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Aplicación de PCR

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Aplicación de PCR
Hola a todos, este es el Dr. Vishal Trivedi de, Departamento de Biociencias y Bioingeniería, IIT Guwahati y hoy vamos a discutir sobre la aplicación de la PCR. Así que, lejos de lo que hemos discutido hemos discutido sobre los diferentes aspectos relacionados con la PCR como la forma de configurar la PCR, cuál es el principio básico de la PCR y luego, en la conferencia anterior.También hemos discutido sobre cómo diseñar los primers y cómo puedes tomar las precauciones y consideración antes de poder finalizar una secuencia de cebadores, que puedes usar para amplificaciones. Por lo tanto, con este trasfondo técnico, ahora, nos gustaría seguir adelante y nos gustaría discutir acerca de cómo se puede explotar la PCR como una técnica para responder a algunas de las preguntas y, así como cómo puede ser capaz de utilizar la PCR para la comprensión de muchos aspectos relacionados con la ciencia.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 02:01)Por lo tanto, principalmente la PCR, la aplicación de las PCR se encuentra en las 3 categorías diferentes, ya sea que podría estar relacionado con las identificaciones moleculares, o podría ser utilizado para las reacciones de secuenciación, opodría ser utilizado en el caso de la ingeniería genética, lo que significa, que el ingeniero genético significa que puede ser utilizado incluso para el propósito de la investigación. Por lo tanto, con respecto a las identificaciones moleculares significa; que usted está tratando de identificar a un organismo en particular o si usted está tratando de identificar y clasificar.Supongamos, usted ha aislado un nuevo organismos, entonces usted cómo usted puede ser capaz de categorizar ese organismo en particular. Así que, ver en un mundo tradicional, lo que la gente está haciendo es suponer que han identificado una nueva planta, que llevarán esta planta a un taxónomo experimentado, y que el taxónomo en realidad va a basarse en la experiencia, y en base a la similitud de algunas de las características taxonómicas, en realidad va a ser capaz de clasificar esa planta en particular como x e y.Pero en la palabra reciente, lo que la gente está más tratando de entender es que cuál es el patrón de estos ADN y si podemos ser capaces de clasificar las plantas y categorizarlas en base al ADN, así como los productos de amplificación. Así que de esa manera, la identificación molecular está jugando es el lugar donde la PCR está realmente jugando un papel crucial. Así que la identificación molecular que juega un papel en la oncología molecular, la epidemiología molecular, la ecología, la huella dactilar del ADN.Y está siendo utilizado para la clasificación del organismo porque el arriba usted puede ser capaz de amplificar el ADN y entonces usted puede ser capaz de igualar ese ADN con el ADN lo que está disponible en la base de datos, y que en realidad le va a ayudar en la categorización muy precisa de una planta particular o animal o incluso otras criaturas, entonces usted puede utilizar la PCR para el genotipado, diagnósticos prenatales, exámenes de mutación. Así que el tamizaje de la mutación también es un lugar donde usted puede ser capaz de hacer una PCR.Y en realidad le va a decir si el tipo particular de mutación está persistiendo en este gen en particular o no. Y eso tiene una aplicación muy amplia en términos de los diagnósticos porque algunas de las mutaciones como por ejemplo, si hay una mutación, y esa mutación está vinculada a un tipo particular de fenotipo de la enfermedad, entonces usted puede ser capaz de diseñar una PCR y usted puede ser capaz de diseñar los primers de tal manera que realmente va a detectar o sólo va a darle el producto Amplificado cuando habrá una mutación.Aparte de eso, si no habrá mutación entonces no le dará los productos amplificados. Así que es así como usted puede ser capaz de identificar las mutaciones en un cierto conjunto de genes y es así como usted puede ser capaz de identificar si una determinada célula particular está teniendo la versión mutada de ese gen en particular o no. Luego también se puede utilizar el, la PCR para el descubrimiento de fármacos así como la adecuación genética y la detección del patógeno.Por lo tanto, la detección de patógeno también es un área muy importante