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Module 1: Genética molecular del desarrollo de plantas

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Enfoques de los estudios de desarrollo vegetal

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Bienvenidos a la clase actual de Biología de Desarrollo Vegetal, donde vamos a estudiar cómo estudiar la biología del desarrollo de las plantas.Por lo tanto, uno de los enfoques muy importantes y prominentes que tomamos para estudiar la biología del desarrollo de las plantas es el enfoque basado en la Genética Molecular. Por lo tanto, la genética molecular es básicamente para estudiar cómo un gen en particular en un genoma regulatesa en particular el proceso de desarrollo en las plantas. Por lo tanto, hay dos enfoques principales en la genética molecular, que normalmente debemos tomar para estudiar la biología del desarrollo de la planta, uno es el avance de la genética basada en los enfoques y la genética inversa. Considerando que, en el caso de la genética inversa, primero definimos nuestro gen de interés, y luego tratamos de entender o diseñamos el experimento para determinar qué es una función específica del desarrollo de ese geno.Así, se puede ver el diagrama esquemático. Así, en la genética de forward, empezamos con el fenotipo y luego correlacionamos el genoma asociado con este fenotipo. Mientras que en el caso de la genética inversa, tenemos un gen, identificamos el gen primero y el que tratamos de entender, ¿este gen tiene algún papel que desempeñar en el desarrollo de la planta, andif it is so, what is its ¿función específica en el crecimiento y desarrollo de la planta?Por lo tanto, ahora vamos a tomar uno por one.Así, primero vamos a discutir más acerca de la genética hacia adelante. Por lo tanto, como dije el primer paso de la genética hacia adelante es que usted debe tener un mutante; mutante es muy importante, así o cualquier variant.Así, mutante significa un defecto particular en el desarrollo. Por lo tanto, defecto es importante porque si usted no tiene anormalidad, es difícil de rastrear cuál es la normalidad o cuál es el mecanismo que está regulando el desarrollo normal. Por lo tanto, típicamente, ¿cuáles son los diferentes pasos que seguimos durante el avance de la genética hacia adelante?El primer enfoque es identificar un fenotipo de desarrollo deseado o un mutante con el fenotipo. Entonces, una vez que identifiquemos este mutante, entonces obviamente, vamos a analizar la genética o la herencia de este mutante si es dominante, recesivo, semi dominante. Y entonces una vez que conocemos el patrón del mutante o el patrón de herencia del mutante, entonces vamos y tratamos de mapear el lóbulo genético. Entonces, esto es importante entonces tratar de entender que ¿cuál es el loci genético que es actualmenteresponsable de estos defectos de desarrollo?Y luego paso final en la genética hacia adelante lo que tomamos, luego validamos el genotipo y la asociación.Entonces, ¿cómo hacemos?El primer paso normalmente tomamos un mutante o cualquier variante, las variantes naturales también están disponibles para estudiar, y luego y luego, finalmente, hacemos la complementación para validar esto. Por lo tanto, lo primero importante en cualquier estudio de la biología del desarrollo de las plantas es arreglar su pregunta biológica. Por lo tanto, si usted recuerda nuestras clases anteriores, así que lo que hemos discutido, nos hemos referido a lo que son los diferentes eventos de desarrollo que tiene lugar durante el proceso de desarrollo de la planta. estudio.Por ejemplo, usted está interesado en estudiar lo que es el loci genético que es responsable de mantener el meristem, segundo eventos de desarrollo lo que usted puede estudiar es el órgano identitario y patterning.Así, usted quiere entender que lo que son los genes o lo que son los genes, el elemento genético, que es responsable de definir una identidad particular de un órgano o un tejido. Y la segunda cosa es que usted puede identificar cuáles