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Hola a todos, bienvenidos a otra conferencia para la Ingeniería y los Principios de la Entrega de Drogas; en esta clase vamos a discutir un papel en la inhalación.
(Consulte la hora de la diapositiva: 00:37)

Por lo tanto, en las clases anteriores hemos discutido cómo, si usted está tratando de entregar algo al pulmón, usted puede directamente utilizar terapias basadas en la inhalación para proporcionar cualquier efecto secundario en las otras partes del cuerpo. No tiene sentido si quieres que todo tu medicamento vaya a los pulmones para entregarlo a través de la vía intervenosa o oral porque, de esa manera se distribuirá por todo el cuerpo. Por lo tanto, en este artículo los autores han analizado cómo pueden tratar algunas infecciones usando algunas partículas poliméricas y bacteriófagos y describiremos esto con mucho más detalle a medida que vamos en este documento.

(Consulte la hora de la diapositiva: 01:13)

Así que, muy rápidamente primero de todo lo que están tratando de hacer; por lo que, este es un papel que está mirando la infección de la fibrosis quística. Entonces, ¿la fibrosis quística primero de todo lo que es eso? Es un trastorno genético, causado por una mutación en un gen que se llama CFTR, que es un gen del receptor transmembrana de la fibrosis quística. Y, por eso la secreción del ion cloruro no es buena y eso provoca muchos problemas en cuanto a la difusión en el contenido de agua del moco. La fibrosis quística en realidad afecta a una gran cantidad de órganos, incluyendo su intestino, así como los pulmones y otros como incluso las glándulas sudoríparas.
Pero, el manifiesto mayor de esto viene en el pulmón donde normalmente en el pulmón normal se tienen estas células epiteliales pulmonares. Y, estas células epiteliales pulmonares continúan secretando gran cantidad de moco que causa la generación de dos capas de moco. Por lo tanto, tienes una capa de moco más viscosa y tienes una capa de moco menos viscosa. Y, en general en una vía aérea normal del pulmón este moco se mantiene en movimiento hacia arriba y cuando digo arriba su básicamente arriba en el sentido de que, se mueve de los pulmones hacia la boca. Y, lo que ocurre es que digamos que estamos respirando cualquier patógeno o cualquier tipo de partículas que el cuerpo no quiera que estas partículas se depositen en esta gruesa capa de moco.
Y, dado que este moco se está moviendo constantemente hacia arriba que se llama la escalera mucociliaria, seguirán despejando esto. Y, eventualmente se mantiene una homeostasis donde se secretan más y más moco, sea cual sea el moco previo que tenga que mover. Por lo tanto, típicamente como se sabe en la literatura, se trata de tomar alrededor de 18 horas para que todo el moco se regenere. Por lo tanto, dentro de las 18 horas en una vida normal toda la mucosidad que está presente será reemplazada por un nuevo moco. Pero lo que ocurre en las vías respiratorias de la fibrosis quística es que, debido a este problema en el gen aquí el contenido de agua es mucho más bajo.
Y, de ahí que tengas una capa única muy gruesa de moco.
Ahora, este moco siendo tan viscoso no se mueve realmente como solía moverse, en el caso normal más también es muy grueso. Y así, eso resulta en bastante acumulación en el bloqueo de las vías respiratorias también. Por lo tanto, ahora usted está respirando en la bacteria, que puede crecer en sus pulmones y en realidad permanecer allí durante mucho tiempo establecerse y causar la enfermedad. Por lo tanto, en general alrededor del 80 al 95 por ciento de los pacientes realmente vienen porque, de esa insuficiencia respiratoria. Porque, es causada por esta bacteria crónica como las infecciones que van a causar la inflamación con más y más células inmunes van a venir.
Ellos van a seguir destruyendo el tejido circundante y eso causa más secreción de moco y más homeostasis para ser perturbado el bloqueo de las vías respiratorias. Así que, con el tiempo, los pacientes acaban de morir porque, incluso ellos no pueden respirar muy bien. Así que, como dije entonces, uno de los principales objetivos, es esta bacteria como la infección y entre la infección bacteriana que se ve en esta enfermedad hay muchos tipos de bacterias que empieza a colonizar el pulmón.
Pero, entre ellas la especie muy común de bacterias patógenas en este caso es Pseudomonas aeruginosa. Por lo tanto, es una bacteria gram-negativa que coloniza tus pulmones si tienes fibrosis quística y tales infecciones.