donde se puede poder utilizar la PCR porque una de las principales ventajas de la PCR es que es muy sensible. Por lo tanto, incluso si usted tiene un número muy pequeño de copias disponibles dentro de los organismos particulares o dentro de la sangre, usted puede ser capaz de incluso hacer la amplificación, usted puede aumentar ese número y usted puede ser capaz de hacer propósitos de identificación.Ahora, el segundo es la secuencia. Por lo tanto, en las reacciones de secuenciación, se puede poder utilizar la PCR. Así que, en una típica secuencia de reacciones, lo que están haciendo es que simplemente están tomando nuestro ADN lo que están interesados en secuenciar y luego están haciendo una PCR con la ayuda de los primers y eso en realidad le va a dar ADN amplificado y ese ADN amplificado está siendo amplificado de tal manera que realmente le va a dar los fragmentos de ADN.Por ejemplo, si hablamos del método Sanger, el ADN se amplifica con la ayuda de los primers, así como los nucleótidos modificados, y estos nucleótidos modificados realmente le van a dar los pequeños fragmentos y que pequeños fragmentos se pueden usar para identificar la secuencia y así es como usted puede ser capaz de conseguir reducir la secuencia. Una vez que haya obtenido la secuencia, puede ser capaz de utilizar esa secuencia y coincidencias con la base de datos.Y que para usted puede ser capaz de hacer eso en la bioinformática de manera similar la PCR se está utilizando para la clonación genómica, así como en los proyectos del genoma humano para secuenciar las múltiples transcripciones o múltiples fragmentos de ADN, lo que se ha producido a partir de las bibliotecas de ADN. Aparte de eso, en la ingeniería genética o los propósitos de investigación, la PCR se ha utilizado ampliamente para 2 propósitos.Uno es que están siendo utilizados para generar el sitio de mutagénesis dirigida, lo que significa que usted puede ser capaz de generar muy precisamente la mutación de punto en un gen en particular. Y así es como puedes ser capaz de responder a las preguntas como por ejemplo, si hay una enzima que en realidad está teniendo un aspartato y que el aspartato es muy crucial. Así que entonces usted lo que puede hacer es con la ayuda de la PCR, usted puede ser capaz de hacer es introducir una mutación y eso será un punto mutaciones.Y esa mutación de punto reemplazará el aspartato a alanina o glicina o según su hipótesis y según la interacción de ese aspartato con los residuos vecinos. Y así es como usted puede ser capaz de responder a las preguntas que si ese aspartato en particular es crucial para una actividad en particular o no, el otro es que el estudio de la expresión génica, por lo que, con la ayuda de la PCR, usted puede ser capaz de incluso estudiar la expresión de su gen en particular.Así que, teniendo en cuenta todos estos 3 aspectos diferentes, hemos tomado, ahora vamos a entrar en la parte de la aplicación y vamos a tomar la aplicación según las diferentes corrientes de la ciencia por ejemplo, la ciencia de la planta, la Ciencia de los animales y también así que vamos a empezar con Lo que hemos hecho es que hemos tomado el ejemplo de la PCR como se puede ser capaz de usar la PCR en la ciencia de la alimentación. Así que cuando usted habla de la ciencia de la comida, la ciencia de la comida es todo acerca de que usted está hablando de las verduras, así como de los frutos. Así que usted como puede ver en esta imagen, tenemos los diferentes tipos de las frutas y las verduras. El principal problema conestas frutas y verduras, lo que puedes comprar en el mercado o lo que se ha producido en la granja es que están infectadas con los diferentes tipos de organismos patógenos.Y si consumes que estas verduras patógenas o las frutas, las bacterias o virus particulares en realidad van a entrar en el cuerpo humano y que cómo estas frutas y verduras no son buenas para los consumos. Así que, como sabrás que el lote particular de fruta o la verdura es bueno para los consumos humanos. Así que en ese caso, lo que usted va a hacer es que va a hacer la PCR y, en consecuencia, supongamos que estoy interesado en identificar la salmonela es una bacteria muy peligrosa en ella realmente causa mucha enfermedad en los seres humanos.Así que si usted consume una verdura que está infectada con la salmonela entonces realmente va a causar la toxicidad. Entonces, lo que vas a