son los genes o cuáles son los elementos genéticos que es responsable de los patrones, esto es importante en el proceso de un mantenimiento de la arquitectura. Entonces usted puede identificar mutantes que muestra la anormalidad en la forma o el tamaño de un particular órgano, en particular una parte de la planta. Y luego otra cosa muy interesante lo que usted puede estudiar lo que son las mutaciones del desarrollo que afecta a la transición.Así, si usted vuelve a recordar nuestra clase anterior, por lo que ya hemos discutido que durante el desarrollo del crecimiento, una planta pasa a través de diferentes fases a partir de la fase de embriogénesis. Entonces en la post embriogénesis primero se somete al proceso de desarrollo juvenil, hay una transición de juvenil al desarrollo vegetativo adulto. desarrollo, hay otra transición o transiciónimportante es de la vegetativaal desarrollo reproductivo. Por lo tanto, estas fases se regulan en el tiempo.Así que, ¿qué podemos hacer?Podemos identificar variantes o mutantes donde esta etapa o esta transición sean defectuosas. Otra cosa importante si se recuerda a la clase anterior, hemos hablado de la activación de la ramificación o la activación del crecimiento secundario. Por lo tanto, esto tanto este proceso de la vía de acceso se regula y se produce sólo en un punto de tiempo determinado. Por lo tanto, también es importante o como se puede imaginar que también están regulados por el elemento.Así, también podemos identificar o la pantalla de un mutante donde estos procesos son defective.Así, ahora vamos a ir y mirar cuáles son las diferentes maneras de identificar el mutant.Así, el primer paso de la genética hacia adelante nosotros El primero y tal vez más importante con respecto a los enfoques de crianza era ver la variación.Así, en esta naturaleza, hay una gran cantidad de variaciones en las etapas de desarrollo, órganos, estructura de la función. Así, si usted busca por ejemplo, este panel superior, por lo que aquí son diferentes la adhesión de Arabidopsistaliana.Y lo que usted mira hay variaciones morfológicas variaciones.Así, si usted mira sus hojas, el número de hojas, la forma de las hojas, el tamaño de las hojas, sothere son una gran cantidad de variación incluso dentro de las mismas especies.Entonces, ¿qué podemos hacer?Podemos elegir cualquiera de estos dos contrastes dos de acceso con la actual contrastingor con el rasgo diferente, y entonces usted puede tratar de que usted puede tratar de identificar el localizador asociado. Si usted mira aquí, así que esto es básicamente variaciones en las hojas de 6 rosetas, por lo que es una adhesión diferente. Así que usted puede ver que incluso no sólo la morfología general, sino la forma y el tamaño de un órgano específico también muestra una gran cantidad de variación a través de estas especies o a través de las adhesiones. Aquí está la variación en la arquitectura. Así, usted puede mirar estas todas las plantas se comparan en el momento de después de la transición floral Y usted puede ver que a través de estas diferentes variantes o diferentes adhesiones, hay una gran cantidad de variación en su arquitectura final de la planta final de la fila general o final. Por lo tanto, esto podría ser una fuente donde usted puede identificar un rasgo particular de interés, y usted puede querer estudiar el gen asociado. La segunda manera de moverse es usted puede inducir las mutaciones. Por lo tanto, usted puede básicamente crear una planta mutante donde usted puede buscar un fenotipo especial. Así, hay muchas maneras de hacer eso, no vamos a hablar más de ello, pero lo que podemos hacer podemos tomar pocos ejemplos de muy ampliamente utilizado para estudiar la Para generar el desarrollo de los mutantes.Así, hay tres grandes categorías, mutágenos químicos, mutagenos físicos y mutagenos biológicos. En los mutagenos químicos el químico más utilizado es el EMS; EMS genera un puntomutación.Así, lo que sucede usted verá en la siguiente diapositiva que crea una especie de cambio de