(Consulte la hora de la diapositiva: 05:19)

En realidad, es muy difícil tratar en primer lugar y ya hay un sistema inmunológico deteriorado que está presente en los alrededores. Como este moco es tan grueso, que las células inmunes también están encontrando difícil moverse en este moco. Entonces este Pseudomonas aeruginosa realmente desarrolla resistencia a los antibióticos a cualquier antibiótico que esté dando, y es un gran problema en estos días. Y, dado que tiene un tiempo de residencia más largo porque el moco no se está moviendo, puede formar estos biofilms.
Y, las biopelículas en general son extremadamente difíciles de tratar, hemos hablado de esto en nuestra clase de infección. Estas biopelículas serán muy difíciles de tratar ya que los antibióticos realmente no funcionan muy bien, casi se come 1000 veces la concentración de antibióticos que podría ser extremadamente tóxico para las células sanas también y es muy difícil de tratar. Y, en general, quiero decir; obviamente, la resistencia a los antibióticos está siendo destacada bastante en varias revistas y en varias revistas de publicaciones. Es un gran problema que está siendo enfrentado por la humanidad en este momento.

(Consulte la hora de la diapositiva: 06:17)

Entonces, este documento trató de atajar eso y lo que han hecho es que, están proponiendo, de nuevo no son el primero en hacer eso, hay varias personas que han propuesto eso. Pero, en este caso están mirando un método de entrega normal para esta solución que es bacteriófagos para el tratamiento. Entonces, ¿qué son los bacteriófagos? Los bacteriófagos no son nada, pero se trata de virus que infectan específicamente a su bacteria huésped. Esto es sólo una imagen de modelo; se puede ver que hay una bacteria y luego varios tipos de virus se unen a en la parte superior de esta bacteria.
Y así, estos son virus que van a ir y en poner su material genético en la bacteria eventualmente causando la lisis de esta bacteria en particular. Estos bacteriófagos son muy específicos para su bacteria huésped. Por lo tanto, no dañan realmente sus bacterias comensales, por lo que sabemos que tenemos una gran cantidad de bacterias en nuestro cuerpo que en realidad es saludable y nuestro cuerpo lo requiere. Por lo tanto, estos bacteriófagos no lo van a matar, a diferencia de sus antibióticos, que eliminan casi todas sus bacterias a la vez; estos bacteriófagos son específicos para el objetivo. Y, también son autoreplicantes y autolimitantes y lo que hace exactamente eso significa que, cuando encuentren al anfitrión empezarán a multiplicarse. Por lo tanto, se autoreplicarán y cuando el anfitrión no esté allí no se multiplican más.
Por lo tanto, se limitan a sí mismos y son eventualmente aclarados, son seguros para el uso humano que han sido utilizados durante décadas en los humanos de hecho, los que han sido utilizados incluso antes de que los antibióticos fueron descubiertos. Por lo tanto, hay una larga historia de uso en los seres humanos y por lo tanto, se ha demostrado que son seguros y se ha demostrado en realidad que son eficaces contra los biofilms, así que no es el caso con antibióticos. Por lo tanto, esta es sólo una imagen de pseudomonas biofilm; se trata de una imagen de SEM: Imagen de microscopio electrónico de barrido. Y, muestra que la superficie es colonizada por el Biofilm Pseudomonas que cuando se trata con los fagos se erradica completamente. Otra cosa es, como cualquier otro virus o cualquier otro material genético que puedan ser diseñados.
Por lo tanto, usted puede poner otras enzimas en estos bacteriófagos también para aumentar su potencia, que pueden aumentar incluso la eficacia antibiótica. Por lo tanto, usted puede utilizar por la co-entrega con antibióticos o usted puede tener algunas estrategias alternativas también; sin embargo, un desafío es el tamaño es bastante pequeño. Por lo tanto, son de unos 10 a 100 nanómetros de diámetro y que si estamos mirando la entrega de polvo seco al paciente, que es mucho más compatible. Realmente no van a los pulmones profundos y hemos hablado de esto en nuestra clase de inhalación, vamos a repasar brevemente otra vez.
(Consulte la hora de la diapositiva: 09:03)

