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    Variantes de Electroforesis Gel Hola a todo el mundo se trata del Doctor Vishal Trivedi del departamento de biociencias y bioingeniería IIT, Guwahati. Y lo que estábamos discutiendo sobre la electroforesis en gel horizontal en nuestra conferencia anterior. Hemos hablado de la condición experimental y de cómo realizar la electroforesis en gel. También te hemos mostrado una pequeña demo clips cómo hacerlo en el laboratorio y espero que estas sean estas 2 cosas se les hubiera explicado la electroforesis en gel horizontal en un detalle más y podrás realizar la electroforesis de gel de agarosa en tu propio laboratorio. Así que vamos a pasar a discutir las diferentes variantes de la electroforesis de gel que usted puede hacer o que han estado disponibles. Así que hay la página de SDS que es en realidad una página de desnaturalización así que como usted sabe que la movilidad electroforética deen realidad se rige por la tasa de carga por masa. Así que si mantengo la carga por proporción de masa así que si mantengo la carga constante entonces la movilidad electroforética va aser inversamente proporcional a la masa y eso es lo que la condición para la página de SDS. Así que si añado elSDS a la electroforesis en gel, el SDS se va a unir a la molécula de proteína.Y como resultado en realidad va a dar la carga negativa y como la carga es impartida porel SDS va a ser uniforme para cada proteína. El componente de carga va a ser anuladoComo resultado la estructura 3-D de la proteína se destruye y migra según su subunidadpeso molecular.   edad y si se ejecuta la misma proteína en la página nativa y si ustedcalcula su movilidad electroforética y si utiliza esa información puede ser capaz de responder ala cuestión del estado oligomérico de la proteína particular porque la movilidad electroforéticaen el SDS va a ser según el peso molecular.Considerando que, la movilidad electroforética; en la página nativa va a ser según el cargo por masa. Porque si la proteína es dimérica la masa si va a ser de correspondiente al dímeromientras que en la página de SDS va a ser monomérico. Por lo tanto, la combinación de la página de SDS yla página nativa le dará la respuesta sobre el estado oligomérico de la proteína.Número 1 número 2 con la ayuda de esta página nativa puede ser capaz de porque la página nativava a mantener las confirmaciones de 3 dimensiones.También va a mantener la actividad de la proteína para que pueda ser capaz de hacer las actividades funcionales deque puede ser capaz de gran cantidad de ensayos de actividad cuando la proteína está presente en el gel y ustedpuede responder que puede resolver muchas preguntas relacionadas con la actividad bioquímica de esa enzimaen particular o actividad bioquímica de esa proteína en particular. Número 3 de las proteínas nativas porquela página nativa también va a permitir las confirmaciones de 3 dimensiones la página nativa puede serevento utilizado para el estudio de la interacción entre las 2 proteínas.Por ejemplo la proteína A y la proteína B es su proteína A y B si interactúan entre sísu carga resultante resultante masa molecular va a ser muy alta. Así es como usted puedeser capaz de hacer esa pregunta en particular si usted carga la proteína A, la proteína B y la proteína AB complejaentonces la movilidad electroforética va a ser diferente para el complejo. Aparte de esto si
    vea cuál es el tamaño de la proteína y si usted ve qué tipo de electroforesis en gel o qué tipo de gel detiene que usar para ver la mejor resolución y separación.Pero usted ve es que si usted tiene el peso molecular muy pequeño por ejemplo la proteína de 4 a 40 kDaentonces usted puede ser capaz de usar el 20% de electroforesis de gel que significa que usteduna solución de acrilamida al 30% en realidad contiene un 1% de agente de enlace cruzado (())(08:36) entonces de su puede ser capaz de usar el gel al 20%, si usted tiene si usted está trabajando conla proteína que está en el rango de 4 a 40 kDa. Pero si está trabajando en el rango de 12 a 45 kDa puede utilizar el 15% si va a 10 a 70puede utilizar el 12.5. Si utiliza de 15 a 100, puede utilizar el 10% y si está trabajando en el rango de 25200, puede utilizar el 8%, lo que significa que el peso molecular está aumentando, en realidad,disminuye la acrilamida. Porque creo que si usted recuerda que le he demostrado que cuandola poliacrilamida es cuando la acrilamida está recibiendo enlace cruzado por la bisacrilamida y querealmente crea un poro dentro de la debido a las fibras se están conectando por el bisacrilamidaEn realidad crea un poro o el lío y de ese embrollo la molécula como para pasar a través de tal siusted toma la acrilamida concentrada muy alta