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Interacción anticuerpo-antígeno
Hola a todo el mundo esto es el Dr. Vishal Trivedi del departamento de biociencias y bioingeniería de IIT Guwahati. Y hoy vamos a discutir sobre el en interacción de los anticuerpos con el antígeno en las conferencias anteriores hemos discutido cómo generar los anticuerpos que hemos discutido sobre la generación de los anticuerpos policlonales y así como el anticuerpo monoclonal. Así que una vez que hayas generado el anticuerpo has generado la primera herramienta inmunológica para usarla con diversos fines.Así que uno de los propósitos de generar un anticuerpo es estudiar la interacción del anticuerpo con el antígeno. Así que vamos a ver cómo el anticuerpo y el antígeno realmente interactúan entre sí y cómo se puede explotar para diseñar diferentes tipos de experimentos o diferentes tipos de herramientas para estudiar los diversos procesos biológicos.(Consultar tiempo de la diapositiva: 02:02)Así que como puedes ver que tienes un anticuerpo y luego tienes un antígeno este antígeno podría estar compuesto de una o más regiones epitopicas por ejemplo en este caso tenemos las 6 regiones epitópicas como 1 2 3 4 5 y 6. Y lo que se puede ver es que toda esta región epitópica está realmenteproduciendo los anticuerpos o todas estas regiones epitópicas son antigénicas en la naturaleza por lo que en realidad están produciendo los anticuerpos y todos estos anticuerpos son exclusivos de esta región epitópica.Lo que significa que el anticuerpo y los antígenos están realmente formando un par de coñados donde un anticuerpo es exclusivo de un antígeno específico específico de un antígeno es específico de esa región epitópica particular. Lo que significa que si usted tiene el anticuerpo para la región epitópica 6 en realidad va a reconocer este epítopo en particular y como un global también va a permitir que usted reconozca el antígeno también. Así que por qué el antígeno y los anticuerpos están formando el par cognate.Porque en realidad están trabajando en los principios de reconocimiento exclusivo donde se tienen los determinantes exclusivos que están permitiendo que el antígeno y los anticuerpos interactúen entre sí y que la interacción es muy específica y exclusiva.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 03:42)Ahora vamos a ver que tienes un anticuerpo y luego tienes un antígeno y cómo y por qué en realidad está teniendo las interacciones exclusivas o la espasticidad exclusiva. Debido a que el antígeno está formado por una estructura tridimensional. Así que es usted tiene una estructura tridimensional que se compone del anticuerpo. Y lo que se puede ver es que en realidad puede permitir que los antígenos interactúen y los antígenos que en realidad están mapeando con el tipo similar de 3 estructuras dimensionales en realidad se les permite interactuar con los anticuerpos.Además de que los anticuerpos también están proporcionando los diversos espacios donde realmente van a proporcionar el sitio para la interacción electrostática o las interacciones hidrofóbicas. Por ejemplo, en este caso este sitio realmente está teniendo un residuo cargado positivamente por lo que lo que va a pasar es en realidad va a permitir que el antígeno tenga un reidue negativamente cargado. Así que incluso la estructura tridimensional de un anticuerpo, así como el antígeno es coincidente. Pero los residuos positivos que están presentes en este lado no están recibiendo un residuo negativo presente en el antígeno.En realidad no está permitiendo que este y particular antígeno para unirse, lo que significa que podría haber múltiples antígenos que en realidad pueden estar formando ese tipo similar de estructuras tridimensionales. Pero hasta menos que esta interacción no se vaya a satisfacer el anticuerpo no va a reconocer el antígeno para formar el complejo estable. De manera similar usted tiene un sitio para la unión de hidrógeno por lo que el anticuerpo podría ser un donante de hidrógeno que es por lo que en realidad está buscando un aceptador de hidrógeno en el antígeno para que sea capaz de formar una unión de hidrógeno estable.Del mismo modo tiene los grupos que en realidad están participando en las interacciones de la pared de maravilla y por otro lado también tiene los grupos que en realidad están involucrados en la interacción de apilamiento de tuberías. Así que todas estas interacciones, así como las estructuras tridimensionales realmente proporcionan la especificidad en los anticuerpos para reconocer el antígeno o la región epitópica presente en el antígeno.