Por lo tanto, todo el punto de este documento fue que se puede desarrollar una terapia que utiliza un biomaterial; por lo que, que pueden aumentar el cumplimiento del paciente, así como asegurar una profunda entrega pulmonar de estos bacteriófagos.

(Consulte la hora de la diapositiva: 09:17)

Así que, de nuevo si recuerdas una de las cosas que causa la entrega en el pulmón profundo es el diámetro aerodinámico. Entonces, ese d aero y nosotros dijimos que el d aero tiene que estar entre 1 a 5 micras. Y, eso es porque si es inferior a 1 micrón entonces típicamente, no tienen suficiente inercia y luego siguen yendo en streamlines con el aire en el que estás respirando y también se van exhalando. Si son mayores de 5 micras entonces tienden a tener una inercia muy alta y terminan acumulando donde, primero golpean que es esa tráquea en la boca superior, vías aéreas superiores. Y así, el rango ideal que se quiere entregar, es de 1 a 5 micras.
Entonces, esto es lo que el sistema fue imaginado por estos autores donde están diciendo que usaremos una partícula que está en este rango. Y, a continuación, cargar estos bacteriófagos o el fármaco lo que sea que esté tratando de entregar en estas partículas y de esa manera esto asegurará que estas partículas vayan a lo profundo en el pulmón, en los sacos alveolares. Y, luego está cuando el medicamento puede salir y obviamente, quieren usar los inhaladores de polvo seco porque es mucho más compatible con el paciente, el paciente puede simplemente usarlo por sí mismo.

(Hora de la diapositiva: 10:37)

Así que, de nuevo, ¿cuáles son los requisitos? Como dije tenemos que tener de 1 a 5 micras para el pulmón profundo y el d aero para partícula polimérica que también habíamos discutido antes. No es nada, sino su relación con el diámetro físico y la raíz cuadrada de la densidad. Así que, ahora, también sabemos y hemos discutido esto; también que el macrófago tiene una captación muy alta en el rango de 2 a 5 micras. Por lo tanto, si usted entrega algo en ese rango lo que sucederá es la mayor parte de su medicamento terminará en los macrófagos: macrófagos alveolares, que están inspeccionando el área y usted perderá una gran cantidad de sus medicamentos.
Por lo tanto, ese no es el resultado que usted quiere; usted realmente no quiere entregar este medicamento al macrófago porque esta bacteria no reside en los macrófagos. Así que, una cosa con la que se les ocurrió es que decidieron hacer estas partículas porosas y más grandes. Por lo tanto, en realidad cambiaron el tamaño físico de estas partículas a 8 a 10 micrones y disminuyen la porosidad de este para mantenerlos en 2 a 5 micras, rango para ese d diámetro aerodinámico. Por lo tanto, en ese rango de tamaño de 8 a 10 micrones no son demasiado grandes.
No son más que este rango de 2 a 5 micras que los macrófagos pueden tomar, pero todavía están en el rango aerodinámico adecuado para poder depositar en el pulmón profundo.
Y, entonces otro beneficio que observan a partir de esto es cuanto más grande es el tamaño de las partículas más fácil es para que se aerosolize. Por lo tanto, si usted tiene un polvo y usted fluye, digamos si usted tiene este polvo de partículas grandes. Por lo tanto, la relación de superficie a volumen es baja.