hacer es si estás sospechando de una infección por salmonela, lo que puedes hacer es tomarte las verduras y luego lo que puedes hacer es que solo puedas aislar las células. Por lo tanto, usted puede simplemente aplastar estas verduras que usted puede hacer una homogeneización y luego de esta homogeneización usted puede ser capaz de hacer una PCR con la ayuda de los cebadores.Estos primers no son nada más que estos primers van a ser en realidad para la salmonela. Por lo tanto, en ese caso lo que sucederá es si habrá incluso una diminuta contaminación por salmonela, incluso si habrá algunas bacterias de salmonella lo que está presente en esta planta en particular o en este vegetales en particular, en realidad le va a dar un ADN amplificado.(Consultar Tiempo de Slide: 10:55)Así que, veamos además de la salmonela, cuáles son las otras cosas que se pueden detectar en las que se relacionan con la microbiología alimentaria. Por lo tanto, una primera es la salmonela se está detectando con la ayuda de un gen objetivo que se llama como inVA, y lo que puedes hacer es que puedes hacer un qPCR, así como el TaqMan, entonces tienes varias especies de salmonela. Por lo tanto, la ventaja de la PCR es que le permite no solo detectar el tipo particular de bacterias, sino que también le permite una especie particular de bacterias.Por lo tanto, hay así que en realidad se puede identificar primero la salmonela y luego se puede ser capaz de utilizar otro conjunto de primers y que en realidad le permitirá detectar qué especies de las especies de salmonela presentes con el vegetal o los materiales alimenticios. Aparte de eso, también te vas a permitir detectar esta Listeria o Staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, e coli, bacilo, y esa bacteria total viable. Así que; también se puede hacer que en realidad se puede simplemente ir si habrá una infección bacteriana en el vegetal o la comida o no. Y luego también hay otras opciones.(Consultar el tiempo de la diapositiva: 12:09)Entonces estás hablando de la PCR en la ciencia médica. Por lo que el uso de PCR en el caso de la ciencia médica es muy extenso. Y, de hecho, cuando las personas han diseñado la tecnología PCR, diseñaron la tecnología PCR debido únicamente a la ciencia médica. Así que a principios de los 80 cuando la gente estaba tratando de amplificar los genes cruciales, lo que es responsable de la anemia de una sola célula y otros tipos de enfermedades, estaban teniendo una tarea muy difícil.Así que es por eso que han decidido eso, que tengamos una técnica para que realmente nos va a permitir amplificaciones y así es como se está usando la PCR. Así, el uso de la PCR en la ciencia médica ya empezó en el año de 1985. Y una prueba viable para medir la cantidad de VIH en la sangre y que fue publicada en mayo de 1987. Así en 1989, Norm Arnheim y el equipo desarrollaron una PCR multiplex.Y la amplificación de una sola célula se realizó por primera vez en la célula de esperma única para analizar directamente el producto de la recombinación meiótica y también se aplicó en el otro objetivo como el antígeno leucocitario humano en el DQalfa. Así que la tecnología de PCR se ha convertido en una investigación esencial y las herramientas de diagnóstico para mejorar la salud humana y la calidad de vida, permite la detección del organismo infeccioso sólo de 1 célula por la amplificación de la región específica del material genético.Así que una de las principales ventajas como dije antes, también que la sensibilidad de este método, por lo que esto, debido a que la sensibilidad es muy alta, en realidad puede ser capaz de detectar el organismo infeccioso o la alteración dentro del propio gen huésped de una sola célula. Así que la cantidad de ADN que usted va a recibir incluso de la sola célula o cantidad de genoma lo que va a recibir incluso de la célula única que es lo suficientemente bueno para darle los productos suficientes.Que se puede analizar tanto para fines de secuenciación, así como si usted quiere clonar que usted puede ser capaz de clonarlo en nuestro vector de expresión, usted puede estudiar un montón de cosas. Así que es por eso que la PCR se ha utilizado ampliamente en el caso de la ciencia médica también.