Análisis de manchas e imágenes

Así que, en la conferencia de hoy, vamos a discutir sobre la tinción del gel. Y así como cómo una vez que conseguiste el gel manchado, cómo puedes ser capaz de hacer el análisis de la imagen.
Tenemos las múltiples opciones en cuanto a los diferentes tipos de una mancha y tenemos las ventajas así como los diferentes tipos de opciones disponibles con las diferentes manchas.
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Así, tenemos la coomassie brillante azul R250 como una mancha y la coomassie brillante azul R250 es la de la mancha más popular lo que la gente está usando para los geles de acrilamida. Y no es específico, por lo que no mancha el tipo de proteína en particular. Por ejemplo no puede manchar la proteína fosforilada ni la proteína acetilada sino que manchará toda la proteína lo que está presente en el gel.

Pero una de las principales ventajas de la coomassie brillante coloración mediada azul es que es el procedimiento de una sola etapa de tinción. Y la principal desventaja es que el límite de detección está en el rango de la banda de microgramo por proteína o el microgramo por proteína presente en el carril.
A continuación, para mejorar esta gente han desarrollado las soluciones de color azul brillante coloidal azul. Por lo tanto, la solución coloidal coomassie brillante tiene el 5 a 10 veces más sensibilidad que el coomassie normal brillante azul R250.

Y la ventaja añadida es que usted no necesita hacer estos pasos de la tinción. A continuación, en comparación con que la gente ha llegado con la mancha de plata, la tinción de plata es incluso 100 pliegues más sensibles que a la coomassie brillante R250. Pero la desventaja es que no es un simple procedimiento de tinción, requiere de múltiples pasos y requiere de los diferentes tipos de reactivos. Y por otro lado tampoco es la espectrometría de masas incompatible lo que significa que si mantienes tu gel con la mancha de plata no puedes usar la proteína de directamente para la espectrometría de masas.

Para superar estas personas han desarrollado las tres más las manchas como el rubí SYPRO, la naranja SYPRO y la tangerina SYPRO. Y todos estos son en realidad los colorantes compatibles con espectrometría de masas y son sensibles hasta los 1 a 2 nanogramos por bandas de proteínas. Y por ejemplo la naranja SYPRO es un tinte de color naranja y luego la tangerina SYPRO también es una muy, muy sensible y también es compatible con la espectrometría de masas.

Por lo tanto, incluso después de la tinción una vez que se ha conseguido la banda se puede utilizar las aplicaciones en sentido descendente como el espectrómetro de masas se puede identificar la proteína con la ayuda de los diferentes enfoques de la proteómica. Por lo tanto, en un procedimiento típico de tinción lo que se supone que debes hacer es que primero tienes que tomar el tinte y luego tienes que preparar las soluciones de tinción. Y una vez que prepare la solución de pie, entonces incuba el gel en la solución de tinción y luego tiene que realizar los pasos de destino o en algunos casos que no se requieren pasos de destino.

Por lo tanto, para explicarte el procedimiento de tinción hemos tomado un ejemplo del azul brillante coomassie y cómo realizar el procedimiento de tinción.
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Por lo tanto, para la tinción del gel con el azul brillante coomassie el material lo que usted requiere es el gel de poliacrilamida que contiene las bandas de proteínas. Entonces usted requiere una coomassie brillante pegamento R250 soluciones de tinción entonces usted requiere una solución de destino. Así que, la solución de destino que contiene un 15% de metanol, ácido acético 10% y que todo lo que se va a preparar en el triple agua destilada y se requiere un plástico o el recipiente de vidrio con la tapa y luego se necesita un agitador.

Para realizar la tinción mediada por pegamento brillante de coomassie, primero lo que tiene que hacer es retirar el gel de poliacrilamida de la unidad de electroforesis. Y colóqualo en un recipiente de plástico con 10 volumen de las soluciones de tinción de color azul brillante de coomassie, agita el lentamente en un agitador de plataforma durante 30 a 60 minutos. Luego se descarta la solución de tinción y se lava el gel con el triple agua destilada. Por lo tanto, eso en realidad va a eliminar el exceso de tinte lo que se une al gel.

