Loading

Alison's New App is now available on iOS and Android! Download Now

    Study Reminders
    Support

    Set your study reminders

    We will email you at these times to remind you to study.
    • Monday

      -

      7am

      +

      Tuesday

      -

      7am

      +

      Wednesday

      -

      7am

      +

      Thursday

      -

      7am

      +

      Friday

      -

      7am

      +

      Saturday

      -

      7am

      +

      Sunday

      -

      7am

      +

    Identificación de la región de Genome
    Hola a todos esto es el doctor Vishal Trivedi del departamento de biociencias y bioingenieríaIIT, Guwahati. ¿Y en lo que estábamos discutiendo? Estábamos discutiendo acerca de la electroforesisy en este módulo en particular hemos discutido acerca de los fundamentos de la electroforesis seguido por la electroforesis en gel vertical de, electroforesis en gel horizontal. Y luego en la conferencia anterior, nosotrostambién hemos discutido acerca de las diferentes variantes de la electroforesis en gel.Y luego, en última instancia, también hemos discutido acerca de algunos de los problemas de investigación en los quepuede ser capaz de utilizar la electroforesis como una herramienta para responder a esas preguntas. Y en esteen particular; series ahora hoy también vamos a discutir pocos experimentos más y pocos más problemas de investigación dey mientras se discuten estos problemas de investigación usted será capaz de entendercada vez más potencial de la electroforesis para resolver el problema de investigación relacionado con su trabajo de.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 02:01)
    Una vez que haya identificado que el factor de transcripción está interactuando el científico no va asatisfacer allí y en realidad están más interesados en saber más y más pregunta. Y eso espor qué como dije que sabes en este curso no vamos a discutir solamente sobre el problemalo que también vamos a decir que sabes el de un problema que vas a ver muchos más problemas de.Así que en el problema anterior el científico ha identificado que el factor de transcripción esinteractuando con el ADN. Y en base a ese ensayo entonces puede ser capaz de identificar el factor de transcripción. Ahora lo que quieren es saber qué región del genoma o qué región del ADNque el factor de transcripción es vinculante. Entonces, en esta pregunta en particular, ¿qué quieren es eso? Elloshan identificado el factor de transcripción que saben que es vinculante para el gen del gen X.Pero lo que quieren saber es que quieren saber el; identificar la región del genoma dondeeste factor de transcripción es vinculante. Así que ahora esta pregunta se puede utilizar o esta pregunta puede serresuelta por otro ensayo de modo que vamos a discutir de todos modos.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 03:14)
    Por lo tanto, eso se puede hacer en una impresión a pie, pero antes de discutir para la impresión de pies, déjenme decirles uncómo vino la idea de la impresión a pie. Así que puedes tener los 2 bloques de madera tan 1 bloque de maderatienes 1 bloque de madera y ahora supongamos que usas un cortador y cortamos este bloque de madera en las múltiples piezas de. Así que lo que vas a conseguir vas a conseguir las múltiples piezas. Y allí
    no será ningún problema que usted conseguirá cortar esto que vamos a poder cortar esta pieza de madera en múltiples piezas de.Porque no hay protección presente en este bloque de madera ahora si usted rap este bloque de maderacon alguna tubería de acero o algo. Entonces lo que sucederá es que usted será capaz de cortar a este bloque de madera deen la misma ubicación con la ayuda del cortador. Y usted puede ser capaz de cortar en el lado inferior de, así pero no será capaz de cortar en este punto porque esto ya estáprotegido del acero.Así que lo que usted en el patrón es que habrá un ADN intacto presente o bloque de madera intactopresente que va a tener la gran parte del bloque de madera. Mientras que en este caso;todo va a ser cortado en las múltiples piezas. Y ese es el modo exacto de hacerlo si yole pregunto dónde la impresión del pie del bloque de madera donde está la impresión del pie del bloque de acero, queusted ha añadido usted puede decir fácil que este es el lugar donde he añadido el bloque de acero porqueeste es el bloque de madera que no se ha cortado por el cortador.Y eso es lo que es la filosofía básica de hacer la impresión de pies de la misma manera que usted puederealmente cortar el ADN y es como si usted protege a alguna región que la región no va a ser cortadapor sus cortadores y eso es en realidad va a ser la indicación de que es la región donde la proteínaes interactuando.(Consulte la hora de la diapositiva: 05:21)