(Consultar el tiempo de la diapositiva: 14:30)Así que la PCR se está utilizando muy ampliamente para detectar la enfermedad infecciosa. Por lo que la tecnología PCR se ha convertido en la base de un amplio espectro de pruebas de diagnóstico clínico para diversas enfermedades infecciosas, incluidos virus y bacterias. A diferencia de la herramienta de diagnóstico tradicional basada en anticuerpos que depende del paciente para desarrollar el anticuerpo con el tiempo. La PCR permite el diagnóstico más rápido que sujeta el tratamiento y la recuperación además de detectar la presencia de patógenos.Así que, la PCR permite; cuantificar la cantidad de patógenos presentes en la sangre del paciente y necesitan ayuda para monitorizar la progresión de la infección o la respuesta al tratamiento, por lo que, qué otra enfermedad se puede detectar. Por lo tanto, esto no es sólo la lista extensa que esto es sólo una lista representativa, lo que usted puede detectar que puede detectar el VIH que causa el SIDA, entonces usted puede detectar el virus de la hepatitis B y C que causa la enfermedad del hígado y el cáncer.Entonces usted puede detectar el virus del papiloma humano, que puede conducir al cáncer de cuello uterino, usted puede detectar la Chlamydia trachomatis, que causa la infertilidad en las mujeres, usted puede detectar Neisseria que causa los ambientes de la enfermedad inflamatoria pélvica y luego usted puede detectar el citomegalovirus que realmente detecta los pacientes de trasplante y los inmunodeprimidos personas como los pacientes con SIDA. Y por último, también se puede detectar la tuberculosis mycobacterium que causa la tuberculosis en los pacientes.En general ahora, cuando se está buscando la detección de estos organismos patógenos, tradicionalmente lo que la gente estaba haciendo, simplemente usando el anticuerpo. Entonces, lo que sucedió es que, cuando estos organismos infecciosos están entrando en el cuerpo, en realidad están actuando como antígeno. Por lo tanto, cuando el antígeno está entrando en el cuerpo, en realidad está causando el desarrollo de anticuerpos, pero en este período, cuando el antígeno está entrando en el cuerpo humano y está desarrollando los anticuerpos, es un período muy largo.Qué significa, tomará por lo menos 14 a 21 días antes de que usted podría ser capaz de detectar alguna cantidad de anticuerpo y entonces usted puede ser capaz de decir que este organismo infeccioso en particular está presente, pero que realmente requiere una amplificación muy grande o la gran multiplicación de los primeros organismos infecciosos de ADN, entonces sólo el sistema inmunológico del cuerpo va a reconocer eso y Entonces, en realidad va a procesar ese antígeno y en realidad le va a dar los anticuerpos.Por lo tanto, esta es una respuesta muy retrasada y lo que pasa es que, hasta que no se ha desarrollado la PCR, la gente estaba usando esta técnica en particular, pero una desventaja importante de la prueba basada en anticuerpos es que realmente va a, antes de que pueda ser capaz de detectar, permitirá que la enfermedad llegue a una etapa muy seria, lo que significa que en realidad es para el momento en que usted va a detectar la enfermedad en el ser humano particular o paciente en particular.La enfermedad se va a alcanzar a tal nivel que es realmente no tratable o es difícil de tratar. Entonces, por eso la gente se ha trasladado al método basado en PCR porque en el método PCR, lo que hay que hacer es, dependiendo del sitio de la infección, por ejemplo, si es un hígadoo, esputo o sangre, hay que dibujar ese tipo particular de tejido humano. Y luego hay que simplemente, hacer una homogeneización.Y luego hay que tomar un pequeño, pocos microlitros de esa muestra en particular. Y eso en realidad es lo suficientemente bueno con la ayuda de la PCR, que va a ser específica para estos organismos infecciosos, lo que significa que van a tener un conjunto de primers, que en realidad van a detectar el VIH o los que van a tener un conjunto de imprimaciones que en realidad va a ser dirigida de las proteínas clásicas, lo que está presentando la tuberculosis mycobacterium.Y eso es lo suficientemente bueno como para detectar la tuberculosis mycobacterium porque es al final se va a ver una banda, que va a ser específica para la mycobacterium tuberculosis. Y es así como con la ayuda de los PCR las personas han recortado el proceso de detección. Por lo tanto, es así como la detección va a ser mucho más rápida en comparación con el método basado en anticuerpos.