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Por lo tanto, la última clase dije que hablaremos de Hairy Root Cultures.Aparte de las cultivaciones de células vegetales comercialmente para la producción de metabolitos secundarios, las culturas de la raíz de la producción también están siendo utilizadas en la industria.Entonces, ¿de dónde vienen las culturas raíz peludas?En realidad, eran una enfermedad en la planta causada por agrobacterium rhizogenes.Ahora, ya hemos estudiado acerca de las transformaciones de agrobacterium, si agrobacterium tumefaciensinfecta las células de la planta entonces obtenemos la corona de la enfermedad de la corona, si agrobacterium rizogenesinfect entonces obtenemos raíces adventicias que se llaman como raíces peludas desde el punto de la información debido a la raíz de origen de la raíz de la raíz de los genes raul presentes en el T-DNA.Ahora, hay diferentes aplicaciones comerciales de las culturas de raíz peluda que están siendo testedfor los estudios de fitoremediación, que se utilizan para el metabolismo secundario Pero hay limitaciones en la escala de las culturas de raíz peludas por el diseño de biorreactores juega un papel importante. A continuación, la producción de metabolitos secundarios medicinales o el uso especialmente de los que están en peligro entonces se puede hacer para las plantas medicinales, por ejemplo, la producción de altos valores de valor. Luego, para la ingeniería metabólica, incluso para la expresión heterólogica de las proteínas, entonces se convierte en un sistema más biosintético y bioquímicamente estable porque hay un T-DNA estable Pero la tasa de crecimiento sabias de las culturas de ruta peludas que son estructuras organizadas, así como las células de las plantas son lentas porque las células de las plantas son dispersadas, más disponibilidad de nutrientes, por lo que las tasas de crecimiento específicas son más altas, pero entonces debido a la capacidad biosintética y la estabilidad es más que la gente prefiere la ruta peluda cultures.Ahora, las ventajas como hemos dicho ahora son de rápido crecimiento cuando decimos rápido crecimiento de la carne en relación a la planta natural o sistema de raíz natural, porque en comparación con los sistemas naturales hay más número de tallos mari Por lo tanto, usted ve que estas tasas de crecimiento específicas son más altas que las raíces normales. Entonces la estabilidad genética debido a la integración cromosómica. Entonces la estabilidad bioquímica porque hay organización organizada estructura, por lo que el rendimiento del metabolito secundario más alto. Y por otra parte porque tienen nuevo plástico en la naturaleza. Por lo que, de nuevo no hay hormonas necesarias porque las oximas que sintetizan los genes ya están presentes, por lo que no hay ningún requisito de la hormona en el medio, por lo que el costo efectivo en la comparación de la célula de la planta Ahora, los desafíos en el cultivo del biorreactor o escala. Usted puede ver la imagen de las raíces peludas aquí. Así, crecen como una malla matrix.Así, el problema con raíces peludas es que como el volumen de trabajo aumentaría, incluso desde el día uno dependiendo del tamaño del inóculo puede ser gradientes de la limitación de nutrientes especialmente oxígeno y también los nutrientes si el tamaño de la matriz es grande a medida que crece. Ahora, las raíces peludas son auto-inmobilizarse en la naturaleza. Así, la tasa de crecimiento comienza el crecimiento comienza una vez que vienen juntos. Así, como el crecimiento va a suceder crecerán como una sola matriz y por lo tanto, la En general, se encuentra que el núcleo interno está desprovisto de nutrientes y obtiene necrótica.Así, las raíces peludas ahora, hay sensibilidad de corte, se ha observado que si se utilizan configuraciones de tankreactor se utilizan forhairy las culturas de la raíz entonces se rompen porque estos rootswill break y si la rotura sucede el organismo lo toma como una herida creada y por lo tanto será llamada a suceder en las raíces, por lo tanto conduce a la formación de productos inconsistentes. Entonces hay un requisito de la matriz de apoyo porque son auto-inmovilizando en la naturaleza. Se ha observado que el más disperso que permanecen en el medio líquido el Por lo tanto, el crecimiento no empieza. Por lo tanto, son necesarios, se necesitan para venir juntos para que actúe como un prerrequisito para el