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. Por lo tanto, las desventajas de la extracción de plantas naturales, que incluye la baja concentración del producto en la planta. Puede ser debido a la demanda, la diferencia de oferta puede ser limitada, puede ser una planta en peligro de extinción, de un amplio desarraigo por parte de la industria. Entonces puede ser una planta endémica no capaz de crecer en otra parte sólo en una región en particular, por lo que puede haber un suministro limitado por estas razones. Ahora, las especies en peligro de extinción que he dicho pueden ser una limitaciónque puede conducir a la extensión de la planta. Entonces la planta natural becauseit es estacional el compuesto es temporal y la variación espacial está allí, Por lo tanto, porque ifit es estacional entonces hay mucho tiempo requerido tal vez sólo se produce cuando la planta madurada arriba, así que no uniforme y calidad y cantidad inconsistente. Así, cuáles son los métodos de producción alternativos para tales fitoquímicos de alto valor etheralgunos como dije que habíamos visto lo complejo son las estructuras y las vías biosintéticas. Por lo tanto, estos con muy alto valor y los metabolitos de volumen bajo estructuras muy complejas demasiado los centros manychirales, por lo que se ha observado que la síntesis química es muy difícil. E incluso si es gente es capaz de hacerlo, se convierte en un proceso de varios pasos. Así que, ¿qué métodos basados en la biotecnología pueden ser métodos de base biotecnológica? Uno es el proceso bio basado en células vegetales, ¿qué más? .Lo cual no se menciona aquí. Ingeniería de proteínas. Ingeniería de proteínas. .Donde significa la expresión heteróloga de la que está hablando, por lo que en algún otro sistema principal sistemaeucariótico sistema principal. Pero, algunos de los metabolitos secundarios que la gente está probando el sistema más frecuentado es la levadura donde la gente es un organismo eucariota que la gente está tratando de expresar. Pero el reto es que algunos de estos metabolitos de alto valor o vía biosintética no se hayan dilucidado. Por lo tanto, ahora cómo conseguir esos pasos intermedios, la ingeniería de proteínas que se requiere usted necesita saber qué proteínas están involucradas. Entonces el otro es que es un espectro tan amplio y grande como por ejemplo, 40 o 50 estepas están involucrados y si es un sistema heterólogo donde las vías no presentes. Por lo tanto, todos los tipos de interés deben ser incluidos, por lo que es muy difícil, lo que puede causar que los rendimientos sean muy inferiores, lo que puede hacer que el proceso sea no económico y difícil. Por lo tanto, el proceso más factible que se propone es lo que nos gustaría proponer es el proceso bio basado en la célula donde la maquinaria está presente. Pero hay que trabajar en torno a otros cuellos de botella que pueden ser los bajos rendimientos y la escala del proceso. Por lo tanto, la ventaja de producir estos metabolitos de alto valor que son de bajo volumen en la naturaleza usando la tecnología de las células de la planta puede ser. Puede haber control del suministro ¿por qué? Debido a que el producto es independiente de la disponibilidad de la planta en sí y que está lejos de las restricciones climáticas, geográficas, y gubernamentales,. Luego, el alto crecimiento y la productividad, por lo que el crecimiento y la productividad se compararán con la planta natural, el crecimiento y la productividad en comparación con las plantas de tonatural. La productividad porque podemos cultivarlos inmenor cantidad de tiempo. Derecho. Puede optimizar la producción de acuerdo a nuestras necesidades. Por lo tanto, la tasa de crecimiento porque estas son susceptibles de optimizaciones. Por lo tanto, usted puede terminar el tiempo es el gran factor que se puede ejecutar por lotes para el lote algunos son meses o años donde usted tendrá que esperar aquí usted puede ejecutar un reactor y la cosecha. Por lo tanto, la reducción en el tiempo y el espacio es lógico; requisito para la producción de sus compuestos deseados. Ahora, la mejora de la tensión es también la línea de la célula en sí es susceptible a la optimización. Por lo tanto, usted puede manipular los rendimientos celulares para mejorar la y p por x, que es la biomasa