(Consultar tiempo de la diapositiva: 06:12)Ahora la interacción de anticuerpos del antígeno podría ser de múltiples tipos porque como se puede ver que el antígeno podría ser de múltiples tipos. Por ejemplo, el antígeno podría ser un antígeno insoluble o podría ser un antígeno soluble, por lo que lo que significa el antígeno insoluble es eso. Por ejemplo, las células como por ejemplo usted tiene el RBE así que RBE es un antígeno que en realidad no es soluble en la solución que en realidad va a formar un material particulado. Por ejemplo, si usted mantiene el RBC en el búfer cualquiera que realmente va a establecerse.Así que es por eso que está cayendo bajo la categoría de los antígenos insolubles las otras moléculas que también son insolubles son como el virus o algunas de las bacterias también están cayendo bajo los antígenos insolubles. Los antígenos solubles son principalmente las sustancias proteináceas como las proteínas o el ADN o el ARN. Y en algún momento también los lípidos por lo que las moléculas que son solubles en medios acuosos están cayendo bajo los antígenos solubles. Así que si el antígeno es insoluble en realidad va a interactuar con los anticuerpos y participará en las reacciones de aglutinación.Las reacciones de agresión son las reacciones en las que el anticuerpo va a interactuar con el antígeno y en realidad va a formar una red o la malla. Debido a eso en realidad se va a aplaudir se va a clonar todo el antígeno que contiene un antígeno de partículas. Mientras que si el antígeno es soluble en la naturaleza va a interactuar con los anticuerpos. Y en un proceso sus anticuerpos van a precipitar el antígeno desde las proximidades.El ejemplo clásico en las reacciones de precipitación son el ensayo de difusión de inmuno radial así como las inmunopalpitaciones. Y aparte de la interacción de anticuerpo de antígeno que están participando en la reacción de aglutinación o las reacciones de precipitación, la interacción de anticuerpos de antígeno también es responsable para el desarrollo de diferentes tipos de inmunoensayo tales como el ELISA RIA o el blotting occidental. Así que en la conferencia de hoy en día vamos a discutir la mayoría de estas técnicas y luego nos gustará también ir a ver cómo esta técnica puede ser utilizada para resolver algunos de los problemas científicos.Cómo realizar los ensayos de hemaglutinación el material lo que usted requiere para hacer el ensayo de hemaglutinación es el que requiere los RBCs que requiere el microtitre lectores de placas o placa de microtitre que requiere el PBS. Entonces usted requiere la micropipeta y las puntas que usted requiere los tubos cónicos entonces usted requiere la centrífuga con un rotor de cubo oscilante y usted requiere una solución de lejía para que usted sea capaz de desinfectar el virus que contiene artículos para que no habrá contaminación cruzada de los virus a los otros objetos.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 23:57)En el paso 1 usted tiene que preparar los glóbulos rojos así que lo que usted hace es usted recoger de 1 a 2 ml de la sangre con EDTA para que contenga el anticoagulante entonces los glóbulos rojos nuevos deben estar preparados para este ensayo porque los glóbulos rojos frescos van a tener la cantidad muy alta de El antígeno, así como los glóbulos rojos frescos no van a mostrar ninguna degradación del antígeno que se expresa en su superficie celular, entonces usted gira el esto por 1500 rpm durante 10 minutos cuidadosamente.Retire la capa de búfer blanco que significa que usted elimina las WBSs en la parte superior de la paleta RBC y luego retira la parte de suero entonces usted diluye el precipitado resultante en PBS y lo mezcla con el giro invertido a 1500 rpm durante 10 minutos desechar el sobrenadante repetir el lavado de 3 a 4 veces y luego usted prepara una solución RBC al 1% usando la solución salina tamponada de 1 x fosfato como un diluyente. Una vez que sus RBC están listos, entonces usted puede hacer las diluciones virales.