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Module 1: Genética molecular del desarrollo de plantas

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Patrón de expresión espacial y temporal

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Bienvenido al curso de Biología de Desarrollo de Plantas.Por lo tanto, en la clase anterior estamos continuando con los enfoques basados en la genética inversa. Por lo tanto, si se recuerdan las lecciones anteriores. Por lo tanto, hemos terminado la identificación y el aislamiento del gen para el estudio funcional, hemos estudiado ya el análisis del patrón de expresión en particular el análisis global o la expresión patterndonde se han identificado los genes diferenciales expresados. En esta clase nos centraremos más en el análisis del patrón de expresión espacial. Por lo tanto, esto es muy importante en el contexto de la biología del desarrollo, porque el desarrollo de cualquier órgano o cualquier tejido es un proceso dependiente del contexto. Y si usted recuerda nuestras pocas de las conferencias anteriores o muy una o una primera o segunda conferencia, hemos discutido que, la comunicación celular es un factor importante de la conducción en el caso del desarrollo. Por lo tanto, si usted quiere estudiar la función de un gen particular a través del enfoque basado en la genética inversa, lo primero y muy importante lo que tiene que hacer usted tiene que estudiar muy precisamente cuál es el patrón de expresión particularmente es el patrón de expresión espacial y temporal. Spatial significa qué tejido, qué células o qué órganos se expresa y temporalsignifica en qué etapa del desarrollo se inicia Por lo tanto, hay varias maneras de estudiar para analizar la expresión particularmente espacial y temporal, una forma es el ARN in situ hibridación. Aquí usted puede hacer en todo el tema de montaje o secciones.Así, básicamente el tema de montaje completo usted puede tomar un órgano completo o estructura completa y luego usted puede sondear que con una sonda específica específica del gen y luego identificar dónde se expresa un particulargen?En la sección de tejido lo que nosotros primero arreglamos la sección y luego hacer una sección transversal de los tejidos, 8 micrones de espesor; tejido grueso o 10 micrones gruesos secciones transversales y luego usted sondea esa sección transversal con el gen específico probe.Así, este método usted puede utilizar para identificar ARN mensajero ARN que significa que usted puede identificar la actividad transcripcional de un gen en una manera específica de tejido. Segunda cosa que usted puede estudiar es la proteína in situ hibridación, donde usted puede buscar donde una proteína en particular es presente.Así, hay otra manera de estudiar el patrón de expresión de genes temporales y espaciales wichis promotor Ensayo de reportero y trampeo de promotor, vamos a discutir uno por one.Así, primero vamos a tomar ARN in situ hibridación.Así, como dije que aquí se puede hacer en dos o se puede hacer todo montaje in situ hibridación o se puede hacer en la sección, pero ¿cuáles son algunos pasos que tiene que seguir?Por lo tanto, el primer paso importante de ARN in situ hibridación es la preparación del tejido. Por lo tanto, usted recoge la muestra dependiendo de qué tejido o qué órganos va a estudiar, usted puede recoger la raíz, el tallo, la inflorescencia, las flores dependiendo de su interés. Entonces, lo primero importante es que usted tiene que arreglar los tejidos. Esto es muy importante para terminar cualquier reacción biológica en curso o reacciones bioquímicas. Hay varios fijadores disponibles para fijar el tejido de la planta y luego estos dos procesos son comunes en todo el montaje in situ, así como in situ en las secciones transversales o en la sección longitudinal, pero si usted ¿Quieres hacer en las secciones entonces otra cosa lo que tienes que hacer?Usted tiene que tomar este tejido e incrustar en los medios de incrustación esto es muy importante porque usted quiere hacer una sección muy delgada, que es de 8 micrones o 10 micrones sección y la embeddingmedia más preferiblemente lo que estamos usando es una parafina. Por lo tanto, hay un proceso de la deshidratación esto es importante que hacemos a través de etanol serial eliminar el agua y luego se infiltra esto con la parafina. Y luego una vez que sus bloques de parafina están listos, usted toma estas muestras usted hace una sección transversal recoger esta sección en poly lisina, Poly-L-lisina diapositiva recubierta, esto es muy importante porque desea que su sección se pegue en el Entonces otra cosa importante es que usted tiene que generar ARN sonda. Como se