Loading

Alison's New App is now available on iOS and Android! Download Now

Study Reminders
Support
Text Version

Set your study reminders

We will email you at these times to remind you to study.
  • Monday

    -

    7am

    +

    Tuesday

    -

    7am

    +

    Wednesday

    -

    7am

    +

    Thursday

    -

    7am

    +

    Friday

    -

    7am

    +

    Saturday

    -

    7am

    +

    Sunday

    -

    7am

    +

Ayer se burlaba de las transformaciones genéticas en la célula vegetal. Ahora dije que la transformación genética de células vegetales in vitro se lleva a cabo generalmente mediante el uso de vectores.Ahora, en la naturaleza la transformación genética está sucediendo en las células de la planta a través de una transformación de agrobacteriores.Así, ¿qué sucede en la transformación de agrobacterium? Tiene un plásmido que se llama plásmido de tripa o un plásmido de inducción de la ruta. Ahora, estos plásmidos tienen un determinado gen que puede ser integrado en el cromosoma de la planta, causando así la transformación en las células de la planta. Ahora esto se puede explotar en condiciones in vitro mediante la eliminación de algunos de los genes que no son necesarios para la transferencia y la colocación de sus sitios de polilinker o su sitio de múltiples clonado que usted conoce como NCS con un sitio de restricción único así, que usted puede insertar su desiredgene junto con su sistema de marcadores en el T-DNA.Generalmente el agente selectivo inporque estos son todos los vectores binarios que también estábamos hablando de su son plásmido conyugal y no hay plásmido transmisible. Así, ahora, el plásmido no transmisible que no es conjugado; si para ellos la facilitación se hace usingconjugado plásmido. Por lo tanto, en ese caso utilizamos vectores.Ahora, a veces porque estos plásmidos Ti y Ri son bastante grandes en tamaño 200 kbp, Ri más grande es 250kbp. Así que, ahora, los plásmidos muy grandes y los bajos números de amapola para la multiplicacióny la agrobacterium el éxito de la transformación podría ser menor. Por lo tanto, generalmente lo que es doneis para eliminar, la bulkiness la región de virulencia este plásmido Ti en particular que es inherentemente presente es desasamed que significa los oncogenes que están presentes que en natureget transmitido como una parte de la infección en la planta cromosome.Ahora, oncogenes son qué oncogenes son su auxina y citocinina sintetizando qué leadto esta multiplicación rápida y los acontecimientos morfogenéticos cambian en el maquillaje bioquímico específicamente con respecto a las hormonas de crecimiento. Ahora estas se eliminan y su esto se llama como disarmedplásmido y su gen de virulencia está en tak. Esta región de genes de virulencia en el disarmedplásmido se mantiene por separado de otro plásmido artificial que se prepara que es mucho tamaño pequeño que se llama como un vector binario como la pcambiya que escuchamos en la transformación de la planta se llaman como vectores binarios porque tienen un origen de replicación para ecolias bien como para agrobacterium. Por lo tanto, que pueden multiplicarse y conseguir el mantenimiento de ecoli y también en agrobacterium y tendrán su T-DNA. Ahora es un deassmedplásmido el inherente Ti plásmido, pero este vector tendrá el T-DNA con su polylinkersite y CS con su sistema de marcadores con su promotor y su principal polier de 3 utr. Por lo tanto, allí por cuando estos dos son su trabajo en trans y esta virulencia genes que su presente en el plásmido desasmado ayudará en el envasado de este T-DNA y procesandoeste T-DNA ayudando para su integración en el cromosoma de la planta y por lo tanto la expresión del gen deseado que usted ha insertado en este área.Así, ¿qué sucede en la naturaleza? La enfermedad de la corona gall es causada por la infección de agrobacteriumtumefaciens y conduce a un crecimiento neoplásico. Utiliza opina producida por la célula huésped, aparte de sus oxiones y la síntesis de sus genes citoquinina que son los genes de la opinion alsostresido en este T-DNA que una vez se integra la planta comienza