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 25:02)Así que las diluciones virales que usted va a hacer como una dilución en serie, así que a cada pozo usted agrega el 50 microlitro de PBS y entonces usted va a hacer una dilución en serie de los virus así que lo que usted hace es tomar los virus primero usted agrega el virus en la primera muestra y entonces usted realmente va a hacer una dilución en serie simplemente transfiriendo los virus de un pozo a otro y así es como usted realmente va a preparar una dilución en serie de las muestras del virus.Lo que significa que usted va a preparar un pliegue diluciones desechar el 50 microlitro del último pozo en las soluciones de lejía entonces usted prepara el control positivo y negativo apropiado el control positivo debe ser de una muestra donde el virus ya es conocido para estar presente, mientras que el control negativo sería sólo para tener el RBC y el PBS entonces usted agrega el 50 microlitro de la RBC a todos los pozos la cuantificación de trabajo sería el 0.5 por ciento de los glóbulos rojos.Entonces usted los mezcla suavemente y cerrar la tapa y luego mantener o incubarlos para la temperatura ambiente durante 15 a 30 minutos para desarrollar o para realizar las reacciones de modo que si va a mostrar el Ensayo de hemaglutinación.(Consultar tiempo de la diapositiva: 26:26)En última instancia, el resultado lo que usted va a ver es esto así que lo que usted ha hecho es que usted acaba de poner los virus en las diferentes diluciones como 1 es a 1 1 es a 4 1 es a 8 así que es cada vez que se diluye en la mitad y en última instancia usted va a tener las múltiples diluciones como hasta 1 es a 128 entonces en el control positivo lo que usted ve es que el hasta el 1 es a 32 usted realmente está obteniendo una pastilla de RBC con un patrón de hazía así que lo que usted ve es en realidad un patrón nublado que es en realidad un representante con la indicación del ensayo de hemaglutinación.Mientras que usted ve este RBC este es un botón suave RBC que en realidad es la indicación de que el ensayo de hemaglutinación no está funcionando en esta concentración en particular una vez que la concentración del virus pasará a un nivel particular entonces no será suficiente para aglutinar las RBC y es así como usted va a ver un botón suave RBC ahora usted tiene una muestra 1 y muestra 2 así que en la muestra 1 lo que se ve es que en realidad está libre de virus porque no está mostrando un ensayo de hemaglutinación.Los botones RBC están presentes desde el primer pozo en sí, mientras que en el número de muestra 2 usted tiene la reacción de aglutinación el patrón hazy aquí y el patrón de hazy aquí, pero en el de 1 es a 8 usted está realmente comenzado a obtener el botón RBC que indica que los virus tiene el título de 1 es a 8 en la muestra 2, mientras que el negativo control le está mostrando el botón RBC de la parte superior a la parte inferior así que lo que se ve es que el título de hemaglutinación del control positivo es el 32 o el 2 al poder 5.Considerando que el no virus se observó en la muestra 1 por lo tanto tiene la unidad 0 HA y el título de HA de la muestra 2 es 4 o el 2 a la potencia 2 en realidad están en 50 microlitros por lo que esto realmente va a decir que la muestra está teniendo la cantidad más baja de virus y qué muestra tiene la menor cantidad de virus y usted puede ser capaz de cuantificar el número de virus presentes en cada muestra y este es un ensayo muy útil para detectar el virus en una muestra en particular y como bien como usted puede ser capaz de cuantificar el nivel de los virus presentes en esa solución en particular.Ahora vamos a volver a las interacciones del antígeno de anticuerpos hasta ahora hemos discutido acerca de los antígenos insolubles y hemos discutido acerca de las reacciones de aglutinación en las que también hemos discutido acerca de la hemaglutinación y dentro de la aglutinación que hemos discutido sobre las reacciones de aglutinación directa, así como las reacciones de aglutinación indirecta ahora vamos a discutir acerca de los antígenos solubles por lo que una vez que el antígeno es soluble en realidad va a formar el precipitado mediante la interacción con los anticuerpos.Y dentro de las reacciones de precipitación se tienen los 2 ensayos como el ensayo de difusión inmune radial, así como las inmunoterapias para estudiar la interacción entre el antígeno, así como los anticuerpos.