    Así que vamos a ver con el ADN así que lo que va a pasar es que lo que haces es? Se toma el genoma yse usa un DNAse y se le pide que se corte. Así que si usted toma el genoma y le pide a la enzima que lo corte enmúltiples piezas que va a ver las múltiples piezas de acuerdo. Pero si usted protege alguna región deeste ADN o alguna región puede imaginar que en esta región hemos agregado un bloque de acero para que lo quesuceda es?En este caso porque este es un ADN lo que hemos hecho es que hemos agregado un bloque de proteínas así eneste caso esta región ahora va a ser protegida de la acción de la enzima. Así que como resultadoesta porción va a quedar sin cortar y esta porción no va a aparecer. Así que las bandascorrespondientes a esta porción son en realidad el sitio donde la proteína de su lugar donde su proteína estáinteractuando y que es lo que la filosofía de la impresión a pie del ADN.Lo que significa que usted puede imaginar que usted tiene un ADN muy grande y en consecuencia el ADN en un puntousted tiene una región donde la proteína está unida. Así que lo que pasa es que si usted corta esto le va a dar aeste patrón porque no está protegido, pero si está protegido entonces obtendrá todas las demás bandas de, excepto la banda que corresponde a esta región. Y es por eso que esta región puede seridentificada simplemente secuenciando estas bandas y usted será capaz de saber que la región del genoma deestá vinculada por esta proteína en particular. ¿Cómo realizar esto?(Consulte la hora de la diapositiva: 07:12)
    Así que para realizar se necesitan los diferentes tipos de reactivos, material y equipo ’ s. Entonces, ¿cuáles son los reactivosnecesarios? Necesita un almacenamiento intermedio A que contenga realmente los almacenamientos intermedios normales y
    conoce como 10 HEPES millimolar el NaCl Sacarosa, el EDTA, Titon X 100. Y entonces ustedtambién requiere el inhibidor de proteína PMSF entonces usted requiere el buffer B que es exactamente el mismo, excepto que usted necesita un ETDA de glicerol y PMSF.Entonces si usted requiere un buffer C que es el mismo excepto que es muy alta consulta de la NaCly entonces usted requiere el buffer de enlace DNAse. Así que en realidad contiene la TDT glicerolEDTA MgCl2 y Tris-HClPh 7.6. Y luego se requiere la solución de calcio y magnesioque es como 5 milli molar calcio 10 milli de cloruro de magnesio molar. Luego se requiere la solución de paradaque es como 200 millimolar NaCl 30 milli molar EDTA y 1% SDS.Y luego se requiere un buffer de carga es NaOH formamida 0,1% xileno cianol y 0,1%bromofenol azul. Aparte de que necesita una enzima que se llama DNAse y paraque realiza este experimento, necesita un microfugio, así como los operadores de electroforesis.(Consulte la hora de la diapositiva: 08:41)
    Así que en el paso 1 usted va a preparar el extracto nuclear para preparar el extracto nuclear quetiene que suspender el tejido de 100 mg. En 0,5 ml de almacenamiento intermedio A, entonces hay que homogeneización suavemente ydespués centrifugar a 5000 g durante 2 minutos a 4 grados. Y recuerde que todo este procedimiento como para serhecho en una, condiciones frías como 4 grados. Para que pueda proteger los factores que espresente en el extracto nuclear.
    El sobrenadante se puede usar como un extracto citoplásmico ahora que una vez que centrifuga usted va a obtener un paladary el sobrenadante puede ser utilizado como un extracto citoplásmico. Mientras que el pellet que va aredimensionar en el buffer B centrífuga a 5000g por otros 3 minutos. Entonces se disuelve el pellet por lo queen después de esto también se va a obtener un pellet en un sobrenadante. A continuación, otra vez se disuelveen 50 micro litros de almacenamiento intermedio C en hielo durante 30 minutos con la sacudida constante.Así que después de esto cuando centrifugar a 10000 rpm usted va a conseguir el sobrenadante, así comousted va a obtener el pellet. Y ese sobrenadante es conocido como el extracto nuclear que usted puederealmente estimar la cantidad de proteína con de la Lowry, así como el Bradford. Y queen realidad puede ser utilizado incluso para que usted sepa por una base para ver cuánta actividad tiene. Entonces ustedtiene que usar los búferes de reacción de unión.Así que los búferes de reacción de unión para el buffer de enlace de DNase 25 micro litros entonces usted requiere eletiquetado de ADN 5 micro litro. KCl y luego tienes que añadir el extracto nuclear y luego tienesel make up el volumen 250 micro litros con la ayuda del agua destilada.(Referir Slide Time: 10:40)