de la unidad de producción de producto. Entonces, hay facilidad de extracción y purificación ¿por qué?Debido a que no estamos recibiendo una mezcla de productos que estamos obteniendo. Debido a que usted está haciendo la optimización del proceso, por lo que, usted estará optimizando las condiciones para aumentar la productividad de sus compuestos deseados. Por lo tanto, lo que sucede que la abundancia relativa de su compuesto deseado se vuelve más que la otra molécula pequeña u otras impurezas, por lo que allí por el procesamiento de aguas abajo puede ser más fácil. Entonces, ¿qué necesitamos para el cultivo de células de plantas que hemos estudiado todo esto, un apropiador apropiado es necesario, un medio de crecimiento adecuado; qué es el medio de crecimiento compuesto apagado. Usted tendrá sales importantes, sales menores, fuentes de energía, reguladores del crecimiento en él que llenará voluntariamente el crecimiento de la célula de la planta y esto puede ser la forma? Líquido, o semi-sólidos. Por lo tanto, se requieren condiciones asépticas, a fin de prevenir la contaminación especialmente de los microbios. Ahora, las condiciones de cultivo óptimas, por lo que habrá condiciones de cultura externas meanascondiciones ambientales y otros parámetros físicos y químicos. Por lo tanto, este es un esquemático ¿cómo comenzamos? Sabemos que comenzamos desde las partes de la planta y luego la llamos en la forma de una forma diferenciada que es callo. De este modo, usted puede seleccionar las líneas celulares, traerla en suspensión, hacer las optimizaciones donde se implementan las estrategias de mejora del rendimiento. Así que, ¿cómo mejorar la y p por x qué tipo de estrategias vienen en esto? Su mejora, su optimización de los medios, la alimentación precursora, la obtención, y la ingeniería genética que puede ser la ingeniería metabólica. Después, una vez que se ha optimizado la fase de biorreactor en la fase de biorreactor, lo que se puede hacer. De nuevo optimizamos los parámetros de operating-biorreactor que también denominamos parámetros de fermentación. Entonces usted puede optimizar el modo de funcionamiento, el modo de cultivo que significa que pueden ser estrategias de alimentación para eliminar lo que, ¿por qué tenemos que tener estrategias de alimentación, cuál es el objetivo, por qué estamos hablando de los modos de cultivo aquí cada vez en los reactores, por qué o los reactores no pueden ser runas por lotes? .Para eliminar la limitación de nutrientes y la innovación de nutrientes, si está ahí, por lo que para mejorar la productividad su rendimiento de rendimiento le gustaría aumentar el biomasor el producto. ¿Y por qué en un lote se está limitando? Debido a la imitación de nutrientes, por lo que la alimentación de nutrientes se hace para superar esta limitación de nutrientes. Y ahora con la lógica de que si la limitación de nutrientes se puede volcar en todo el sustrato, por lo que tatit nunca es limitado, por lo que entonces una innovación puede desempeñar un papel. Por lo tanto, viene el rol de cómo se alimenta, cuando se alimenta. Por lo tanto, después de haber crecido la biomasa que comesto el procesamiento en sentido descendente, proceso en sentido descendente significa separación, purificación del producto. Por lo tanto, ¿cuáles son los enfoques que vamos a debatir, que pueden conducir a la mejora del rendimiento y la productividad del metabolito secundario, la optimización de la composición de los medios, la optimización de los factores medioambientales, la adicionalidad de precursores, la permeabilización de las células, la adición de los provocadores, la inmovilización de las células vegetales y el cultivo de alta densidad en los reactores. Y en algunos de ellos es con el fin de reducir el golpe y la prueba y minimizar el número de experimentos que le gustaría conductto llegar a la optima vamos a ver cómo el modelado matemático se utiliza con los estudios de caso. Ahora, ayer si usted recuerda que estaba hablando de que para desarrollar el inicio del bioproceso que le gustaría empezar con el .Más alto. Línea de celdas de mayor rendimiento, por lo que lógicamente le gustaría recoger primero la variedad de la planta que es el más alto rendimiento, cómo es la pantalla y la selección es la misma o es diferente. Sea