Y entonces lo que puedes hacer es, puedes añadir de 5 a 10 volumen de soluciones de destino. Y como resultado lo que sucederá es que en realidad va a eliminar el tinte de los lugares con destino no específico y esa solución de destino, hay que mantener el gel en la solución de destino para 30 a 60 minutos o hasta que no verá las bandas. Si el color de la solución de destino es azul intenso, puede sustituirlo por la nueva solución de destino. Por lo tanto, que puede ser capaz de utilizar o puede ser empezar a quitar más y más tinte de los (()) (07:51) lugares débilmente atados.
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Y si lo haces, vamos a ver si mantienes el gel con el azul brillante coomassie en un principio, el gel será aspecto como la firma negra. Y esto es todo porque el azul brillante coomassie va a atar cada lugar independientemente de si usted tiene la proteína o no, lo que significa que en realidad va a unirse a la poliacrilamida, así como las proteínas y luego, pero la afinidad del azul brillante coomassie para la poliacrilamida, así como para la proteína va a ser diferente.

Así que, una vez que hagas el paso de destino, así que lo que va a pasar es el coomassie millones de azul se va a eliminar de todo el gel de poliacrilamida no específico. Pero el lugar donde se tiene la proteína no se va a quitar porque tiene una afinidad más por el azul brillante coomassie. Así que, como el resultado, vas a empezar a ver las bandas de proteínas, por lo que este es el patrón típico de la banda de proteínas lo que vas a conseguir después de sus pasos de destino lo que puedes ver es que incluso entre las bandas.

También el tinte se ha eliminado por las soluciones de destino. Y esto es lo que hay que lograr simplemente entrando en la solución de destino. Por lo tanto, después de la cada ronda de solución de destino que tiene que observar el gel si usted está recibiendo las bandas o no. Y por consiguiente puedes optimizar ese paso en particular para ver que lo que estés viendo es en realidad lo adecuado y en realidad te va a dar las apariencias de todas las bandas de proteínas presentes en el carril.
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Ahora, una vez que tienes esta banda, una vez que tienes esta imagen lo que puedes ver es y lo que puedes ser capaz de analizar las dos cosas. Una es la posición de la banda, la segunda es si la distancia desde el origen. Y en base a esto y aparte de eso también se puede ver cuál es la intensidad de esta particular banda. Por lo tanto, estas son las 3 informaciones que usted puede ser capaz de inferir cuando usted realmente va a hacer el análisis de la imagen después de los procedimientos de tinción.

Por lo tanto, el análisis de imágenes es un procedimiento muy, muy complicado porque requiere la comprensión no sólo de la banda de la banda de proteínas sino también de los fondos vecinos. Por lo tanto, es por eso que el análisis de imagen requiere de algún tipo de ayuda de los softwares que realmente se va a integrar. Y que en realidad va a cambiar la imagen en un formato binario. Y como resultado todos estos puntos se van a convertir en el formato binario de 010101 así.

Y como resultado lo que se puede ver es que en realidad va a cambiar la imagen en una especie de formato 01. Y como resultado lo que vas a ver al final es, si por ejemplo si supongamos que esta es tu banda ok. Por lo tanto, lo que sucederá es que cada lugar se va a convertir en un enfoque 01, lo que significa que dondequiera que usted no tenga la intensidad que será considerada como 0. Mientras que donde tengas la banda de proteína se va a considerar como 1 o 10 o 50 o así depende de la calibración de los softwares.

Por lo tanto, si usted puede calibrar el software y realmente va a analizar su imagen puede en realidad y asigna un número aleatorio a la intensidad particular. Y como resultado puede ser capaz de convertir toda esta imagen en ese formato en particular y que en realidad ayuda a los softwares a entender todos y cada uno de los píxeles que está presente en la imagen. Y es así como puedes ser capaz de identificar la posición de esta banda, puedes ser capaz de medir la intensidad de esta banda. Por lo tanto, para este propósito tenemos un par de softwares que se pueden utilizar para realizar esta función (Consultar tiempo de la diapositiva: 12:03)

Por lo tanto, estos son los diferentes softwares lo que se puede utilizar para el análisis de gel de poliacrilamida, estos son trabajos de visión o el propio doc que es de las incorporaciones de UVP, total de la serie de laboratorio que es de la dinámica no lineal, Gel pro o ImagePro que es de la cibernética de los medios de comunicación y la imagen de los NIH que es en realidad un software libre que está disponible de la agencia de financiación estadounidense NIH.