crecimiento a comenzar. Por lo tanto, hay requisito para la matriz de soporte. Son altamente sensibles a incluso el material del soporte. En general, el acero inoxidable es el material que se utiliza en los reactores, pero depende de la especie a veces se encuentra que es muy específico y sensible a la materialde las partes internas de los reactores.Así, la matriz inerte es necesaria. Restricción de la entrega de nutrientes o de oxígeno a la masa central del tejido, thenresistanceto flujo Por lo tanto, la limitación de transferencia de masa en estos sistemas es mucho más grave que cuando usted está trabajando con células de plantas o células microbianas porque el tamaño de la célula es pequeño, por lo que el espesor de la capa límite del líquido es más pequeño, pero aquí la limitación de la capa límite de líquido sólido es más alta en comparación con el gas líquido. E incluso dependiendo de la especie en la que usted está trabajando la raíz misma puede ser verygris.Así, si la raíz está teniendo una morfología más gruesa en general para las especies de árboles. Si se compara con las hierbas herbáceas de las especies se verá así [vocalized-noise.Generalmente, si usted va a trabajar con hierbas entonces usted tendrá raíces muy finas, pero si usted está trabajando con las especies de árboles entonces usted puede tener morfología muy frágil y la morfología gruesa, como cuando estábamos trabajando con azadirachta indica. Inicialmente cuando se indujeron las raíces peludas, era como un sistema de taproot había un solo y entonces rama y la ramificación también fue arrenda.Así, era muy difícil hacer la cultura líquida de esas raíces, las tasas de crecimiento eran muy lentas, por lo que nosotros tenía que optimizar los medios para y luego aplicamos el ácido gibberélico como una de las hormonas y podríamos ver claramente la morfología completamente cambiado a la imagen como este.Así, donde habíamos visto una diferencia completa en la morfología porque al añadir gibberellicacid lo que observamos el número n de los tallos mari que vino. Así, más número de mari tallos pesados de la ramificación del ácido gibberélico es conocido por aumentar la branebranchingen los sistemas rados.Así, entonces había una fuerte ramificación debido a que la morfología se hizo delgada y se hizo más fácil de escalar el sistema y las limitaciones de transferencia de masa también fueron Por lo tanto, tiene que ser un acto de equilibrio entre las necesidades biológicas del tejido sin inducir una respuesta biológica adicional, lo que significa, por ejemplo, heridas que, como por ejemplo, incluyen callosutilizando en las raíces. Ahora, los reactores para las culturas de raíz peluda se dividen en dos tipos, los agentes de fase líquida y los reactores de fase gaseosa. Los reactores de fase líquida son generalmente el tipo de reactores que trabajamos con la fermentación de la microbialfermentación o las fermentaciones de células vegetales.En los reactores de fase líquida, el gas es el medio disperso en el líquido. En los reactores de fase gaseosa el líquido es el medio disperso en el medio gaseoso. Por lo tanto, hablaremos de los reactores de fase líquida. En los reactores de fase líquida, los diferentes tipos de reactores que ya conocemos, que se han utilizado agitó la columna de la burbuja del tanque, donde el tipo de impulsor que se utiliza ha sido diferido o sumergido flujo convectivo de tambor rotacional y reactores.Yo le mostraré las imágenes. Por lo general, como he dicho, porque las culturas de raíz son auto-inmovilizando que necesitan un soporte. Así, incluso en este tipo de fase líquida Se proporciona un soporte de tal manera que el cual puede facilitar la auto-inmovilización de las raíces peludas. Por lo tanto, se puede ver en la imagen a, que es un reactor de tanque agitado, hay una malla provista sobre la cual se hace la inoculación y el impulsor es entonces y se mantiene debajo de la malla tal que no puede generar grandes fuerzas de corte en las raíces inoculadas. Entonces, ¿cuáles son las limitaciones?Pero en todos estos, por lo que se puede ver la imagen de biorreactores de tambor rotativos estos son los reactorsque ya se han utilizado para la raíz peluda cultures.Así, hay reactores donde habrá un sistema de apoyo, habrá aimpellerpara la mezcla, pero en general también se puede encontrar que puede haber dos compartimentos separados, uno puede ser el compartimiento de la