(Hora de la diapositiva: 12:23)

Y así, el aire puede llegar muy fácilmente y aerosolizarlo y así, eso es lo que ellos siguieron adelante y lo hicieron usaron el polímero llamado PLGA; de nuevo, hemos discutido bastante a través de este curso que es un polímero aprobado por la FDA. Y, han sido capaces de hacer esta partícula porosa, ya que se puede ver su muy porosa.
Por lo tanto, su densidad es muy baja, es biodegradable, es biocompatible porque PLGA la puedes tener degradante más rápido y la densidad que modificaron era de unos 0,3 gramos por cc. Así que, a partir de 1 han bajado hasta el 0,3; eso significa, que ahora esta partícula es bastante ligera y ahora si se aplica esa ecuación de daero, digamos si esto es de 8 micrones multiplicado por la raíz cuadrada de la densidad.
Así que, ahora si resuelvas esto encontrarás que esto es más en el rango de 3 a 5 micrones. Así que, eso es lo que usaron aquí; entonces lo que han hecho es que han usado bacteriófagos.
Encontraron bacteriófagos, que específicamente dirigidos contra pseudomonas y que han purificado usando un procedimiento llamado cromatografía líquida de rápido rendimiento. Y, con el tiempo han salido adelante y cargado estos fagos sobre estas partículas y lo que encontraron fue que consiguen una carga de cerca de millón de fagos por miligramo de partícula y la carga se realiza por simple adsorción.

(Consulte la hora de la diapositiva: 13:49)

Así, los fagos se acaban de incubar con esta partícula y les han permitido interactuar entre sí y adsorber a la superficie. Y, entonces encuentran que pueden poner alrededor de 10 a la potencia de 6 fagos por miligramo de partícula. Es importante tener en cuenta en este caso que están utilizando una mezcla de 5 fagos y la razón por la que quieren usar mezcla de fagos es porque digamos que esta es la bacteria y digamos que esto es un fago. Por lo tanto, tal vez hay un receptor en la superficie bacteriana para adaptarse a donde va y se une el fago.
Por lo tanto, si sólo utilizan un tipo de fago lo que sucederá es que las bacterias pueden potencialmente mutar este receptor al que entonces el fago no puede unirse. Así que, para evitar que eso suceda han usado 5 phages a la vez y así, esto es phage 1 tal vez el otro phage usa un receptor diferente. Por lo tanto, tal vez hay otro receptor ahora, que está siendo utilizado por un fago diferente. Y así eso significa, que incluso si digamos que una bacteria es capaz de anular de alguna manera uno de los fagos, seguirá siendo susceptible a los otros cuatro fagos.
Y, eso asegura que la terapia exitosa y luego pudieron demostrar que estos fagos que se cargan sobre las partículas siguen activos y siguen adelante y lisis de las bacterias.

(Hora de la diapositiva: 15:23)

Así que, aquí está lo que han demostrado. Por lo tanto, han utilizado una bacteria GFP, y en el control; por lo que, tiene todo esto es un césped bacteriano y el rojo son sus partículas. Por lo tanto, dondequiera que las partículas estén aterrizando no se ve ninguna muerte bacteriana. Sin embargo, si cargan sus partículas con el fago que usted ve no sólo es la bacteria verde que se limpia dondequiera que la partícula está aterrizando y en realidad se está propagando. Por lo tanto, como dije que los fagos son auto replicantes. Por lo tanto, están infectando a las bacterias, lo están liando, se están propagando y luego también están matando las bacterias que están a su lado también.
(Hora de la diapositiva: 16:15)

Luego aquí, han demostrado que estos fagos también son efectivos contra las biopelículas. Así que, ahora lo que estás viendo, es un biofilm que está siendo manchado por muertos en vivo. Así que, se puede ver que en este caso hay bastante de la biofilm que está viva frente a los muertos.
Mientras que, si dan sus partículas de fago, ven bastante una baja intensidad de bacterias vivas y bastante una alta intensidad de las bacterias muertas y aquí está la imagen fusionada; esto es para la cuantificación de vivos a muertos en el tejido.
Y, en los casos en los que están dando el fago combinado con micro partículas, encuentran que la proporción es mucho menor en realidad significativamente menor. Por lo tanto, son eficaces incluso contra las biopelículas.
(Consulte la hora de la diapositiva: 17:01)