puede ver aquí esto es ARN-ARN in situ hibridación que significa que usted es detectingmensajero ARN para un gen en particular y el uso de ARN como un probe.Así, si usted tiene que hacer la sonda tendrá ARN antisentido como una sonda porque este antisenseRNA irá e hibridar con el sentido RNA.Pero como un control también hará que la sonda de detección para comprobar básicamente cuál es la señal de background. Y cómo hacer estas sondas tal vez voy a describir en detalle, hay dos maneras que uno es que usted puede hacer la síntesis de la sonda basada en la PCR o usted puede clonar un gen específico fragmenten un vector y luego utilizar eso como una plantilla para generar la sonda. Puesto que estamos generando la sonda de ARN el proceso que implica es la transcripción in vitro y aquí estamos utilizando la polimerasa de ARN T7 o la polimerasa de ARN T3 dependiendo de qué promoterestá disponible y entonces usted puede usar etiquetada NTP.Así, hay dos maneras de hacerlo uno la forma inicial donde la gente solía hacer probehan utilizado para hacer la sonda radioactiva etiquetada y ahora el debido a muchos problemas con la actividad de la radio, nos estamos moviendo más hacia la sonda etiquetada no radioactiva. Y en esta síntesis de la sonda qué sucede o se toma uno de los NTP como labelledor de isótopos se puede utilizar algunos de la sustancia química sintetizada NTP.Por ejemplo, esto es biotina etiquetada UTP, DIG o digoxigenin etiqueta UTP y luego esta sonda dependiendo de lo que es el tamaño de su gen, usted puede usarlos y usted puede hidrosethem.Así, ¿qué usted hace básicamente?Usted toma su gen específico fragmento que clone en un vector de clonación, lo importante es que su vector de clonación debe tener T3 y T7 promotor o puede utilizar el promotor de SP6 depende del vector disponible. Y entonces si su gen fragmento específico está en la orientación del sentido, si usted tiene que generateantisentido sonda. Usted tendrá que utilizar el promotor T 3 y la polimerasa T 3 ARN y luego para hacer esto lo que usted hace linearize este vector de aquí y luego utilizar T 3 ARN polimerasa para transcribir esta región como una sonda antisentido. se llama en DIG-UTP y luego si esta síntesis de la sonda o si el tamaño de la sonda es más alto que lo que va usted prefiere hidrolizar y hacer un tamaño de la sonda de aproximadamente 75 to100 de nucleótido largo. Esto es importante porque si el tamaño de la sonda es muy alta no penetrará correctamente los tejidos en el momento de la hibridación.Así, por ejemplo, este es un gel que muestra cómo generar el probe.Así, este es un plásmido linearizado; por lo que, usted tiene plásmido con su gen específico fragmentclonado en él, entonces usted ha hecho la transcripción in vitro y usted ha generado el probesesto es ARN sonda. Pero este tamaño de la sonda es bastante alto entonces hemos hidrolizado esta sonda y hemos madea pequeño hidrolizado probe.Ahora, esta sonda hidrolizada está lista para la hibridación. ¿Para la hibridación lo que hacemos?Antes de ir para la hibridación hay algún tratamiento con los tejidos, y un tratamiento veryimportante hay un tratamiento de proteinasa K esto es muy importante para digerir de manera parcial el tejido para permitir una mejor penetración de la sonda. Y entonces una vez que usted ha tratado sus tejidos entonces usted utiliza esta sonda de ARN y hacer hibridación generalmente de 16 a 20 horas a 50 a 55 grado centígrado entonces una vez que su hibridación isfinished es muy importante para usted para eliminar las sondas unbound de lo contrario también se givesbackground signal.Así, qué es lo que hacemos para eliminarlos un tratamiento que hacemos que es el tratamiento de RNase typicallywe estamos utilizando aquí RNase A. RNase A que se degrada específicamente unbound unbound RNA.So, esto eliminará todo el ARN no enlazado de los tejidos entonces hacemos un lavado estricto para eliminar incluso si hay algo que no hibridar las sondas. Esto es muy importante antes de ir para la detección de la señal, si usted no doesta correctamente entonces usted va a tener muchas señales de fondo. Entonces el proceso va una vez que usted ya tiene secciones, ya se ha sondeado con las sondas de ARN antisentido, entonces usted utiliza el anticuerpo.Por lo tanto, normalmente usamos anticuerpo Anti-DIG.Por lo tanto, usted sabe que nuestra sonda de ARN antisentido está etiquetada con DIG.Ahora estamos usando un anticuerpo que reconoce digoxigenin.Así, este Anti-DIG anticuerpos que estamos usando y luego dependiendo de qué método o qué manera usted va a detectar, si usted quiere hacer el ensayo colorimétrico entonces lo que weuse DIG anticuerpos anti DIG que