    Debido a que el control es muy importante, también puede ejecutar un control donde no se puedeno añadir los extractos nucleares. Así que sin un extracto nuclear te va a decir que vas aconseguir todo, el fragmento en eso, reacciones particulares. Mientras que cuando se agrega un extracto nuclear y siel extracto nuclear está teniendo alguna proteína que es vinculante para el ADN que la región va a serprotegida de obtener la limpieza.
    Ahora usted mezcla el contenido de ambos tubos suavemente en el baño de hielo durante 10 minutos y agrega 50 microlitro de solución de magnesio de calcio; en 18 grados. Durante 1 minuto y luego añadir 3 micro litros deDNAse incubar estas mezclas a 37 grados centígrados durante 1 minuto. Entonces usted agrega estas solucionespara que usted sea capaz de detener la actividad del ADN, así que usted simplemente va a hacer una actividad de DNase limitada de.Lo que significa que usted no va a permitir que un DNase corte el ADN para usted sabe por mucho tiempode lo contrario, ¿qué sucederá? La DNase va a cortar el ADN por completo, entonces usted no seráver los fragmentos. La mezcla se somete entonces a la extracción de cloroformo de fenol, a la precipitación de etanol dey a la re-suspensión en el 4 microlitro de carga. Lo cual; significa una vez queesto usted va a añadir estas soluciones de parada entonces usted tiene que recuperar esos fragmentos simplemente porpasando por la precipitación del ADN y usted sabe la eliminación de la parte de la proteína.Entonces usted corre y esta mezcla en un gel de secuenciación de ADN de urea al 5% para ambos en las muestras fragmentadas de ADN de. Así que analiza los patrones de ADN obtenidos para las huellas.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 12:29)
    Así que los resultados de lo que va a ver los resultados verá que es el ejemplo de los estándarescorrectos. Así que esto es sus muestras de control así que lo que ves es ver las bandas de arriba aabajo todas las bandas lo que ves es en realidad correspondiente a la diferente cantidad diferente
    tamaños de los nucleótidos. Mientras que en este 4 carriles donde realmente ha añadido el extracto denuclear lo que ve es que una gran basura de la región no tiene fragmentos.Y estas son en realidad las bandas de huella porque eso es lo que sucede exactamente estas son las bandas deque se han desaparecido de su ejemplo tratado significa la muestra donde ha añadidoun extracto.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 13:19)
    Así que el siguiente problema es que el científico, ha aislado una vieja muestra de roca con una muestra de ADN deel fósil de Dinosour. Han aislado el ADN y han hecho amplificación de PCR con los cebadores aleatorios de. Ahora quieren determinar el tamaño del ADN amplificado. Así que lo que han hecho esque han aislado una vieja roca y que la vieja roca estaba conteniendo un pequeño fósil de dinosaurio. Así que lo quehan hecho es que han aislado este fósil en particular y luego por la ayuda de alguna técnica avanzada depodrían ser capaces de aislar el fragmento muy pequeño del ADN.Pero esta cantidad del ADN no fue suficiente para que puedas ser capaz de hacer cualquier tipo de análisiscomo la secuenciación y conoces el tamaño de este ADN y cuál será la composiciónde los nucleótidos en el ADN particular. Así que para este propósito tienen que amplificarasí que lo que han hecho? Ellos han hecho una PCR y luego obtuvieron el ADN amplificado para que esta cantidadde ADN fuera lo suficientemente buena.
    Así que ahora la pregunta es cómo determinar el tamaño del ADN, así que para esto pueden ser capaces de usarla electroforesis de gel de agarosa. Así que vamos a ver cómo hacerlo.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 14:41)