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 19:02)Así que, en un método típico de la enfermedad infecciosa por PCR, por ejemplo, este es un ejemplo clásico del VIH. Por lo tanto, lo que estamos mostrando es que lo que tienes que hacer es simplemente dibujar de 5 a 10 ml de sangre. Y luego de la sangre lo que vas a conseguir es lo que tienes que hacer es que primero tienes que aislar los leucocitos, y de los leucocitos, puedes ser capaz de ver directamente realizadas las reacciones de PCR con la ayuda de los primers lo que se está dirigiendo contra el VIH.Así que, puedes usar alguna de la vía metabólica de Bessel en enzimas lo que está presentando el VIH ya sea la ARN polimerasa o alguna de las proteínas de código y que en realidad te va a permitir amplificaciones así que cuando lo corres en la máquina de PCR y luego si analizas ese resultado en el gel de PCR, lo que vas a ver es que estamos 2 muestras de muestra 1 de muestra 2, y la muestra 1 le va a dar un ADN amplificado que se corresponde con el tamaño del ADN.Lo que se ha reportado en ese gen en particular en el de los virus del VIH, mientras que, la muestra 2 no le da ese producto amplificado en particular, lo que significa que la muestra 2 es negativa para el VIH, mientras que la muestra 1 es positiva para el VIH, lo que significa que esta muestra al paciente de la muestra 2 es positiva para esa enfermedad en particular. Por lo tanto, este es sólo un ejemplo y el diagrama esquemático para mostrar que cuál es el protocolo que tienes que seguir por ejemplo, en el caso de mycobacterium tuberculosis, incluso va a ser muy simple.Porque entonces tú lo que tienes que hacer es simplemente recoger el esputo de ese paciente en particular y desde el esputo puedes simplemente recuperar la bacteria o simplemente puedes simplemente usar el esputo como tal, y entonces solo puedes realizar la PCR con la ayuda de los primers y eso es lo suficientemente bueno como para darte el producto amplificado si la cantidad de bacterias está presente. Por lo tanto, incluso ver pocas células de la bacteria es realmente lo suficientemente bueno como para darle un producto amplificado.(Consultar el tiempo de la diapositiva: 21:17)Así, la PCR también se usa en la detección de sangre. Por lo tanto, la tecnología PCR ayuda a detectar la presencia de enfermedades infecciosas en las muestras de sangre donadas. El beneficio de usar la tecnología de PCR es monitorear incluir una disminución en el período de espera durante el cual el agente infeccioso es indetectable por la tecnología de detección serológica que se basa en la formación de los anticuerpos. La capacidad de realizar un cribado combinado de sangre para un paciente que amenaza la vida común y a diferencia de la hepatitis C y VIHCombinación de la prueba basada en PCR incorpora a la sangre durante la importación de la pantalla, aumenta la conciencia y reduce la contaminación de las transmisiones del virus. Entonces, lo que pasa es cuando en realidad se va a dar la sangre por las donaciones, esa sangre podría tener potencialmente podría tener el organismo infeccioso. Por ejemplo, usted podría, por lo que el donante podría estar infectado con el VIH o el donante podría estar infectado con la hepatitis.Por lo tanto, hay un conjunto de organismos infecciosos, que ya están listados que antes de usted, recoger la sangre de un donante y antes de dar esta sangre a aceptador, usted tiene que realizar la detección del organismo infeccioso. Así que en eso hay que realizar la prueba para el VIH hay que realizar la prueba para la hepatitis y todo eso, porque estos son el organismo que en realidad puede transmitir de una persona a otra, si no se detecta eso.Por lo tanto, la PCR es muy ventajas porque simplemente se puede simplemente tomar un pequeño, pocos microlitros de la sangre, y luego se puede hacer una PCR y en realidad va a permitir detectar el VIH así como la hepatitis y todos los demás tipos de organismo infeccioso. La otra ventaja es que en comparación con la otra técnica, como las técnicas serológicas, es posible que tenga que realizar las reacciones serológicas de diferencia como diferentes reacciones para detectar el VIH.Reacciones diferentes para detectar la hepatitis y diferentes reacciones para detectar la tuberculosis mycobacterium mientras que en el caso de la PCR, usted puede ser capaz de mezclar todos los primers juntos y usted puede ser capaz de detectar todos estos organismos infecciosos en un solo objetivo teniendo en cuenta que el tamaño del ADN, así como la similitud de las secuencias pueden no existir. Así que usted puede ser capaz de hacer un solo paso y la detección de todo el organismo infeccioso lo que está presente en la sangre de un donante.Y es así como usted puede ser capaz de muy seguro, obtener la sangre de la persona donante y usted puede ser capaz de utilizar esa sangre con mucha seguridad de que no va a transmitir ningún tipo de enfermedad a los aceptores.