Y luego tienes Melanie o Maestro de Imágenes que es de Expasy y luego tienes el imageMaster que es de la GE Healthcare. Ahora, para analizar una imagen tenemos los pasos discretos. Por lo tanto, qué hay en el paso 1, el paso 1 tienes que detectar primero las posiciones de carril, el carril en el que te interesa hacer las todas las operaciones de análisis de imagen. Así que, en el primer paso en el análisis de imagen para identificar y marcar las posiciones terrestres lo que significa que si tienes un carril tienes que marcar primero el carril que quiero analizar este carril proteico en concreto.

Hay diferentes maneras de hacer esto para el gel con las bandas bien definidas algoritmo de detección automática de carril puede ser capaz de detectar el carril. Si las bandas sonrientes o no rectas entonces un posicionamiento manual y carril identificativo es el mejor. Hay una consideración necesariamente mientras se hace el posicionamiento manual, el soporte utilizado debe ser lo suficientemente grande para cubrir todo el carril, pero no debe ser lo suficientemente ancho para incluir el carril del otro carril.

Por lo tanto, cuando estás haciendo el primer paso, primer paso tienes que detectar el carril al que te interesa hacer las mediciones. Esto tiene que ser muy preciso, para que solo sea detectar el carril 1, no debe ir a tomar la banda desde el carril vecino lo que significa que si tienes 2 carriles lado a lado, solo puedes decir seleccionar el carril lo que te interesa medir. Pero no debería ser tan grande que usted realmente va a tomar la banda del carril vecino también. Por lo tanto, una vez que se hace la detección de la posición de carril entonces hay que ir para el paso 2.
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En el paso 2 tienes que hacer las bandas, en el ancho de banda te interesa hacer la posición, para conocer la posición de esa banda en particular. Así como para conocer la intensidad de la banda que significa dentro del carril se pueden tener las múltiples bandas. Y luego dentro de este carril también puedes seleccionar la banda que te interesa medir o que te interesa analizar. Una vez que el carril se define su banda de proteína en el carril se puede definir mediante la exploración sistemática del perfil de carril e identificar la región de la maxima local como una banda.

Luego el paso 3, el paso 3 es que tienes que hacer la resta de fondo. Por lo tanto, una vez que seleccionas la banda no vas a seleccionar la banda pero también vas a seleccionar el fondo vecino. Por lo tanto, ese fondo tiene que ser sustraído de sus bandas de proteínas, para que usted vaya a obtener la intensidad absoluta de esa banda en particular. Por lo tanto, el fondo juega el papel importante en la identificación de la banda de proteína, así como la medición de la intensidad de la banda de proteína.

El fondo de un cuadro de gel no es distribuido uniformemente y hace la medición menos precisa, lo que significa que si el fondo es uniforme, usted va a ver la medición más y más precisa. Pero si el fondo es no uniforme, eso en realidad va a traer más y más problemas porque el software no sabe cuál es su intensidad y cuál es su fondo.

Así que, si lo es, es un fondo uniforme, en realidad le va a dar los números más uniformes lo que significa que va a asignar muy cómodamente el 0 a cada píxel de menor intensidad. Pero si es un alto más bajo, inferior alto entonces no será capaz de juzgar dónde está comenzando su intensidad del lugar, donde su banda está existiendo dentro del gel. Entonces, eso en realidad va a hacer que las mediciones sean cada vez más erróneas.