las proteínas de alto peso molecular no vana entrar. Así que para las referencias prácticas punto de que estos valores son utilizados de modo que es porsimplemente por la gente ha hecho los diferentes tipos de experimento y es como ellos vienen coneste valor.Pero la condición viene cuando usted tiene que resolver una proteína de 500 kDa por ejemplo o incluso2000 kDa proteína. Por ejemplo, si usted tiene una proteína tan grande o si usted tiene el complejo multimérico de la proteínaes cómo usted va a resolver eso, porque si usted deja esta consulta asuponer un 5% de acuerdo o incluso al 3% esta consulta más baja de la acrilamida es tan menos queno va a darle el gel como estructuras que en realidad va a hacer que realmente no es lo suficientementepara darle un gel que puede ser manipulado de una manera muy simple.Así que para resolver este problema donde tiene una proteína muy grande y complejos de proteínas las personashan desarrollado la nueva técnica de electroforesis en gel aquí están usando los múltiples geles y quees como son capaces de utilizar y resolver estas proteínas de alto peso molecular. Aparte deque suponen que tienes la proteína de menor a esta consideración. Por ejemplo, si tiene
    Los aminoácidos que están interesados en resolver en el gel de acrilamida, entonces no pueden irmás allá del 20%. Porque ese es el máximo de lo que se puede preparar a partir del 30% de las soluciones de acrilamida.Pero lo que se puede ver es que la solución de acrilamida al 30% como solo el 1% de bisacrilamida por lo que si ustedtiene una proteínas de un tamaño muy pequeño entonces lo que puede hacer es que todavía puede ser capaz de ejecutar el gel del 20%pero puede aumentar el porcentaje de la bisacrilamida. Este tipo de gel se llama comolos geles altamente reticulados bien. Así que si usted tiene un peso de molécula muy pequeña puede utilizar los geles de enlace de alta cruz dedonde realmente puede utilizar el 2% o 3% de bisacrilamida.Considerando que si tiene una proteína de peso de molécula muy alta, entonces usted puede tener que usar una combinaciónde diferentes geles que vamos a discutir en una diapositiva posterior.Ahora usted hierve y deja que la acrilamida se disuelva lo único es que no debe agregarel temed y no debe agregar la APS en el sistema. Así que preparas el completeAsí para este propósito lo que tienes que hacer es que tienes que rotar este casete en esta direcciónprimero bien. Así que usted puede imaginar que acabamos de rotar este cassette por elde 90 grados y ahora usted comenzó a llenar de este lado de acuerdo.Así que primero usted llena este entonces usted llena este, así que cuando gire usted tiene que bloquear de la parte superiortambién y entonces usted comienza a verter de la parte superior y primero usted llena este como ese bien. Entonces
    una vez que se haga con la fundición de todo el hasta el final, entonces usted puede girar de nuevo yentonces usted puede empezar a verter el gel de apilamiento, y usted puede ser capaz de echar el peiney usted puede echar los diferentes pozos, y luego usted sólo cargar las proteínas que ya estánincubado con la cantidad diferente de urea.Y como resultado lo que usted va a ver en la observación que va a ver como paraejemplo usted tiene un molar de 0, 3 molar, 6 molar y 8 molar. Así que en el 0 molar que va aver una sola banda que en realidad va a ser correspondiente al tetramer. Así que asumo queestamos disolviendo una proteína tetramérica. Ahora una vez que llegue a la 3 su consideración de tetramerdel tetramer se va a romper.Y entonces usted realmente va a ver alguna cantidad de trimer alguna cantidad de dímero y alguna cantidad dede monómero lo que significa que esto realmente va a ser trimer esto va a ser dímero yesto va a ser monómero. Si usted va más arriba, entonces la banda y la concentración del tetramer dese va a reducir mientras que el resto de las proteínas se van a aumentar. Perouna vez que llegue a los 8 molares todos estos llegarán a las proteínas mole-meric.Así que todo se romperá en el monómero así que si realmente puedes ser capaz de seguir este tipode estudio y si haces este tipo de experimentos que en realidad te van a decir la estabilidad dede estos oligómeros individuales hacia la urea. Así que en realidad le dirá que qué monómero dese va a romper y en qué paso la proteína está perdiendo sus estructuras de 3 dimensionesy en qué paso está realmente perdiendo su interacción con los vecinos.Por lo tanto, que la proteína tetramérica se está convirtiendo en trimerica y la dimérica y monomérica.Y en última instancia todo se convertirá en el monomérico por lo que en esta etapa toda su proteínase desarrolló mientras que esta etapa toda su proteína está bajo la etapa de plegado.