    Así que en el tamaño de un ADN se puede determinar comparando el tamaño de las moléculas de ADN conocidas.El ADN de los tamaños conocidos se resuelve en un 0,8% agarosa con el junto con la muestra desconocida de.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 14:58)
    Lo que tiene que hacer es resolver primero el ADN en el gel de agarosa junto con los marcadores de la molécula de ADN. Luego usted calcula los valores relativos de Rf con la ayuda de la migración del ADNversus la migración del tinte de ADN. Por lo tanto, la migración del ADN frente a la migración del rastreo
    teñir y luego trazar el peso molecular del registro frente al valor Rf relativo. Así que en realidad vapara darle una curva estándar.Entonces lo que hace es realizar una regresión lineal para calcular las ecuaciones y esa ecuaciónva a ser en forma de y = mx + c para que la ecuación pueda ser utilizada para calcular el peso molecularde su muestra desconocida. ¿Qué significa si supongo que tengo esto es un saber si tengo el valor deRf de esto puedo simplemente ir ya sea convencional manera de ir con la interceptación y puedocalcular el peso molecular del registro y luego puedo ir fácilmente y calcular el peso molecular portomando el antilog.O simplemente puedo simplemente ir con el usted sabe que lo que será el resultado en este ensayo es que es ustedprimero ejecutar la muestra con el peso molecular ocurrir y esta es su muestra. Por lo tanto, lo quepuede hacer es simplemente calcular el valor de Rf para estos marcadores de peso molecular y calcular el peso molecular dede usted y, a continuación, las muestras. Así que si usted tiene el software ’ s tiene la imagensoftware de análisis ’ sEste software de análisis de imagen puede fácilmente ser capaz de entrenar; con la ayuda de estos marcadores de peso de la molécula. Así que usted sabe el tamaño de este molecular y luego con la ayuda del software ’ susted puede ser capaz de hacer el cálculo automáticamente sin siquiera planear esto. Debido a que este plan desiempre lo hará el propio software y que en realidad le va a dar el tamañodel ADN.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 16:57)
    Vamos a pasar a los siguientes problemas para que el siguiente problema sea que los estudiantes de doctorado hayan aislado el ARN mensajero dede la muestra de cáncer. Y quiere usar este ARN mensajero para el norte de. Ahora quiere comprobar la calidad del ARN mensajero. Así que ya sabes cuando quieres quehaga el borrado del norte o que en realidad de todos modos vamos a discutir en nuestras posteriores conferenciasy tú lo primero es que tienes que entender el; o tienes que saber la calidad deel ARN mensajero.Lo que significa cómo; el ARN mensajero es si está intacto o si está degradado todo eso.Porque si usas el ARN mensajero degradado entonces el borrado del norte es resultados que no vana ser precisos y no van a ser concluyentes.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 17:48)
    Primero es que los geles de ARN siempre se realizan bajo las condiciones de desnaturalización. Y sonse han realizado en la condición de desnaturado porque usted tiene las estructuras secundarias en el ARN.Usted tiene los diferentes tipos de estructuras secundarias como los tallos tiene el Loop de Hairpin, ustedtiene el pseudo bucle, Pseudoknot que tiene las protuberancias, tiene los bucles internos y tienelos bucles múltiples.Y cómo estas estructuras secundarias no son buenas porque permiten que el ARN se ejecute rápidamente en el gel de agarosa de. Y si van a ayunar si van a correr rápido, conseguirá menos tiempo para que la molécula ainteractúe con el gel de agarosa. Y en consecuencia habrá menos resolución dentro de las diferentes especies de RNA de. La destrucción de las estructuras secundarias en la estructura de ARN minimiza estos; efectoy permite una mejor separación en el gel de agarosa.Así que debido a que como estructura secundaria se convierte en una estructura muy compacta y debido a esoen realidad corre muy rápido dentro de los poros lo que está presente en los geles de agarosa. Y como usted sabe ycreo que hemos discutido en el pasado también que cuando usted está haciendo un gel horizontalelectroforesis con el agarosa como una matriz. Los tamaños de los poros; dentro de la agarosa es muy grandeen comparación con los tamaños de los poros dentro de la electroforesis del gel de poliacrilamida.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 19:13)