cultura, el otro puede ser su medio de almacenamiento. Por lo tanto, si desea evitar evitar sus fuerzas de corte en la biomasa entonces el iris aireado y mezclado por separado y luego circularon a través de la cámara de cultivo. Como usted puede ver en la imagen d.So, la configuración sigue siendo el mismo lo que hemos estudiado ser columna burbuja, airliftreactors, pero la geometría se difiere, de modo que trabajar alrededor con la transferencia de masa limitationscan ser para los nutrientes puede ser para el oxígeno. Y porque el apoyo es necesario que tienen auto-inmovilización, por lo que algunas estructuras en el interior de las mismas configuraciones de reactoridades se proporcionan para trabajar para equilibrar la transferencia de masa y las fuerzas de corte. Por lo tanto, las limitaciones que se han encontrado con los reactores de fase líquida aumentan la headdensity raíz aumenta la caída de presión en todo el reactor y limita el transporte masivo. Por ejemplo, si usted está utilizando este tipo de reactor empacado sistema.Así, entonces, más alto es el como la biomasa comenzará a crecer allí se aumentará la presión con el aumento de la densidad de la ruta.Por lo tanto, entonces habrá límites de transferencia de masas. Del mismo modo, incluso si las raíces son suponemos que las personas han utilizado configuraciones donde han usado pequeñas cestas de polipropileno, malla, y ellos inoculan las raíces en esos meshand entonces dejan caer toda la malla con las raíces inoculadas dentro del mediuma.Ahora, como las raíces crecerían alrededor de la malla que la ramificación ocurriría entonces usted puede imaginar que el núcleo interno de las raíces que está allí la malla no tendrá la misma disponibilidad de oxigenación lo que la superficie externa tendría. entonces, ¿cuál puede ser una manera de superar este problema?Necesitas apoyo, las raíces crecerán así, son auto-inmovilizadas que no se dispersan. Entonces, ¿cómo vas a mejorar?¿Qué estrategia utilizarías para mejorar la transferencia masiva?¿Qué puedes hacer?Estos son el tipo de reactores que conocemos. generalmente used.Ahora, sabemos cuáles son los retos. Entonces, ¿qué son los reactores de fase gaseosa?Dije que los reactores estaban en líquido se dispersa en el medio gaseoso. ¿Se puede adivinar?Líquido que se dispersa en el medio gaseoso. Como por ejemplo, reactores de cama de goteo o biorreactores perdidos, donde los medios de comunicación se proporcionaban en la forma de nube y se perdieron en las raíces y las raíces se mantuvieron en el sistema de apoyo. Y cuando hicimos esto hubo una mejora significativa en el crecimiento de los rootes.Ahora, ¿por qué crees que era podría estar ayudando?Hay una limitación de escala hacia arriba, pero esto estaba funcionando, el estrés hidrodinámico podría ser evitado, la hiperhidricidad.Raíces cuando se sumergió completamente en el medio líquido que también se observaron allí wasa gran cantidad de mucílago que fue recolectando en las superficies de raíz que era la inhibicion del crecimiento de los roots.Así, cuando tuvimos, por lo que la disponibilidad de los nutrientes tampoco significa que usted lo mantenga sumergible en el medio líquido. Mantenerse sumergido todo el tiempo en el medio líquido fue también que observamos evenin el frasco de batido, que había una gran cantidad de fenolicos y mucílago que estaba obteniendo collectedon a la superficie de la raíz. Así, entonces cuando leemos la literatura y encontramos que son sensibles a hiperhidricidad, demasiada retención de agua en las raíces. Por lo tanto, cómo evitar que se utilice esta niebla. Al cambiar, ahora usted puede incluso utilizar el sistema de cama de goteo, pero allí los sitios de gota sería mayor o usted utiliza la niebla, por lo que el tamaño de gota se ha reducido. Ahora, incluso en los biorreactores de niebla el ciclo de la niebla, el tamaño de la gota se puede optimizar para los mejores resultados. Por lo tanto, este es un tipo de sistema de reactor de fase de gas. Así, los reactores en los que el líquido es la fase dispersa y el gas es la fase continua. Roots están expuestos a aire y los nutrientes líquidos son rociados a las raíces y deliveredas un misterio. No es que directamente nosotros, estábamos haciendo todo en paralelo.Así que, uno era que estábamos tratando de probar el diseño de la niebla. Ahora, antes de eso también teníamos costumbre hecha pequeñas configuraciones donde