    La electroforesis de geles de 2 dimensiones es una combinación de enfoque isoeléctrico seguido por la página SDS deen una dirección perpendicular. Los puntos isoeléctricos, separa las muestras basadas en su pH isoeléctrico, está indirectamente relacionado con la carga que está presente en las proteinas.para darle las 2 partes. Usted puede imaginar si pongo y resuelva el mismo ejemplo, ya sea usando el punto isoeléctricoo con el peso molecular, entonces las muestras no se resolverán correctamente ono se resolverá completamente.En general, el análisis de la lisada bacteriana compleja o extracto de tejido puede producir hasta 1000 a2500 puntos bien separados. Con una herramienta de detección de sensibilidad y un software de análisis de imágenesindividuo de estas manchas puede ser identificado en las diferentes condiciones. Así que el gel 2Delectroforesis es muy popular en términos de buscar los cambios en el patrón de las proteínascuando se está tratando un organismo o bacteria en particular con algo que en realidad escambiando el protieum de ese organismo en particular.Y debido a que estos cambios son muy sutiles y estos cambios son muy difíciles de trazar simplemente porusando la propiedad ya sea el punto isoeléctrico o el peso molecular que es por lo que las personas sonusando la electroforesis de gel de 2 dimensiones para resolverlos. Y en general, usted va aproducir de 1000 a 2500 partes solamente y eso en realidad le va a dar la suficiente separación aver todos y cada uno de los puntos.Y una vez que usted tiene estos puntos puede ser capaz de extraer la proteína de esas partes y usted puedeser capaz de identificar esos puntos y usted puede ser capaz de identificar las proteínas. ¿Cómo realizar la 2dimensional; electroforesis?(Consulte la hora de la diapositiva: 25:10)
    El material que necesita es para la electroforesis de gel de 2 dimensiones que necesita las tiras de enfoque isoeléctricas de. Estas tiras de Focusing isoeléctricas no son más que estas tiras de la celdadonde tienes los ánforlitos se disponen a las tiras de diferentes cargas. Así queestos empollights no son nada más que las moléculas anfotéricas y estas tiras están recubiertas con estas moléculaspor lo que esta región va a ser realmente correspondiente a un tipo particular de PI.Así que debido a eso cuando las proteínas van a funcionar y cuando llegan a su punto isoeléctricose inmovilizarán a esa región en particular. Y por eso se van a separaren base al punto isoeléctrico. Entonces usted necesita un reactivo para la página de SDS y entonces ustedtambién requirió el reactivo porque usted quiere hacer una detección sensible para que también pueda requerir un reactivo depara la mancha de plata.Entonces usted requiere un tripsina porque una vez que obtuvo la (()) (26:15) usted tiene que (()) (26:16) así queque las proteínas van a producir los péptidos y entonces estos péptidos pueden ser analizados en la espectrometría de masa depara saber cuál es la masa de estos péptidos y entonces usted será capaz deidentificar la proteína.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 26:33)