a producir estos ciertos compuestos que son los que en carbono y nitrógeno y este plásmido Ti que está allí en el agrobacteriumno todo se está integrando. Así, en el resto del plásmido, hay genes de opinecatabolismo. Ahora, una vez que la planta produce estos opinesel catball, indujeron el gen del catabolismo de la opine presente en el plásmido de agrobacterium Ti que la agrobacterium puede usarlo. Por lo tanto, en la naturaleza, agrobacterium es un parásito para la La transformacion se asocia con una realizacion por transferencia de una porcion de replicacion estable de ADN plasmidico de Ti a la celula de planta. Por lo tanto, la porción replicante del plásmido Ti es su T-ADN. Veremos cómo sucede. Se desconoce el mecanismo preciso, pero molecularanalysis ha demostrado que 25 nucleótidos que se llaman como repeticiones directas; repetime directamente algunos de los pares de base que son después de un hueco continuamente encontrado para estar presente en más de un par. Por lo tanto, más de una vez se repiten continuamente. La secuencia repetida flanqueando los límites de los sitios de integración que quedan y la frontera derecha se lee desde la derecha a la izquierda. Los genes que van a ser introducidos en las células de la planta deben ser insertados entre la izquierda y por lo tanto, la derecha. Por lo tanto, lo que sucede en la estructura del plásmido Ti, hay cuatro regiones; una es la región de ADNtesta es la principal transferencia de ADN responsable de la inducción tumoral que tiene todos los más genios. La segunda razón en este plásmido Ti es responsable de la replicación, la tercera región es responsable de la conjugación. Por lo tanto, la formación de tal manera que la transferencia puede llevar a la cuarta región responsable de la virulencia donde los genes están allí. Por lo tanto, es importantepara el procesamiento y la transferencia de T-DNA. Ahora, la estructura del T-DNA se rompe en tres partes la transferencia de T-DNA en el cromosoma vegetal trae cambios fisiologicos y morfológicos en el tejido debido a la expresión de los genes localizados en la región T-DNA.Onc que es la región oncogénica tms uno. Ahora se trata de diferentes locus o posicionesde los genes tms 1 y tms 2, representa un locus shooty que significa que representan o expresan para producir citocininas. Entonces, por eso se les llama como locus shooty. ¿Qué tipo de citoquinina? generalmente es ipa; ipa es su edad de la adolescencia de la iso. A continuación, la región de tmr, el locus de gallo es responsable de la síntesis de la auxina en general qué tipo de auxina IAA, el ácido acético indol. A continuación, la región del SO es su región de Síntesis de Opina responsiblepara la síntesis de aminoácidos y derivados del azúcar opina que no son nada, sino aminoácidos y derivados de azúcar colectivamente llamados como opina. Se trata de compuestos orgánicos de compuestos de nitrógeno de bajo peso molecular. Hay muchos tipos diferentes de opinas algunas de ellas son la nopalina de la aroctopina y a veces la agrobacterium. Se clasifican dependiendo del tipo de opine, están produciendo, algunos son llamados como mono monopinetype de agrobacterium, algunos son octoppina. Por lo tanto, en términos de la clase de opara los tipos de opiniosproducidos agrobacteriumare también clasificados. Ahora, la secuencia de repetición de 25 pares base que se llama como borde izquierdo y la frontera derecha es esencial para la transferencia de T-DNA. Ahora, ¿cómo se lleva a cabo? Estos son algunos de los enlaces que usted puede pasar a través de la ayuda a tounderstand. Por lo tanto, se trata de una representación pictórica de todo el plásmido Ti. Ahora usted tendrá genes oncogénicos, tendrá genes citocinicos, usted tendrá los genes de síntesis de la opine, entonces todo este se llama como oncogenicregion. Entonces usted tendrá la región de la r; r regionirá incluyendo su frontera izquierda la frontera derecha y todos estos genes entonces conjugativetransfer le dije. Por lo tanto, esta es la razón que es responsable de la transferencia conjugativa, entonces los genes del catabolismo de la