tiene conjugados de fosfatasa alcalina. Pero si usted quiere detectar a través de la detección de base fluorescente, entonces usted puede usar anti-DIGanticuerpo con algo de la proteína etiquetada fluorescente, por ejemplo, Rhodamine.Así, básicamente usted ha tratado ahora las diapositivas con el anticuerpo entonces usted tiene que lavar para eliminar De nuevo el método de detección dependerá de qué tipo de sondas qué tipo de anticuerpo se han utilizado. Por lo tanto, si usted ha utilizado la sonda radioactiva, entonces usted puede detectar la señal por la autoradiografía, si usted ha utilizado anticuerpo antiDIG que tiene fosfatasa alcalina u otras enzimas basedenzimas de color entonces usted puede hacer la reacción del color, pero si usted tiene el anticuerpo fluorescente etiquetado, entonces usted puede hacer la microscopia fluorescente para detectar la señal. MADS2 fue detectado o analizado para su patrón de expresión usando una sonda de ARN antisentido no radioactivo, y esto fue detectado por microscopía de fluorescencia. Por lo tanto, sólo para saber rápidamente que este es el órgano en el que queremos ver la expresión, este órgano se llama lodicule es un pequeño órgano de la flor del arroz que se puede ver aquí muy claro que este es el órgano aquí, y queremos ver que cómo MADS2 se expresa a través de los orgas.Así, básicamente hemos tomado todo este lodicule y hemos hecho todo el montaje in situ hibridación utilizando la sonda antisentido contra el MADS2 y luego detectado usando anti rhodamine labelledanticuerpo.Y usted puede ver claramente aquí que con este método in situ podemos decir que la expresionde MADS2 es asimétrica distribuida. Si esto es un lodicule se puede ver que las puntas y la región periférica de la lodiculetienen más señal MADS2 en comparación con la región proximal y basal de this.Así, este análisis básicamente no sólo nos permite comprobar la expresión en un particular órgano, sino que también nos permite comprobar si la transcripción es asimétrica distribución.Del mismo modo, si usted toma este ejemplo. Por lo tanto, aquí básicamente estos se hicieron en las secciones longitudinales del panicle.Así, esto es de nuevo arroz pancile, y la panícula de arroz es como la inflorescencia que tiene diferentes florets, florets en una fase de desarrollo diferente y este panel superior si usted mira que han sido etiquetados con el ARN antisentido sonda para otro gen que se llama MADS1, pero la radio etiquetada probe.Así, usted puede ver claramente la expresión es a lo largo de la etapa temprana y luego el stageit es más restringido al lema y palea y la expresión en los órganos de whorl interior son dispearing.Así, este es un ejemplo típico de la etiqueta radiactiva ARN in situ hibridación en la sección. Por otro lado si usted mira este OsMGH3.OsMGH3 es un río abajo gen que está regulado por el MADS1 y lo que sucede si se ve a continuación este stage.Así, esto se hace por medio de una sonda de ARN antisentido no radioactivo y si se mira esta etapa se puede ver que muy similar a la MADS 1 muestra el alto nivel de expresión a lo largo de la primimedia floral. Pero en la etapa posterior cuando los órganos florales son organogénesis ya se ha comenzado youpuede ver la expresión en lema y palea se disminuye, pero los órganos de muelle interior están teniendo alto nivel de expresion.Así, de esta manera; este método nos está permitiendo estudiar dónde exactamente un gen en particular es expressed.Así, esto fue ejemplo de ARN ARN La hibridación in situ, pero todos sabemos que el ARN en la mayoría de los casos la molécula funcional es proteína no el RNA.Por supuesto, hay una gran cantidad de RNAs que están funcionando sin traducir en una proteína, pero en casos generales o típicamente ARN están experimentando el proceso de la traducción y están haciendo la proteina.Así, si usted quiere detectar la proteína en un tejido o si usted quiere detectar la localización espacialy temporal de la proteína, usted puede realizar la proteína in situ hibridación que también se llama inmunohistoquímica y lo que usted puede hacer esto es un ejemplo típico de todo un montaje. Aquí esto es bastante Similar con la hibridación del ARN in situ, excepto el método de detección es ligeramente diferente. Por lo tanto, aquí también se recoge el tejido y luego se realiza la fijación, después de la fijación se está haciendo la permeabilización de la membrana y luego se puede añadir el anticuerpo.Por lo tanto, hay dos posibilidades si usted quiere detectar una proteína contra la cual usted alreadyhave anticuerpo entonces usted puede usar ese anticuerpo, si usted no tiene anticuerpo contra una particularproteína de interés