tenucleótido en una forma en que el par de base GC se convierte en la base de AT. Por lo tanto, esto es una especie de mutación de punto y esta mutación de cualquier punto tiene mucho beneficio. Segundo mutágeno es mutagenes físicos donde usted puede utilizar diferentes radiaciones electromagnéticas rayos gamma, rayos X, luz UV y ellos pueden La tercera manera de generar mutantes son los mutagenos biológicos, donde estamos usando una bacteria que se llama Agrobacterium. Y Agrobacterium básicamente estamos usando este sistema de transformación mediado por Agrobacterium, donde podemos usar el sistema basado en el ADN o en los transposones, y queremos crear un gen kindof knock out mediante la inactivación.Así, de nuevo si se mira cómo funciona el EMS, por lo que como he dicho; así que vamos a suponer que aquí es una base de basura de GC. Y si usted trata con el EMS, lo que hace; lo cambia modificar este nucleótidos Y una vez que esta modificación se ha producido en la siguiente ronda de replicación, este metylatedG no puede emparejar con el C, sino que puede emparejar con el T. Así, ahora ha añadido T en lugar de C en una hebra y una vez que este ADN se someterá a la segunda ronda de replicación en el lugar de T, naturalmente A se agregará. Por lo tanto, si miramos de aquí a aquí hay una transición de un par de base de CG a un par base de TA. Esto está creando una especie de mutación de punto. Y este es uno de los muy poderosos químicos mutágenos que estamos usando o personas que están trabajando en el campo de la biología del desarrollo es ampliamente utilizado para generar ¿Qué es lo que hace con este?Por lo tanto, la forma de generar vamos a tomar ejemplo típico de Arabidopsis thaliana.Así, usted toma un gran número de semillas, y expone las semillas con el químico. Y lo que usted está esperando?Usted está esperando mutaciones aleatorias en algunas de las semillas, en cualquier parte del genoma, usted no puede controlarlo. Y entonces usted genera una población donde usted tendrá algún no-mutante, algún mutante. Y cada vez que esta mutación ocurrirá en la línea germinal y usted toma estas plantas las cultiva. Y cuando usted las cultiva, hay una posibilidad, si su planta ha venido de las semillas no mutadas, tendrá una normal, va a crear un patrón normal, pero hay una posibilidadque usted pantalla una planta que viene donde el genoma ya ha sido mutated.Así, usted ha generado algún tipo de mutaciones puntuales y como dije que de esta manera Entonces, usted tiene que examinar una población muy grande de mutante para encontrar su mutante del deseo. Entonces usted criba esta población y busque su fenotipo, arregle su fenotipo. Por lo tanto, en primer lugar vamos a asumir que si usted quiere estudiar el desarrollo de la raíz, entonces usted debe buscar un mutante donde la raíz es defectuosa. Si usted quiere estudiar el desarrollo de rodaje, encontrar o la pantalla para mutante, donde disparar isdefect, flor es defectuoso, cualquiera que sea su interés, usted puede arreglarlo y luego tratar de identificar un fenotipo mutante. Y sabemos de la genética este mutante puede ser o bien dominante, recesivo, canbe ya sea en condición homocigosa o condición heterocigo; todo este tipo de cosas que usted puede analizar, y usted puede entender que lo que es el pattern.Así, voy a tomar algunos ejemplos. Así que, si usted mira aquí, esta es la raíz de Arabidopsis, este es un típico o muy temprano stageArabidopsis semillero. Cuando este semillero era la mutagénesis del EMS y era y la gente estaba buscando algunos defectos de la raíz, y lo que observamos que si usted mira esto, el desarrollo del rodaje parece bastante normal. Pero hubo tres mutantes independientes, que fue identificado de esta población donde el desarrollo de la raíz fue afectada.Así, Usted puede ver que son muy corta raíz. No sólo que esta es una herramienta poderosa. Usted puede incluso hacer una pantalla genética muy sofisticada. Por ejemplo, si usted mira estas dos imágenes, por lo que aquí queremos identificar el