opinin también están presentes, el origen de la replicación está presente, la región de la reliance está presente. Por lo tanto, el T-DNA no contiene el exterior de los otros genes ni los catabolimgenes ni de origen de la replicación. El gen de virulencia que es yo cuando decimos deassmedplásmido, lo que significa que la región del ADN ha sido sacada replace.Ahora, la región de virulencia es generalmente de 35 kbp de largo, está organizada en 6 operons de virulencia A, B, C, D, E y G y cada una de estas regiones juega un papel diferente durante este proceso de transferibilidad. No es sólo la transferencia que está sucediendo desde el momento en que se producen las señales como sudefensa o algunas moléculas que, como los compuestos de poli fenol, que han sido liberadas por las plantas que lesiona las células vegetales, actúan como couso que inducen algunas de estas regiones de virulencia en el agrobacterium. Y estas diferentes proteínas serán responsiblepara la primera inducción de otras regiones subsecuentes de este gen de virulencia que algunas de las proteínas serán utilizadas en el empaque, algunas de las proteínas serán utilizadas en la creatinga algunas de las proteínas se utilizan en la protección del ADN de la T a medida que entra a las células de la planta algunas de las proteínas son responsables de la conjugación. Por lo tanto, la virulencia a es una proteína de membrana interna específica del producto que reconoce y responde a los compuestos fenólicos de la planta. Por lo tanto, esto es lo que es responsable de reconocer los compuestos fenólicos de la planta. Por lo tanto, actúa como un receptor. La virulencia G actúa como un activador de la transcripción de otros loci de la región de virulencia. El producto de Vir C y D está involucrado en la generación y procesamiento de T-DNA, lo que crea un nig y luego se replica y luego se empaqueta, lo que significa que los cinco primariosy se traslapan. La virulencia B y R están implicadas en la formación de componentes estructurales que facilitan el movimiento del ADN. La virulencia H permite a las bacterias sobrevivir en la presencia de compuestos bactericidas de la planta durante la infección.Entonces, ¿cómo ocurre? El evento temprano es la entrada del plásmido Ti entre la tercera y la cuarta base de la parte inferior de la base 25 por repetición de la virulencia Encodes y endonucleasa que produce nick en la secuencia de bordes. A continuación, la iniciaciónde la síntesis del ADN comienza en los 5 primeros a 3 finales. Ahora, se acompaña de la síntesis y la secreción de ciertas otras moléculas como la glucosa, la celulósica o las proteínas de la superficie que tienen características patógenas. El apartado T ahora que se ha replicado. Ahora es una sola hebra. Ahora, como para entrar en el cromosoma de la planta y luego la membrana nuclear a través de la membrana nuclear en la planta cromosoma.Ahora, la hebra T con el fin de transversalizar a través de la membrana bacteriana de la pared celular de la membrana de la célula de la planta y luego la membrana nuclear durante todo este proceso. Debe evitar la degradación con nucleasas que el T-ADN existe como proteína de ADN complex.Por lo tanto, he hablado de la limitación que lo protege y media sus viajes el T-ADN se convierte en el ADN de doble hebra antes de. Por lo tanto, este ADN de doble hebra está sucediendo antes de la integraciónen el cromosoma de la planta. La colocación de los genes extranjeros en la región T-DNA del plásmido Ti es posible clonar muchos hacer copias clon significa hacer copias. Los genes introducidos con la multiplicación del plásmido residiendo dentro de la bacterialcon el crecimiento bacteriano. Por lo tanto, esto es lo que estamos hablando de esto es cómo sucede los diversos acontecimientos que usted está hablando acerca de los diversos tipos diferentes de. Así, se puede leer eso y se puede correlacionar con la figura. Por lo tanto, han demostrado las diversas proteínas de virulencia significa que son responsables uno isacting como un receptor, a continuación, induce a otras regiones de la virulencia de la inducción de la