Muchos métodos de la sustracción de fondo son posibles, en uno de los métodos se puede generar una imagen de réplica y luego restar digitalmente de la imagen original para corregir el fondo. Por lo tanto, una vez que se haga con las correcciones de fondo, entonces usted puede ir al siguiente paso y pedir al software que le dé la intensidad.
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Así, el siguiente paso son los pasos de medición, por lo que una vez definido el carril y las bandas es posible realizar la cuantificación y los pasos de caracterización. La cantidad en cada banda se cuantifica en comparación con la información de fondo. Y la intensidad total presente en todos los pixeles presentes en la banda, lo que significa que si tienes una banda en realidad vas a conseguir una intensidad profunda de todos y cada uno de los píxeles de esta banda.

Y es así como y esa intensidad será en relación a los antecedentes de lo que se tiene en la vecina a los alrededores de esta particular banda de proteínas. Por lo tanto, si la cantidad conocida de una muestra de proteína se carga entonces se puede extraer una curva de calibración y utilizar para cuantificar con mayor precisión la banda de proteína, lo que significa que si usted tiene la cantidad conocida de la banda de proteína, lo que puede hacer es medir la intensidad frente a la concentración de proteína.

Y puedes ser capaz de dibujar una curva de calibración entre ésta y una vez que tengas ese tipo particular de curva de calibración, entonces podrás poder usar esta curva de calibración para medir la intensidad de la proteína presente en esta banda en particular. Por lo tanto, esta es una breve visión general del análisis de imágenes sólo para explicarte estos pasos con más detalle. Le llevaré a mi laboratorio para una amplia demostración en uno de los softwares donde los estudiantes van a mostrar todos y cada uno de los pasos con la ayuda de los softwares.

Estos softwares están disponibles en las empresas, por lo que es posible que no estén disponibles libremente para usted para la práctica. Pero espero que esta demostración sea útil para que usted entienda todo el procedimiento. (Video Starts: 18:26) En este video, le mostraremos cómo analizar una particular banda de interés de los geles de electroforesis SDS o Agarose gel usando software de laboratorio de imágenes. Así que, aquí le mostraré cómo abrir el software de laboratorio de imágenes y cómo analizar diferentes componentes.

Por lo tanto, hay que ir a iniciar y escribir el laboratorio de imágenes. Por lo tanto, se abrirá usted necesita no hacer nada sólo esto es que estamos utilizando el nuevo protocolo. Así que, solo tienes que ir primero te mostraré cómo analizar los geles de proteínas. Por lo tanto, esta es nuestra imagen de gel, por lo que esta es la escalera de peso molecular primera fila y último carril y estas son las fracciones. Entonces, queremos analizar cuántas bandas diferentes hay, primer componente y cuál es la intensidad de estas bandas y cuál es el peso molecular. Por lo tanto, voy a tratar de mostrar uno a uno.

En primer lugar, después de obtener la imagen o puede obtener de usted puede abrir cualquier imagen de laboratorio punto SEN de instrumento. Así que, vaya a aquí en un panel superior izquierdo usted puede ver las herramientas de imagen, así que si usted va allí,

hay datos diferentes, no desea ver una imagen completa. Así que, sólo usted puede recortar, recortar la imagen y así sólo decir la cosecha. Así que, esta es la imagen completa y vuelve aquí, después de eso hay que identificar cuántas bandas hay, cuántos carriles hay.

Basta con dejar esto al software que hará de forma automática o de otra manera se puede seleccionar manualmente también, así que vamos a ver cómo se realizará. Por lo tanto, haz clic en carriles y bandas, por lo que buscador de carriles, aquí los carriles o permiten que el software detecte o se puede hacer manualmente. Así que, si pido automático, así se puede ver en hay carriles dados en la parte superior del gel 1, 2, 3, 4, 5, 6 hasta 10.

Por lo tanto, esto es algo diferente o si quieres hacerlo de forma manual también puedes hacer suponer si quieres hacer entre número de carriles, cuántos carriles hay, así que 10. Por lo tanto, aquí puedes ajustar carril, ver esto no es adecuado en el completamente, por lo que tienes que ajustar así para conseguir un carril completo. Ahora, se pueden ver los carriles completamente ajustados encajados en el carril por completo, por lo que esta es otra forma manual.