(Consultar tiempo de la diapositiva: 24:14)Entonces la PCR se puede utilizar en la ciencia de la planta por lo que hay varios campos o aspectos en los que la ciencia de la planta en la que se puede utilizar la PCR para la tecnología de PCR, uno de los principales es que usted puede ser capaz de utilizar la PCR para las especies de plantas identificaciones por lo que la técnica de PCR también se ha empleado en la identificación de las especies de plantas utilizando la especie y el grupo de cebadores específicos dirigidos al miembro de ADN del cloroplasto.Que estamos hablando del ADN del cloroplasto no el ADN genómico porque el ADN del cloroplasto es algo que continuó de la familia a la familia porque en lo que a la planta se refiere. por lo que el ADN genómico es seguir alterando con cada recombinación porque si la planta está teniendo un macho y una hembra, el macho tiene su propio genoma, la hembra tiene su propio genoma y durante la recombinación cuando realmente van a formar el grano de polen, así como los ovarios.El genoma en realidad va a pasar con el proceso de meiosis y así es como se va a dividir. Así, por ejemplo, si tienes que decir 2 pares de elisa, entonces por ejemplo, A A yB B, en realidad se va a dividir. Por lo tanto, se va a dividir en A y A así. Así que, si vas con las cosas del ADN genómico, en realidad vas a ver que habrá una contaminación donde como si vas con el ADN de los cloroplastos, se va a seguir siendo constante, porque el cloroplasto en el sistema de la planta también el cloroplasto viene del lado femenino.Así que, eso en realidad continuó sobre las múltiples generaciones y no se ve afectada si las cosas vienen del lado masculino o las cosas vienen del lado femenino. Estos ensayos permiten la identificación de una planta basada en el tamaño de los amplicones específicos, por ejemplo, las plantas que pertenecen a la misma familia tienen un sitio de enlace primario cercano y por lo tanto, van a darle el mismo tamaño de ampliconos.En las pruebas parentales, las repeticiones cortas en tándem o los STRs se utilizan como un marcador donde cada persona las copias de ADN contienen 2 copias de estos marcadores, y una cada uno del padre, así como la madre. Estos marcadores difieren en longitud y en algún momento en la secuencia también. Entonces, lo que puedes ver es que tienes los diferentes tipos de marcadores de ADN como A, B, C, D y E, y todos estos marcadores están presentes tanto en la madre como en el padre,Pero una combinación va a estar presente en el niño por ejemplo; en este caso, lo que ves es para el marcador de ADN A la 26 está presente de la madre y 30 está presente del padre, lo que significa que el niño va a ser un híbrido del padre y la madre. Entonces, por eso si bien la madre está teniendo 26 y 31, el padre está teniendo 29 y 30, los niños van a tener los 26 y 30. Entonces, lo mismo es este tipo de análisis que va a permitir identificar al padre.Así que, imagine que usted tiene los múltiples candidatos que están afirmando que podrían ser un padre de este niño en particular. Así que entonces lo que puedes hacer es simplemente hacer un análisis de los múltiples candidatos con la ayuda de los diferentes tipos de marcadores de ADN, y entonces puedes comprobar si eso es coincidente o con el niño o no. Por lo tanto, otra técnica sensible que puede ser usada para establecer la relación materna entre las personas se llama como el análisis de ADN mitocondrial.Que se basa en la PCR este análisis es mejor que la huella dactilar para la muestra que se hace demasiado viejo, que el núcleo de las células se degradan. Así que aparte de estas personas también están usando el ADN mitocondrial porque como dije en el pasado, también el ADN mitocondrial es algo que permaneció conservado en toda la familia. Así que debido a que el ADN mitocondrial es lo que la gente está teniendo, ya sea un hombre o la mujer está siempre viniendo del lado de las madres en lugar de un lado padre.Así que si usted analiza el ADN mitocondrial, que no se va a diluir porque todo el ADN genómico se va a diluir, en todos los manantiales, como después de cada generación, usted va a tener la mitad de su padre y la mitad de su madre. Y pero ese ADN mitocondrial va a quedar intacto. Así que si usted sigue el ADN mitocondrial muy precisamente, usted puede ser capaz de recoger el pedigrí de esa familia en particular y usted puede ser capaz de identificar incluso al padre, así como a las madres.