(Consultar tiempo de la diapositiva: 30:00)Así que las reacciones de precipitación la reacción de un antígeno soluble con la IgG o los anticuerpos IgM para formar un gran agregado de interbloqueo se llama como las reacciones de precipitación. Las reacciones de precipitación se forman por los anticuerpos se conocen como los precipitantes por lo que el precipitado lo que esformado por los anticuerpos se conoce como los precipitantes se produce en 2 etapas por lo que la interacción de anticuerpos del antígeno se produce en realidad en 2 etapa para formar el precipitado en la etapa 1 en realidad es una reacción rápida.Donde tan pronto como se añaden los anticuerpos al antígeno habrá una rápida interacción dentro de un segundo entre el antígeno y el anticuerpo para formar el complejo de anticuerpos del antígeno una vez que esta rápida interacción se produce y el antígeno y el anticuerpo están formando un complejo estable Entonces se procede a la etapa 2 donde habrá una velocidad lenta de reacción completando incluso dentro de unos pocos minutos u horas y formando un entramado de los complejos de anticuerpos de antígeno que significa ahora en la etapa 2, que en realidad es una reacción lenta.Todos estos complejos de anticuerpos de antígeno van a formar un muñón o la celosía y al hacerlo los estos complejos van a ser tan pesados que en realidad no van a ser solubles en los medios acuosos y es así como van a ser eliminados o realmente van a formar un material particulado que en realidad puede ser visible a simple vista. Desajuste de los anticuerpos y la relación de antígeno de anticuerpos, por lo que lo que es muy importante para los anticuerpos del antígeno complejo o antígeno de antígeno para formar el precipitado.Es que se supone que usted debe proporcionar la cantidad adecuada de antígeno, así como los anticuerpos, ya que si va a haber un desajuste entre el antígeno o el anticuerpo si usted tiene un antígeno demasiado bajo o un antígeno demasiado alto los anticuerpos no van a formar el precipitado óptimo y eso es todo es importante que usted debe añadirlos en una relación particular para observar los precipitados óptimos no se forman precipitados visibles si usted tiene la proporción inadecuada el primer experimento lo que vamos a discutir son los ensayos de inmunodifusión o pruebas de inmunodifusión las pruebas de inmunodifusión se realizan en un medio de agar gelificado uno del ensayo de inmunodifusión se llama como la prueba de Ouchterony en los pozos de prueba de Ouchterony se cortan para que usted tenga un bloque de agarosa y en este bloque de agarosa lo que va a hacer es que va a cortar el pozo y estos pozos van a contener el antígeno o los anticuerpos y entonces usted va a añadir los anticuerpos o el antígeno en estos bien.Y lo que va a pasar es que el antígeno en realidad va a salir de estos pozos en todas las direcciones de manera similar se puede imaginar que el antígeno 2 también se está difundiendo en este y el anticuerpo también se difunde en el agar y lo que va a pasar es bien cuando se difunden en realidad se van a reunir entre sí y es como en su punto de reunión estos 2 van a formar realmente el precipitado por lo que lo que se ve es que en este caso en particular el antígeno 1 y, así como el antígeno 2 están realmente formando un precipitado continuo.Lo que significa el antígeno 1 y, así como el antígeno 2 son en realidad son Idénticos entre sí y son similares entre sí es por eso que en realidad están mostrando el precipitado visible y en realidad están formando un precipitado continuo cuando junto a los anticuerpos por lo que a partir de entonces se forma una línea de precipitado visible entre el pozo donde después de la difusión óptima relación de anticuerpo de antígeno se forma así que el antígeno y el anticuerpo va a tener una concentración muy alta aquí.Pero cuando se difunde su concentración se diluye de manera similar cuando el antígeno se difunde es también la concentración es muy alta junto al pozo pero cuando se difunde y que es todo lo que es realmente va a lograr concentraciones óptimas de anticuerpos del antígeno para ver el precipitado visible.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 34:54)Ahora el siguiente es el ensayo de inmunodifusión radial. El ensayo de inmunodifusión radial es una técnica de ensayo de inmunodifusión cuantitativa utilizada para detectar la concentración de antígeno midiendo el diámetro del anillo precipitante formado por la interacción del antígeno y el anticuerpo en una consideración óptima en este método el anticuerpo se incorpora en gel de agarosa mientras que el antígeno se difunde en él en un patrón radial de este modo el anticuerpo se distribuye uniformemente en todo el gel.Así que en comparación con los ensayos de inmunodifusión en este lo que está haciendo es que simplemente está tomando un bloque de agarosa y en realidad está añadiendo los anticuerpos en que esto significa que el bloque de agarosa va a tener la concentración