    Cómo hacer que las muestras de ARN y el gel de agarosa contienen formaldehído para desnaturalizar la estructura secundaria depresente en el ARN y luego eso impide la reforma de la región estándar dobleen las estructuras de ARN. Y eso en realidad va a dejar que usted ejecute estos ARNen una estructura lineal ’ s y es así como ellos serán capaces de obtener resolución muy bien de las otras especies de ARN dey le dará el mejor patrón.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 19:45)
    Los materiales y el equipo ’ s lo que se requiere para ejecutar los geles de ARN lo que es necesario es quenecesita una agarosa que necesita la necesita el almacenamiento intermedio 10X mops la composición del almacenamiento intermedio de mops esdado. Entonces usted requirió las soluciones de formaldehído del 37% entonces usted requiere un ARN molecular
    marque la escalera. Así que esto es diferente de la escalera de ADN porque aquí usted va a tener losdiferentes tamaños del ARN.Entonces usted requirió el acetato de 0.5 molar de amonio entonces usted requiere el tinte de tinción que el0.5 micro gramos por ml de bromuro de ehidio y que está preparado en el 0.5 molares de amoniodude. A continuación, se requiere el ARN ’ s free water formamida formaldehydes loading buffers yque es la composición del buffer de carga de formaldehído. Y el búfer de carga puede serfiltrado por el filtro de 0.2 micro y luego puede aliarse en una pequeña pieza y almacenar en -22grado.Lo que requiere los guantes de autoclave que requiere el baño de agua que requiere el sistema de electroforesis horizontal de. Necesita la fuente de alimentación y, a continuación, necesita un contenedor en el quepueda almacenar los geles de tinción y descoloración libres del ARN. A continuación, se requiere el shaker ’ sque necesita la cámara UV ’ s requiere un gel Doc y luego se requiere un frasco para prepararel gel de agarosa.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 21:14)
    Es un proceso de varios pasos por lo que en el propio paso 1 tiene que hacer el aislamiento del ARN mensajero.Así que usted va a hacer con la ayuda de la purificación de la afinidad y que de todos modos vamosvamos a discutir cuando vamos a discutir sobre el blotting del norte. Luego tienes que preparar el gel de agarosa dey que también es un paso múltiple. Así que en el paso 1 hay que hacer la preparacióndel agua libre de ARN.
    Así que el agua libre de ARN se prepara simplemente disolviendo el dietilpirocarbonato o DEPC endesionizado aún agua a una concentración final de 0.1%. Y DEPC es un fuerte inhibidor de los fuertes RNA de, de modo que en realidad es un inhibidor del ARN, lo que significa que realmente va. Si prepara o utilizael agua tratada con DEPC, en realidad va a proteger su ARN de la degradación porqueva a inactivar el RNA ’ s lo que está presente en los búferes o en las mezclas de reacción.Remueve la solución durante 12 horas y luego autoclave para desintegrar el DEPC y luego puedealmacenar esta solución a temperatura ambiente durante mucho tiempo.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 22:35)
    A continuación, el tercer paso que tiene que hacer la fundición del gel de agarosa así en un matraz en el 1 gramo deagarosa a los 75 ml de agua libre de RNase. Calentar las soluciones para fundir el agarosa y observar la desaparición dedel matraz de agarosa esto creo que ya hemos discutido cuando discutimossobre la formación de gel de agarosa, cuando estábamos discutiendo acerca de cómo resolver esto para el ADNtambién. Entonces usted permite que la solución se enfríe hasta 55 grados centígrados dentro de una capucha de humoa 10 ml de 10 X más búfer y 18 ml de formaldehído 37%.Setup la bandeja de fundición con un peine y vierta el gel en la campana de fumado en esta etapa que tiene quemantener el cuidado que el formaldehído es muy tóxico y puede ser fácilmente absorbido a través del vidrio de desgaste de la piel ytiene que usar el frasco. Porque el formaldehído se evapora muy fácilmente de manera que