    Esto es como los pasos múltiples por ejemplo el paso 1 que va a hacer las extracciones de proteínas. Enla extracción de proteínas del tejido o de la pared celular congelada en y hará un polvo de búsqueda entonces estemismo polvo se mezcla con el 10% de Tca enfriado en acetona con 1% de TDT. La suspensión del tejido
    se incubó con 1 hora de duración en 20 grados y la mezcla se centrifuga a 35000g durante 15 minutosa 4 grados.Puede desechar el sobrenadante y disolver cuidadosamente el paladar en el hielo y acetonaque contiene 1% de TDT. Incubar la suspensión y pasando por este procedimiento en última instancialo que va a conseguir el material y antes de cargar este material en la tira de enfoque isoeléctricaque tiene que estimar la proteína con la ayuda de la Lowry o el método de Bradford.Para que no debe ser que usted carga muy alta cantidad de la proteína o muy menos cantidad de proteína. Debido a que si usted carga muy alta cantidad de la proteína entonces la proteína se va a solaparentre sí y la operación va a ser de compromiso si usted carga muy poco, entonces usted puede serextraño algunas de esas proteínas que estaba presente en la muestra. Pero como el nivel era tan bajo, puede queno sea el nivel de detecciones.(Consulte la hora de la diapositiva: 27:59)
    A continuación, el paso 2 va a hacer las primeras dimensiones para que las tiras de IPG en este caso que tenemosestén tomando un ejemplo de pH de 3 a 10. Así que las tiras de IPG o bien dijeron que sabes que en realidad están teniendo los empollonesque están recubiertos y puedes tener una tira IPG de cualquier rango como 2 a 5, 2 a 10, 3 a10 se rehidrata de la noche a la mañana con 350 micro litros de 3 ofertas de barra de rehidratación. Y una vez que se vuelva a hidratar, puede cargar la tira IPG con 1000 microgramos en una bandeja de reselling a temperatura ambiente.
    Estas tiras focalizadas se equilibraron dos veces en primer equilibrio en 50 viajes de milli con tiras que contieneny la segunda fue una solución que contenía un 4% de yodoacetamida en lugar de la TDT de. Así que vas a hacer la 2 ronda de enfoque en una de ellas va a tener la TDT laotra que vas a tener la yodoacetomida. Una vez que el enfoque isoeléctrico se llevó a caboen 20 grados para la condición de funcionamiento primera hora a 500 voltios seguido por los 1000 voltios durante 2 horasy finalmente las 16 horas a 3000 voltios.Así que cuando se ejecuta estos para las 16 horas a 300 voltios las proteínas van a migrar a través dela tira de enfoque isoeléctrico y luego se inmovilizará a sus puntos individuales. Las tiras IPGse sacarán de los operadores y la segunda separación dimensional serárealizada en la página de SDS en una losa vertical de la acrilamida.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 29:37)
    Ahora, una vez que se haga con esta primera dimensión, entonces lo que va a tener es queva a tener las tiras de IPG bien. ¿Y entonces lo que tienes que hacer es tomar las tiras de IPG yponerlo en las soluciones de acrilamida para que lo que vas a hacer? Usted va a hacer la primera castalos geles de resolución de acuerdo, pero usted no necesita echar los geles de apilamiento y por lo que primero se echa el gel de resolución dey se pone la tira bien y luego realmente se echa el gel de apilamiento ydebido a que en realidad va a sellar las diferencias entre la tira de IPG, así como la página de SDS de.
