosha las leaves. Por lo tanto, la información en este cartón proviene de estudios en varios organismos. El primer ejemplo es de C. elegans que es donde se descubrió por primera vez, pero entonces la gente trabajó el mecanismo al estudiar múltiples organismos.

Por ejemplo, Drosha fue descubierto en Drosophila, donde hicieron extractos celulares e hicieron estas reacciones in vitro. Por lo tanto, estas repeticiones múltiples son digeridas en unidades individuales en el núcleo por Drosha, y eso es transportado al citoplasma. Estos vienen como repeticiones de horquilla, y esa horquilla se elimina por una nucleasa citoplasmática llamada Dicer.
(Consulte la hora de la diapositiva: 38:07)

Y ahora se obtienen las dos hebras, y se desenrollan y se cargan en un complejo llamado RISC.
Este complejo RISC toma una de las dos hebras del dúplex de miRNA y utiliza que para identificar la secuencia de destino, va allí, y se enlaza a la secuencia de destino. La unión al objetivo puede tener múltiples consecuencias; una de ellas es que el ARN se limpia, la estabilidad se reduce drásticamente, esta es una, pero se pueden tener varias consecuencias.
(Consulte la hora de la diapositiva: 38:44)

Eso está ahí en esto, desliza entonces volveremos a ese ejemplo. Así que este complejo de ribonucleoproteína miRNP que lleva la secuencia de miARN puede realizar cualquiera de estos tres; podría inhibir el complejo de iniciación, una proteína que se une a la tapa 5 ' o puede dificultar la capacidad de ribosomas para alargarse, o puede eliminar la cola de poli-A y reducir la estabilidad del ARN, o podría reclutar proteasas para digerir el péptido naciente que está saliendo.

Los tres mecanismos se han visto con ejemplos concretos. Así que veremos hasta qué punto importa en el contexto de los mamíferos.
(Consulte la hora de la diapositiva: 39:35)

Por lo tanto, durante el desarrollo de diferentes tipos de linfocitos, la célula precursora linfoide tiene una baja abundancia de miR181. Por lo tanto, se obtienen tanto las células B como las células T. Las células B expresan miR181 en mayor abundancia que el precursor. Pero si usted introduce artificialmente una gran cantidad de miR181, en esta célula precursora, terminará produciendo la gran mayoría del tipo de célula B y no las células T.
Por lo tanto, usted hace más células B a expensas de las células T, por lo que estas tienen claras consecuencias de desarrollo en múltiples organismos. Por lo tanto, cada tipo de célula va a tener un conjunto específico de los productos genéticos, no la información genética, y como resultado, su destino va a ser diferente.