homogénea de los anticuerpos de modo que usted tiene un bloque de agarosa que realmente contiene los anticuerpos en una consideración homogénea así que en comparación con los inmunoensayos radiales en este que en realidad está teniendo en comparación con los ensayos de inmunodifusión.En este se está teniendo en realidad la concentración constante de los anticuerpos a lo largo del bloque de agarosa y entonces lo que hace es que realmente va a cortar un pozo y entonces realmente va a añadir el antígeno en que una vez que se añade el antígeno; el antígeno va adifuso y en realidad va a lograr en una concentración particular que en realidad va a seguir interactuando con el anticuerpo que está presente en este bloque de agarosa y luego es empezar a hacer el precipitado dependiendo de la cantidad de antígeno que usted está teniendo en este pozo en particular.En realidad va a darle un anillo de precipitación proporcional a la concentración del antígeno lo que usted ha añadido en el pozo el diámetro del anillo de precipitante es proporcional a la concentración del antígeno con la concentración creciente del antígeno el anillo de precipitado con el con será un más grande El diámetro se forma el tamaño del anillo de precipitado dependerá de los siguientes 4 factores número 1 en realidad va a estar presente en la concentración de antígeno lo que está tomando en la muestra bien.Número 2 también depende de la concentración de anticuerpos de agarosa lo que está tomando en este bloque de agarosa en particular porque si el anticuerpo va a ser el factor limitante entonces el antígeno no va a ser suficiente suficiente si el anticuerpo es limitar entonces el antígeno incluso en el antígeno es más el anillo de precipitado será proporcional al final de la concentración del anticuerpo entonces usted también dependerá del tamaño de la muestra bien, por lo que la cantidad de lo que va a tomar la difusión comenzará a partir de allí.Así que el tamaño del anillo de precipitado también será en proporción a eso y entonces el volumen de la muestra es también muy importante para ver el diámetro del anillo precipitante.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 38:08)Cómo realizar este ensayo, por lo tanto, la curva estándar se puede obtener de la cual se puede determinar la cantidad de antígeno en una concentración desconocida, por ejemplo, en realidad se puede hacer la muestra desconocida de diferentes concentraciones para que pueda hacer un antígeno de diferente cantidad y que en realidad le va a dar el anillo de precipitación de diferente diámetro. Así que lo que puedes hacer es simplemente trazar los diámetros de estos anillos en el eje y.Y en realidad puedes trazar la concentración del antígeno en el eje x y entonces lo que puedes hacer es simplemente usar la concentración desconocida y puedes ser capaz de determinar la concentración de ese antígeno en particular si el más de un anillo aparece en la prueba por ejemplo si tienes los 2 anillos como este entonces que en realidad implica que tienes más de un antígeno presente en tu mezcla de reacción.Lo que significa que estos antígenos realmente están teniendo las reacciones diferenciales con los anticuerpos que esto podría ser la mezclaEsto podría ser debido a que usted lo que el anticuerpo que está añadiendo no es puro por lo que en realidad está teniendo los 2 diferentes anticuerpos y que estos 2 diferentes anticuerpos tienen los diferentes tipos de interacción con el antígeno y debido a que en realidad está recibiendo los 2 anillos un anillo que es para el anticuerpo 1 el otro anillo que es para el anticuerpo 2 o en otro caso usted tiene el único anticuerpo.Pero usted tiene 2 antígenos que también están teniendo la interacción con el anticuerpo por lo que el anillo más pequeño que está obteniendo para el antígeno 1 de acuerdo a su concentración y el anillo más grande que usted está recibiendo para el antígeno 2 que también es de acuerdo a su concentración particular esta prueba se utiliza comúnmente en los laboratorios clínicos para la determinación de la etiqueta de inmunoglobulina en los pacientes, así que con estos ensayos inmunológicos radiales usted puede realmente ser capaz de determinar los antígenos que usted puede ser capaz de determinar los anticuerpos.Debido a que en realidad le va a dar el anillo de precipitant para que realmente pueda ser capaz de detectar o puede ser capaz de diagnosticar la presencia del anticuerpo en la muestra o la presencia del antígeno.