    Y luego se convierte en el gel 1 continuo y luego va a realizar la segunda página de SDS de dimensión, ya que estábamos discutiendo acerca de la electroforesis en gel vertical. Las proteínasque en realidad van a ser migradas como esta ahora van a correr en esta dirección bien, lo que significa que todas estas proteínas van a ser concentradas y así es como usted realmente va aobtener un lugar de esta proteína. Así que usted podría tener múltiples proteínas que están presentes en estepuntos particulares y es por eso que usted va a ver los múltiples puntos de una sola tira de IPGárea de enfoque.Lo que significa en un PI de 3.1 usted puede tener 5 proteínas y todas estas 5 proteínas pueden tener un peso molecular diferente de. Así que es por eso que van a ver las proteínas de los puntos de las diferentes posiciones dey lo mismo será cierto para múltiples lugares. Una vez que haya conseguido los puntos que puede sercapaz de saber analizar este patrón de pote en el gel de segunda dimensión y usted puede ser capaz decompararlo con las muestras no tratadas o las diferentes muestras de tratamiento y que es cómoen realidad le va a decir que lo que son los puntos se han expresado diferencialmente.Lo que significa que estos son los puntos que, además, están presentes y que son las manchas quepuede ser capaz de extraer del gel y que usted puede ser capaz de utilizar los enfoques de electroforesis en gel bidimensional aguas abajo 2 Y (()) (32:03) por ejemplo usted puede hacer la tripsmización dey entonces usted hace la masa múltiple y todo eso y usted puede ser capaz de identificar las proteínas de.Hay un par de buenos cursos MOOC están disponibles en el IIT Bombay si usted está interesadopara estudiar la electroforesis de gel de 2 dimensiones, así como el proteómico. Por lo tanto, si está interesado, en realidad puede ir a los cursos de IIT Bombay ’ s y MOOC y puede estudiar eso en más detalles en. Así que aquí no vamos a discutir todos y cada uno de esos pasos que estoy tratando de decirque estos son los realmente obstance que están disponibles para que usted utilice electroforesis en gel pararesponder a muchas preguntas críticas.Así que en lo típico lo que usted tiene lo que hemos hecho así que lo que hemos discutido hasta ahora que usted esprimero va a tomar la célula o el tejido, usted va a preparar el extracto el primero que usted esva a ejecutar este extracto en las tiras de IPG. Y eso lo va a resolver como en la
    forma de las bandas en estas tiras, y entonces lo que va a hacer es que va a cargarestas tiras en la página de SDS.Así que cada tira, cada lugar es o cada banda que va a resolver ahora en los puntos individuales yque es cómo va a obtener los 1000 a 2500 puntos diferentes y estos puntos se pueden cortardel gel y se puede hacer para las aplicaciones en sentido descendente como el tratamiento proteoso la espectrometría de masas de.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 33:44)
    Ahora hemos hablado de la página nativa que hemos hablado sobre la página de SDS que hemos habladosobre los geles de agarosa y acrilamida y también hemos hablado sobre el gel de 2 dimensioneselectroforesis. Lo que es la limitación de la página nativa es que siempre se rige por la carga intrínsecade la proteína particular, lo que significa que si la proteína se carga negativamente esrealmente va a correr según la carga negativa.Pero usted sabe que la electroforesis opera tiene un electrodo negativo en el electrodosuperior y positivo en la parte inferior. Pero cuál será la condición si usted tiene una mezcla donde usted esva a tener el cargado positivamente y así como la proteína cargada negativamente. En este tipode mezcla compleja no podrá utilizar la página nativa porque la proteína cargada positivamentese ejecutará o la proteína cargada de forma nativa se ejecuta.