Así que, a continuación ahora tras identificar los carriles, hay que ir a bandas, cuántas bandas hay. Por lo tanto, usted permite que el software para detectar las bandas. Por lo tanto, aquí pocas opciones están ahí, la sensibilidad de detección de banda, una es baja significa mejor para las más destacadas. Por lo tanto, la sensibilidad de detección baja, si se mantiene baja sensibilidad, entonces se detectan sólo las bandas prominentes que el software puede observar en función de la intensidad.

De lo contrario, puede hacer otra cosa, seleccionar alta y alta sensibilidad significa que también seleccionará a las bandas débiles. Como puede ver, tiene (()) (23:21) o puede seleccionar manualmente la sensibilidad. Por lo tanto, estoy preguntando mejor para las bandas débiles ver cómo va a hacer, ver estas muchas bandas están allí cada una y cada una de las bandas se detectarán aunque algunos de aquí o de la izquierda, pero todavía se puede añadir manualmente la banda.

Así que, si quieres solo bandas destacadas, así que en ese caso solo seleccionas bajo que es mejor para bandas destacadas, por lo que estas muchas bandas. Así que, ahora la pregunta viene, usted no quiere calcular el peso molecular o valores de intensidad, que es la cuantificación para todas estas bandas, ya sea que usted puede mantener estas bandas seleccionadas por el software o puede eliminar. Por lo tanto, para suprimir suponga si desea añadir alguna banda en particular.

Supongamos que aquí quiero añadir esta parte inferior de la banda de este carril, así que sólo vaya añadir sólo que añadió otra banda extra. Por lo tanto, si quieres borrar algunas bandas, ver que no quieres estas muchas bandas que quieres sólo calcular para estas bandas prominentes, sólo para ir a eliminar, sólo tienes que seguir haciendo hasta conseguir bandas satisfactorias ok, de esta manera puedes hacer, por lo que puedes añadir también. Así que, tras hacerse esto hemos detectado primero los carriles y en segundo hemos detectado las bandas.

Ahora es tiempo de cálculo o de análisis de peso molecular. Así que, aquí la parte difícil es que tienes que seleccionar el carril, qué carril has cargado el marcador de tasa molecular. Por lo tanto, estoy seleccionando el primer carril y el último carril ok, así que automáticamente llegó. Así que, si estás usando tu gel de interés, por lo que en ese caso lo que puedes hacer es, necesitas no preocuparte, solo tienes que dar tus pesos moleculares.

Supongamos que este es el azar tomado por defecto ha tomado Biorad precisión más, usted puede cambiar este también, este patrón usted puede cambiar también. Supongamos que desea añadir algunas nuevas normas de peso molecular de proteínas, no tiene esta precisión Biorad, además de que ha cargado alguna otra cosa. Pero sabes lo que es la primera banda aparece en la parte superior de la banda inferior. Así que, si sabes que puedes añadir nuevo, solo tienes que ir nuevo estándar o puedes dar el nombre.

Supongamos que estoy dando nuevos estándares de peso molecular algo xxy ok, el nombre de alguna compañía.
Así que, después de eso hay que sumar todas y cada una de las bandas. Supongamos primero que sólo estoy dando estos valores sólo para fines de conveniencia 250. Y la segunda banda es de 150, no necesita ser estos valores cualquiera que sea su elección de marcadores que usted puede dar esos valores, esos valores KD. No necesitas preocuparte por lo que ha escrito, automáticamente desaparecerá.

Y la tercera banda es sólo decir 99, y la cuarta banda es 78, y la quinta banda es 47, la sexta banda es 36 séptima banda es 22, la octava banda es 19, la novena banda es 14, esto es 12 y la última es que puede mantener 8. Esto es sólo por ejemplo propósitos solamente, esto no es en realidad cualquier marcador de peso molecular estándar sólo para su comprensión que estoy dando este. Después de dar el peso molecular que solo haces clic en aceptar y seleccionas ok, sí que te está pidiendo que quieras aplicar sí sí, quiero aplicar, así que visto.