inducción del gen de la virulencia implica la producción de donde D donde E es involucrado. Onceit entra en el cromosoma de la planta para protegerlo de las nucleasas, luego donde B está involvando conjugaciones. Por lo tanto, puede correlacionar y recordar cómo los eventos toman place.So,. Ahora los plásmidos de Ti no pueden ser usados directamente debido a como yo estaba diciendo, generalmente tenemos vectores binarios y estos vectores son insertados en agrotóxicos que son disarmed.Ahora, desarmados les dije que el plásmido inherente T-ADN ha sido reemplazado y sólo se mantiene el gen de la virulencia. La razón por la que son grandes en ausencia de tamaño de sitio de restricción único. Por lo tanto, es difícil insertar su gen de interés. Entonces, la inducción del tumor, ¿por qué cree que se debe evitar la inducción del tumor? Si no se desarma habrá oncogenicgenes presentes. Entonces, el evento morfogenético estaría causando tumores o causando raíces adventitousroots que no era el propósito si eso sucede ¿qué pasará? Depende del objetivo del estudio. Está intentando hacer una transformación dirigida a la célula de la planta. Por lo tanto, más el número de transformación genética; más carga metabólica. Por lo tanto, cualquier integración allí está llevando a la eliminación de ciertos genes endógenos y el reemplazo, hay una alta probabilidad. Por lo tanto, más la eliminación más hay una oportunidad de que algunos de los crucialque sabe si algún gen endógeno crucial se callan o se reemplaza y esto es adisease. Sólo si lo desea, le gustaría tenerlo de otra manera por qué le gustaría tener un crecimiento innecesario en su crecimiento de plástico en la planta. Dependiendo de si usted está trabajando para plantas enteras entonces; obviamente, usted no quiere tener un nuevo crecimiento de plástico en toda la planta. Pero, ¿qué ocurre si el propósito de la producción de metabolitos secundarios utiliza cultivos de células vegetales? Si suponemos que es para el metabolito secundario producciónutilizando cultivos de células vegetales, ¿es útil o no?Sí, sí, útil. ¿Porqué?Becausethe grow. Van a crecer muy rápido, no van a necesitar hormonas en el medio generalmente esto es lo que se observa. Si los genes oncogénicos; esto es howthey son explotados para la producción metabólica secundaria porque si usted toma un argobacteriumhebras salvajes con su plásmido Ti natural Ti o el plásmido de Ri que nosotros llamamos como raíces de herry. Entonces, ¿su qué está sucediendo? No estamos teniendo ninguna mca específica para un gen específico que ha insertado esta infección natural que explotamos en laboratorio. Entonces, ¿llevaría a qué?La integración del ADN T-ADN incidente inherente conduce a la expresión de oncogenes. Esto es lo que lleva a un crecimiento libre de hormonas en las culturas de transformación. Y una vez que usted tiene crecimiento de la hormonefree más rápido crecimiento más ramificación y porque es el estrés asociado. Por lo tanto, la posibilidad es más alto que el rendimiento del metabolito secundario aumenta, entonces la untransformedis es útil o no? Y son ventajas, pero luego todavía hay una selección necesaria después de la selección de la transformación de la línea celular ¿por qué? Usted entiende lo que yo estoy tryingto preguntar, infecto a la agrobacterium y tendré más de una línea celular que digo quieto hay una selección necesaria. Incluso en si es una transformación dirigida y usada en menos aún hay una selección necesaria en las transformaciones de agrobacterium. La selección de porque acabarás mayando en muchas líneas celulares diferentes no es como acabas en la inducciónno transformada de callos.Entonces, ¿por qué por qué ahora se necesita la selección? Hemos obtenido una vez que he confirmado que esta línea de células particulares se transforma generalmente usando pcr, hablaremos de esos métodos una vez que haya confirmado por qué no puedo adherirme a esa línea. Es posible que no se regenere en todas las generaciones los plásmidos. Como es un evento de transformación estable porque se obtiene, no es expresionit transitoria como se ha