    Independientemente de si es así si tiene una mezcla compleja en la que tiene elcargado positivamente o las proteínas cargadas negativamente tiene que ejecutar la página horizontal. Por lo tanto, la página horizontal essimilar al gel de agarosa, pero está utilizando la acrilamida en lugar de Agarose.(Consulte la hora de la diapositiva: 35:11)
    Por lo tanto, la electroforesis de gel horizontal en este aparato la muestra biológica compleja se resuelve comopor su carga y se mueve al electrodo del contador de carga. Lo que significa que el positivo se moveráhacia lo negativo y el negativo se moverá hacia lo positivo. La muestra; cargada en el mediodel gel se resuelve en función de su relación de masa por cargo. El casete de gel está diseñado parapreparar gel de agarosa no es apropiado para echar el gel de poliacrilamida debido a la exposición de gelcon el oxígeno ambiental.Así que el casete de gel lo que usamos para la electroforesis de gel de agarosa no es lo suficientemente bueno como para echar los geles de poliacrilamida de. Porque, está abierto desde la parte superior por lo que en realidad vapara obtener la entrada directa de oxígeno; y usted sabe que el oxígeno es un expositor de la polimerización de la acrilamida. Así que si el oxígeno está presente la poliacrilamida no se va a polimerizar adarle la página.Así que debido a eso se requiere un operador de página nativo especializado que en realidad puede resolver la muestrabasada en la carga por proporción de masa. La página nativa horizontal separa la mezcla de proteínacon la alta resolución y la migración de proteínas se corresponde bien con la proporción de masapor cargo.
    (Consulte la hora de la diapositiva: 36:34)
    Así que primero discuta sobre la parte de instrumentación para que el diseño de los casetes de gel. El casete de gelconsta de 3 placas la 1 placa grande que es el número de placa 1 y las 2 pequeñas placas que sonnúmero 2 y 3 son de 2 mm de espesor de vidrio se pega a la placa grande para dar los espacios de construcción, lo que significa que en realidad va a poner la diapositiva de 2 mm de espesor en la diapositiva. Y queen realidad le va a dar los separadores del cassette de gel se sella con la espuma gruesa en elambos ladoOkay en el lado ambos tienen una espuma muy gruesa que en realidad va a utilizar para el selladode estos operadores particulares que se impregna con agarosa para evitar la fuga. Luego, el casete de gelse ensambla con la ayuda de un sujetador con un hueco de 1 mm de 1 centímetro para colocar el peine de. Lo que significa que tienes esta placa principal tienes un peine que tienes una espuma en este ladotienes espaciador en ambos lados.Y entonces tú lo que vas a hacer es que vas a colocar el número 2 que vas acolocar el número 3 como este y luego vas a poner los clips en ambos lados. De modo que este operador completo dese va a ensamblar como 1 y entonces va a empezar a lanzar los geles de poliacrilamida de.(Consulte la hora de la diapositiva: 38:04)
    La fundición de los geles de acrilamida nativos horizontales el cassette de gel se ensambla por el aglutinanteclips para mantener una distancia de 1 centímetro entre ellos para colocar los peines. La fuga del casete fueantes de verter la solución de acrilamida. Así que lo que tienes es que tienes una placa principal dedonde vas a tener la espuma en la parte inferior y la parte superior tan primero lo que haces eseres así que este es el número de placa 1.El primero lo que haces es poner el número de placa 2 está bien poner los clips en ambos lados y luegovierte el líquido bien. Y una vez que el mismo se resuelve y se polimeriza entonces tienes querotar esto bien y luego pones t número 3 entonces este lado y lo traes abajo bien y luegovolverlo a echar. Así que usted puede imaginar que esto es así si usted va a ver para esto número 2irá en la parte superior y el número 3 vendrá en la parte inferior y que es cómo usted va a verter enesto.Así que en realidad el casting va a ser un evento de 2 pasos primero que usted echa para el número 2 entonces usted echapara el número 3 y luego la porción media va a estar vacía y la capa delgada de aguaequilibriol equilibrado se ha terminado encima de la resolución de gel. Se adopta el mismo procedimiento para emitir el gel de resolución deen el otro lado de la placa de vidrio. El casete de gel se coloca horizontalmente y se vierte el gely se coloca un peine para lanzar los pozos, lo que significa que una vez que se hacen las cosas, entoncesse toma la placa como esta bien.