estábamos usando un nozzleand esta boquilla podría crear un spray del medio líquido y este spray que primero hadmade puso las raíces en el soporte y debajo del soporte que tuvimos ese spray.Así, que directamente no golpea las raíces, solía subir a la placa de la cabeza y de allí solía caer por el spray.Pero entonces no nos dio buenos resultados, pero vimos que había mucha retención de agua en las raíces las raíces se volvieron necróticas para el final de 25 días.Del mismo modo, entonces intentamos que pongamos la boquilla en la parte superior y rociamos las raíces con menor tamaño de gota, pero todas estas configuraciones no funcionaron y la razón que podríamos descifrar era probablemente la gran cantidad de retención de agua que estaba sucediendo en los roots.Aunque, entonces podemos cambiar el soporte también, entonces inicialmente el soporte no tenía agujeros, entonces creamos agujeros en el soporte, de modo que el agua podría drenar downand go back to the Pero entonces eso tampoco ayudó mucho porque pudimos ver mucha retención de agua en las raíces y luego surgió el diseño de la niebla que funcionó. Pero entonces la escala es un problema allí. Las cosas pueden funcionar a pequeña escala, pero imagínate y la producción escala así, bastante costoso.Por lo tanto, las raíces están expuestas al aire y los nutrientes líquidos son rociados en las raíces o deliveredas un misterio. Por lo tanto, estos son los diseños de biorreactor de niebla. Ahora, ¿qué pueden hacer pueden eliminar la deficiencia de oxígeno en las densas capas de la raíz y lo podemos ver muy claramente.Incluso cuando nos abrimos, una vez que cosechamos los reactores y abrimos la raíz del meshand pudimos ver que hasta el núcleo interno pudimos ver pequeñas ramas que salen de primer lugar, por lo que en total la biomasa fue uno de los mejores en comparación con todos los reactordiseños que estábamos eligiendo. Bajo el medio ambiente de corte. Por lo que, ahora, hay un ambiente de corte más bajo porque no hay partes móviles. Control completo de los gases en el ambiente gaseoso. Ahora, este es uno de los mejores. Ahora, uno es que puede viajar hasta el núcleo interno, la hiperhidricidad también se elimina. Una de las ventajas del bestor fue que hubo buena transferencia de gas ¿Por qué piensa usted?Mejor transferencia masiva de oxígeno que en el líquido que podría haber sido la razón de mejor.Así, el oxígeno va a llegar a las raíces a través de la mista.Así que, si puedo estirarlo entonces lo que ella está tratando de decir es ahora la transferencia de gas está pasando directamente del aire a la raíz, y en el todo el problema que hemos sido discusingsover, sobre el oxígeno siendo escasamente soluble en el líquido que no es el caso en el aire. Por lo tanto, hay una mejor disponibilidad de oxígeno para la transferencia de gas a suceder que podría haber sido la razón para obtener un cambio significativo. reactores, gas spargedreactor.Así, podemos ver algunos de los diseños. Por lo tanto, esto es lo que también hemos tratado. Por lo tanto, en el centro esta era una cámara de niebla en la que se puede incluso utilizar transductores ultrasónicos, donde se creó la niebla, luego va a la cámara de cultivo donde se ha inoculado sus raíces y las ventajas se utilizan. Entonces, cualquier condensado se puede volver a reciclar de nuevo a la ira.Entonces, los reactores de cama de goteo, por otra parte, dije la calidad de apoyo o el tipo de apoyo que también importa. Probamos cuentas de vidrio como soporte, intentamos la cesta de polipropileno o meshas de polipropileno, intentamos Espuma de poliuretano como soporte y probamos meshas de acero inoxidable y todos estos diferentes tipos de soportes nos dieron diferentes resultados. Por lo tanto, el tipo de material que se utiliza como soporte también puede convertirse en un factor crítico para los resultados. Por lo tanto, estos son algunos de los otros reactores que se han utilizado, que en la literatura forotherorgano culturas de una multiplicación de brotes o embriones somáticos. Para la escala de embriones somáticos, las personas han utilizado el tipo de globo de bioreactores.Ahora, donde generalmente se observa o bien se utilizan como relleno y el tipo de dibujo de un sistema para eliminar los fenómenos de la hiperhidricidad o demasiada cantidad de agua retención y allí se recicla el agua, como en el biorreactor de tambor giratorio todo el tambor rotaría.