entonces usted puede etiquetar la proteína, usted puede etiquetar su proteína con alguna etiqueta. Por ejemplo, usted puede agregar la etiqueta HA, la etiqueta MYC o cualquier tipo de etiqueta y entonces usted puede utilizar el anticuerpocontra la etiqueta para detectar la localización de la proteína. Y entonces hay dos maneras, si usted tiene un anticuerpo primario ya etiquetado con los conjugados si ya está conjugado, usted puede utilizar el anticuerpo primario más que usted puede detectar primero con el primario anticuerpo.Y entonces usted puede usar el anticuerpo secundario que está en contra del anticuerpo primario y luego usted puede hacer, usted puede visualizar la señal. La visualización de la señal que usted puede hacer de manera diferente puede, de hecho, cot con differente.Así, por ejemplo, si usted toma este ejemplo aquí una proteína que es la proteína PIN1 veryimportante proteína transportadora de Axin se ha visto para su localización y usted puede ver la señal verde es para la proteína PIN. Y luego otra molécula u otra proteína que está básicamente etiquetada con la señal roja es ATPasa tan básicamente esto va a marcar la proteína de la membrana y luego DAPI wichichis azul en La DAPI de color se une básicamente con el DNA.So, se va a quedar en el nucleo.Así, esto los tres juntos se ha utilizado para comprobar básicamente la localización de PINproteina.Así, si usted mira aquí; Así, esto es puede ser una versión ampliada de él y usted puede decir claramente que este es el límite celular y en el límite celular la proteína PIN está muy bien localizada o asimétricamente localizada en un lado de la membrana celular, pero se ve a este lado de la membrana la localización de la proteína es muy pequeña. Por lo tanto, esto es que estoy tomando sólo un ejemplo, pero hay un montón de ejemplos disponibles donde se puede detectar esta proteína por proteína in situ hibridación o inmune-histochemistryok.So, el siguiente método que se está utilizando para monitorear la expresión de genes temporales y espaciales es promoterreporter ensayo, muy comúnmente used.So, en si usted recuerda una de nuestras conferencias anteriores. Por lo tanto, hemos discutido que podría haber dos tipos de ensayo del promotor del reportero.Usted puede hacer una construcción de fusión transcripcional o hacer una construcción de fusión translacional, ¿qué es la diferencia entre ellos?En una construcción de fusión transcripcional así, usted sólo toma el promotor o la secuencia de actualización de su gene.Así, si este es su gen que sólo toma la región promotora y esta construcción basicamente le dirá la actividad transcripcional o promotora dondequiera que esté disponible. Y entonces usted utiliza una especie de gen reportero aquí, el gen reportero o puede utilizar GUS kindof gen o puede utilizar GFP, RFP cualquier tipo de gen reportero que puede utilizar aquí. Entonces, si usted genera este tipo de construcción se llama construcción de fusión transcripcional, y este constructo básicamente le dirá dónde está el dominio de la actividad promotora. Esto no se puede utilizar por sí solo porque en las plantas la mayor parte del tiempo se ha visto que los promotores no están muy localizados, hay algunos elementos reguladores del cis que son esenciales para la actividad del promotor e incluso se encuentran dentro del gen en algún momento en los intrones.Así que, siempre es difícil elegir qué cantidad de región o cuánto segmento del ADN se debe tomar para la actividad promotora.Por lo tanto, si usted toma un fragmento, supongamos que si está tomando 3 Kb secuencia en sentido ascendente desde el principio de inicio transcripcional, entonces lo clonará y verá un patrón de expresión, pero si quiere validarlo o si quiere estar muy seguro de que en realidad esta es la actividad promotora que tendrá que hacer este análisis junto con el in situhibridación.Así, la hibridación in situ justo ahora hemos discutido, allí usted va y usted no está haciendo nada usted está sólo detectando el patrón de expresión endógena de un gen de un RNA.Y entonces usted está haciendo la construcción de la fusión transcripcional y cuando usted Si su actividad promotora o si su actividad promotora de informador es la misma que la hibridación in situ, entonces puede decir que el elemento promotor o la región promotora que ha seleccionado, está completo y tiene todos los elementos reguladores del cis que es parte de este promotor o que es requerido por este promotor. En la fusión translacional construir lo que hacemos eso, esto es más importante porque se lo dirán los dominios de la expresión, así como la localización de la proteína subcelular.Básicamente tomamos el