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 40:33)Ahora vamos a ver ¿Cómo realizar este ensayo y cualquiera que sea el material que se requiere el material lo que usted requiere es el cristal cónico como el cilindro de medición de cilindro y los reactivos de panadera que requiere agarosa para que usted será capaz de preparar el bloque de agarosa entonces usted requiere el buffer de ensayo entonces usted requiere los antígenos estándar entonces usted requiere los antígenos de prueba de gel de la placa de vidrio pinchazos y el agua destilada y alcohol el equipo lo que usted requiere es la incubadora de la incubadora de 37 grados Celsius un microondas o el quemador.Así que usted será capaz de preparar el bloque de agarosa entonces usted requiere un vórtice mezclador de espátula micropipeta y todo este tipo de elementos menores.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 41:18)Para los procedimientos primero hay que preparar un gel de 10 ml de agarosa del 1 por ciento para que pueda realmente pesar la cantidad de agarosa lo que requiere y luego lo puso en los 10 ml de la PPS entonces usted saca los 6 ml de esta solución de prueba en un tubo de prueba permiten que la solución para enfriar hasta 55 a 60 grados centígrados este es un paso muy importante que usted debe permitir que esta solución para enfriar para que cuando usted agrega los anticuerpos a la solución de anticuerpos no deben ser desnaturalizados y añadir el 80 microlitro de antisuero a 6 ml de soluciones de agarosa.Mezcla bien para una distribución uniforme de los anticuerpos entonces vierte las soluciones de agarosa que contienen la entasra en una placa de vidrio libre de grasa no grasa colocada en la superficie horizontal permite que el gel se acomode durante 30 minutos, lo que significa que usted va a tomar un bloque de vidrio y este bloque de vidrio no debe tener la grasa porque el vidrio está llegando donde usted tiene un recubrimiento brillante así que si usted tiene un recubrimiento brillante este un bloque bruto no va a seguir eso.Así que lo que necesita es un vidrio que no tiene el recubrimiento brillante y debe ser áspero en realidad para que pueda mantener el Bloque bruto entonces usted realmente va a echar el agarosa sobre esto y entonces usted dejó que el agarosa se solidificó una vez que el agarosa se solidifica entonces usted realmente va a perforar los pozos con la ayuda de un puncher de gel que en realidad va a usted sabe que usted tiene que hacer los agujeros para que usted será capaz de cargar los antígenos en este uso gelatinas una vez que usted en el agujero usted puede quitar este bloque de agarosa.Así que habrá un pozo para cargar las muestras entonces usted puede agregar el 10 microlitro del antígeno estándar y el antígeno de prueba en el pozo y luego usted incuba esta placa de vidrio en una cámara húmeda Porque si usted permite que el agua se evapore de esto la agarosa no va a quedar como una hoja delgada por lo que tiene que detener la evaporación del agua por lo que lo que puede hacer es simplemente añadir un poco de tejido que es tejido húmedo en el agua para que debe venir mantener el contenido de humedad intacto dentro de esta cámara.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 43:39)Ahora simplemente incubar para la noche y luego usted va a ver los resultados entonces usted observa el anillo de precipitante alrededor del antígeno marca los bordes del anillo de precipitado y medir el diámetro así que lo que va a ver es ver por ejemplo este es el pozo y Lo que vas a ver es un anillo precipitante alrededor de esto de manera similar este es el otro antígeno que va a ver el anillo de precipitado entonces lo que va a hacer es simplemente esbozar este anillo y entonces usted va a determinar el diámetro de este anillo de precipitación en particular.Y lo que usted va a observar es que el contra la concentración tiene que anotar el diámetro y entonces también puede anotar el diámetro para las muestras de prueba entonces lo que va a hacer es usted trazar estos en una curva.