Luego han seguido adelante y han hecho las formulaciones en polvo seco. Por lo tanto, lo que han hecho es que han liofilizado su polvo o han liofilizado sus partículas para hacer un polvo y encuentran que hay una pérdida mínima de la actividad. Así que, te dije que han podido conseguir 10 a la potencia 6 fagos por miligramo y te encuentras que no hay una gran cantidad de pérdida y este polvo es bastante estable a temperatura ambiente. Por lo tanto, aquí, usted puede ver que aquí está el título y realmente no cae mucho durante un período de 2 semanas a temperatura ambiente también. Por lo tanto, esto podría ser una buena terapia para los lugares de la aldea que pueden no tener suficiente acceso para que digamos un almacenamiento en frío o cualquier tipo de instalaciones.

Y, para ayudar aún más con la aerosolización, han utilizado la lactosa que es un crioprotector, así como un buen agente aerosolizante. Por lo tanto, no es esencialmente nada, sino un azúcar y por lo tanto, han mezclado esto junto con la formulación de partículas para que empiece a fluir mejor. El propio PLGA no fluye muy bien. Por lo tanto, tienen que mezclarlo con lactosa para hacer eso y en su resultado, verán que encuentran que esto es una excelente entrega a pulmón profundo. Entonces, aquí está lo que han hecho; aquí lo han hecho con un ratón y luego han aislado varios órganos.
Así, este proceso se llama insuflación donde se accede a la tráquea del ratón y luego a través de una jeringa, están pufando el polvo directamente en la tráquea; por lo que, ese proceso es insuflación. Por lo tanto, como se espera ver y estas partículas son fluorescentemente etiquetadas y luego están utilizando algún tipo de sistema de imágenes de animales del sistema de imágenes del sistema. Y lo que encuentran es que, específicamente, reciben la entrega en los pulmones, mientras que, los otros órganos no muestran ninguna entrega final en absoluto, que es lo que usted espera si usted está haciendo en la simulación. Esto es una cuantificación adicional de que toda la señal de fluorescencia es del propio pulmón y todos los demás órganos no muestran nada.
(Hora de la diapositiva: 19:25)

Luego han seguido adelante y eutanizado a algunos de estos animales y luego hicieron la crioseccionadora y así, lo que se está viendo aquí es pulmón seccionado. Este azul es el DAPI que está manchando el núcleo de células de mamíferos y el rojo son sus partículas y se puede ver que incluso en el pulmón profundo. Por lo tanto, usted sabe que esto es un pulmón profundo porque, usted puede ver bastante espacio de aire que sugiere que esto son alvéolos en la histología.
Y, usted puede encontrar que estas partículas están depositando en los pulmones profundos y por lo tanto son buenos en términos de su rango de diámetro aerodinámico y esta es la cuantificación adicional en animales vivos. Por lo tanto, han hecho todo el animal en vivo por imágenes y lo que encuentran es la mayor parte de la señal es del pulmón, mientras que, en un animal sano, si usted espera por cerca de 18 horas se elimina.
Por lo tanto, su generalmente seguro para un animal sano no se queda realmente en el pulmón por mucho tiempo, no bloquea nada. Se borra dentro de las 18 horas, que es lo que se espera como dije en animal sano el moco se va a regenerar en unas 18 horas y luego muestran que la porosidad es realmente esencial. Por lo tanto, si hacen las mismas partículas de tamaño que no son porosas y luego insuflan esas partículas en los pulmones del ratón. Lo que encuentran es, en primer lugar si se comparan con un fago libre, encuentran que las partículas porosas son capaces de dar un titer muy alto de fago a los pulmones.
Por lo tanto, el experimento se hace que usted ha insuflado ya sea fage libre o fago cargado en la cantidad de partícula porosa igual cantidad. Y, entonces se homogeneiza el pulmón y el titer por cuánto fage está presente en esos homogeneizados. Y, se encuentra que casi 4 órdenes de magnitud, principalmente porque, más altas las partículas y lo mismo que observaron con la partícula no porosa versus porosa. Por lo tanto, la porosidad es esencial para los pulmones profundos y lo que encuentran es en la región del pulmón profundo las partículas porosas le dan sobre un orden de mayor deposición de la magnitud de los fagos en comparación con la partícula no porosa; de nuevo, recuerde que esto es titering para las placas. Por lo tanto, todos estos fagos son realmente fagos activos.
Por lo tanto, a lo largo de todo este proceso han sido capaces de alcanzar la actividad del fago en el pulmón y luego, finalmente, muestran que esto es en realidad la infección en respuesta. Por lo tanto, y lo que eso significa, que digamos si es un pulmón sano entonces usted encuentra que si usted entrega partículas de fago se obtiene un cierto título de sus fagos en el pulmón recuerde y esto es en miligramos ahora, por lo que es por eso que se ve una gota en la escala y esto fue en microgramos, esto fue en gramo. Así, pero en cualquier caso, si usas estas partículas de fago, dan una cierta acumulación en el pulmón. Sin embargo, si tienes pulmón infectado estos fagos entonces replicas así, esto se hace 24 horas después.