tejido patterningen un tejido muy especial que se llama phloem.Así, si usted mira esta señal, esta es una proteína fluorescente verde proteína. Y lo que sucede que si usted expresa o si usted produce la proteína fluorescente verde en las células del phloem, puede moverse a través de las células de ploem, y se distribuye en el theroot tip.Ahora, si alguien quiere identificar qué es el locus genético o qué es el gen wichis Responsable de dar una identidad adecuada a la célula de phloem o regular una propiedad de la célula de ploem, puede mutar estas plantas y mirar la planta por lo que esta propiedad de ploem está afectado. Por lo tanto, si usted mira el mutante, aquí usted puede ver que tenemos la señal fluorescente verde en algún lugar aquí, pero de alguna manera el fluorescente no se mueve, el GFP no es moving.Así, esto dice que en este mutante algún aspecto de cualquiera de los desarrollos phloem son la función afectedor phloem que es el transporte de las moléculas son afectados.Así, usted puede solucionar su pregunta biológica aquí, y entonces usted puede ir y rastrear atrás ¿Qué es el loci genético asociado a este? Del mismo modo, este enfoque mutagénico que usted puede tomar, supongamos que ya havea mutante, usted sabe la función de un gen en particular a través de la genética hacia adelante. Usted puede tomar más y usted puede tratar de identificar otro componente genético de esa vía entera induciendo por mutagenización de sus mutantes y la detección de mutaciones del segundo sitio identifyingenhancer, identificando supressor.Así, usted puede do.tomar estos ejemplos aquí. Por lo tanto, este es un gen que se llama AG AGAMOUS gene.Así, en este mutante, este es un solo mutante, se puede ver algún fenotipo, a Cuando este mutante fue mutagenize y buscó otra segunda mutación del sitio, por lo que fue otro mutante que fue identificado hua 1, hua 2; y estos mutantes junto con los mutantes de 4 mutantes, dobles mutantes. Si usted mira todos los demás el fenotipo mutante todavía está allí, pero incluso los estampados son gettingreconvertido en petal.Así, ya sea la segunda mutación del sitio puede mejorar la primera mutación. Caso similar, usted puede aquí hua 1, hua 2, solo ellos no tienen ningún fenotíty.Así, si usted toma un solo mutante, no hay ningún fenotipo obvio, pero cuando usted screenfor other superior order mutantes, so hua 1 and 2 with hen 1, there is a loss of floraldeterminacy there is homeotic conversion of stamen into petal.Similarmente, hua 1, and hua 2 with ago 10 gene there is loss of floral determinacy, withagamous, there is loss of floral determinacy and conversion. So so, if you look this this is a way to this provides una muy poderosa manera de realizar una pantalla genética muy especial o muy dirigida e identificar el doble mutante, el triple mutante, y luego tratar de entender toda la vía genética se puede rastrear la vía genética de lo que todos los genes son responsables de regular un Otra cosa importante si usted mira aquí esto es una proyección de un supresor.Así, supongamos que he identificado un mutante donde la hoja es defectuosa. Si usted mira aquí esto es de tipo salvaje hay tantas hojas y forma y es diferente. Pero cuando usted tiene un mutante donde el número de hojas y la forma y el tamaño de las hojas arealtered.Ahora, he identificado un gen o un componente genético que es responsable de este patrón, quiero identificar qué es el otro gen o cuáles son los otros componentes genéticos que están interactuando con este gen para proporcionar esta forma particular Usted puede tomar este mutante y ahora usted puede buscar el doble mutante donde incluso los previousmutantes están siendo suprimidos. Esto se llama mutantes supresores. En estos casos, usted los está añadiendo y usted está identificando un fenotipo mutante más grave. Aquí estamos buscando un mutante donde incluso el fenotipo existente está desapareciendo o recibiendo supressed.Así, esta técnica usted puede utilizar para identificar ambos tipos de genes. Ok No voy a ir en