microbiano, ya sea animal, ya sea la fomentación de células plantadas, estas técnicas siguen siendo las mismas de optimización, cuando decimos screeningy selección. Screening.Ella estaba cerca, el screening es una técnica pasiva, la selección es una técnica activa. Screeningis lo que dijo para la selección en la que se pantalla la línea de la celda en función de cómo supondrían la pantalla de youscreen, cualquier ejemplo. .Hm. Como mejorar por pantalla culture.Ok, por lo que ingeniarás las celdas primero. Para el blanco azul. Para el blanco azul. Mam, hay cierto que hay ciertas bacterias que pueden utilizar el órgano de la sangre algunos que no pueden. Por lo tanto, en este proceso de tamizaje al que sometimos a este mismo medio, podemos entender cuales son las células que tilizan los medios de comunicación y que son las que no pueden, por lo tanto, que es el proceso de cribado. No, tan extrapolado a los metabolitos secundarios de las células de la planta. Tenemos que seleccionar la callusline de mayor rendimiento. Por lo tanto, una vez. O la línea celular callo es una mezcla de un número de células no es. Es por eso que decimos que la llamada nos llevaría a la diferencia con las siguientes sub-culturas usted puede encontrar que el rendimiento keepson varía. Co cultura correcta y ver que la bacteria está recibiendo. Bacterias ¿dónde viene la bacteria?Al igual que decir si la planta está produciendo un metaphyte en particular que va a defender contra la bacteriaque será una especie de organismo de prueba para saber que la producción está realmente sucediendo o no se puede en las bacterias a encontrar. En el papel esto se puede hacer, pensar en los terms de usted se le da y usted necesita para desarrollar un bioproceso. Por lo tanto, piense simple que puede costarle menos, que se puede implementar fácilmente y entonces usted necesita tomar las líneas celulares. Por lo tanto, una vez que comience a crecer bacterias junto con las células de las células de la planta de las células no sobrevivirán. Mam, tomando nuestro punto, podemos simplemente introducir la cantidad de condiciones de estrés en las que usted ofrece un metabolito secundario es producido. Y el sujeto a todas esas líneas de callo y vemos cuál de ellas produce la cantidad de metabolitos secundarios. Eso es correcto, pero la única comprobación aquí es que ahora usted está consiguiendo que usted ha optado por un material que es conocido para producir el compuesto que usted tiene un número de líneas celulares. Por lo tanto, se comprueba el rendimiento del producto y se selecciona la línea de celdas de mayor rendimiento y la otra si se supone que es parte del segundo si se trata de un metabolito secundario basado en pigmento. Por lo tanto, entonces usted puede tomar esa pieza de calla que demuestra ese color si es un pigmento de color antocianinas o cualquier pigmento de coloudother. Entonces usted sabe de esa mezcla de células que las células estarán produciendo que callo o como usted la gente dijo que si ahora está llegando a la selección que es usted quisiera sólo tomar las líneas de celda deseadas los otros que usted no cuida. Así que, déjenlos morir sólo los que usted quiere seleccionar debe sobrevivir, será útil cuando usted está seleccionando una línea de la célula de la planta para lo que para darme algunos ejemplos para qué propósito. Si estoy tratando de encontrar una línea celular que sea altamente resistente, supongamos que estoy buscando estrés de salinidad como usted está diciendo, así que sólo aquellos que pueden resistir sobrevivirán a los otros no sobrevivirían. Por lo tanto, que subsecuente sub-cultivo y aclimatatizationalso usted terminará teniendo la línea celular que es resistente a la tensión y por lo tanto, usted puede recoger la línea de la celda de velocidad deseada en la línea celular. Entonces, ahora las células de la célula vegetal sabemos que son genéticamente heterogéneas significa qué, que cambian en cromosomal.Así que, eso fue lo que cuando digo cambio en número cromosómico, arreglo, de qué tipo de variationam hablo. .Soma variación clonal, por lo que la inestabilidad epigenética, la inestabilidad epigenética significa cambio en la expresión del gen o el fenotipo celular causado por mecanismo que no sea cambios en su DNAsecuencia. Así, que causa