    Así que este lado es castado este lado es castrado entonces usted echa el gel de apilado en el medio y poner un peine de. Así que si pone el peine, el pozo se va a preparar como si estuviera preparado para el ADN de.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 40:04)
    Ahora, la preparación de la muestra para la preparación de la muestra de proteínas se mezcla con el colorantecarga 5xque contiene el 40% de sacarosa 10% de azul de bromofenol y un 10% de azul de metileno. El bromofenoles un colorante aniónico y se utiliza para controlar la movilidad de las proteínas en el lado anódico, mientras que MBes un tinte catiónico para rastrear el momento del otro lado. La electroforesis una vez que se pone queuna vez que el gel de apilamiento se polimeriza los sujetadores de peine y las almohadillas de espuma se eliminan y los pozosse lavan con agua y 1x el búfer nativo de la Tris-glicina que corre.El casete de gel se coloca en la dirección horizontal en la cámara del electrodo. La cámara esllena con el buffer nativo de la Tris-glicina de 1x enfriado al nivel lo suficiente para tocar ala placa de vidrio que significa si usted tiene esto y usted ha mantenido la placa de vidrio como esta bien. Así queeste lado tiene una cámara que conecta estos con un algo para que realmente tome el buffer depero no es un modo continuo de ejecutar.Va a ser el modo discontinuo para que la corriente pase a través del gel de 1 cámara de almacenamiento intermedioa la siguiente cámara de almacenamiento intermedio. Así que el principio sigue siendo el mismo, excepto que ahora estamoshaciendo la electroforesis en las direcciones horizontales. Cargar las muestras hasta los 20 litros de mica una electroforesis dese realiza con la constante de 100 voltios en una sala de frío. Debido a que
    La electroforesis va a ser de 18 a 20 horas para que esté en la sala de frío de modo que la muestrano se desnaturaliza y se destruye.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 41:51)
    A continuación, una vez que se hace con que se hace la tinción y des-manchas después de la electroforesis essobre gel se retira del casete con la ayuda de un bisturí y el manchado con el azul coomassie. Todo el proceso de tinción y des-manchas del gel completo esmenos de 3 horas y lo que puedes es que he cargado un lycate bacteriano y lo que puedes ver esque las proteínas cargadas positivamente van hacia los electrodos negativos y las proteínas cargadas negativamenteestán migrando hacia los electrodos positivos y así es como puedes ser capaz de hacerlo.Y todas las dos muestras son nativas en así que es como puedes ser capaz de resolver y túpuede ser capaz de visualizar el patrón de los positivos, así como la proteína negativa presente en la misma mezclael electroforesis en gel horizontal.(Consulte el tiempo de la diapositiva: 42:45)
    Cuáles son las ventajas de esta electroforesis en gel se puede utilizar la electroforesis en gel horizontalen esta conjugación con la página de SDS para separar y analizar las muestras biológicas complejas. Es amigable con el usuario dey no se requiere equipo especializado el gel preparativo nativo de la página nativa espurifica en cantidad a granel la proteína en la cantidad a granel para el desarrollo de anticuerpos, así comopara la actividad como se dijo.Por otra parte este diseño no requiere ninguna fabricación especializada y en permitir al usuario lanzarapilando y resolviendo gel juntos. Lo que significa que la página horizontal le está dando las muchas ventajas dedonde realmente puede utilizarlos para resolver las proteínas de la positiva, así comolas cargadas negativamente que están presentes en la muestra juntos. Número 2 porque en realidad estáresolviendo la muestra basada en la relación de carga por masa que puede ser capaz de utilizar el gel en la conjugación decon la página de SDS, y que en realidad le permitirá resolver las muy complejas muestras biológicas de.Y hay otra ventaja que es fácil de usar comparar con el otro TDS la página horizontal(()) (43:59) están disponibles y así que con esto nos gustaría concluir nuestra conferencia aquí. En nuestra conferencia posterior deen realidad vamos a discutir los experimentos, así como los problemas de investigaciónque están relacionados con la electroforesis. Y también vamos a discutir estas técnicas de la mayoría de las manchas deque también están disponibles en las que también se utilizan en la electroforesis de.
    Así que con esto me gustaría concluir mi conferencia aquí en una conferencia posterior vamos a ir adiscutir los temas más relacionados con la electroforesis gracias.