detalle, pero usted puede mirar esta imagen aquí gamma mutagénesis, las radiaciones físicas que se utilizan para mutagenizar las plantas. Y lo que usted puede ver que hay muchas clases diferentes de mutantes con diferente fenotipo, se puede ver fenotipo de clorofila, fenotipo de hoja, fenotipo de brotes, fenotipo de flores, todo este tipo de fenotipo o mutantes se puede generar con este mutagenesis.Así, estos son los dos modos de hacer mutagénesis. Y tercero otra manera muy importante para generar una deseada mutantsis biológica mutantsis. Aquí hay tres grandes enfoques que se está llevando a cabo. Primero uno es T-DNA mutagenesis que se hace por Agrobacterium mediada, T-DNA de inserción. mutagenesis.Así que, en transposones todos ustedes han estudiado en su curso o curso anterior que los transposonsson los elementos genéticos móviles que naturalmente están presentes en el organismo, y en realidad saltan en el genoma por lo que todos ellos también son llamados genes.Así, podemos usarlos como una técnica para básicamente interrumpir un gen en particular e identificar el fenotytipo.Entonces, ¿qué podemos esperar a través de este?Entonces, aquí básicamente este proceso se llama inactivación insercional o mutagenesis.Entonces, ¿qué sucede?Por lo tanto, usted toma transposón o toma el etiquetado de activación; el etiquetado de activación es ligeramente diferente, pero si usted toma T-DNA o transposon.Así que, lo que básicamente está haciendo, usted está permitiendo que esta molécula al azar se pueda insertar el genoma. Y si sucede que, se inserta en el gen o los elementos reguladores del gen, puede afectar a la expresión o la función del gen y que resulta en algún mutantfenotipo. Por lo tanto, estas son algunas posibilidades.Supongamos que si esto se inserta en la región de codificación, puede interrumpir la región del codingy usted puede obtener una pérdida del fenotipo de la función. Por lo tanto, donde el gen se interrumpe, no se hacen proteínas funcionales y es por eso que usted tendrá un fenotipo debido a la pérdida de los genes. Segunda posibilidad es que si la inserción de alguna manera sucede en la región promotora oruntraded region.Así, las regiones promotoras que usted sabe que esto es muy importante para regular la expresión y el patrón de expresión de una región de las regiones de origen-No traducido, que directamente no están involucrados en la codificación de la proteína, mayordomo de regulaciones se produce a través de la región no traducida. Por lo tanto, si hay inserción o interrupción debido a la T-DNA o transposones en esta regiones, ¿qué vamos a esperar?Podemos esperar una expresión reducida o un patrón de expresión alterado. Y en ambos casos, podríamos tener el fenotipo. Otra manera es que sucede que de alguna manera la inserción ocurre en un gen o en los elementos genéticos y también puede mejorar la expresión. Esto es más relevante cuando hablamos de la codificación de la activación, pero también se ha visto que si la inserción ocurre en algún lugar en el promotor o ocurre en el elemento wichis como el silenciador o represor de un gen. Y si esta inserción suprime o mata a los reguladores, entonces usted podría haber aumentado la presión. Pero de nuevo como dije que este proceso Por lo tanto, también existe la posibilidad de que haya una inserción múltiple en el mismo genoma en el sitio múltiple y esto puede generar un nocaut múltiple o derribar cualquier condición de la condición ok.So, vamos a discutir brevemente cómo T-DNA mutagenesis se produce. Así, Agrobacterium es una bacteria que básicamente se sabe que infecta las células de la planta. Y tiene un plásmido que se llama Ti plásmido, plásmido usted sabe que es un material genético cromosómico extra. Y lo que sucede que cuando la bacteria infecta una célula de la planta, una sección de este plásmido Ti plásmido que se llama T-DNA se transfiere en la planta Y entonces este T-DNA se integra en el genoma de la planta, pero esa integración es totalmenteal azar. Por lo tanto, puede ir e integrar