la inestabilidad genética que conduce a la acumulación de productos sólo en la sopapoculación de las células que es el problema que el llamado heterogéneo tendría. Ahora, la productividad en esa población mixta de células es susceptible de ser inestable, por lo que generalmente, cuando inducimos de un explante a un callo no se le llama como una línea de célula vegetal. Debido a la herida que usted crea y el inicio de la célula alrededor de esa herida, la célula comenzará a dividirse rápidamente y a formar una masa diferenciada. Ahora, todas estas cellave un maquillaje diferente y como lo harías en un medio solidificado se multiplicarían.Por lo tanto, algunas de las células que están cerca del medio tendrán más aproximación a los nutrientes y son más los nutrientes que están más disponibles para esas células que las células que están en la parte superior. Por lo tanto, existen gradientes bioquímicos que pueden formarse que pueden conducir a un cambio de ultimátum en su potencial biosintético. Por lo tanto, generalmente se observa que cuando usted comienza con las líneas de callo, ya sea que primero lo lleva a la suspensión y a través de la cellinería si usted recuerda que hablé de la técnica de la costura de la célula. Con el fin de obtener una cultura sincrónica basada en el tamaño con una suposición de que las células del mismo tamaño y forma pueden ser asumidas para estar en el mismo estado metabólico. Por lo tanto, allí conduciendo a una cultura sincrónica o usted sigue subculturándolos de tal manera que las condiciones que son preferibles para el metabolito secundario de interés tal que, durante la subcultura la selección natural sucede. Por lo tanto, usted sólo preferirá las células que son capaces de producir bajo esas condiciones el metabolito secundario continuaría creciendo y más tarde serían la mayoría. Por lo tanto, siempre es el tipo de células en el callo y el número de esas células en ese callo que son capaces de producir su metabolito secundario. Por lo tanto, cómo aumentar ese número y generalmente se observa que cuando usted comienza con los rendimientos de la inducción del callo para el año inicial o así usted verá una gran variación. Sólo después de 3 4 años de subcultura se encuentra que se reduce a un rendimiento de producto consistente. Por lo tanto, la productividad en una población mixta de células es susceptible de ser inestable desde el cambio en cualquier factor. Esa es la misma razón por la que nosotros en laboratorio siempre insistimos en mantener las condiciones consistentes que no se puede o tomar a la ligera la sub-cultura de los callos que el material padre va a formar su banco celular maestro. Así que, bajo las condiciones que usted subcultura, el tiempo en el cual usted subcultura no puede pensar que si son 30 días, déjenme hacer itin cuarenta días que no importa. Todo importa el tiempo en el que estás subculturando, las condiciones de hoy habías puesto punto ocho mañana habías puesto 0,6 va a variar. Por lo tanto, uno tiene que ser realmente cuidadoso mientras subculture su banco de células maestras. Puesto que los cambios en cualquier fábrica de medio ambiente, o nutricionalque favorece el crecimiento de una sub-población particular de las células allí cambiando la posición de la cultura de la variación en la cultura. Ahora, porque es algo que puede ajustar el potencial bio sintético de su masa celular, por lo que también se convierte en una herramienta para la variación. Por lo tanto, la variación de la cultura ofrece la oportunidad de aislar de la población mixta de las células variantes, las de alta productividad. Por lo tanto, el índice de acumulación dentro de las células productivas y la proporción de tales células en la cultura es lo que rige el rendimiento o la selección de la línea celular de alto rendimiento. La baja producción en cultivo celular puede deberse a una competencia entre las vías primaria y secundaria, los mismos intermedios que hemos visto las vías que luego bifurcan el metabolismo secundario. Por lo tanto, siempre habrá una competencia de flujo de carbono. La menor expresión de las enzimas clave en los pasos limitantes de la velocidad en la vía patológica o en la expresión génica del metabolismo secundario puede ser una limitación. Luego, el tamizaje es una técnica