promotor deseado y luego tomamos el gen también, pero fuseeste gen con algunos de los reportes.Así que, básicamente lo que estamos haciendo aquí, estamos mutando el codon stop del gen de la información y luego en el marco estamos fusionando con algunos de los reporteros y luego lo que sucede eso?Esto y si usted usa este constructo esto se llama fusión translacional construct.So, esto dirá a primera cosa que, donde siempre es la actividad promotora que reportará y segunda cosa es que lo que es la localización subcelular de su proteina.Así, porque su proteína ahora está etiquetada con el GUS y GFP así que, dondequiera que su proteinara se mueva él reportará su presencia, pero aquí hay un problema. La cuestión es que puesto que usted está haciendo una proteína de fusión hay una posibilidad de que esta fusiónpodría inactivar sus proteinas.Así, su proteína podría no estar en su confirmación apropiada y Entonces, si usted reporta su localización siempre es cuestionable que la localización es debido al artefacto o es el pattern.Así que, esto tiene que ser validado esto lo puede validar, cómo usted puede validar su construcción haciendo la complementación que significa que, si usted toma mutante de este gen de interés, donde usted ve algún fenotipo y luego tomar la fusión translacional constructand volver a la mutante. Si el fenotipo de mutante se complementa con este constructo, lo que significa que su proteína de fusión es funcional y usted puede confiar en su localización pattern.So, I le dará ahora pocos ejemplos muy importantes donde la construcción de transcripciones y translationalfusion se ha utilizado con éxito para revelar una información muy importante. Por ejemplo, si usted mira este gen SHORTROROOT. Por lo tanto, el gen SHORTROOT es muy importante para el desarrollo de la raíz en Arabidopsis y si usted sólo tiene ARN in situ hibridación o si usted genera una fusión transcripcional construct.Así, esto es la detección de ARN endógeno por ARN in situ hibridación y aquí usted tiene el promotor takenSHORTAROOT y fusible en aquí GFP aquí GUS.En todo este caso si usted mira el dominio de expresión de la proteína SHORTROOT lo que se ve que este gen se expresa en el problema vascular. Por lo tanto, si usted mira esto es una visión longitudinal de la raíz de Arabidopsis creciente esto es endodermis.Así, si usted ve esto en endodermis usted no ve ninguna señal, pero el tejido después de endodermislike pericycle, xylem, phloem, procambium que tienen la actividad esto es lo mismo usted puede ver aquí y esto es también usted puede ver cuando usted hace cuando usted hace in situ hibridzationhere en el root.Así, esto dice que el promotor SHORTROOT está activo en el tejido vascular, pero cuando usted hace una fusión translacional, donde usted está usando el mismo promotor SHORTAROOT, pero ahora ABREVIADO La proteína se ha fusionado translacionalmente con el GFP.Lo que se observa es que aparte del dominio de la expresión que está en el tejido vascular, también se ve que la proteína también está presente en la endodermis y en la endidermis es gettinglocalizada al núcleo, y esto tiene mucha importancia tal vez en algunas de las clases futuras, vamos a discutir cuál es la importancia funcional de esto.Así, ¿cómo esto es posible?Si su promotor está activo aquí, las transcripciones están ocurriendo sólo en el tejido vascular, ¿cómo está presente su proteína en el tejido donde la transcripción no está sucediendo?Así, esto da una información de que podría haber una posibilidad de que su proteína está gettingsintetizada en el tejido vascular, entonces de tejido vascular que está migrando a las células de vecindad que es endidermis en este caso. Y esto sólo es posible si usted estudia tanto la transcripcional como la construcción de la fusión para el gen. Similar tipo de estudio se ha hecho en rodaje apical meristem de Arabidopsis thaliana, y aquí la una proteína muy importante que se llama WUSCHEL.WUSchel es importante para regular y para mantener la actividad meristemática, usted verá en la próxima clase, pero aquí lo que quería mostrar si usted mira el patrón de hibridación in situ de la WUSCHEL.Usted siempre verá que este WUSCHEL se expresa en algún lugar aquí en este dominio, pero este dominio que es L 1 y L 2 capa, esto es la inflorescencia meristem esto es el meristem floral. En todos los casos se puede ver que L 1 y L 2 capa no tienen ARN que la transcripción de WUSCHEL no está sucediendo en L 1 y L 2 capa. Pero cuando se toma y cuando se ve la localización de la proteína de WUSCHEL entonces lo que se ve. Por lo tanto, este es WUSCHEL promotor de la conducción de GFP fusionado con la proteína WUSCHEL, se puede