Aquí este es el peso molecular lo que hemos seleccionado, ver aquí nuevo marcador de peso molecular xxy. Así que, aquí puedes ver lo que hemos dado es que viene como está. Entonces, lo siguiente es que tienes que calcular el peso molecular de estas cosas bien. Por lo tanto, sólo es necesario no preocuparse por nada y sólo para ir a analizar esta tabla. Por lo tanto, aquí tabla analista dará para todos y cada detalle de carril con el porcentaje de banda apropiado y el porcentaje de carril.

Supongamos, en primer carril, carril 1 que corresponde al peso molecular. Ver desde abajo el peso más alto, así que cuáles son los valores valores diferentes y la cantidad absoluta esto lo veremos en la parte siguiente.
Y porcentaje de banda cuánto porcentaje es, estas cosas que podemos ver. Por lo tanto, si quieres calcular supongamos que tienes carril 2, carril 2 esta es la quinta banda que pienso. Por lo tanto, dará lo que son el peso molecular, por lo que esto está empezando desde el número de banda inferior esto es de 1 a 5ª banda creo.

Así, la quinta banda significa en la quinta parte superior la banda es de 87.4 kda, esto es 78 que estamos calculando para este, esto es casi llega 87.4 kda. Y el frente relativo es de 0,187, por lo que de esta manera puedes calcular el peso molecular de la tu banda de interés. Por lo tanto, todo esto se trata de peso molecular, se puede guardar esta cosa y exportar este resultado a una nueva hoja de Excel. Así que, después de ser hecho esto ahora nos estamos moviendo a las herramientas de cantidad. Por lo tanto, la cantidad significa que usted sabe que ha cargado algo que cantidad ha cargado en este carril.

Si usted sabe que lo que podemos calcular la cantidad de carriles restantes, cuánto tenemos. Por lo tanto, hay dos partes una es la cantidad relativa, la banda de referencia del selector en el gel, por lo que, usted tiene que seleccionar una banda de referencia en base a que calculará todas las bandas relativa cantidad. Pero no da ningún valor, supongamos que estoy seleccionando éste, este es el referente. Por lo tanto, automáticamente calculará el carril 3 de proteínas restantes, este es el carril 2.

Por lo tanto, calculará automáticamente la cantidad relativa que está tomando 1 para esta referencia 1. Por lo tanto, en base a esto calculará todas las bandas de intensidad relativa. Supongamos que si usted dice esto es 1, lo que podría ser para la banda 1, es 0.59 y la banda 2, 0.15, 0.15 0.06, 0.07. Por lo tanto, en otro carril 3 también esa banda es esto es

5ª banda. Por lo tanto, carril 3 banda 5 que es peso molecular 7, las cantidades relativas 0.89. Entonces, esto es 1, si usted está diciendo esto es 1 este es 0.89, así que de esta manera usted puede calcular la cantidad relativa.

Y no quieres que esto sepas algún número, supongamos cuánta proteína está presente en esta. Así, en ese caso se puede ir a cantidad absoluta al menos se necesitan de 2 a 3 bandas. Por lo tanto, veo que estoy seleccionando este ok, este es un estoy diciendo que esta es la cantidad de 50 nanogramos. Y estoy seleccionando esta cantidad de 65 nanogramos y estoy seleccionando otro, esto es 25 me refiero automáticamente da.

Por lo tanto, sólo lleva el puntero del ratón a cualquier banda que desee calcular la cantidad real cantidad. Por lo tanto, usted calcula que puede hacer clic en que le dará automáticamente 72.214 nanogramos, usted quiere calcular esta banda. Por lo tanto, solo debes mantener que uno le dará el valor que quieras calcular este, dará el valor. Por lo tanto, de esta manera usted puede calcular la cantidad absoluta después de cualquier banda dada en el gel.

Por lo tanto, puede exportar estos resultados o puede ahorrar de este también. Por lo tanto, después de la cuantificación de los carriles de proteínas y las bandas, puede utilizar esto para la anotación también. Por lo tanto, puedes ir a las herramientas de anotación, supongamos que quieres indicar esta banda ok, solo tienes que dar la marca de flecha de lo contrario quieres mostrar esta banda. Por lo tanto, esta también es otra forma en la que puede tomar esto como captura de pantalla o puede guardar como una imagen con estas cosas con herramientas de anotación.