    realmente entrar en su cuerpo a través de la respiración. Así que es por eso que tienes que usar la máscara comobien como tienes que usar los dientes para que no tengas un, absorber a través de la piel también.Ahora en el paso 3 tienes que preparar las muestras de ARN así que toma las muestras de ARN y make upal maquillaje a los 6,5 micro litros con una cantidad apropiada. Así que cualquiera que sea la muestra de ARNque usted tiene sólo preparar un 6.5 micro litro de muestra. Y a cada muestra se le agrega el 2.5 microlitro 10X mops que ejecuta buffer 4.5 micro litro o 37% formaldehído y 11.5 micro litros de formamida deformaldehído.Así que en realidad va a hacer una mezcla de reacción de 20 micro litros mezclar por vórtice ygirar brevemente para recoger la muestra en ese fondo. A continuación, dentro del capó a 5 micro litros deRNA de carga de la mezcla de buffer se mezcla por vertexing y brevemente girar para dejar que la muestra en la parte inferior. Como ustedpuede ver que estamos haciendo todo este procedimiento bajo la capucha de humo para que usted no debe ser expuestoa los humos lo que viene del formaldehído, así como la formamida.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 24:54)
    En el paso 4, usted hace la carga de las muestras de ARN así que llene el gel desnaturalizado de agarosa preparadocon el 1% 1X mops ejecutando buffer y cargar la muestra de ARN en el carril. Así que la carga esexactamente igual que lo que hemos discutido de la carga del ADN en el gel de agarosa.Excepto que hay que tener poco cuidado de que todos estos consejos y todos los demás instrumentos y cosaslo que está usando deben ser esterilizados.
    Debido a que el ARN es muy sensible para la degradación por lo que el ARN está presente en todas partes por lo queque en realidad se degradan con muy rápido. Por lo tanto, debe esterilizarlo todo y, a continuación, tienepara utilizar las sugerencias de filtro en lugar de los consejos normales.(Consulte la hora de la diapositiva: 25:46)
    Ahora, en el paso 5, tiene que hacer la ejecución de la agarosa de desnaturalización así que coloque la ventaja sobrela cámara de almacenamiento intermedio y lleve a cabo la electroforesis y 5 voltios por centímetro hasta que el frente de tintellegue a la tercera parte de la longitud. Así que esto es exactamente lo mismo que usted tiene que hacer el electrodo negativoelectrodo positivo y luego usted ejecuta el ARN. Y tienes que correr hasta los 2 tercerosde la longitud del gel. Después de esto usted tiene que hacer una tinción y destaining para visualizar el ARN.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 26:16)
    Entonces usted tiene que hacer la tinción del gel de agarosa por lo que en un gel de Agarosa de contenedor libre de RNAse essumergido en el acetato de 0,5 molares de amonio durante 40 minutos a una temperatura ambiente. Esto es paraseguido de la eliminación de la solución y sumergir el bloque en un, acetato de amonio de 0,5 molaresque contiene 0,5 microgramos por ml de bromomida etidio. Así que este es el tinte de tinción que se preparaen el sulfato de 0,5 molares de amonio.Luego se incuba el gel en la temperatura ambiente durante 30 a 40 minutos y si es necesario y la manchaes demasiado intensa, lo que significa que no se puede ver un mejor fondo o mejor contraste
    entre el ARN, así como el fondo, entonces lo que puedes hacer es simplemente hacer la mancha de-por el acetato de 0,5 molares de amonio durante otros 50 minutos a 2 horas. Entonces lo que hace es
    la transferencia del gel a una cámara UV y captura la imagen con una unidad de documentación en gel. Un perfil de ARN típico dees parecido a esto.(Consulte la hora de la diapositiva: 27:28)
    Así que aquí lo que ves es que esta es la escalera de ARN así que lo que ves son las bandas de los diferentes tamañosy la típica muestra se verá como esta donde tienes el ARN de diferentes tamaños. Y esto esque se va a resolver por lo que estos son los mensajeros RNAse de diferentes tamaños. Mientras que normalmentecuando se ejecuta el ADN o agarosa del que no es el gel desnaturalizante lo que se ve es que el ARN completo deestá presente en el fondo del gel y no se ha resuelto.Así que esto es lo que se ve es en realidad una resolución de esto que es donde todas las bandas de ARN estánseparados en el múltiple mensajero RNAse. Y así es como puede ser capaz de realizar la
    Northern blotting al transferir a una membrana y con sondear con las sondas radiactivas.Así que con esto me gustaría concluir nuestra conferencia aquí, gracias.