ver la capa de thatin L 1 y L 2 capas tiene la proteina.Así, transcripcionalmente está aquí, el ARN está aquí y entonces la proteína también está presente en la región donde la transcripción activa de la transcripción para WUSCHEL no es casualidad. Por lo tanto, esto dice que esta proteína podría estar moviéndose de una célula a otra de la célula ok. El método final lo que se está utilizando para estudiar la expresión temporal y espacial es la promoteratrapamiento o atrapamiento del potenciador o atrapamiento de genes, ¿qué es este atrapamiento?Este es un método muy importante y lo que usted puede hacer hay diferentes tipos de trapingyou puede hacer. Este es el ADN genómico típico y luego, por ejemplo, usted quiere identificar un gen con un particularor con un patrón de expresión definido como usted puede hacer?Una forma de hacerlo en trampeo potenciador aquí nos centraremos más en el trampeo del promotor, creo que en el trampeo potenciador que ya hemos discutido en una de la clase anterior. Pero, ¿qué pasará si usted tiene que atrapar a un promotor de su interés, si usted quiere identificar un gen que nos ha dejado asumir la expresión en la hoja o si se expresa sólo en los pétalos y usted quiere identificar ese tipo de gen para el estudio basado en la genética inversa puede usted hacer?Por lo tanto, básicamente usted puede generar una construcción en esta construcción lo que sucede que, usted puta reportero gen, pero en el gen reportero sólo promotor menos del gen reportero, y poner, transferencia hacer un constructo en el ADN T y utilizar este ADN T para elevar la planta transgénica. Por lo tanto, básicamente lo que está sucediendo este ADN T se insertarán al azar en el genoma, pero si este ADN T se insertó, vamos a asumir en el gen de interés que se expresa en el pétalo y si vamos a suponer que si este es un promotor, este es el gen y aquí se asume si su construcción se ha insertado. Entonces ahora tiene una actividad promotora de aquí del gen que es Por lo tanto, básicamente se está integrando al azar a un reportero en el genoma y tratando de identificar la línea transgénica, donde su reportero ha sido integrado en el río abajo de un promotor que está activo en un tejido en particular. Y entonces usted puede básicamente aislarlos, de manera similar usted puede hacer el gen trampeo; usted puede hacer el atrapador atrapando en el atrapador que atrapan lo que básicamente hacemos?Tomamos un promotor mínimo y luego reporters.Así, promotor mínimo promotor, así como reportero y luego tratar de atrapar el potenciador, aquí weare tratando de atrapar al promotor. Y usted puede ver algunos de los ejemplos de que esto ha sido muy exitosamente utilizado para identificar muchos genes cuyas expresiones son de una manera muy restringida por ejemplo, este geneis expresado en la hoja esto se expresa en el trichome entonces esto se expresa en la raíz apical meristem de manera similar aquí si usted mira las primordias laterales son las primordias laterales que vienen de modo coming.Así, básicamente entonces entonces ya que usted conoce la secuencia de ADN T usted puede utilizar parte de la técnica basada en la molecularbiología para mapear el gen donde es el sitio de la integración, entonces usted puede identificar el gen para el estudio funcional.Sí, aquí hay un muy buen ejemplo, donde donde los genes o las líneas se han identificado que muestran tanto pétalo como stamen y o algunos de ellos se expresan tanto en pétalo como en estamentos. Por lo tanto, se puede ver que se han generado.Por lo tanto, gran número de línea de trampa de genes se ha generado y si se ven estas líneas están teniendo un patrón de expresión diferente. Algunos de ellos se expresan específicamente en el pétalo o específicamente expresado en el stamen algunos de ellos se ha expresado tanto en pétalos como en estambres, entonces usted puede ir mapeste gen y luego la identidad y tomar este gen para el estudio funcional adicional.Por lo tanto, si recapitulase lo que hemos debatido hoy.Así, hoy hemos terminado el análisis del patrón de expresión particularmente hemos takenwhat son las maneras y estudiar el patrón de expresión espacial y temporal de una planta de genética. Y particularmente estos son muy importantes cuando usted está estudiando el desarrollo de un particular órgano o si usted está identificando algún regulador putativo de un proceso de desarrollo, andif usted quiere estudiar su función específica en el proceso de desarrollo.Así, voy a parar aquí, en la próxima clase discutiremos la caracterización funcional de un gene.Así, una vez que usted ha identificado un gen, cómo lo tomará para más funcional caracterización. Muchas gracias.