apassive por la cual se analiza un número de células para la tasa deseada. Por lo tanto, generalmente como usted estaba diciendo que buscaríamos la línea de células de mayor rendimiento, wewill do alguna parte del callo que vamos a sacar vamos a hacer la extracción y vamos a hacer análisis de rendimiento. O si se trata de un pigmento de color se puede ver directamente desde el suyo es visibleto ojos, si si es si es fluorosis bajo UV entonces a usted puede hacerlo por luz UV. Por lo tanto, si el callo que usted ha obtenido está produciendo su compuesto o no cancheck. Ahora, la selección es ¿qué? La selección es un proceso activo por el que deliberafavorece sólo la supervivencia de la variante deseada y el otro tipo de células silvestres que van a morir. Por lo tanto, los sistemas de callos se utilizan para la selección y la selección. Las líneas celulares que acumulan altos niveles de compuestos coloreados pueden ser seleccionadas a través de la observación visual. El callo se puede comprobar visualmente para la pigmentación alterada por el ojo desnudo para manchas coloreadas bajo la lámpara UV. Screening de pigmentos por ejemplo, si supones que sabes de la literatura que más verde es el que está en alguna parte vinculado al metabolismo secundario del metabolito secundario biosintesis.Así, te gustaría seleccionar la línea de callo más verde, por lo que la detección en la base de pigmentos como clorofila, antocianinas, naptoquinonas, carotenoides, estos son todos los pigmentes.Así, si usted está buscando tal tipo de pigmentos se hace muy fácil hacer la selección. Ahora la selección también se puede realizar utilizando sus técnicas de cribado, los medios de detección utilizan diferentes tamaños de malla e intentan reducir el tamaño de la malla, por ejemplo, de 100 micras a menos de 100. Por lo tanto, algunos suponen 500 mayores de 500 micras a menos de cien micras. Por lo tanto, lo mismo que usted puede terminar en la cultura sincrónica, la selección se puede realizar con la suspensión de rápido crecimiento rápido que consiste de agregados de 50 células o así. Ahora, la suspensión de la celda fina es adecuada en la selección para la resistencia por qué usted piensa cada vez que el estrés en la suspensión de la celda fina para el proceso de selección, cómo será de ayuda que la cultura a tanto alzado. Así que todo el uniforme del sensor en una actividad metabólica. Estamos hablando en términos de selección, de selecciónes. Por lo tanto, la variación de tamaño no afectará el proceso de elección, como todas las células tendrán el mismo. Eso fue vender costura, ahora en general puede haber más que aparte de métodos de costura celular como por ejemplo, si usted está buscando resistencia. Por lo tanto, el resto obtendrá killedonly los que son resistentes sobrevivirán o bien este resistente puede ser resuelto resistencia, o puede ser contra el metabolito tóxico o resistencia antimetabolito. Por lo tanto, si supongamos que el otro muere y usted necesita ahora el único sobrevive por qué theyit se recomienda para usar las suspensiones de células diluidas. Al igual que usted estaba dando un ejemplo para las bacterias que usted hace crecer en un medio solidificado de tal manera que sólo la bacteria que puede degradar ese metabolito en particular. O que es resistente se iría y entonces, ¿qué haces tú pickup lo que coges el. Colonia.Colonia, por lo que también hay lo que se recomienda use.Solution. Soluciones diluidas que usted puede llegar a los objetivos? Seleccionar la línea de celda de mayor rendimiento que nos llama es ¿qué? Un conjunto heterogéneo de células. Por lo tanto, por lo tanto, lo que es preferido que lo traigas en suspensión, haz una selección diluyente para una línea celular resistente y permite que eso crezca y lo multiplique para que te dé un callo fresco usando lo que las técnicas de cultivo de células individuales que hemos aprendido antes. Así, en el programa de selección para la resistencia en la cultura celular uno puede detectar el crecimiento de la población resistente. Sin embargo, dado que usted está en una sola célula, se convertirá en un momento para que reaparezca el llamado y para que la cultura vuelva a un estado de rápido crecimiento. Por lo tanto, por lo tanto, se dice que tatit tardará unos 1 o 2 meses en volver