de cualquier manera. Por lo tanto, si usted quiere usar esta tecnología, y si usted quiere crear y hay ciertos elementos que es puede ser más relevante en la fabricación de transgénicos, usted podría discutir en el futuro. Y lo que sucede aquí que si usted puede diseñar genéticamente este T-DNA, usted puede básicamente utilizar esta tecnología para generar mutantes.Así, lo que usted hace, en este borde izquierdo y derecho de la frontera usted puede poner un marcador visible, esto le ayudará a identificar las plantas donde se ha producido la inserción o usted El marcador de selección, se puede poner un gen de resistencia a los antibióticos. Por lo tanto, básicamente se puede seleccionar directamente el transformante utilizando este antibiótico. Y luego utilizar esto y generar un gran número de plantas transgénicas. Y luego criarlos ya sea en base al marcador de selección visual o seleccionando en el antibiótico. Y esto ha sido muy ampliamente utilizado en la planta modelo Arabidopsis thaliana. Y de hecho, de colecciones completas de esta planta de inserción de T-DNA o mutantes ha sido generado, y se ha almacenado o mantenido como una firma de un gran programa donde cualquier persona acrossel globo terráqueo puede ordenar estas líneas, que pueden utilizar para su propio estudio específico.Por lo tanto, si usted mira cómo se ven, así que típicamente así es como sucede. Por lo tanto, si usted toma un ejemplo este es un gen, y lo que se ha encontrado que a través del proceso de la inserción del ADN, la inserción de múltiples sitios se ha generado.Así, en algunos mutantes, se insertó aquí; en algunos mutantes se insertó aquí; aquí; aquí; aquí; así, usted puede decir que para este gen al menos 6 alelo se ha generado a través del T-DNAinserción y todos los 6 mutantes tiene el fenotipo. Por lo tanto, si usted mira esto es una planta normal de tipo silvestre, y los mutantes esto es 1, 2, 3, 4,5, 6, dependiendo de su sitio de inserción, hay una variación en el fenotype.So, todos estos mutantes que pueden ser simplemente generados por la integración de la T-DNA.So, la segunda forma de generar mutación es la transposón basada en mutagenesis. Uno muy comúnmente utilizado transposon es Ac Ds based.Así, lo que sucede Ds es el elemento de la transposón que en realidad salta que getexcised de un lugar y se integra a otro lugar. Y Ac es la parte que ayuda en el proceso. Por lo tanto, lo que usted puede hacer puede generar un plásmido Ti puede diseñar Ti plásmido y usted puede poner Ac aquí en un plásmido Ti en Agrobacterium; usted puede poner Ds en otro plásmido Ti en la Agrobacterium y lo que usted puede La cosa importante es que el elemento Ds no puede saltar hasta y a menos que el elemento Ac esté presente, pero lo bueno es que el elemento Ac puede funcionar en trans, por lo que no necesitan estar juntos. A pesar de que si están presentes en la misma planta en diferentes loci genéticos, está bien, todavía pueden trabajar. Y entonces lo que usted hace tomar esta planta; esta planta, y si usted los cruza, básicamente trae el elemento Ac, así como el elemento Ds en la misma planta transgénica, y una vez que este Ac esté disponible, este Ds comenzará la transposición. la transposición puede ir y puede ser inactivable o puede insertarse o integrarse en diferentes loci genéticos y que podría crear un mutante del desarrollo. Véase el ejemplo aquí. Así, utilizando este ejemplo, se trata de plantas de maíz, se han generado algunos mutantes. Si se mira la planta de tipo salvaje, estos mutantes, las hojas no se ven normales. Esto es más clase de hoja de gota que están cayendo off.Ok, otra transposón muy importante que se utiliza para la generatingmutación es Tos 17.Tos 17 es una retroincorporación y es muy importante porque esta transposición normalmyes estable en la planta adulta o Por lo tanto, una vez que es el elemento está presente, pero no está siendo muy activo en el proceso de transposición. Pero si usted genera un callo de estas plantas, en la etapa de callo se activan estos