Por lo tanto, estos fagos replican y en realidad aumentan su número de nuevo casi de 3 a 4 órdenes de magnitud; lo que indica que estos son en realidad auto-replicantes y el sistema de respuesta a la infección.
(Hora de la diapositiva: 23:05)

Luego siguieron adelante y usaron este sistema en un modelo de infección aguda. Por lo tanto, lo que hicieron es que entregaron la bacteria en los fagos al ratón en los pulmones. Y así, se trata de animales sanos, en este caso animales de tipo salvaje y han entregado cerca de 0,5 miligramos de partícula. Tiene una carga de los fagos en eso y PAO1 que es una cepa de laboratorio de pseudomonas fue utilizado y este es un modelo de 24 horas. Por lo tanto, ambas cosas han dado y luego están probando lo que sucede 24 horas después en términos de ambas bacterias en el fago.
Y, lo que encuentran es solo en el caso cuando tienen el fago cargado en las partículas.
Entonces, aquí está su fago libre, aquí está su única bacteria, aquí está su única partícula. Por lo tanto, no se ve ninguna reducción, pero solo en el caso cuando se tiene partícula cargada con el fago se ve una reducción en la cantidad de CFU, algún número de bacterias que está presente en la homogeneización pulmonar. Y, entonces los fagos también se miden y la bacteria era entonces el animal se buscaba entonces la supervivencia y lo que encuentran es que se consigue una reducción masiva en la supervivencia entre los dos grupos.

Por lo tanto, si usted no da ningún tratamiento la mayoría de estos animales mueren; sólo tal vez 10-15 por ciento de ellos sobreviven. Pero, si usted está dando tratamiento de fagos casi de hecho, el 100 por ciento de los animales terminó por sobrevivir durante la duración del estudio.
(Hora de la diapositiva: 24:49)

Y, entonces, utilizan un ratón CFKO que es un ratón que está mutado y imita la fibrosis quística. Aquí también son capaces de mostrar que de hecho, a un ritmo mucho mejor que si se utilizan sólo los fagos hay algún efecto. Pero si usas fagos más bacterias casi erradicas todas las bacterias que están presentes en el sistema y aquí, también están mostrando si la bacteria se está propagando o no. Por lo tanto, han analizado para el hígado donde si la bacteria que se propaga sistémicamente, se acumulará en el hígado también. Y, encuentran que si le dan al bacteria solo tratamiento casi todos los animales tienen colonias bacterianas en el hígado. Sin embargo, si usan micropartículas de fago ninguna de las bacterias se encuentra en el hígado.
Por lo tanto, no solo está previniendo el pulmón, también está impidiendo otros órganos también y esto es más datos de histología. Por lo tanto, en un animal infectado ves si solo das bacterias ves una respuesta masiva de tus células inmunes. Puedes ver donde los alvéolos, que ahora están completamente llenos de todas estas células inmunes puedes ver aquí. Si le das algún tratamiento de fagos entonces esto reduce un poco, pero casi se vuelve como un tejido sano; si lo haces con la micropartícula de fago. Y, esto vuelve a mostrar más el número de bacterias que está presente en estas secciones pulmonares. Por lo tanto, se pueden ver todos estos rojos que se están representando como bacterias y que se reduce más a medida que se da el tratamiento.
(Consulte la hora de la diapositiva: 26:33)