a alcanzar a un callo uniforme una sola línea de callus basada en celda. Ahora, para evitar problemas inherentes en el uso de callos o cultura celular para la selección y el tamizaje, se puede preferir el chapado de células o protoplastón de medios sólidos o colchones. Ahora, en el chapado de las células, el primer paso es preparar células individuales o agregados de tamaño pequeño para el chapado. Las células tienen que ser chapadas en densidades más bajas permitiendo el crecimiento de colonias individuales, claramente separadas que pueden ser aisladas y luego subcultivadas. A diferencia de las células microbianas, las células de la planta de cultivo requieren una densidad mínima de inóculo, también estudiamos que las células vegetales necesitarán una densidad mínima de inóculo para que el crecimiento comience. Están creciendo. Comunícate unos a otros. Se comunican entre sí a través de. Transferidos como partes. Por lo tanto, hay célula para el contacto celular que es necesario, hay comunicación sucediendo, así que para facilitar y traerla a esa condiciónesa mínima densidad de inóculo es necesaria. Ahora, la preparación de células individuales o protoplastwe ya han estudiado para filtrar células de successiveleave de cultivo de suspensión fina a través, por lo que utilizamos técnicas de costura celular. Por lo tanto, donde alrededor de 500 a 75 micrones que keeptando la suspensión celular esto terminará en la cultura sincrónica. La suspensión obtenida consistirá en células individuales o pequeños agregados, que muy probablemente se hayan originado en singlecells por qué se puede suponer que. Cuando estamos usando estas técnicas de la costura de las células se está empezando por el tamaño grande y estamos terminando a un tamaño muy pequeño de las células de 75 micras de tamaño sin importancia. Por lo tanto, generalmente las células que dijimos 50 o 100células juntas estarían allí en los agregados celulares y el tamaño es alrededor del tamaño de las células de la planta que también ser promedio muerto. Si usted sabe que la media va a llegar a la lógica de por qué esta técnica de la corriente de 500 a 75 terminará en cualquiera de las células individuales o terminará en muy pequeños agregados que; obviamente, estar viniendo de las células individuales. Debido a que han sido multiplicados y formados un poco más grandes que la célula única. Por lo tanto, grandes agregados de suspensión añadiendo pectinasa ayuda a cómo esto también lo hemos hecho, es la razón por la que estábamos haciendo todo eso. En general, usted encontrará que incluso cuando usted va a inducir callo de diferentes tipos de explant que todos varían no sólo en su bioquímica de maquillaje que también a veces varían en su morfogenética o morfología.Algunos serán muy duros y compactos, algunos serán muy friables que solo tocarás con una espátula y se dispersarán en el medio. Por lo tanto, esto se debe a la friabilidad del contenido de agua en el callo. Por lo tanto, grandes suspensiones agregadas estamos usando pectinasenow porque se prefiere que el callo deba ser friable en la naturaleza. Si desea generar una suspensión, porque puede dispersarse fácilmente en el medio líquido. Screening y selection should be done from a freshly prepared cell suspension from the plant thanfrom a very old suspense why? ¿Por qué debería preferir a los jóvenes? Porque van a ser células de crecimiento más activo. El tejido de mostial para aislamiento de una sola célula es células de hoja y mesofila que pueden ser aisladas mecánicamente y enzimáticamente. Con el fin de seleccionar una sola célula para la suspensión de las células, las suspensiones deben diluirse en densidades en las que las células vegetales no crecen sin necesidad especial. Por lo tanto, ¿cuáles son los métodos de cribado y selección, los metabolitos secundarios que puede tener un color intenso, por lo que la detección visual puede tomar esa pieza del callo y empezar a propagar ese callo. Por lo tanto, usted terminará en una línea de callo que le dará el producto de su interés. Las áreas pigmentadas alteradas del callo pueden ser fácilmente detectadas o el análisis directo del extracto celular se hace para conocer la calidad del clon. Los clones investigados tienen que ser divididos para la subcultura y el análisis químico.