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 44:31)Y usted puede ser capaz de utilizar esa curva para calcular la concentración del antígeno en una muestra desconocida mientras que usted está realizando este ensayo que podría tener que usted podría enfrentar los diferentes tipos de problemas y que es cómo usted en realidad puede hacer la resolución de problemas también. ¿Cuál es el problema que usted puede no ver una forma de anillo de precipitación en ese caso usted podría no haber hecho la adecuada sensación inadecuada de los pozos o usted puede ser capaz de incubar el gel de agarosa se secó mientras usted estaba haciendo la incubación.Así que mientras que se secará en realidad va a afectar la difusión del antígeno y es como en realidad no le va a dar los anillos de precipitante cuando usted está realmente agregando los antisueros en la agarosa la temperatura de agarosa no era de 55 a 60. Pero fue ligeramente más alto y es así como los anticuerpos se desactivaron si quieres resolver este problema lo que tienes que hacer es que tienes que llenar la cantidad adecuada de las soluciones en el pozo que tienes para asegurar que hay suficiente crema hidratante en la cámara.Y luego también tienes que asegurar que el agarosa se enfrió abajo llegar a lo suficiente para que el antisera no va a ser inactivado en algún momento lo que usted va a observar también es el anillo precipitante de desenfoque que significa que el anillo de precipitado no va a ser muy claro de corte. En realidad va a ser hazy en ese caso que usted podría ser la primera razón es que podría ser debido a la inactivación del suero o podría ser debido al vertido desigual del gel, lo que significa que su espesor de gel es desigual.Lo que significa que no va a formar la superficie muy suave y debido a que en realidad está mostrando un anillo de precipitante borrosa usted puede simplemente resolver este problema, ya sea por asegurarse de que el antisueros no se ha desactivado y el agarosa se enfría por completo antes de que se vierte en la placa de vidrio. Y luego también se puede colocar la placa de vidrio en una superficie plana mientras que verter el gel para que no haya un vertido desigual de la agarosa en las placas de este vidrio de modo que todo esto se trata de los ensayos de inmunodifusión radial donde hemos discutido todos y cada detalle de los protocolos vamos a pasar a la siguiente diapositiva.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 46:54)El siguiente es el inmune-electroforesis el principio de la inmuno-electroforesis se basa en el movimiento del antígeno y los anticuerpos al polo opuesto después de aplicar la corriente eléctrica si la reacción ocurre usted verá una línea de precipitación hasta ahora qué Estábamos haciendo es simplemente confiar en la difusión del antígeno o de los anticuerpos y en ese caso usted va a observar un anillo de precipitación o línea de precipitación, pero en algún momento el antígeno o el anticuerpo lo que usted está manejando son muy grandes y ellos están allí la tasa de difusión es muy lento.Debido a que no es posible para estos antígenos a ser probado en un ensayo de inmuno radial o los ensayos de inmunodifusión por lo que en ese caso es lo que usted hace es simplemente hacer un gel de agarosa y en ese caso usted sólo sabe que vierte el antígeno vierte el antígeno en un pozo y los anticuerpos en otro pozo y luego usted Aplicar la corriente eléctrica a través de ellos, así que lo que sucederá es que el antígeno y los anticuerpos van a correr en dirección opuesta y entonces mientras estén corriendo se interactuarán entre sí y es así como van a formar el precipitado.Así que lo que usted va a hacer es simplemente ir a añadir el antígeno en uno de los anticuerpos de pozo en otro pozo y entonces usted va a aplicar el campo eléctrico de modo que una vez que aplique los campos eléctricos el antígeno se ejecutará en esta dirección el anticuerpo se ejecutará en esta dirección y cuando se reunirán en el punto central que va a ver una línea de precipitación para que la línea de precipitación se va a decir que este antígeno y este anticuerpo están interactuando entre sí.Y este es este tipo de ensayo es útil para el diagnóstico de la meningitis bacteriana y las otras enfermedades por lo que todo esto es sobre el estudio de la interacción del antígeno y el anticuerpo hasta ahora discutimos acerca de las reacciones de aglutinación que discutimos sobre las reacciones de precipitación y en las reacciones de precipitación sólo hemos discutido acerca de los ensayos inmunológicos radiales así que con esto me gustaría concluir mi conferencia aquí en las conferencias posteriores que estamos En realidad vamos a discutir acerca de las reacciones de la inmunoprecitación.Y entonces vamos a tomar los inmunoensayos para discutir cómo realizar los inmunoensayos y cómo usted puede ser capaz de usarlos para responder a algunas de las preguntas biológicas, así que con esto me gustaría concluir mi conferencia aquí gracias.