integrado en el cromosoma vegetal. Voy a dar una pista de que estábamos hablando de estrés. Se ha encontrado en la literatura que las infecciones de agrobacterium son el estrés a las células de la planta. Entonces, ¿dónde se comprometerá? Algunas células podrían ser resistentes a esa ressreses que podrían no ser afectadas por ese estrés. Depende de; actúan como elementos de transposición. Por lo tanto, sometimesel número de copia y la posición no está en su mano. Por lo tanto, si el número de copias no está en su mano y la posición no está en su mano, las líneas celulares que vienen superarán en crecimiento, así como el rendimiento y siendo un estrés, habrá un compromiso y un crecimiento. Por lo tanto, hay una necesidad de otro paso de selección, incluso después de la transformación para alcanzar el rendimiento más alto y más alto o con un mejor crecimiento en comparación con otros.Así, entre lo que se ha transformado, generalmente se selecciona en función de su metabolismo secundario y el índice de crecimiento. Entonces, entonces las células tumorales no pueden desarrollarse en brotes normales. La desarmingdel plásmido de Ti o la eliminación de la propiedad inductora del tumor es un paso esencial. En general, se observa que una vez que se produce una infección por agrobacrium, incluso si ha terminado en líneas celulares, su capacidad de regeneración se ve obstaculizada debido al estrés en las plantas enteras. Por lo tanto, cuando se trabaja para plantas transgénicas, se tienen que sacar todas las regiones tumorales o las oncoregiones. Esto se hace mediante la sustitución de los genes que inducen el tumor en la transferencia de ADN del T-ADN por marcador seleccionable que proporciona resistencia contra los antibióticos como la kanamicina. Ahora volviendo a mi pregunta, dije que se recomienda que el gen deseado tiene que ser insertado cerca de los 5 primeros extremos. Ya sea que se atrape cinco de primer extremo en protected.Entonces, nuestro ADN insertado es más seguro allí. Y sus sistemas de marcadores de su resistencia el gen antibioticresistance es en el otro extremo. Por lo tanto, si se engaña una vez que la transformación se hace, no le gustaría tener el gen de resistencia a los antibióticos en la planta porque cualquier inserción de extrageno es una carga metabólica. Los promotores y las señales de poliadenilación aislados de los genes sintasa de nopalina. Por lo tanto, debido a que en la naturaleza ya estos opinan se están obteniendo expressed.Así, la gente ha utilizado el mismo promotor de la expresión como el promotor de CaMV 35S; CaMV 35Spromotor fue utilizado entonces aquí la síntesis nopalina 3 prime utr se utiliza porque ha sido foundto express muy bien en los plomos. Por lo tanto, lo que son vectores binarios estos se basan en el principio de que los genes de virulencia pueden estar localizados en un plásmido de Ti ayudante que tiene la totalidad del ADN T localizado. Por lo tanto, este plásmido de Ti desamido se llama como el plásmido de Ti ayudante. En este caso, el ADN T-T se encuentra en un vector separado que es el diseño de vector binario para replicateen E. coli y agrobacterium. Por lo tanto, tiene el origen de la replicación tanto de la E. coliand la agrobacterium y capaz de. Ahora, ¿por qué cree que existe una necesidad de E. coliorigen de la replicación, por qué innecesariamente tener este E. coli paso en el medio?Rep para transferirlo para poder cultivarlo en bacterias porque tiene multicopias. Hm.Porque se trata de un plásmido de figura conjugada. Por lo tanto, los números de copia no pueden multiplicarse aquí. Por lo tanto, es necesario tener más copias y luego transformar aquellos en el agrobacterium y luego esta agrobacterium se utiliza la transformación; agrobacterium se utiliza para transformar las células plantadas. Voy a parar aquí. Allí el otro tipo de vectores también presentes llamado como vectores intermediarios y ayudantes, pero generalmente usted encontrará en la literatura la tasa de éxito es veryhigh con vector binario. Por lo tanto, la mayoría de estas transformaciones se realizan utilizando vectores binarios.