Entonces querían ver si algo así va a funcionar en las cepas clínicas.
Por lo tanto, dije que los autores inicialmente usaron la cepa de laboratorio que era PAO1. Por lo tanto, las cepas de laboratorio son buenas para hacer su optimización, pero obviamente, las cepas clínicas son mucho más virulentas y mucho más difíciles de tratar. Por lo tanto, lo que hicieron es que lo han comprobado en varias cepas de bacterias que están aisladas del paciente. Y, lo que encuentran es que sus micropartículas de fago son capaces de matar la mayoría de estas; hay un orden aquí, que no era capaz de matar. Pero, casi todos estos aislados clínicos estaban siendo capaces de ser asesinados por la formulación de micropartículas de estos fagos.

(Consulte la hora de la diapositiva: 27:21)

Y luego, hicieron un experimento in vivo usando uno de esta cepa clínica, que es PA103 y lo que encuentran es de nuevo el mismo resultado que, si solo dan fagos, realmente no ven mucha reducción. De hecho, no hay una reducción significativa mientras que, si dan su micropartícula de fago, ven bastante reducción en el número de bacterias que está presente en los pulmones. Lo otro que hicieron es obviamente que esto funciona bien con una sola bacteria de infección en el sistema del ratón. Pero los humanos están expuestos a varios tipos de bacterias, varios tipos de Pseudomonas, varias cepas de Pseudomonas a la vez.
A la vez, el paciente puede tener muchos tipos de cepas de Pseudomonas que están colonizando los pulmones. Entonces, ¿cómo puede este trabajo con todo eso? Debido a que están utilizando los 5 fagos y luego han demostrado que estos fagos son eficaces contra la mayoría de las cepas que se encuentran en los humanos. Salieron adelante y lo intentaron y encuentran que, incluso si tienes dos cepas diferentes mezcladas juntas y luego le das la terapia de fagos incluso entonces puede causar la reducción en el número de bacterias que está presente.

(Consulte la hora de la diapositiva: 28:33)

Y entonces una pregunta que surge repetidamente con el tratamiento de la fago es qué pasa con la respuesta inmune contra el fago en sí mismo; por lo que, debido a que los fagos son extraños y pueden provocar alguna respuesta inmune. Por lo tanto, en este caso entonces los autores querían probar lo que sucede si dan fagos antes y luego tratan de terapia. Por lo tanto, en este experimento en particular primero usaron el ratón para entregar la micropartícula de fago sin ninguna bacteria. Esperaron unos 21 días que es un buen momento para dejar que se desarrolle la respuesta inmune adaptativa.
Y, entonces lo que hicieron es, luego siguieron adelante con sus originales con su estudio normal donde usan los mismos ratones para entonces, dar tanto los fagos en la bacteria y ver la respuesta 24 horas después. Y así, lo que encuentran es si usted ha pre-tratado versus ningún pre-tratamiento de fago. Así que, en este caso hubo pretratamiento con fago, en este caso el pretratamiento es solo con partículas y obviamente, esto es lo que nunca estuvo expuesto a los fagos. ¿Qué encuentras es que ambos funcionan como buenos y no hay diferencia entre las terapias?
Por lo tanto, si hubiera una respuesta inmune contra los fagos el cuerpo habría tratado de limpiar los fagos y no habría conseguido este mucho espacio libre. Y así, al menos en cuanto a su eficacia funcional no ven ninguna reducción. También buscaron anticuerpos contra los fagos en la sangre y no pudieron encontrar ningún anticuerpo y usar los fagos al menos para una administración. Obviamente, esto tiene que hacerse a una duración mucho más larga y en un

modelo crónico para poder decir con éxito que esto va a funcionar o no. Pero hay mucha promesa en esta terapia en particular. ¡Bien! Por lo tanto, vamos a parar aquí y seguiremos en la siguiente clase.
Gracias.