transposones y se inicia. Así que, particularmente para aquellas plantas donde podemos generar una planta transgénica usando callo, es muy buena manera de generar una gran cantidad de mutación insercional de para este. En estas plantas transgénicas, usted puede identificar un defecto de desarrollo, el desarrollo mutantand usted puede generar la colección de este tipo de mutantes. Aquí hay pocos ejemplos en el arroz que usando este Tos 17 retrotransposal lote de mutantes hadrado generado. Esto estoy mostrando sólo unos pocos de ellos. Usted puede mirar aquí esto es el sacrificio grueso. Entonces usted tiene una especie de flor anormal, usted tiene un sinfín de mutantes de labrador, usted tiene una panícula verydensa, la panícula es básicamente inflorescence.Así, la panícula densa significa que usted tiene más panícula ramas, más número de flores, más número de seedas.Así, esto todos los mutantes que han sido generados por el uso de la transposición retro basada en Tos 17. Ambos tienen estos enfoques normalmente el Ac, los enfoques basados en D o los enfoques basados en T-DNA normalmente o por lo general generan la pérdida de mutantes de función, porque podrían killan los genes que son más propensos a inactivar un gen. Pero otra manera de un estudio de una función genética que si usted puede mejorar la expresión de un gen en particular, y ¿cómo puede mejorar?Así que, aquí esto se llama ganancia de función. Una forma de mejorar es que usted no cambia su dominio de expresion.Así, todavía expresan en el mismo tejido, donde normalmente se expresan, pero su nivel de expresión aumenta. En segundo lugar es que si usted cambia su dominio de expresión o puede hacerlos para expresar una célula o en el tejido, donde no se expresaron antes. Y si este tipo de reguladores genéticos son suficientes para dar una identidad adecuada o eventos de desarrollo, si son suficientes para iniciar ese tipo de programa, que darán un fenotipo diferente. Y esto se está utilizando a través de un proceso que se llama activation tagging.So, lo que sucede en el etiquetado de activación, la inserción aleatoria de múltiples enhancer.Así, los potenciadores son los elementos genéticos, que pueden aumentar la expresión de un gene.Así, ¿qué personas están haciendo?Están utilizando una copia múltiple de potenciador y son genéticamente ingeniería T-DNA ora Ti plásmido y están utilizando este potenciador a través de la transformación mediada por Agrobacterium y están generando un gran número de plantas. Y entonces hay esas plantas que están mirando bien, si hay una planta donde hay un fenotipo, y lo más probable es que este fenotipo podría ser debido a la activación de un gene.Así, si este potenciador de elementos, supongamos que se inserta en algún lugar aquí muy cerca de promotor de un gen particular o los elementos reguladores de este gen en particular, hay posibilidad de que, porque de su actividad potenciador, mejorará la expresión de este gen o este gen. Y es posible que tenga un fenotipo del desarrollo en este caso. Este es un ejemplo en el que la activación de etiquetas se ha utilizado para generar mutaciones. Como se puede ver este es el sitio de las mutaciones y esta mutaciones en realidad puede aumentar la expresión.Así, si usted mira esto es un tipo salvaje, esto es RT-PCR, vamos a discutir un poco de tiempo en la clase, cómo hacemos exactamente.Pero esto es medir para cuantificar el nivel de ARN mensajero de un genio en particular. Por lo tanto, si usted mira este gen y este gen, y si usted toma la etiqueta de expresión en el tipo salvaje, estos genes se expresan en un nivel bajo, pero cuando hay una activación etiquetando la inserción del elemento potenciador entre usted puede ver el nivel de expresión de estos genes se incrementan significativamente en estas líneas. Por lo tanto, vamos a detener aquí esta clase, en la siguiente clase, vamos a tomar esto más allá y discutiremos si tenemos un mutante cómo podemos ir más allá y tratar de identificar el lociado genético con él. Muchas gracias.