Puedes añadir texto también, supongamos que deseas añadir texto aquí, sólo tienes que añadir algo, supongamos carril 2 como ese carril 2 banda 5 ok. Por lo tanto, esta es la forma en que el análisis se puede hacer utilizando software de laboratorio de imágenes. Por lo tanto, esto es todo acerca de las proteínas, por lo que ahora quiero hacer un mismo análisis para los ácidos nucleicos suponen el ADN. Así que, solo tienes que ir ahora tienes ADN, por lo que toda la parte es igual en comparación con las proteínas.

Por lo tanto, puedes ir a herramientas de imagen para recortar, puedes cultivarlo o cualquiera que sea la parte que quieras mantener puedes mantener esa y decir cosecha, después de ese carril bandas de arena. Por lo tanto, es exactamente el mismo protocolo para las proteínas y el ácido nucleico también, detectará las bandas de baja mejor para las bandas prominentes que estoy pidiendo como ese ok. Así que, después de eso detectó carriles y bandas también, ahora se puede ir a peso molecular

análisis. Por lo tanto, aquí también puede dar su elección de los pesos moleculares de interés, puede dar y puede crear nuevos y añadir los valores.

Esto es aquí ácidos nucleicos, peso molecular, pares de bases. Por lo tanto, de esta manera usted puede dar o puede utilizar uno que ha dado ya dado en el software. Así que, como se puede ver, esto ya es lo que representa aquí lo que es la cantidad de pares base de cada carril, por lo que aquí también esto es lo mismo. Por lo tanto, lo siguiente es después de estar completado, es necesario no mirar específicamente en lo que esta banda corresponde, simplemente ir a los valores de carril 2. Este es el carril 1, esta es la única banda de carril 2 que estamos prediciendo que pertenece a 78.6 valor de par base en el carril 2.

Así que, como se puede ver esto es 80 y aquí está llegando esto es 78.6 pares base. Así, de esta manera se puede calcular el peso molecular de los ácidos nucleicos también. Y la otra parte es la cantidad de herramientas, usted puede (()) (39:14) el ADN también. Así que, aquí también en caso de análisis de proteínas, aquí relativo, por lo que tienes que seleccionar 1 banda supongamos que estoy seleccionando esta. En base a esto se calculará la cantidad relativa de la intensidad relativa de todas las bandas o se puede seleccionar la banda estándar 1 y esto es la cantidad.

Esta cantidad de banda que soy es como 30 nanogramos, por lo que otra banda al menos que necesitamos es como 10 nanogramos. Después de dar 2 valores puedes hacer clic en cualquier banda, supongamos este un 39,92, este 55 y este 63, este 64. Por lo tanto, de esta manera usted puede calcular la cantidad absoluta de intensidad de la banda dada. Puede utilizar herramientas de anotación también dando flecha o mostrando que representa gráficamente también, puede hacer lo mismo.

Y también puedes exportar esta captura de pantalla, para que puedas guardar estas cosas y puedas exportar aquí las opciones de exportación están ahí, puedes hacer exportación también. Por lo tanto, espero que esta parte de información de software le ayude a entender cómo se puede utilizar el software para el análisis de diferentes bandas y propósito de peso molecular o propósito de cuantificación. (Fines de vídeo: 41:39) Por lo tanto, en esta demo los estudiantes te han explicado cómo seleccionar los carriles, cómo puedes medir la intensidad de cada paso.

Y cómo se puede incluso ser capaz de determinar el peso molecular de la proteína en particular.
Porque si tienes los marcadores porque en el ejemplo el alumno ha demostrado que la si tienes un marcador de peso molecular corre sobre el gel en el en uno de los carriles, puedes usar esa información incluso para calcular el peso molecular. Así que, con esto nos gustaría concluir nuestra conferencia aquí, en la conferencia subsiguiente vamos a discutir acerca de algunos aspectos más relacionados con la electroforesis, gracias.