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 43:14)Entonces la PCR también se ha utilizado con mucho éxito en el caso de las aplicaciones de investigación. Así que se está utilizando la PCR en el caso de la clonación de ADN. Por lo tanto, la PCR se está utilizando en la secuenciación del ADN, y luego también se está utilizando en los sitios basados en la secuencia. También se está utilizando en el análisis filogenético, y también se utiliza en los estudios de la expresión génica. Así que en el caso de la clonación de ADN, la PCR ayuda a amplificar el ADN específico de un genoma.Y el ADN amplificado puede ser insertado en un vector para la transformación y la expresión este inserto puede ser confirmado aún más por los métodos de PCR, y luego la secuenciación del ADN los PCR evalúan la tarea para la secuenciación del ADN del paciente con las mutaciones de la enfermedad genética, entonces los sitios de impuestos de la secuencia. Este es un proceso donde se usa la PCR y un indicador si un segmento particular de un gen o genoma está presente en un clon en particular.Esta aplicación es vital en el mapeo de los clones cósmicos que serán secuenciados por los proyectos del genoma humano. Luego también se usó en el análisis filogenia. Así que la filogenia de organismos como la planta, los animales y otros organismos inferiores pueden ser rastreados por el análisis de ADN. También se puede descartar el origen de una muestra desconocida como el hueso recuperado del hombre temprano. El ADN de diferentes organismos también puede distinguirse.Por ejemplo, en el caso de los mamíferos, la región conservada como la 3 prime UTR del gen Son se puede utilizar para identificar el origen mamífero de una muestra utilizando esta prueba se distinguió el ADN del humano, el gato mono, el ratón de cabra y el ADN de hámster. En los estudios de la Expresión Gene también se puede usar la PCR para monitorear la expresión de ese gen en particular.(Consultar el tiempo de la diapositiva: 45:08)Así que, en un proceso simple, la PCR se puede usar para la clonación de reacciones. Por lo tanto, lo que va a hacer es que usted va a tomar la secuencia del genoma basada en la secuencia del genoma, supongamos que está interesado en aislar el gen x, lo que va a utilizar es que va a generar una imprimación delantera, que es para el gen x, y entonces usted realmente va a tener la imprimación inversa que es para el gen x.Y entonces usted va a aislar el genoma y del genoma que va a configurar una PCR con la ayuda de la imprimación, así como la imprimación inversa y en última instancia lo que va a obtener, usted va a obtener el gen x fragmento y este gen x fragmento va a tener estos Los sitios de restricción en ambos lados, lo que significa que este fragmento de genes del gen x va a tener los sitios de restricción en ambos extremos y estos sitios de restricción pueden ser utilizados para integrar estos genes x en un vector de su elección.Por lo tanto, usted puede digerir el vector con la ayuda de estos marcos de conjunto que son enzimas como por ejemplo, R 1 y R 2, y usted puede ser capaz de utilizar eso para integrar eso en los plásmidos y luego puede utilizar este plásmido para aplicaciones en sentido descendente como usted puede utilizarlo para análisis de expresión o puede utilizarlo para las otras preguntas como si usted está interesado para monitorear el replicaciones y transcripciones y traducciones.Y así, también puedes hacer algunas investigaciones básicas y también puedes hacer un trabajo orientado a la aplicación. Por lo tanto, todo esto se trata de la aplicación de la PCR en diferentes campos de la ciencia. Así, empezamos con la ciencia de la planta y luego terminamos con una ciencia forense, así como con las aplicaciones de investigación. Así que con esto, me gustaría concluir mi conferencia aquí. Gracias.